第三军医大学学报杂志
Journal of third military medical university 제삼군의대학학보
- 主管单位： 第三军医大学
- 主办单位： 第三军医大学
- 影响因子： 1.01
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-5404
- 国内刊号： 50-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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犬可复性胆总管不全梗阻对Oddi括约肌功能的影响
目的建立可复性胆总管不全梗阻的动物模型,研究胆总管不全梗阻对Oddi括约肌(sphincter of Oddi,SO)运动的影响.方法将成年杂种犬麻醉后,暴露并游离胆总管中段,不全梗阻(PO)组以丝线将胆总管和一直径1 mm的导管一同结扎后拔除导管,正常对照(NC)组不结扎胆总管.术后不同时间点获取血液和肝脏的标本分别检测肝功及肝脏的病理变化;术后第28天进行SO测压.结果术后28 d实验组胆总管梗阻完全解除,肝细胞形态结构恢复,肝功能正常;实验组SO基础压和峰压降低,收缩频率减慢,但收缩间期无明显变化.结论胆总管不全梗阻对SO运动具有抑制作用,该动物模型能够模拟短期的梗阻性黄疸对胆道动力学的影响,方法简便、易行,可重复性好.
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附加二氮嗪与1,6-二磷酸果糖心麻痹液对冷保存大鼠心脏能量代谢的作用
目的观察附加二氮嗪(DZ)与1,6-二磷酸果糖(FDP)心麻痹液对冷保存大鼠心肌能量代谢的作用.方法42只SD大鼠随机分为4组,正常对照组6只;其余各组每组12只,分别为STH组(单纯St.ThomasⅡ号液),DF组(St.ThomasⅡ号液+DZ 50 μmol/L+FDP 5 mmol/L),DF+5-HD组(St.ThomasⅡ号液+DZ50μmol/L+FDP5mmol/L+5-羟基葵酸盐100μmol/L),在4℃条件下保存心脏6 h后,6只取左心室,测定心肌ATP、ADP、AMP含量,计算能荷;提取线粒体,测定线粒体内游离Ca2+浓度([Ca2+]m)及线粒体呼吸功能;另外6只建立离体左心工作模型,再灌注30 min后,测量上述指标.结果与正常对照组比较,冷保存后STH组心肌ATP含量及能荷显著下降,[Ca2+]m显著增高,线粒体Ⅲ态呼吸速率(ST3)及呼吸控制比(RCR)明显降低(P＜0.01);再灌注后心肌ATP含量及能荷没有明显改善,[Ca2+]m进一步增高,RCR进一步降低(P＜0.01).DF组各项指标显著优于STH组(P＜0.01);线粒体ATP敏感性钾通道阻断剂5-HD可部分降低附加DZ与FDP的保护效果.结论附加DZ与FDP可显著改善St.Thomas液冷保存大鼠心脏的能量代谢.
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光化学作用增强阳离子聚合物介导EGFP转染结肠癌
目的观察光化学基因转染技术对阳离子聚合物介导目的DNA转染结肠癌细胞效率的影响.方法以结肠癌细胞SW480、HT29为靶细胞,激光共聚焦显微镜观察光敏剂TPPS2a的胞内分布,MTT法观察基于TPPS2a的光化学作用对结肠癌细胞的生长抑制作用,同时以阳离子聚合物PEI为DNA载体,EGFP质粒为目的DNA,通过流式细胞技术对比观察光化学作用对阳离子聚合物介导EGFP质粒转染结肠癌细胞的影响.结果TPPS2a在2种结肠癌细胞系呈颗粒状分布于细胞质;基于TPPS2a的光动力效应对结肠癌细胞的生长抑制作用随光照剂量增大而逐渐加大,SW480细胞取得IC50的光照时间为约6 min,而HT29取得IC50的光照时间为约12 min;与单纯质粒转染组和阳离子聚合物转染组相比,光化学作用可将阳性细胞率分别提高至(29.61±1.15)(SW480细胞)和(23.47±0.62)(HT29细胞)(P＜0.05).结论TPPS2a的胞内分布与内吞密切相关;基于TPPS2a的光化学细胞毒性作用呈剂量依赖性;与单纯质粒转染组和阳离子聚合物转染组相比,光化学作用可明显提高阳离子聚合物介导转染目的DNA的阳性细胞率.
