南江黄羊基因组DNA的AFLP和RAPD研究

目的研究南江黄羊遗传多态性和探讨AFLP标记在山羊遗传多态性方面应用的可行性.方法应用RAPD和AFLP两种方法对15只南江黄羊个体基因组DNA进行了分析,并比较两种方法的检测效果.结果RAPD标记检测得到的群体遗传相似系数和多态位点比率分别为0.942和26.98%;AFLP标记检测得到的群体遗传相似系数和多态位点比率分别为0.874和31.4%.结论AFLP方法和RAPD均适合于品系内个体间的遗传检测,并且为准确评价南江黄羊的遗传稳定性提供了相关的参数.

RDP1258免疫调节功能在大鼠体内实验研究

目的观察一种新型HLA衍生肽(RDP1258)的体内免疫抑制功能并探讨其机制.方法人工固相合成HLA衍生肽(RDP1258),以3H-TdR法观察其在体内对大鼠脾细胞增殖反应的影响;与HO-1酶活性激动剂HEMIN及拮抗剂ZNPP相对比,采用酶化学法及免疫组化方法观察其对体内脾细胞血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)活性的影响.结果RDP1258体内应用可显著抑制淋巴细胞转化及MLR的增殖反应;该肽能够明显提高体内HO-1活性,并增强HO-1的表达.结论RDP1258体内应用能够显著抑制大鼠脾细胞由丝裂原或同种抗原引起的增殖反应,这种作用可能是通过影响HO-1活性而达到的.

血晶素促进缺血缺氧大鼠脑组织诱导型血红素氧合酶基因的表达

目的研究血晶素对全脑缺血再灌注Wistar大鼠脑保护作用及机制.方法成功建立成年Wistar大鼠全脑缺血再灌注模型后,于全脑缺血10 min再灌注24、48、72 h 3个时相点观察缺血再灌注对大鼠脑组织血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达及皮质神经元的作用及变化规律;并于模型成功建立后5 min,1、2 d侧脑室内注射25mg/kg的血晶素,观察血晶素对缺血再灌注大鼠脑HO-1蛋白表达及皮质神经元的影响.结果大鼠脑组织HO-1蛋白表达在全脑缺血10 min再灌注48 h达高峰(P＜0.05);血晶素可促进脑HO-1蛋白表达(P＜0.05),并减轻了全脑缺血再灌注所导致的皮质损害.结论血晶素对缺血再灌注大鼠脑缺血有保护作用,其可能的机制是通过上调脑HO-1蛋白表达,启动一系列的内源性的神经保护机制来发挥脑保护作用.

靶向DC-SIGN的Le(x)-OVA抗原的制备

目的制备用于靶向DC-SIGN受体的Le(x)寡糖介导的靶向抗原.方法利用Sulfo-SMCC异源双功能交联试剂交联链霉亲和素(streptavidin,SA)和模式抗原卵白蛋白(ovalbumin,OVA),再利用SA与生物素高亲和力结合的特性,将SA-OVA复合物与生物素修饰的Le(x)寡糖反应,由此获得由Le(x)寡糖介导的靶向抗原Le(x)-OVA复合物.结果应用SDS-PAGE蛋白质电泳和Western免疫印迹方法证实SA与OVA蛋白成功交联,ELISA方法证实SA-OVA复合物中的SA仍具有与生物素反应的功能,根据SA-OVA复合物与生物素修饰的Le(x)寡糖饱和反应的比例,获得所需要的靶向抗原Le(x)-OVA复合物.结论获得Le(x)寡糖介导的靶向抗原Le(x)-OVA复合物,为进一步研究经由DC-SIGN靶向后的抗原特异性免疫应答奠定了基础.

能量可控陡脉冲对小鼠U14宫颈癌杀伤作用的实验研究

目的观察能量可控陡脉冲对小鼠U14宫颈癌的杀伤作用.方法取雌性BALB/C小鼠48只,建立Ui4宫颈癌皮下移植瘤模型,分别观察实验组和对照组各时相的组织形态学变化,并对抑瘤曲线进行分析.结果通过组织学和抑瘤曲线检测证实:陡脉冲电场能选择性杀死肿瘤细胞,抑制肿瘤细胞的增殖.组织形态学改变在治疗后即刻光、电镜观察可见肿瘤细胞变性,核固缩、核碎裂、核溶解坏死等征象,并随时间推移坏死更加明显.结论能量可控陡脉冲对肿瘤具有杀灭和抑制作用.

