第三军医大学学报杂志
Journal of third military medical university 제삼군의대학학보
- 主管单位： 第三军医大学
- 主办单位： 第三军医大学
- 影响因子： 1.01
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-5404
- 国内刊号： 50-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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人CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞蛋白质组的双向电泳分析
目的用双向电泳技术分析人CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞表达的蛋白质组,建立二者之间的差异表达谱.方法从人脾脏分选CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞,用双向电泳技术分析两种细胞蛋白质组的表达差异.结果分选细胞纯度分别为CD4+CD25+T细胞82.3%,CD4+CD25-T细胞96.5%,双向电泳分析发现有4个蛋白点明显仅于CD4+CD25+T细胞检测到表达,有9个蛋白点明显仅于CD4+CD25-T细胞检测到表达.结论 CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞表达蛋白质组有明显差异.
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大鼠低顺应性膀胱中Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的基因表达
目的检测低顺应性膀胱组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白基因表达.方法用原位杂交的方法检测大鼠梗阻性低顺应性膀胱组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达的改变.结果与正常对照组相比,低顺应性膀胱组肌层内Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白基因表达被上调,且Ⅲ型胶原蛋白基因表达被上调的程度更为显著.结论在大鼠的梗阻性低顺应性膀胱中,发现膀胱组织肌层内Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白基因表达被上调,而这两种基因表达的上调与梗阻后低顺应性膀胱的形成存在一定的关系.
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大鼠严重创伤后早期下丘脑CRH的表达
目的探讨在颅脑撞击伤应激反应中下丘脑表达和分泌促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)的变化规律及其反馈调节机制.方法应用BIM-Ⅲ型多功能小型生物撞击机致伤,采用免疫组化和Western blot等技术进行检测下丘脑CRH的表达变化和分布规律.分组:对照组、撞击伤后15 min、30 min、1 h、2 h、6 h、12 h撞击伤组、撞击伤治疗组,治疗组用CRH1受体(CRH1R)特异性阻滞剂CP-154526处理.结果正常情况下,CRH少量的表达于下丘脑室旁核和视上核,撞击伤后1 h CRH表达明显增加,主要分布于室旁核和视上核,且表达呈逐渐增加的趋势,在2～6 h时相点表达明显增加,6 h后开始回落;用CP-154526治疗的大鼠,撞击伤后下丘脑CRH表达的增加明显减少.结论在创伤性应激反应中,CRH对下丘脑合成和分泌CRH存在明显的调节作用,CRH通过与CRH1R的结合在其中可能起着关键的作用.
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铜绿假单胞菌体外粘附肠上皮细胞对其细胞膜生物特性的影响
目的探索铜绿假单胞菌粘附肠上皮细胞后细胞膜生物特性的变化规律及可能的机制.方法采用体外肠上皮细胞培养模型,研究绿脓杆菌粘附后对肠上皮细胞活力、细胞膜磷脂酶A2、细胞内钙、细胞膜磷脂成分、膜流动性的影响.结果细菌粘附后3 h肠上皮细胞活力明显下降,PLA2活性增高,细胞内钙离子浓度增加,肠上皮细胞膜荧光偏振度、微粘度和分子排列有序性系数即出现增加,膜流动性降低,细胞膜磷脂含量降低,磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰胆碱(PC)含量逐渐降低.结论绿脓杆菌粘附后肠上皮细胞胞内钙超载所导致的膜PLA2活化以及肠上皮细胞膜磷脂降解是导致膜流动性降低的根本原因.