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C5a反义肽对实验性脓毒症小鼠肺损伤的作用研究
目的研究C5a反义肽(NH2-EARLQRVFLYVNPS-COOH)对盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)致脓毒症小鼠发生肺损伤的保护性作用.方法实验组小鼠CLP后即经尾静脉注射反义肽R4 1、2、4、8 mg/kg,浓度0.5mmg/ml),观察不同剂量R4对小鼠96 h生存率的影响,并对肺组织进行病理观察,检测肺髓过氧化物酶(MPO)活性,检测动脉血氧分压、肺湿干比.结果相较于对照组,治疗组小鼠在R4使用浓度2 mg/kg时96 h生存率明显提高(P＜0.05),动脉氧分压升高(P＜0.01)、MPO和肺湿/干比降低(P＜0.01)、病理改变减轻.结论反义肽R4在小鼠体内有良好的拮抗C5a作用,对脓毒症小鼠肺的急性损伤有保护作用.
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急性尿潴留大鼠膀胱组织黄嘌呤氧化还原酶活性变化及其意义
目的探讨在急性尿潴留时大鼠膀胱组织黄嘌呤氧化还原酶(xanthine oxidoreductase,XOD)活性变化的意义.方法以2倍于正常膀胱容量充盈膀胱2 h建立大鼠急性尿潴留模型.分别于充盈2 h及排空后1、2、3、4 h检测膀胱功能及膀胱组织中XOD活性及脂质过氧化产物丙二醛(malondialdebde,MDA)含量;并观察超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)对膀胱的保护作用.结果急性尿潴留期膀胱不稳定性收缩频率无显著改变,而排空后其不稳定性收缩频率增加.XOD活性在尿潴留期增高,排空后1 h活性降低,排空后2 h再次升高,随后逐渐降至正常.MDA在尿潴留期轻度增高,排空后早期明显增高,4 h后接近正常对照组水平.SOD治疗后逼尿肌不稳定性收缩频率、XOD活性及MDA含量与排空后2 h比较显著降低(P＜0.01,0.05).结论AUR时黄嘌呤氧化还原酶活性变化特征呈双相性改变.提示AUR后膀胱再灌注损害中内源性活性氧可能起诱导、促进炎症损害作用,外源活性氧在急性尿潴留排空后膀胱功能损害中可能起重要作用.
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增生性瘢痕中P物质神经纤维与肥大细胞关联的形态学观察
目的对增生性瘢痕中神经肽P物质神经纤维与肥大细胞进行形态学观察,探讨增生性瘢痕中二者的相互作用情况.方法对神经肽P物质神经纤维及肥大细胞分别行免疫组化及甲苯胺蓝染色,进行形态学观察.结果在增生性瘢痕中,神经肽P物质神经纤维分支多且交错连接,正常皮肤中多为单根走形;瘢痕中肥大细胞数(7.22)显著多于正常皮肤(4.64),有统计学意义;增生性瘢痕中神经肽P物质与肥大细胞密切关联,呈"串珠"样形态.结论增生性瘢痕中神经肽P物质神经纤维与肥大细胞的密切关联,可能与瘢痕的增生和瘙痒相关.