蛋白酶激活受体1介导人肺上皮细胞分泌MCP-1

目的探讨蛋白酶激活受体1(protease-activated receptors1,PAR1)激动肽和凝血酶对人肺上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)分泌的影响.方法人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的PAR1激动肽SFLLR和反PAR1激动肽RLLFS以及不同浓度的凝血酶和/或凝血酶抑制剂水蛭素进行刺激,刺激时间为2、16 h.用ELISA方法检测上清液中的MCP-1水平.结果经过16 h的培养,PAR1激动剂SFLLR可引起浓度相关性MCP-1的释放增加,增加到300μmol/L时诱导MCP-1的释放量比基础分泌量增加了近12倍,反PAR1激动剂RLLFS不能引起MCP-1的释放增加.凝血酶也可引起浓度相关性MCP-1释放,凝血酶在浓度3 000 U/L时就可引起MCP-1释放量增加,10 000 U/L时诱导MCP-1的释放量达高峰,为基础分泌量的5倍.凝血酶抑制剂水蛭素可以抑制凝血酶对MCP-1的释放作用.时间相关曲线表明,从2 h起即可引起PAR1介导的MCP-1释放增加,16 h达高峰.结论PAR1激动肽和凝血酶可促进人肺上皮细胞分泌MCP-1,PAR1拮抗剂和凝血酶抑制剂可能具有抗炎作用.

Serrate1基因转染对小鼠树突状细胞生物学特性的影响

目的探讨Serrate1基因转染对小鼠树突状细胞生物学特性的影响.方法将Serrate1基因体外转染小鼠DCs,经G418筛选后,Western blot检测DCs Serrate1的表达,流式细胞仪检测转染后DCs表面共刺激分子的表达,混合淋巴细胞反应观察DCs对T淋巴细胞增殖的影响.结果Serrate1基因转染的树突状细胞Serrate1的表达较未转染组明显增高,转染Serrate1基因的DCs表面CD80、CD86等共刺激分子的表达与对照组比较无明显改变(P＞0.05);在混合淋巴细胞反应中,转染DCs对T细胞的增殖有抑制作用,而空载体pcDNA 3.1(+)对照组与未转染组的树突状细胞具有强烈的激发T细胞增殖的能力.结论Serrate1基因转染能在不影响DCs表面共刺激分子表达的情况下显著抑制T细胞活化.

感染约氏疟原虫前后大劣按蚊血淋巴的差异表达蛋白分析

目的获得并分析感染约氏疟原虫前后大劣按蚊血淋巴的差异表达蛋白.方法利用二维电泳方法分别分离感染约氏疟原虫前后的大劣按蚊血淋巴蛋白,进行考马斯亮蓝染色,并利用PDQuest 2D Elite软件分析和比较凝胶结果;对感染约氏疟原虫前后的差异表达蛋白进行质谱分析,获得肽质量指纹图谱;利用Mascot软件系统,在Swiss-Prot等数据库中检索和分析所获得的肽质量指纹图谱.预测差异表达蛋白的生物学特性和在卵囊黑化中的功能.结果获得了分辨率和重复性均较好的二维电泳图,感染组凝胶可见120个蛋白点,正常组凝胶可见95个蛋白点,二者比较分析后发现有37个差异蛋白点;质谱分析获得3个肽质量指纹图谱,于蛋白数据库检索后未发现匹配分值很高的相关蛋白,其中差异蛋白点1与冈比亚按蚊一蛋白具有较高的同源性.结论获得了感染约氏疟原虫前后大劣按蚊血淋巴的差异蛋白和部分差异蛋白的相关信息,这为从蛋白水平认识蚊媒和疟原虫的相互关系和更深入地利用大劣按蚊-约氏疟原虫模型开展卵囊黑化的相关研究奠定了基础.