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兔源内毒素结合蛋白的提取纯化及体外生物学活性研究
目的从烧伤合并内毒素血症损伤兔的血清中分离纯化出内毒素结合蛋白(Lipopolysaccharide-Binding Protein LBP),以研究LBP在烧伤复合内毒素血症中的作用. 方法兔血清中蛋白质通过二步离子交换层析(Bio-Rex 70 Resin、Mono-Q)及凝胶过滤来分离纯化,并经流式细胞分析实验、绵羊红细胞凝聚实验、氨基末端氨基酸残基测序等方法鉴定,再将LBP作用于体外培养的人单核细胞(U937), 观测其分泌TNFα等细胞因子的状况.结果获得一种分子量为60×103蛋白质,其N端10个氨基酸序列为TNPGLITRIT,与NCBI蛋白质库中有关兔的氨基酸序列进行比较,发现其与LBP的序列相同,它能促进脂多糖( Lipopolysaccharide LPS)与外周血单核细胞(PBMC)结合,并能促进U937在极低浓度的LPS用下分泌TNFα.结论从血清中分离纯化带有生物活性、全长LBP是可行的,LBP能促进极低浓度的LPS与单核细胞结合,介导炎性因子的分泌,从而促进炎症反应的发生.
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人BAFF cDNA的克隆及原核表达载体的构建
目的克隆人BAFF(B cell activating factor belonging to the TNF family)全长及128～285片段的cDNA并构建其原核表达载体,为表达和检测其生物学活性做准备. 方法提取HL-60细胞总RNA,经RT-PCR扩增编码人BAFF全长及128～285氨基酸残基的cDNA序列,并将其克隆至载体pUC18和pUC19进行序列测定,然后构建于新型原核表达载体pQE-80L中.结果 RT-PCR扩增得到了858 bp和477 bp的DNA片段,序列分析与GenBank 中报道的编码BAFF全长及128～285氨基酸残基的cDNA序列完全一致.结论 BAFF cDNA的克隆及其原核表达载体的构建,为进一步表达和检测其生物学活性奠定了基础.
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雄激素受体反义RNA对前列腺癌细胞雄激素受体表达的抑制作用研究
目的观测雄激素受体(AR)反义RNA逆转录病毒表达载体在前列腺癌细胞中的表达及其对AR表达的影响.方法将AR反义RNA逆转录病毒表达载体导入前列腺癌细胞株LNCaP,PCR检测AR目的片段在重组LNCaP细胞基因组中的存在,RT-PCR检测AR反义RNA表达和AR mRNA水平,Western blot检测AR蛋白表达水平.结果 PCR在LNCaPas-AR基因组DNA中扩增出了AR目的片段,表明AR目的片段整合到了细胞基因组.RT-PCR证实LNCaPas-AR有AR反义RNA表达,且其AR mRNA水平较LNCaP和空载体转染的LNCaPNeo显著下调(P<0.05),Western blot证实LNCaPas-AR 细胞AR蛋白含量显著下降(P<0.05).结论 AR 反义RNA可抑制前列腺癌细胞AR表达.
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缺氧条件下梭曼中毒对大鼠心肌M2受体mRNA表达的影响
目的探讨缺氧条件下梭曼中毒大鼠心肌M2胆碱能受体表达的变化.方法采用半定量RT-PCR法分别检测缺氧、梭曼中毒以及缺氧条件下梭曼中毒大鼠心肌M2受体mRNA的表达.结果与正常对照组比较,缺氧组大鼠心肌M2受体mRNA表达增强,但相差并不显著;单纯梭曼中毒组和缺氧中毒组大鼠M2受体在致伤后各时间点表达明显减弱,但与单纯梭曼中毒组比较,缺氧中毒组大鼠心肌M2受体mRNA的表达在致伤后12 h和24 h 明显增强(P<0.05).结论 M2受体对有机磷毒剂非常敏感,缺氧条件下大鼠心肌M2受体的表达相对于平原中毒组有所增强,可能是高原战区神经性毒剂加重心脏功能损害的一个重要原因.
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TNF在犬严重烧伤早期脑水肿中的变化及意义
目的探讨严重烧伤早期血浆TNF的变化与脑水肿形成的关系.方法犬52只分为对照组(n=6)和单烧组(n=6)、乳酸钠液组(n=20)及葡萄糖液组(n=20).将致伤组犬制成50%TBSAⅢ度创面,于伤前及伤后6、12、18、24 h动态测定各组犬血浆TNF值并与脑病理组织学及含水量变化对比分析.结果严重烧伤早期脑水肿模型(葡萄糖液组)伤后TNF水平和脑含水量呈持续升高,伤后24 h达峰值.电镜下伤后6 h后毛细血管内皮细胞及血管周围胶质细胞终足肿胀,神经细胞出现空泡状现象,毛细血管内皮细胞,神经细胞及轴突呈不同程度的缺血性改变.随着观察时间的延长,这种改变逐渐明显,以伤后24 h表现为显著.结论 TNF的变化对严重烧伤脑水肿的发生发展有一定的影响.