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外源性高胰岛素血症对血管内皮细胞sICAM-1表达的影响
目的通过观察高胰岛素血症对血管内皮细胞可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)表达的影响,探讨其在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)形成和发展中的作用.方法新西兰白兔40只,随机分为4组:正常对照组、高胰岛素血症组、高糖高胆固醇组、联合组.每日皮下注射胰岛素,建立外源性高胰岛素血症.通过放射免疫法测血清胰岛素水平,酶联免疫吸附实验(ELISA法)测定血清sICAM-1水平,免疫组化法测血管内皮细胞sICAM-1的表达.结果与对照组相比,高胰岛素血症组、高糖高胆固醇组、联合组3组血清sICAM-1水平均明显升高(P＜0.05),联合组显著高于高胰岛素血症组和高糖高胆固醇组;高胰岛素血症组和高糖高胆固醇组sICAM-1表达水平相似,但低于联合组.结论胰岛素可增强血管内皮细胞sICAM-1表达,且与高糖高胆固醇饮食有协同增强作用.
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大鼠微管相关蛋白4重组腺病毒载体的构建及在细胞中的表达鉴定
目的构建大鼠微管相关蛋白4(microtubule-ossociated protein 4,MAP4)重组腺病毒载体,并转染新生大鼠体外培养的心肌细胞进行表达和鉴定,为真核表达及有关实验研究提供基础.方法设计1对引物,应用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,从大鼠心肌细胞总mRNA中扩增出MAP4 cDNA,并将MAP4 cDNA克隆到腺病毒穿梭质粒pShuttle2中,构建pShuttle2-MAP4表达质粒.将此表达质粒扩增纯化酶切获得含有目的片段MAP4 cDNA的表达盒与Adeno-X Virul DNA重组并线性化后转染HEK293T细胞,包装产生大鼠MAP4重组腺病毒.并且转染新生大鼠原代心肌细胞,应用免疫组化的方法进行表达鉴定.结果扩增所得的MAP4 cDNA片段经酶切鉴定、PCR扩增、DNA测序终确定为大鼠MAP4基因,所得大鼠MAP4重组腺病毒滴度为2.3×108pfu/ml.转染原代心肌细胞48 h后MAP4表达显著增强.结论为研究MAP4的生物学活性及功能的基因治疗提供了基础.
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人牙髓干细胞体外二维和三维培养的实验研究
目的分离人牙髓干细胞并在体外进行二维和三维培养.方法从健康成人拔除的第二前磨牙获得牙髓,酶消化法分离获得牙髓干细胞,并进行鉴定.体外对牙髓干细胞在二维和三维空间里进行培养,并比较其增殖效率.结果人牙髓干细胞在体外呈克隆样生长,诱导条件下可向肌细胞和成牙本质细胞方向分化.在二维空间里培养,细胞密度提高了4.12倍,而在三维空间里培养,细胞密度提高了11.06倍.培养后细胞生物学特性未发生改变.结论成功地从人第二前磨牙中分离到了牙髓干细胞;三维培养是扩增牙髓干细胞的有效方法.
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PTTG1基因上调表达对A549细胞增殖和凋亡的影响
目的研究人垂体瘤转化基因1(human pituitary tumor transforming gene 1,PTTG1)上调表达对肺腺癌细胞株(A549)增殖和凋亡的影响.方法构建含PTTG1基因的真核表达载体,脂质体法转染A549细胞并用G418筛选出高表达的阳性克隆株,实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitation PCR)和免疫细胞化学(immunocytochemical assay,ICA)分别检测PTTG1 mRNA及蛋白表达的改变,3H胸腺嘧啶核甙(3H-TdR)掺入法检测细胞增殖活性,AnnexinⅤ异硫氢酸荧光素(FITC)试剂盒检测凋亡情况.结果成功构建含PTTG1基因的真核表达载体,获得上调表达PTTG1的A549细胞,转染含PTTG1基因重组质粒的A549细胞增殖活性较未转染组细胞及转染空白质粒组细胞均显著增强(P＜0.05);3组细胞间的凋亡率无显著差异.结论PTTG1基因能显著促进A549细胞的增殖,而对细胞凋亡没有影响.
