1、什么培养基中可以省去加酚红?

　　研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用(特别是雌激素)。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，不用加。

　　2、何时须更换培养基?

　　视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上的更换时间，按时更换培养基即可。

　　3、可否使用与原先培养条件不同的培养基?

　　不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基，若骤然使用和原先提供的培养条件不同的培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。

　　4、可否使用与原先培养条件不同的血清种类?

　　不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。

　　5、悬浮性细胞应如何传代处理?

　　一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞的培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。

　　6、冷冻管应如何解冻?

　　取出冷冻管后，须立即放入37℃水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其尽快全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另外，冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。

　　7、细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO?

　　除少数特别注明对DMSO 敏感的细胞外，绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞)，在解冻之后，应直接放入含有10-15 mL新鲜培养基的培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附的问题。

　　8、欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速?

　　回收动物细胞，其离心速率一般为300×g(约1000 rpm)，5-10 分钟，过高的转速，将造成细胞死亡。

　　9、细胞冷冻培养基的成份为何?

　　动物细胞冷冻保存时常使用的冷冻培养基是含5-10% DMSO(dimethyl sulfoxide)和90-95% 原来细胞生长用的新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO 稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成。

　　10、冷冻保存细胞的方法?

　　冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃，30-60分钟→置于-20℃，30分钟→置于-80℃，16-18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。

　　冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序的可程序降温机中每分钟降1-3 ℃至-80℃以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。-20℃不可超过1 小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤，接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微 降低一些。

　　11、细胞欲冷冻保存时， 细胞冷冻管内应有多少细胞浓度?

　　冷冻管内细胞数目一般为1×106 cells/mL vial，融合瘤细胞则以5×106 cells/mL vial 为宜。

　　12、培养基中是否须添加抗生素?

　　除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。

　　13、CO2培养箱的水盘如何保持清洁?

　　定期(至少每两周1次)以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之。

　　14、 为何培养基保存于4℃冰箱中，颜色会偏暗红色，且pH值会越来越偏碱性?

　　培养基保存于4℃冰箱中，培养基内的CO2会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中的酸碱指示剂(通常为phenol red)的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。

　　培养基偏碱的结果，将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时，可以通入无菌过滤的CO2，以调整pH 值。

　　15、各种细胞培养用的dish，flask是否均相同?

　　不同厂牌的dish 或flask，其所coating的polymer不同，制造程序亦不同，虽对大部分细胞没有太大之影响，惟少数细胞则可能因使用厂牌不同的dish 或flask 而有显著的生长差异。

　　16 、购买的细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少的情形?

　　研究人员在冷冻细胞的培养时出现细胞数目太少，大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤，以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心，应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。

　　17、购买的细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因?

　　研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于-80℃太久。