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三七总甙对大鼠肺纤维化过程中血浆MIP-1α、MCP-1含量的影响
目的初步探讨三七总甙(PNS)对肺纤维化大鼠血浆中MIP-1α、MCP-1的抑制作用及其机制.方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各实验组大鼠不同时相点血浆中MIP-1α、MCP-1含量的动态变化.结果肺纤维化模型组各时相点血浆中MIP-1α、MCP-1水平均高于三七总甙组,并随病情进展而逐渐升高,第28天达高水平.PNS组MIP-1α、MCP-1受到明显抑制,接近对照组.结论 PNS能有效抑制血浆中MIP-1α、MCP-1水平,减轻肺泡炎症程度,从而达到防治纤维化的作用.
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猪卵母细胞在不同培养液中成熟后的发育潜力
目的优化猪胚胎体外生产培养系统.方法将猪卵母细胞在不同培养液中行体外成熟、体外受精,比较成熟率和卵裂率.结果促性腺激素明显提高猪卵母细胞成熟率,其中以15 IU/ml FSH+30 IU/ml LH成熟率、卵裂率高,分别为62%和15%.M199和NCSU-23基础培养液中的成熟率相近,但二者的卵裂率差异显著(15.7% vs 36%);两种基础培养液中添加150 μmol/L半胱氨酸后,仅M199培养液中出现促卵裂效应(P<0.05);添加1 mmol/L dbcAMP后,卵母细胞的GVBD被阻止,去除dbcAMP后继续培养 22 h,实验组的成熟率和卵裂率分别为76.1%～83.3%和43.9%～52.9%率,显著高于基础液组和半胱氨酸单独添加组.结论促性腺激素是猪卵细胞体外成熟的重要调节因子;dbcAMP通过调节卵体外成熟动力学,促卵母细胞分裂同步化,提高成熟和发育能力.
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胰腺和胰肾联合移植术的麻醉处理
接受胰腺、胰肾联合移植术(Combined pancreatic-renal transplantation)的病人常合并有全身多系统(特别是心脑血管)的损害,麻醉处理有其特殊性.现就我院在1998年12月至2000年1月所施行的1例胰腺移植术和4例胰肾联合移植术的麻醉情况报告如下.
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曲马朵注射剂致四肢软瘫1例
患者,男,20岁,因腰痛1个月入院.患者于1个月前出现腰痛、活动不便,CT示:腰3、4椎间盘脱出.入院查体:生命体征正常,意识清楚,步入病房,心肺(-), 四肢肌力、肌张力正常,直腿抬高试验(+),腰3、4椎有压痛.辅助检查无异常.入院第4天晚11:00,患者述腰痛不适,即给予曲马朵100 mg肌肉注射.注射后50 min,患者述四肢沉重无力,逐渐加重至完全不能活动.查体:意识清楚,能对话,生命体征无异常,四肢肌力I级,感觉存在.遂予以特别监护.至次日晨,患者四肢肌力恢复正常,无不适反应.
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肝血管瘤的螺旋CT多期增强扫描
螺旋CT在肝脏检查中的优势非常明显.突出的优点是利用肝脏双重供血的特点,发挥螺旋CT扫描速度快,可以控制扫描期相的优势,进行动脉期、门静脉期及延迟期扫描,从而可以动态观察肝脏肿瘤增强特性.本研究通过对肝血管瘤(Hepatic hemangioma, HHE)各期的强化特点的观察,探讨螺旋CT诊断肝血管瘤的价值.