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胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化的体外诱导
目的探讨胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化诱导的途径和方法,为阐明胰岛β-细胞的发育机制和糖尿病的细胞移植治疗奠定基础.方法将传统的多步诱导法改良为两步诱导法,将胚胎干细胞诱导为胰岛素分泌细胞,并与传统的多步法进行比较.结果经过两步诱导,胚胎干细胞被诱导成了胰岛素分泌细胞,越过了先将胚胎干细胞诱导为神经前体细胞,再进一步诱导为胰岛素分泌细胞的传统模式,使诱导时间缩短,诱导方法简化,所得胰岛素分泌细胞数量与传统方法所得相当.结论多阶段和两阶段诱导均可将胚胎干细胞诱导为胰岛素分泌细胞.
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佛波酯等3种促癌物诱导BALB/c 3T3细胞骨桥素基因表达升高
目的探讨促癌物佛波酯(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate,TPA),岗田酸(okadaic acid,OA)和氯化镉(cadmium chloride,CdCl2)在促进BALB/c 3T3细胞转化过程中对骨桥素基因(OPN)转录表达的影响.方法以N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)为启动剂,TPA,OA和CdCl2分别为促癌剂,建立BALB/c 3T3细胞转化模型.采用小鼠毒理基因芯片分别检测促癌物处理过程中和转化细胞集落中的基因表达变化,同时采用实时RT-PCR验证部分细胞样本的OPN基因表达.结果基因芯片检测结果显示,3种促癌物在作用过程中均能诱导OPN基因表达升高,其中TPA处理后4 h,7 d和17 d,OA处理后3,7 d和24d,CdCl2处理后3 d和7 d,OPN基因的表达较对照组增强;同时在促癌物诱导形成的9个转化细胞集落中,有8个转化集落检测到OPN基因表达升高.此外,实时RT-PCR检测也验证了OPN基因的表达升高.结论OPN基因与TPA,OA和CdCl2的促癌作用存在密切联系.
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新型漏声表面波生物传感器液相检测条件的实验研究
目的探讨漏声表面波生物传感器液相检测系统的影响因素.方法构建检测和参比双路延迟线,并观察在不同影响因素如离子浓度、缓冲液pH值及不同粘度的甘油PBS溶液中两路延迟线的相位变化规律.结果检测延迟线声表面波信号的相位值随溶液粘度、离子浓度、pH值的增大而发生明显的变化,而参比通道的相位曲线变化不明显.＃结论成功构建了漏声表面波生物传感器液相检测检测技术平台,并探索了溶液的粘度、离子浓度、pH等因素对传感器的影响.
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D-gal对鼠成纤维细胞端粒长度的影响
目的明确D-gal是否可以导致乳鼠心脏成纤维细胞端粒长度缩短.方法使用流式荧光原位杂交法(Flow-Fish)检测成纤维细胞端粒长度的变化.结果经过D-gal处理过的成纤维细胞端粒明显缩短.结论通过Flow-Fish法证实了D-gal能缩短成纤维细胞端粒的长度.在细胞水平明确了D-gal致衰老的作用,为建立心脏成纤维细胞衰老模型奠定基础.
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γ干扰素诱导蛋白30基因在系统性红斑狼疮CD4+T细胞中的表达分析
目的探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者CD4+T细胞mRNA中干扰素诱导蛋白30基因(IP-30)的表达水平与SLE疾病活动度的相关性.方法收集23例SLE患者和10例正常对照人群的临床资料.取外周血用免疫磁珠法分离出CD4+T细胞,抽提RNA并逆转录合成cDNA,运用GLGI方法从LongSAGE标签库中筛选出IP-30,比较该基因在系统性红斑狼疮疾病活动指数(SLEDAI)不同的SLE患者中表达的差异.结果①SLE患者组IP-30的表达量显著高于正常对照(P=0.01,P＜0.05).SLEDAI≥10组和SLEDAI＜10组其IP-30的表达量显著高于正常对照(P分别为0.01和0.047),但两组间比较无显著差别(P=0.149).②SLE有狼疮肾炎组和SLE无狼疮肾炎组相比IP-30表达量有差异(P＜0.05).③IP-30的表达量随SLE的活动水平升高而明显增加,与SLEDAI具有显著的正相关(r=0.830,P＜0.01),与补体C3和外周血白细胞数成负相关(r=-0.517,r=-0.424,P＜0.05).结论CD4+T细胞IP-30水平表达升高提示IP-30可能参与SLE的发病,并对SLE活动度的判断和狼疮肾炎的诊断有一定的意义.