大鼠胶质瘤细胞系C6趋化因子受体CXCR4和甲酰肽受体FPR的表达

目的观测大鼠源性胶质瘤细胞系C6趋化细胞因子受体CXCR4和甲酰化肽受体(formyl peptide receptor,FPR)的表达水平并探讨其与瘤细胞分化和血管生成的关系.方法传代培养大鼠源性胶质瘤细胞系C6,采用免疫细胞化学方法检测CXCR4和FPR表达,并对细胞分化标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和波形蛋白(vimentin)以及血管内皮生长因子(VEGF)表达水平进行检测.结果C6细胞呈长梭形,突起细长,GFAP表达较强,vimentin呈强表达.该细胞高表达CXCR4和FPR,并呈VEGF强阳性.结论C6细胞分化程度低,其高表达的趋化因子受体CXCR4和FPR可能与胶质瘤血管生成有密切关系.

草麻黄中补体抑制成分抑制大鼠异种心脏移植超急性排斥反应的实验研究

目的初步探讨草麻黄中补体抑制成分(complement inhibiting component,CIC)对异种心脏移植超急性排斥反应的作用.方法按是否给予CIC灌胃处理,将动物模型分为对照组和实验组,观察对照组和实验组术后供心存活时间,在术后早期及供心失活时取两组心脏组织行光镜、电镜病理检查,并在术后固定时间分别抽鼠血行血清学检查,用微量法测定CHs0、APHs0,用透射比浊法测定C3.结果实验组移植心脏存活时间为(51.00±3.46)min,与对照组(30.30±3.46)min比较差异极显著(P＜0.01).结论豚鼠至大鼠异种心脏移植后,补体的经典途径和替代途径均被激活.CIC能明显抑制补体活性,延缓超急性排斥反应的发生,从而使移植心脏的存活时间延长.

人层粘连蛋白α4链LG4-5组件的原核表达及多克隆抗体制备

目的利用基因工程技术克隆、表达人层粘连蛋白α4链LG4-5组件(human laminin alpha4 LG4-5 module,hLNα4LG4-5)蛋白并制备其特异性多克隆抗体.方法采用RT-PCR方法从人胎盘组织扩增hLNα4LG4-5的cDNA片段,T/A克隆法将其插入pMD-18T载体进行测序.采用DNA重组技术构建原核表达载体pET-28a-LG4-5,用BL21(DE3)/pET系统表达hLNα4LG4-5融合蛋白,以SDS-PAGE鉴定所表达的融合蛋白.用含融合蛋白的聚丙烯酰胺凝胶颗粒免疫家兔,制备抗hLNα4LG4-5多克隆抗体,Western印迹法检测抗体的特异性.结果成功克隆了hLNα4LG4-5的cDNA片段,12%SDS-PAGE电泳检测显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET28a-LG4-5总蛋白中出现一条分子质量为42×103的新蛋白带,制备了效价为1:10 240的hLNα4LG4-5多克隆抗体,Western印迹分析证实可检测到特异性目的蛋白带.结论克隆并原核表达了hLNα4LG4-5蛋白,制备了特异性抗hLNα4LG4-5的多克隆抗体,为进一步研究LG组件在疾病发生中所起的作用打下了基础.

屋尘螨提取液致敏BALB/c与C57BL/6小鼠肺部变应性炎症模型的比较

目的研究以屋尘螨提取液复制BALB/c和C57BL/6小鼠肺部变应性炎症模型的方法.方法BALB/c和C57BL/6小鼠各分为对照组、加强组和常规组.加强组在第1天采用皮下注射,以后隔日采取腹腔注射进行致敏,再用提取液多次滴鼻激发(第15～17天).后1次滴鼻24 h后对小鼠作肺泡灌洗.常规组则于第1、8天腹腔注射2次,第15～17天滴鼻3次.对照组用PBS作注射和滴药.进行灌洗液细胞计数和分类,肺组织病理计分,灌液洗用ELISA测定IL-2、IL-4、IL-5和IFN-γ含量.结果①C57BL/6加强组肺部病理计分明显升高,呈明显变应性炎症病理改变;灌洗液中细胞计数和嗜酸性粒细胞计数明显升高(P＜0.05);灌洗液IL-4、IL-5明显升高(P＜0.05),IFN-γ、IL-2无明显变化;②BALB/c加强组、腹腔注射致敏组和C57BL/6腹腔注射致敏组可见炎性细胞浸润,但嗜酸性细胞较少,BALF中IL-4、IL-5升高较加强组为弱,灌洗液中细胞计数增高,但嗜酸性细胞计数较对照组无明显差异,③单剂量组上述指标与对照组比较无显著差异.结论与BALB/c相比,在屋尘螨致敏小鼠哮喘模型的复制中,C57BL/6更易取得成功,且使用皮下注射加强致敏C57BL/6小鼠所复制屋尘螨致敏哮喘模型更为典型.