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肺错构瘤的诊断与外科治疗
错构瘤是一种肺部良性肿瘤,其来源和发病机制不明.现就我院1985-2000年行手术治疗,术后病理检查证实的肺错构瘤共15例进行分析,讨论肺错构瘤的临床特点、诊断和外科治疗.
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急性髓细胞白血病完全缓解7年后复发1例
患者,男,47岁.1995年3月15日无明诱因出现头昏、乏力、发热,高体温39 ℃,无咳嗽、咳痰、胸痛、咯血,偶有鼻出血.因头昏、乏力加重,当地县医院血常规示血红蛋白68 g/L,白细胞2.0×109/L,白细胞分类见异常细胞.经骨髓检查诊断为急性白血病.4月6日来我院,查体:生命体征平稳,中度贫血貌, 全身皮肤粘膜无黄染及瘀点、瘀斑,浅表淋巴结无肿大,胸骨压痛(+),双肺呼吸音清晰,未闻及干湿口罗音.
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垂体腺瘤组织质地的术前判定
我们通过对45例垂体腺瘤手术病人的回顾性分析,以期了解病人的临床表现、相关激素及CT、MRI与肿瘤组织质地软硬韧度的关系,现报告如下.
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Ⅲ期上皮性卵巢癌58例临床分析
上皮性卵巢癌(Epithelial ovarian cancer,EOC)是常见的原发性卵巢恶性肿瘤,发现时多为晚期,预后差.近年来,随着对癌细胞减灭术的认识和技术上的提高以及铂类为主的联合化疗的广泛运用,5年生存率有所提高,有30%左右[1,2].回顾近15年诊治的卵巢恶性肿瘤,将资料完整且随访的Ⅲ期上皮性卵巢癌病例的治疗及预后因素总结如下.
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3例Dieulafoy病内镜下的诊断和治疗
病例1 男,59岁,因"反复间歇性黑便9年,再发4 d"入院.1992年因黑便行胃镜检查,诊断为壶腹部溃疡伴出血,经治疗后好转.4 d前再次出现柏油样大便,不伴腹痛、反酸等症状,病前无饮酒及口服非甾体类药物病史.胃镜检查,发现壶腹部前壁小弯侧可见一线性瘢痕,粘膜聚集征明显,无活动性出血,胃腔内有中等量咖啡样液体,胃窦小弯侧可见少量鲜红色血液呈搏动性涌出,出血点周围粘膜正常,未见溃疡及糜烂,考虑为Dieulafoy病,行内镜下钛夹夹闭术,生理盐水冲洗出血部位,未见活动性出血后退镜.
关键词： Dieulafoy病 内镜 -
儿童医源性非酮症高渗性昏迷糖尿病1例
糖尿病非酮症高渗性昏迷是糖尿病的一种少见而严重的急性并发症,也是糖尿病昏迷的一种特殊类型,多见于老年糖尿病患者,青少年较罕见,病死率极高.现介绍的1例糖尿病病儿就是由于基层医院处理不当造成了非酮症高渗性昏迷、碱中毒、低血糖等各种严重并发症,报告如下.
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少儿心脏瓣膜置换手术方法和效果的回顾分析
目的总结我院79例18岁以下少儿心脏瓣膜置换术经验,探讨少儿瓣膜置换术的方法和效果.方法回顾性分析我科从1982年4月至2002年8月间79例接受瓣膜置换术的少儿患者临床治疗资料.年龄9～18(12.5±4.4)岁,<14岁24例.先天性22例(27.8%),心内膜炎6例(7.6%),有合并畸形者20例(25.3%),风湿性51例(64.6%).二尖瓣置换50例,主动脉瓣置换15例,三尖瓣置换6例,二尖瓣和主动脉瓣双瓣置换8例.生物瓣置换2例,机械瓣置换77例.所有机械瓣置换病人均长期口服华法林抗凝.结果早期死亡3例(3.8%);随访3～24(12.6±6.4)个月,晚期死亡1例(1.3%)术后2年死于感染性心内膜炎;其余患者恢复良好.结论少儿心脏瓣膜置换手术对于瓣膜病变严重,不能进行成形手术的患儿是一种安全有效的治疗方法.选择合适的手术方式、同期处理合并畸形、正规的抗凝治疗是提高儿童瓣膜置换手术效果的关键.