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iASPP特异性RNAi表达载体的构建及其干扰效果鉴定
目的构建iASPP基因的RNAi真核表达载体PGCsilencerTM H1/Neo/GFP/RNAi,并观察其转染白血病细胞株Jurkat前后iASPP的表达变化以及其对细胞凋亡的影响.方法根据GenBank中iASPP的序列,设计特异性siRNA序列,将模板序列克隆至PGCsilencerTM H1/Neo/GFP质粒中,测序鉴定后,用脂质体将重组子转染至Jurkat细胞中,用RT-PCR方法检测iASPP的表达,用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化.结果经测序,模板序列与设计序列完全正确,RT-PCR检测Jurkat细胞中iASPP表达在转染干扰质粒后有明显的下降,转染后Jurkat细胞凋亡由11.81%增加到33.15%.结论成功构建了iASPP基因的RNAi真核表达载体,且其对白血病细胞有一定的干扰效果,为下一步探讨iASPP对肿瘤细胞中p53的抑癌作用机制奠定了基础.
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重组小鼠高迁移率族蛋白B1抗菌活性研究
目的:制备具有功能活性的重组小鼠高迁移率族蛋白B1(recombinant mouse high-mobility group box-1,rmHMGB1)并观察其抗菌活性,为深入研究HMGB1抗菌功能创造条件.方法提取BALB/c小鼠脾脏总RNA,经RT-PCR扩增得到编码小鼠HMGB1的cDNA片段,序列测定正确后,构建于原核表达载体pQE-80L,转化于大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达目的蛋白,再经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化后,通过试管稀释法、琼脂扩散法两种抗菌实验观察并比较rmHMGB1对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌(JM109、ATCC25922、DH5α)、绿脓杆菌抗菌活性的差异.结果RT-PCR扩增得到了约648bp的cDNA片段,序列分析与GenBank中报道的编码小鼠HMGB1的cDNA序列一致,纯化后的rmHMGB1对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌(JM109、ATCC25922、DH5α)有明确的抗菌活性,其抗菌活性强弱依次为金黄色葡萄球菌＞JM109＞ATCC25922＞DH5α,对绿脓杆菌则无抗菌活性.结论利用大肠杆菌可表达重组小鼠HMGB1,所获得纯化产物对部分细菌确有抗菌活性,此研究为进一步探讨HMGB1抗菌功能的机制奠定了基础.
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腺病毒介导CTLA4Ig对舍格伦综合征小鼠涎腺分泌功能的影响
目的检测CTLA4Ig-重组腺病毒载体(Ad-CTLA4Ig)在小鼠舍格伦综合征中的治疗作用.方法采用完全弗氏佐剂+同种鼠颌下腺抗原激发诱导小鼠舍格伦综合征.实验组在激发后2 h予以Ad-CTLA4Ig腹腔注射,对照组激发后注射胸腺肽.比较各组动物颌下腺形态学改变,每周饮水量、静态唾液总流率的变化.结果CTLA4Ig-重组腺病毒实验组颌下腺病理学改变不明显,并且静态唾液总流率高于对照组(P＜0.05),而每周饮水量明显低于对照组(P＜0.05).结论Ad-CTLA4Ig可防治小鼠舍格伦综合征的发生,并对临床治疗舍格伦综合征提供了实验基础.