羊膜细胞培养液对兔角膜重度碱烧伤房水中TNF-α和IL-1的影响

目的探讨羊膜细胞培养液治疗兔眼重度碱烧伤的机制,为临床应用提供理论依据.方法采用中国大白兔72只,随机分成对照组(A组)24只,0.1%地塞米松治疗组(B组)24只,羊膜上皮细胞培养液治疗组(C组)24只.各组动物采用单眼建立角膜碱烧伤模型并分别以0.1%地塞米松液和羊膜细胞提取液对B、C组动物伤眼进行治疗.于伤后1、3、7、14 d活杀动物.每个时段各组分别活杀6只兔,取眼房水检测TNF-α、IL-1的含量与活性.结果各时段B、C治疗组与对照组相比TNF-α、IL-1的活性和含量明显降低(P＜0.01).结论抑制TNF-α和IL-1的生物合成和释放可能是羊膜细胞培养液治疗角膜碱烧伤的机制之一.

氨茶碱对哮喘大鼠肺内eotaxin表达的影响

目的通过观察大鼠肺内eotaxin表达的变化,探讨氨茶碱治疗哮喘的可能机制.方法以OVA致敏并激发大鼠哮喘,以不同剂量的氨茶碱治疗,分别通过免疫组化和RT-PCR检测肺内eotaxin蛋白及mRNA的表达.结果大、中、小剂量的氨茶碱均能明显抑制哮喘大鼠肺内eotaxin的表达(与未治疗组相比P＜0.05).结论氨茶碱可通过抑制eotaxin的表达减轻哮喘炎症.

青蒿素对脓毒症大鼠的保护作用

目的观察青蒿素对脓毒症大鼠的保护作用并探讨其作用机制.方法采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligationand puncture,CLP)制作大鼠脓毒症模型,观察青蒿素对CLP大鼠死亡率的影响,ELISA法检测术后2、6、12、24、48和72 h大鼠血清LPS、TNF-α和IL-6水平;光镜和透射电镜观察72 h大鼠肠粘膜形态学的变化;分离大鼠腹腔巨噬细胞(PMФ),ELISA法检测青蒿素对LPS(100ng/ml)及热灭活大肠杆菌(3.5×107CFU/ml)刺激PMФ释放TNF-α及IL-6的影响.结果青蒿素组大鼠死亡率低于模型组(P＜0.05),CLP术后血清LPS、TNF-α和IL-6水平较模型组降低(P＜0.05或P＜0.01),肠粘膜的损伤程度减轻;青蒿素对LPS和热灭活大肠杆菌刺激PMqФ释放TNF-α和IL-6具有显著的抑制作用并呈量效关系(P＜0.01).结论青蒿素能抑制CLP大鼠巨噬细胞活化并减轻肠粘膜损伤,对CLP大鼠具有保护作用.

小鼠24p3基因真核表达载体的构建及其在NIH3T3细胞中的表达

目的构建小鼠24p3基因真核表达载体并观察其稳定转染的NIH3T3细胞中24p3/SIP24蛋白的表达情况,初步鉴定24p3/SIP24蛋白介导铁向细胞内转运的生物学功能.方法RT-PCR自小鼠肺组织中克隆24p3 cDNA.用基因重组技术构建24p3-pcDNA3.0真核表达载体并行酶切和测序鉴定.脂质体DOTAP方法转染NIH3T3细胞,48 h后用G418筛选阳性克隆并培养扩增至21 d.对阳性克隆的培养基上清中24p3/SIP24蛋白的表达用ELISA和Westernblot分析,进一步用原子吸收分光光谱观察其介导铁向NIH3T3细胞内转运的生物学功能.结果成功克隆24p3cDNA并构建24p3-pcDNA3.0真核表达载体,筛选出稳定表达24p3/SIP24蛋白的NIH3T3细胞株,24p3/SIP24蛋白在NIH3T3细胞上清中获得表达,并能介导铁向NIH3T3细胞内转运.结论24p3基因在NIH3T3细胞中获得表达,有良好的生物学活性,为进一步研究24p3/SIP24蛋白介导铁转运的生物学功能及作用机制奠定了基础.