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内镜下氩离子凝固术治疗消化道息肉的临床价值
目的探讨内镜下氩离子凝固术(氩气刀)治疗消化道息肉的价值.方法采用德国ERBE公司生产的APC 300 EA型内镜专用氩气刀对经病理学证实的消化道息肉进行氩离子凝固术.结果 74例患者共116枚息肉,其中106枚为扁平、广基息肉,经内镜氩气刀治疗,另10枚有蒂息肉在内镜圈套治疗时采用内镜下氩气刀配合治疗,全部治愈.每枚息肉根据其部位、大小决定氩离子凝固次数,一般经2～4次凝固息肉皆变平,每次内镜多可处理10枚息肉,息肉超过10枚者宜分次进行治疗.结论内镜下氩气刀对消化道广基、扁平息肉或息肉样隆起可作为首选的治疗方法,其疗效佳,安全性好,副作用少,有较高的临床价值.
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颈胸段椎体肿瘤的前路手术治疗
目的探讨颈胸段椎体肿瘤的前路不同手术入路、肿瘤切除和重建方法.方法总结我院自1999年3月至2002年5月收治的7例颈胸段椎体肿瘤的临床表现、手术入路、术式及其预后.结果术后随访3～28个月,7例患者术后神经功能均明显改善.1例血管肉瘤和2例转移性腺癌患者分别于术后3、8、13个月因全身多处转移、衰竭死亡.暂未发现局部复发病例.结论应根据肿瘤的部位、性质选择相应的手术途径、肿瘤切除术式和前路重建方法.
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脉冲Nd∶YAG激光加氟化钠液对牙釉质、牙本质抗酸性能的影响
目的探讨脉冲Nd∶YAG激光+氟化钠液对牙釉质、牙本质抗酸性能的影响.方法将40个人牙的牙釉质、牙本质标本分成:激光+氟化钠组、激光组、氟化钠组、空白组(不处理)进行处理.再将所有标本用0.1 mol/L乳酸人工脱矿液(pH 4.5)37℃脱矿48 h,原子吸收分光光度计测脱矿液内Ca2+溶出量.结果在牙釉质和牙本质标本中,激光+氟化钠组Ca2+溶出量(×10-6 g)均值低(62.055±5.879,137.474±4.444),其次是氟化钠组(84.053±10.422,153.816±4.097)、激光组(87.824±13.948,158.215±3.583),空白组Ca2+溶出量均值高(143.760±5.443,182.726±16.115);激光+氟化钠组、氟化钠组、激光组与空白组间差异有高度显著性(P<0.01);激光+氟化钠组与氟化钠组间差异具有显著性(P<0.05)、与激光组间差异具有非常显著性(P<0.01).结论脉冲Nd∶YAG激光加氟化钠联合作用能有效地阻止离体人牙牙釉质、牙本质在酸性脱矿液中脱钙,因而具有抗龋性能.
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经腹Heller手术加绕食管后方胃底部分折叠治疗贲门失弛缓症
目的探讨采用经腹贲门肌层切开(Heller)加绕食管后方胃底部分折叠治疗贲门失弛缓症的疗效.方法回顾性总结48例贲门失弛缓症经腹Heller手术加绕食管后方胃底部分折叠治疗的近期及远期效果.结果全组病例手术后恢复顺利,吞咽困难症状缓解,无手术并发症.38例进行了食管动力学监测,术前末端食管括约肌压力(LESP)为(21.48±5.36)mmHg,术后LESP为(16.45±4.12)mmHg,两者经统计学处理(t检验)无显著差异(P>0.05),25例进行了术后24 h pH值监测,DeMeester记分均在正常范围.近期手术优良率100%.31例进行了13～156个月的随访.平均随访时间75个月.随访病人均能正常生活和工作,3例有反流症状,其中1例24 h pH值监测反流次数超过50次.远期手术优良率90.32%.结论经腹Heller手术加绕食管后方胃底部分折叠治疗贲门失弛缓症疗效满意,是一种安全有效的手术方式.