关键词： CTLA4Ig-重组腺病毒载体 舍格伦综合征 -
人胎盘微血管内皮细胞体外原代培养及鉴定方法
目的探索人胎盘微血管内皮细胞的体外培养方法,并对其进行鉴定,为构建体外人胎盘屏障极性模型奠定基础.方法采用酶消化法,获取组织及细胞悬液,经密度梯度离心后,获得较高产量微血管内皮细胞,并进行体外培养.进一步对人胎盘微血管内皮细胞进行免疫细胞化学法的Ⅷ因子相关抗原及CD34鉴定,用透射电镜观察细胞质Weibel-Palade小体.结果体外培养出纯度较高的微血管内皮细胞并培养了3～5代.此外,免疫组化显示Ⅷ因子相关抗原及CD34表达阳性,电镜下观察到Weibel-Palade小体.结论成功分离并培养人胎盘微血管内皮细胞.
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SSX基因家族HLA-A2.1限制性CTL表位预测及其MHC-Ⅰ亲和力分析
目的通过对肿瘤基因SSX家族不同成员进行CTL表位预测,并对其与MHC-Ⅰ亲和力进行分析,为探索基于SSX肿瘤基因家族的免疫治疗奠定基础.方法利用基于超基序结合量化基序方案开发的HLA-A2.1限制性CTL表位预测软件,对SSX基因家族不同成员进行CTL表位预测,然后合成SSX相关待测表位肽P1(AMTKLGFKA)、P4(AMT-KLGFNV)、P5(AMTKLGFKV)和P6(VMTKLGFKV),再对这些合成肽与MHC-Ⅰ结合亲和力及其结合物稳定性进行实验分析.结果与实验阳性肽(HBcAg,18～27)相比,除P1外,P4、P5、P6均显示较高的结合亲和力;而结合稳定性实验(DC50)结果显示,P1、P4与阳性对照肽(HBcAg,18～27)DC50均大于8 h,而P5和P6的DC50介于2～4 h之间.结论计算机软件预测的CTL表位肽,经过体外亲和力与结合稳定性实验筛选到2条理想的表位肽,为该表位的下一步体内鉴定奠定基础.
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阿司匹林对大鼠缺血心肌血管生成及内皮祖细胞动员的影响
目的观察阿司匹林对大鼠缺血心肌血管生成和内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)动员的影响和可能机制.方法实验大鼠分为正常对照组、假手术组、心肌缺血加大剂量阿司匹林组、心肌缺血加小剂量阿司匹林组和单纯心肌缺血组.心肌缺血组和假手术组于术后一周从心腔内取血测血管内皮生长因子(VEGF),外周血分离单个核细胞培养计数EPCs,28 d后取缺血区心肌免疫组化法测毛细血管密度.结果单纯心肌缺血组和假手术组与正常对照组相比,血浆VEGF显著增多[(101.51±16.97)、(94.67±11.78)vs(80.07±10.32),(P＜0.05)];心肌缺血加小剂量阿司匹林组与正常对照组相比,外周血EPCs显著增多[(42±7)vs(20±6),(P＜0.05)];单纯心肌缺血组与正常对照组相比,毛细血管密度显著增加[(600±104)vs(431±73),(P＜0.05)];大剂量阿司匹林抑制了因缺血导致的VEGF、EPCs和毛细血管密度的增加分别由缺血时的(101.51±16.97)、(46±9)、(600±104)降至(70.76±10.15)、(23±6)、(431±80),(P＜0.05).结论大剂量阿司匹林可通过抑制VEGF的表达,抑制大鼠缺血心肌的血管生成和因缺血和损伤导致的EPCs的动员.