三维或单层培养结肠癌HT-29细胞药物敏感性及生物学特性的变化

目的观察结肠癌HT-29细胞在三维或单层培养条件下细胞形态学、细胞周期、细胞凋亡及对化疗药物5-Fu敏感性的变化.方法分别采用liquid overlay技术或常规贴壁法对HT-29细胞进行三维或单层培养,通过显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪测定不同培养方式对细胞周期和凋亡率的影响,并采用radial outgrowth测定法或MTT法分别测定三维或单层培养细胞对5-Fu的敏感性.结果三维培养HT-29细胞悬浮生长,形成致密的多细胞球结构,中心出现坏死区,细胞间有较多的微绒毛、紧密连接、桥粒等结构,而单层培养HT-29细胞呈单层贴壁生长,未见紧密连接、桥粒等连接结构;与单层培养细胞相比,三维培养HT-29细胞G1期比例明显升高[(64.95±0.59)%对(36.77±0.51)%,P＜0.01]、细胞自发性凋亡率降低[(0.99±0.12)%对(4.79±0.49)%,P＜0.01]、对5-Fu产生明显耐药.结论三维培养HT-29细胞在细胞形态学、细胞周期、细胞凋亡等方面与单层培养细胞存在明显差异,可能是导致结肠癌多细胞耐药的重要原因.

持续恒速输注异丙酚在大鼠无肝期前后血药浓度变化的研究靠

目的探讨异丙酚持续恒速输注在大鼠无肝期前后血药浓度变化规律、肝外代谢、肺脏对异丙酚肝外代谢的作用.方法通过大鼠左颈深静脉持续恒速输注异丙酚,于分离肝门时、肝门阻断即刻、肝门阻断15、30、60 min等时间点,同时从右侧颈深动、静脉分别采血(100μl),采用高效液相色谱荧光法(HPLC)检测异丙酚血药浓度.结果颈深静脉或颈深动脉异丙酚血药浓度各时相点间比较,肝门阻断15、30、60min时的血药浓度比阻断前和阻断即刻明显升高(P＜0.01),但3组间没有显著性差异(P＞0.05);颈深静脉与颈深动脉异丙酚血药浓度比较,任何时刻均无显著性差异(P＞0.05).结论肝脏是异丙酚主要代谢器官,异丙酚存在肝外代谢,肺脏不是异丙酚肝外代谢的主要器官.

小鼠组织中Cxcl15 mRNA表达及其在肺组织中的的定位特征

目的观察Cxcl15(chemokine,C-X-C motif,ligand 15)基因在小鼠体内的表达分布规律.方法采用Northern,将小鼠Cxcl15基因与小鼠8种主要组织来源的Poly A+RNA印迹膜进行杂交,观察该基因在小鼠各种组织中的分布规律;采用原位杂交,观察该基因在小鼠肺组织中的分布规律.结果Cxcl15基因主要在小鼠肺组织支气管上皮细胞胞浆中表达,并可能存在不同亚型.结论Cxcl15基因的表达存在组织特异性.

肌间沟臂丛神经两点阻滞法临床应用

上臂近端1/3处及肩锁部位的手术,采用传统的肌间沟臂丛神经阻滞法往往效果不佳,自2002年1月至2004年1月,我科应用肌间沟臂丛神经两点阻滞法,取得较好效果,现报告如下.