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机采血小板P-选择素在常规和冰冻保存条件下的表达研究
目的探讨常规和冰冻保存条件下对血小板功能的影响.方法 10单位机采血小板分别用常规保存袋和低温保存袋贮存,前者贮存5 d,每天留取标本,后者于-85℃贮存后5 d复苏留样.分别检测血小板聚集率、血小板计数、pH值和血小板膜糖蛋白P-选择素的变化.结果常规保存条件下,5 d内血小板聚集率、pH、血小板计数均无显著性变化,血小板P-选择素在1 d后即明显升高(从3.77±1.86到10.87±4.75,达3倍,P<0.01).冰冻保存时,血小板聚集率、pH、血小板计数无显著性变化,P-选择素的表达在冰冻后呈显著升高(从4.37±1.82到16.88±7.23,达4倍,P<0.01).结论血小板P-选择素在常规和冰冻保存条件下的表达变化提示血小板离体后被活化,是反应血小板激活的敏感指标.
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体外诱导脐血造血细胞定向分化的研究
目的探讨造血生长因子体外诱导脐血造血细胞向粒系细胞分化的能力.方法从新鲜的脐血标本中分离的单个核细胞接种于含脐血血清和造血生长因子的IMDM培养液中悬浮培养5周,采用有核细胞计数、免疫荧光染色计数和祖细胞集落测定对有核细胞总数、CD34+细胞和粒单系祖细胞进行动态检测.结果用粒系集落刺激因子、粒单系集落刺激因子、干细胞因子、白介素-3和白介素-6培养脐血单个核细胞3周,可以显著扩增有核细胞总数和CFU-GM,扩增倍数分别为培养前的58.3倍和12.2倍,且培养后的细胞以中性粒细胞为主.而CD34+细胞占细胞总数的比例则从0.97%下降到0.05%.按照此培养条件,可以使单份新鲜脐血样本中有核细胞总数增加(5.1±2.3)倍,CFU-GM增加(2.2±0.95)倍.结论本培养体系在体外可以诱导脐血造血细胞向粒系定向诱导分化,从而增加单份脐血中粒单系祖细胞和粒细胞数量.
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三氧化二砷体外诱导口腔鳞癌细胞凋亡的研究
目的探讨三氧化二砷(As2O3)对口腔鳞癌细胞的体外生物学作用及机制.方法采用形态学、MTT、克隆形成试验、DNA梯度降解试验、原位末端标记及流式细胞仪等方法,对As2O3在Tca8113细胞系中的作用进行体外研究.结果 As2O3对Tca8113细胞产生明显的生长抑制作用,MTT显示生长抑制率为76.3%.DNA梯度降解试验、原位末端标记、流式细胞仪显示As2O3诱导了Tca8113细胞凋亡.流式细胞仪显示As2O3的Tca8113细胞凋亡与细胞周期阻滞有关.结论 As2O3对口腔鳞癌细胞具有显著的体外生长抑制及凋亡诱导作用.
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心脏机械瓣膜置换术后抗凝治疗的临床分析
收集我院2000年7月至2001年7月期间100例资料完整的心脏机械瓣膜置换术病例,对其术后抗凝治疗进行临床分析,现报告如下.
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经尿道前列腺电汽化术严重并发症的原因分析及防治
良性前列腺增生为老年男性病,严重影响老年男性的排尿功能.我科采用经尿道前列腺电汽化术Transurethral Vaporization of Prastate,TVP)进行治疗.现将其严重并发症的原因分析及防护报告如下.
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胸部外伤921例临床治疗体会
我院自1976年至2001年,共收治胸部外伤921例.现将临床治疗体会总结如下.1 临床资料本组921例,男性713例,女性208例.年龄1～90岁,其中17～45岁803例(87.1%).受伤至就诊时间:1 h以内者209例(22.6%),1～8 h内者607例(65.9%),8 h以上者105例(11.4%).