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重组人SMAC及SMAC-PTD的制备
目的制备重组人SMAC及SMAC-PTD.方法经RT-PCR从人HeLa细胞中扩增人野生型SMAC及SMAC-PTD cDNA,分别构建于原核表达质粒pET28a(+),测序正确后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,Ni2+-NTA层析纯化,SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白.结果RT-PCR扩增分别得到编码人SMAC及SMAC-PTD cDNA片断,测序结果正确,重组蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达.结论成功制备了高纯度的人野生型SMAC及SMAC-PTD融合蛋白,为进一步研究奠定了基础.
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IFN-β基因启动子调控区域的分析及IRF-3报告基因的构建
目的对IRF-3的主要靶基因--小鼠IFN-β基因启动子区域进行分析并构建IRF-3报告基因载体.方法将小鼠IFN-β基因启动子全序列以及不同截短片段克隆到无启动子的pGF3basic/enhancer质粒中,以EGFP为报告基因,转染小鼠Raw264.7巨噬细胞系后观察细胞对LPS刺激的反应.结果IFN-β启动子PRD调控区域上游序列、PRDⅠ区,PRDⅡ区和PRDⅣ区缺失后,LPS同样能诱导EGFP报告基因的表达.只保留PRD区及IFN-β启动子核心区的载体转染Raw264.7细胞后,可以在LPS刺激下诱导EGFP报告基因的高表达.结论构建了能检测IRF-3活性的报告基因载体,为进一步研究LPS激活IRF-3的信号转导通路奠定了基础.
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雄激素受体在大鼠触须毛囊干细胞中的表达研究
目的探讨在毛囊周期的3个不同时期(生长期、退化期和静止期)中大鼠毛囊干细胞中以及体外培养的毛囊干细胞中雄激素受体(androgen receptor,AR)的表达规律及其意义.方法采用免疫组织化学方法检测AR表达,采用总RNA提取法及RT-PCR检测AR mRNA的表达情况.结果①在体情况下,生长期、退化期和静止期毛囊干细胞中均有AR的表达,AR mRNA在生长期呈强表达,而在退化期和静止期表达微弱;②体外情况下,培养的毛囊干细胞中有AR的表达.结论毛囊干细胞在整个毛囊周期中均有AR的表达,是雄激素作用的靶细胞;AR mRNA在毛囊周期中呈规律性表达,提示雄激素与其受体的相互作用可能对毛囊干细胞的分化具有重要的促进作用.
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大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化的心肌样细胞内Ca2+和CaMKⅡ的变化
目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs)体外诱导分化为心肌样细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)及钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的表达变化.方法取健康SD大鼠骨髓,用5-氮杂胞苷体外诱导培养.取诱导培养2、3、4周的MSCs为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,另取急性分离的心肌细胞为对照组,分别用激光共聚焦技术和Western blot技术检测[Ca2+]i及CaMKⅡ表达水平.结果经荧光探针结合Ca2+后,用激光共聚焦技术检测发现,随诱导培养时间的延长,[Ca2+]i逐渐增加;诱导培养4周的MSCs内[Ca2+]i与对照组比较无显著差异[(100.81±17.64),(100.32±17.10),P＞0.05].各组细胞CaMKⅡ的变化趋势与[Ca2+]i定量分析结果相似,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及对照组分别为(322.45±19.43)、(434.43±16.77)、(680.91±20.61)、(682.69±21.03),Ⅲ组与对照组比较P＞0.05.结论大鼠MSCs在体外诱导培养4周后已分化为心肌样细胞,其细胞内游离钙浓度和CaMKⅡ蛋白表达水平与正常心肌细胞相似.