1例色素失禁症颅脑损害的MRI表现

患儿,女,10个月,生后15 d开始在躯干、四肢近端出现弥漫性线条状排列的淡红色斑.3周后在此基础上出现绿豆至蚕豆大水疱和丘疹,疱壁厚,尼氏征阴性,不伴发热,无自觉症状.2个月后水疱逐渐消退代之以不规则或旋涡形淡褐色斑,随后由淡褐色逐渐变为深褐色.9个月时,父母发现患儿右侧肢体轻度无力,并肢体活动减少.个人史:患儿系第2胎,足月,顺产,无宫内缺氧或窒息史,无传染病接触史及疫区生活史.

皮肤蝇蛆病10例诊治

近年来发现皮肤蝇蛆病有逐渐增多的趋势,且随着流动人员的增加,发病从牧区转向城市.我院从1991年5月到2004年5月,共诊治10例皮肤蝇蛆病患者,现总结如下.

新生儿单心房、单心室2例

单心室畸形占全部先天性心脏病的1.5%～3%,男性多于女性,在新生儿先天性心脏病中约占4%[1].而单心室同时合并单心房在临床上极为少见.我院新生儿发现2例,现报告如下.

鼻腔原发性恶性黑色素瘤的CT诊断价值

恶性黑色素瘤常发生于皮肤,发生于鼻腔者少见[1].约占全身恶性黑色素瘤的1%[2].本研究收集本院1998-2004年间经手术和/或穿刺活检病理证实且资料完整的鼻腔原发性恶性黑色素瘤11例,对其CT表现进行回顾性分析,探讨CT对该病的诊断价值.

卵巢巧克力囊肿破裂所致急腹症11例分析

妇科急腹症是指以急性下腹痛为主要症状的一类妇科疾病[1].子宫内膜组织(腺体和间质)出现在子宫体以外部位时称为子宫内膜异位症[2].以卵巢内异症多见,囊肿直径一般5～6 cm以下,大可达25 cm,随囊内压的增高,可出现囊肿破裂致急腹症症状.国外于1970年即有报道[3].我们选取8年间巧克力囊肿破裂引起的急腹症共11例进行分析,报告如下.

慢性阻塞性肺病患者肺泡巨噬细胞凋亡测定及其意义

目的探讨慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)凋亡特点.方法经支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞AM.①利用髓过氧化物酶(MPO)染色法观察AM的染色阳性率;②利用TUNEL技术观察支气管肺泡灌洗液中AM凋亡的变化和地塞米松对其凋亡的影响.结果①COPD患者AM之MPO染色阳性率(0.8±0.3)%显著低于对照组(1.2±0.4)%(P＜0.05).②支气管肺泡灌洗液中AM凋亡率(1.9±0.7)%显著低于对照组(4.8±1.3)%(P＜0.01).地塞米松处理12、24、48 h后的AM凋亡率分别为(9.2±2.3)%,(35.4±12.6)%和(45.8±9.2)%,显著高于对照组(5.9±1.8)%,(10.8±2.7)%和(24.1±4.6)%的凋亡率(P均＜0.01).结论吸烟等多种因素可导致COPD患者AM凋亡减少,其对凋亡中性粒细胞(PMN)的吞噬能力下降;较大剂量的糖皮质激素能诱导AM凋亡.

血管内栓塞治疗颅内动脉瘤及其并发症的防治

目的着重讨论微弹簧圈栓塞治疗颅内动脉瘤的方法、技术和手术相关并发症及其防治.方法回顾总结血管内栓塞治疗颅内动脉瘤88例病人,90个动脉瘤.结果100%闭塞70例、90%～95%闭塞13例、80%闭塞5例.术后手术相关并发症9例:微弹簧圈移位3例,术中动脉瘤破裂4例,严重血管痉挛2例;其中死亡2例.结论血管内栓塞动脉瘤腔是一种微创、安全、有效治疗动脉瘤的方法.选择正确的技术和方法对改善动脉瘤栓塞治疗效果,减少并发症有重要意义.