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体外灌流装置分离肝细胞的初步探索
目的探索和建立一种消化分离肝细胞的体外简易灌流装置及方法.方法采用蠕动泵、特制水浴恒温箱、硅胶管、不锈钢网、塑料留置注射软管针头等组装成简易灌流装置,对成年家兔、新生中国实验小型猪和人胎肝进行体外两步灌流,综合评价分离肝细胞的效果.结果灌流装置两步法消化分离肝细胞的活力为84%～98%,细胞获得量为(3.5～9.2)×106/g,普通条件接种培养后细胞贴壁、生长均良好.结论自制体外灌流装置消化分离肝细胞简便、快捷、可靠,尤其适宜于较大动物肝细胞的大量分离.
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环孢素A治疗药物监测的研究进展
1 概述治疗药物监测(Therapeutic drug monitoring,TDM)是近20年来在医药学领域发展起来的一门新学科,其目的是采用现代分析测试技术,定量的测定生物样品中的药物及代谢物浓度,并利用药代动力学的原理和公式使给药方案个体化,以提高药物疗效,避免或减少毒副反应的发生,同时也为药物过量中毒的诊断和处理提供有价值的实验室数据.
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加强我国生物人工肝的研究
尽管传统对症支持疗法有了长足进步,肝衰竭的病死率仍居高不下.国外报道暴发性肝衰竭(FHF)病死率在80%左右;国内由于重症肝炎诊断标准与国外不一致,具体应用中亦各不相同,各家报道的病死率高低不一,但如以相同标准比较,病死率不应比西方国家低[1] .
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应用PCR和RT-PCR检测猪内源性逆转录病毒及其意义
目的观察猪内源性逆转录病毒(Porcine endogenous retrovirus,PERV)在中国实验小型猪的感染情况.方法针对PREV gag区的序列,选用特异性引物,采用PCR方法检测猪肝脏、皮肤前病毒序列;以及RT-PCR方法检测血清中PERV-RNA序列.结果该法在猪肝脏组织中可检测出PERV前病毒序列;此外,在猪血清标本亦检测出病毒序列,而其它2份HBV、HCV阳性血清及2份其它动物血清(大鼠、兔)检测结果均为阴性,说明该方法特异性较高.结论中国实验小型猪均携带该病毒,并可以释放到血清中;采用该法具有特异、简便的特点,为进一步研究PERV感染及生物安全性奠定了基础.
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新型中空纤维编织型生物人工肝反应器的初步构建
目的为体外生物人工肝支持系统构建一种新型中空纤维编织型生物反应器,提高传统中空纤维生物反应器的性能.方法采用中空纤维编织方法,制作三维立体型生物反应器,对反应器进行物质传输试验后,将分离的新生实验小型猪肝细胞接种于中空纤维支架上,用培养液循环式人工毛细管培养系统进行培养,检测生物反应器的生物功能,观察培养猪肝细胞的酶漏出量.结果传输试验显示,中空纤维编织型反应器的半透膜能快速传输含人白蛋白和酚红的RPMI 1640培养液.加入肝细胞并培养后,用SDS/PAGE可从生物反应器内检测出猪肝细胞分泌的白蛋白,生物反应器内的猪肝细胞有效地将氯化铵转换成尿素.反应器实验中,肝细胞仅释放了少量的ALT、LDH.结论初步研制出一种新的、符合生物人工肝基本要求的实验型生物反应器,该反应器内培养的肝细胞保持较好的细胞活力,具有生物合成与转换功能.
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非生物型人工肝对肝衰竭患者内毒素及细胞因子的清除作用
目的观察血浆置换、血浆灌流两种典型非生物型人工肝对重肝衰竭患者体内血浆内毒素及细胞因子的清除效果.方法 7例和10例重型肝炎患者分别行血浆灌流、血浆置换治疗,比较治疗前后患者血液中内毒素、细胞因子等的变化.结果经血浆灌流治疗后,患者血中细胞因子、内毒素显著下降,但IL-6变化不大;血浆置换治疗后,患者血中内毒素下降明显,但对TNF-α、IL-1β、IL-6清除效果欠佳.结论血浆灌流能更有效清除血浆多数细胞因子、内毒素,有望成为有效清除细胞因子的一种治疗手段,从而延缓肝衰竭进一步发展.