人类免疫缺陷病毒1型在垂直传播的个体间病毒基因型和准种的差异性的实验研究

目的通过对人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)在垂直传播的个体间病毒基因型和准种的差异性研究揭示HIV-1在垂直传播过程中的变异规律.方法提取HIV-1感染母亲及其子女共4例的血浆中总RNA,通过逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)获得HIV-1包膜蛋白(env)基因的C2-V5区域片段,纯化后装入T载体,转化至Top10大肠埃希菌内增殖,通过蓝白筛选获得阳性克隆,阳性克隆为模板行PCR,产物进行构象敏感性凝胶电泳(conformation sensitive gel electrophoresis,CSGE)分析,挑选优势准种和劣势准种测序.结果第1对母亲准种复杂性较其子女低,母子之间各准种的核苷酸序列高度同源,均为C亚型;第2对母亲准种复杂性较其子女高,母子之间各准种的核苷酸序列高度同源,母子均为AE亚型.结论HIV-1在垂直传播过程中亚型不发生变化,病毒准种在传播过程中可能具有选择性,进入新宿主后因环境变化而被重新筛选,二者可能共同导致优势/劣势准种的变化.此外,母婴之间准种的复杂性与其宿主的免疫状态有关.

前列腺癌AR表达与细胞增殖的关系

目的探讨113例人前列腺癌雄激素受体(AR)与增殖相关因子表达的相关性.方法应用免疫组化标记AR、细胞增殖相关因子(Ki67、PCNA).EGFR及核仁组成区AgNOR染色,结合光镜、电镜观察及图像分析等方法,研究AR表达与PCa增殖的相互关系.结果前列腺癌AR(-)组细胞增殖作用较AR(+)组明显增强.结论AR突变,造成PCa细胞的无限增殖能力增强,细胞生长迅速,异质性更明显,可能是PCa难于治疗的原因之一.

DNA损伤修复基因MPG在人体骨肉瘤的表达及其治疗意义

目的本研究首先观察N-烷基嘧啶DNA糖基化酶(MPG)在人体骨肉瘤中的表达特点及其与患者预后的关系,进而构建复制缺陷型腺病毒MPG表达载体,探讨人骨肉瘤细胞HOS过表达MPG及其对DNA损伤药物MMS,MNNG和TMZ敏感性的影响.方法应用免疫组化方法检测60例骨肉瘤组织和3株骨肉瘤细胞中MPG的表达.按染色强度将其分为低表达组和高表达组,统计分析它们与临床病理及患者预后的关系.应用流式细胞术、蛋白印迹和HEX标记寡核苷酸方法确定MPG腺病毒表达载体Ad5 HA-MPG在人体骨肉瘤细胞HOS中的感染效率,MPG蛋白表达和MPG酶活性;MTS、SRB和[3H]胸腺嘧啶掺入法检测细胞存活;PE-Annexinv/7-AAD流式细胞术检测细胞凋亡.结果3株骨肉瘤细胞MPG均呈弱阳性表达.60例骨肉瘤中MPG 40例(65%)为高表达,MPG表达和WHO分型和患者预后显著相关.10 MOI Ad5 HA-MPG可使90%以上HOS感染,感染细胞高表达MPG并具有MPG酶活性.MPG过表达HOS显著地提高DNA损伤性化疗药物MMS、MNNG和TMZ的敏感性,其IC50值分别下降了6.0、4.5和2.5倍.结论Ad5 HA-MPG瞬时MPG过表达,可能是一种提高骨肉瘤细胞对DNA损伤性化疗药物敏感性的潜在治疗方法.

AnnexinⅡ在已分化人表皮角质形成细胞中表达的研究

目的探讨annexinⅡ在已分化人表皮角质形成细胞(keratinocyte,KC)中的表达.方法采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)技术检测早、中、晚期人胚胎表皮KC及成人表皮KC中annexinⅡ蛋白的表达.结果①annexinⅡ在人胚胎期表皮KC中的表达随胚胎的发育逐渐增强,在成人期表皮KC中的表达明显高于胚胎期.②annexinⅡ呈胞膜方式表达,主要分布于基底上层的分化KC中.结论annexinⅡ可能参与表皮KC分化的调控.

自体骨髓单个核细胞移植治疗糖尿病足15例

治疗性血管生成(therapeutic vasculogenesis)[1]是近年来发展的一项微创新技术,动物实验表明自体骨髓单个核细胞植入缺血的肢体可促进局部的血管形成,提示有望用单个核细胞移植治疗下肢缺血性疾病,如糖尿病足.我们于2004年7月起开展了自体骨髓单个核细胞移植治疗糖尿病足15例,取得了较好的效果.