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用猪肝细胞型混合生物人工肝支持系统治疗肝衰竭的初步研究
目的对培养猪肝细胞型混合生物人工肝支持系统治疗肝衰竭的可行性进行初步评价.方法采用自行研制的以新生实验小型猪肝细胞为基础的混合生物人工肝支持系统,对5例慢性重型肝炎患者进行体外人工肝支持,综合评价其临床疗效和安全性.结果 5例患者经混合人工肝支持后,肝衰竭均得到不同程度的控制,表现为临床症状和肝衰竭相关指标好转,肝性脑病改善.终2例好转出院,1例经肝移植存活,2例死亡,死亡原因与不良反应无关.结论猪肝细胞型混合生物人工肝系统可用作重型肝炎肝衰竭的辅助支持和治疗.
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三明治培养新生实验小型猪肝细胞的功能与形态
目的探索双层胶原夹心培养猪肝细胞的方法,观察培养猪肝细胞的功能与形态特征.方法将两步法分离的新生中国实验小型猪肝细胞接种于胶原被覆的培养板常规培养,24 h后,肝细胞上再加一层胶原形成双层胶原夹心(三明治)培养,观察培养猪肝细胞的白蛋白分泌、形态学特征和乳酸脱氢酶(LDH)漏出量.结果成功将新生实验小型猪肝细胞固定于双层胶原中,形成三明治状.培养1周内,用SDS/PAGE可检测出猪肝细胞分泌的白蛋白,倒置相差显微镜下观察到典型的形态特征,培养期内LDH漏出量较少.结论可用双层胶原对新生乳猪肝细胞进行三明治样培养,为肝细胞提供更接近体内的培养环境,有助于维持特殊的肝功能和形态学特征.
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混合型人工肝治疗肝衰竭疗效观察
目的评价混合型人工肝支持方法--血浆置换+血液灌流吸附治疗肝衰竭的临床疗效、安全性及其对血浆内毒素的清除作用. 方法 34例肝衰竭患者进行血浆置换+血液灌流吸附治疗,比较治疗前后肝肾功、血常规、PT、血浆内毒素水平的变化,观察治疗后患者临床症状体征情况等变化.结果血浆置换+血液灌流吸附治疗后,患者的临床症状均有不同程度改善,总有效率为67.6%,终存活率仅为29.1%.检测指标中转氨酶、总胆红素、凝血酶原时间、凝血酶原活动度、内毒素水平较治疗前后差异有显著性意义(P<0.01,P<0.05),不良反应较轻.结论混合型人工肝对肝衰竭有肯定的疗效,对血浆内毒素有确定的清除作用.
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乳猪肝细胞-196 ℃保存的初步研究
目的探索适合于乳猪肝细胞-196 ℃冷冻保存的条件和方法.方法体外分离新生乳猪肝细胞,以含不同浓度二甲亚砜(DMSO)的冻存液及不同的细胞浓度在液氮中保存.2个月后复苏接种培养,对其存活率、贴壁率、尿素合成能力、猪白蛋白mRNA的表达等进行检测,并观察其形态结构变化.结果不同DMSO浓度保存猪肝细胞复苏后的活力及形态均有所不同, 其中含5% DMSO冻存液组保存效果差;10%组次之;15%组佳.15% DMSO冻存液组复苏后肝细胞的存活率为(83±4)%,贴壁率是(81±5)%,细胞形态与未冻存组相似,均保持较强的尿素合成能力及猪白蛋白mRNA的表达,较5%与10% DMSO冻存液组有显著性差别(P<0.05).冻存时肝细胞浓度为(5～10)×106个/ml组复苏后细胞存活率明显优于(1～2.5)×106个/ml组.结论 15% DMSO浓度适合于乳猪肝细胞的长期保存.高浓度组猪肝细胞的冻存效果优于低浓度组.