慢性乙肝HBV-DNA载量对甘利欣降酶疗效的影响

甘利欣广泛用于各种急慢性肝炎的治疗,具有显著的降酶效果.然而,慢性乙型肝炎,尤其是"大三阳"者,有疗效差易反跳的现象.观察HBV-DNA载量的高低对其的影响,对提高"大三阳"慢性乙型肝炎的疗效有现实意义.

不同血凝分析仪的检测结果可比性探讨

目的为了提高同一实验室不同血凝分析仪检测结果的可比性.方法以校正合格的ACL-Advance全自动血凝分析仪为比对仪器,利用比对仪器检测患者混合血浆的结果对CA-50半自动血凝分析仪进行校正,然后随机选取比对仪器已检测的高、中、低值患者的新鲜血浆30份,在校正后的CA-50半自动血凝分析仪上检测凝血酶原时间(prothrombin time,PT)、国际标准化比率(international normalized ratio,INR)、纤维蛋白(fibrinogen,FIB).结果30份标本在ACL-Advance全自动血凝分析仪与校正后的AC-50半自动血凝分析仪上测定PT值为(17.30±6.50)、(17.37±6.75)s,INR值为(1.64±0.75)、(1.66±0.76),FIB值为(3.82±1.97)、(3.82±1.99)g/L.二者比较均无显著性差异.结论利用比对仪器测定患者混合血浆的结果来校正其他仪器,可以提高不同血凝分析仪之间的PT、INR、FIB检测结果的可比性.

姑息医学中癌性疼痛的控制进展

未来10年,对癌症和艾滋病患者治愈率的重大变化预期不会发生,许多仍不能治愈的疾病会引起强烈痛苦是不争的事实.姑息医学涉及的对象除晚期癌症患者外,还包括艾滋病、神经病理性疼痛等终生难愈性疼痛的控制.由于艾滋病的传染特性和神经病理性疼痛的症状单一性与晚期癌症患者的表现差别很大,医护干预的原则大不相同,通常所指的姑息医学仅针对晚期癌症病人[1].

SELDI 蛋白质芯片技术及其在医学研究中的应用

随着人类基因组计划的终完成,蛋白质作为生命功能的终执行者,其功能已越来越受到人们的重视.深入研究蛋白质的结构、功能以及它们之间的相互作用,将成为终揭示人体疾病发生发展和转归规律的关键环节之一.传统蛋白质研究的方法如色谱分离纯化技术、二维电泳、质谱等方法因操作过程繁锁、耗时冗长、重复性差、检测样本量小等缺点而不适合对蛋白质开展大规模的筛选研究,蛋白质组学研究迫切需要一种高通量、快速、全自动化的用于对批量蛋白质进行快速研究的仪器.近几年来,随着相关基础科学的发展,融合了生命科学与微电子科学、材料学等多门学科新研究成果的表面增强激光解附离子化飞行时间质谱(surface enhancedlaser desorption ionization-time of flight-mass spectrometry,SELDI-TOFMS)蛋白芯片诞生了,该技术广泛用于各类疾病特异性生物标志物的检测和筛选、蛋白质的相互作用、揭示蛋白酶的作用、测定血清中小分子物质的含量及新药的研制和开发等领域,并取得了一系列突破性进展.

急性早幼粒细胞白血病发生机制及治疗研究进展

急性早幼粒细胞白血病是一种预后凶险的白血病,约占成人急性髓系自血病的10%.该型白血病出血倾向严重,易并发弥漫性血管内凝血(diffuse intravascular coagulation,DIC),尤其在化疗时易发生,常导致患者早期死亡.急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)是临床上第一个应用诱导分化和针对肿瘤特异性标志分子进行治疗并取得显著疗效的人类恶性肿瘤.自从1986年我国首先使用全反式维甲酸诱导分化治疗APL以来,随着对其发病机制的深入研究,不断有新药被证明对APL治疗有效,APL的疗效也在不断提高.由于单从形态学上难以预测APL患者对治疗的反应,联合应用细胞遗传学检查及RT-PCR、FISH技术等对于APL发病机制研究、诊断、疗效监测及预后判断均具有重要意义.

血压计量单位恢复mmHg表示法