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大豆低聚糖及大豆多肽对大鼠血脂代谢的影响
目的探讨大豆低聚糖及大豆多肽单独和联合应用对大鼠血脂水平的影响.方法60只健康成年SD大鼠随机分为5组:分别饲喂正常饲料(正常对照组ND),高脂饲料(高血脂模型组HFD),高脂饲料+2%大豆低聚糖(SO组)、高脂饲料+3%大豆多肽(SP组)、高脂饲料+2%大豆低聚糖+3%大豆多肽(SOP组)8周,测定血脂及载脂蛋白含量.结果与HFD组比较,SO组、SP组、SOP组血清TC、TG、VLDL-C、LDL-C水平及AI值均显著降低,HDL-C水平均明显升高;血浆apoA-Ⅰ水平均显著升高,apoB、apoB/apoA-Ⅰ均明显降低,而SOP组效果更加明显.结论大豆低聚糖和大豆多肽能有效调节体内血脂代谢,可以预防高脂血症,二者联合应用的效果更加显著.
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家兔非经胸深低温低流量体外循环模型的建立
目的建立家兔非经胸深低温低流量(deep hypothermic low flow,DHLF)体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)模型.方法选取体质量2.0～2.5kg家兔36只,18只供血,18只用于建立模型,采用单侧股动脉灌注,双侧股静脉引流建立CPB,体表冰浴结合血液降温,肛温低降至18℃保持低流量灌注30 min,随后复温至35℃脱离体外循环,监测血液动力学、心电图、脑电图、血气等变化.结果14只成功建立CPB,顺利脱离体外循环和呼吸机,存活超过6 h.死亡4只,1只死于术后严重渗血,3只死于严重肺水肿.结论家兔深低温低流量CPB模型,稳定,可行,成功率较高.是进行深低温CPB基础研究的理想模型.
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反义波形蛋白逆转录病毒对损伤的星形胶质细胞的作用
目的探讨重组反义波形蛋白cDNA逆转录病毒重组质粒对体外培养损伤的星形胶质细胞(astrocyte,AST)波形蛋白(vimentin)表达的影响.方法采用体外培养AST划伤模型,设实验组及对照组,通过免疫荧光、RT-PCR、Western blot等方法,研究反义波形蛋白逆转录病毒感染对损伤AST波形蛋白表达的影响.结果反义波形蛋白逆转录病毒使损伤AST生长抑制,突起回缩,波形蛋白mRNA及蛋白水平表达降低.结论反义波形蛋白可有效抑制体外培养损伤AST的生长及其波形蛋白的表达.
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大鼠生长期触须毛囊干细胞中FGF-13的表达研究
目的探讨大鼠生长期触须毛囊中以及体外培养的毛囊隆突部细胞即毛囊干细胞中FGF-13的表达分布及其意义.方法分别采用免疫组织化学方法和免疫细胞化学方法检测FGF-13的表达.结果体外和在体两种情况下,毛囊隆突部细胞都有FGF-13的表达,在体情况下毛囊Bulge区以下毛球部以上的外根鞘细胞中亦有干细胞标记和FGF-13的表达.结论提示FGF-13参与生长期触须毛囊隆突部细胞沿毛囊外根鞘向下迁移这一过程.
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体外培养条件下毛囊bulge细胞分泌的β神经生长因子的检测
目的定性定量地检测毛囊bulge细胞体外培养条件下分泌的β-神经生长因子(β-nerve growth factor,β-NGF)及其与bulge细胞生长状态的关系.方法首先使用显微操作技术剥离出原代组织,然后培养原代细胞,使用超薄切片和透射电镜技术来观察原代细胞超微结构,使用酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法测定原代bulge细胞分泌的β-NGF,利用免疫细胞化学(immunocytochemistry,ICC)方法检测原代细胞中β-NGF的表达.结果成功培养出原代bulge细胞,ICC方法检测到原代培养的bulge细胞质表达强阳性β-NGF.超薄切片和透射电镜技术能够显示出原代培养bulge细胞的内部结构,即核质比大,细胞器较少.通过ELISA方法能够测定出原代细胞分泌的β-NGF与体外原代培养的bulge细胞特性呈规律性变化.结论原代bulge细胞分泌的β-NGF呈规律性表达,即生长高峰时期表达为丰富,这与毛囊bulge细胞的生长状态具有规律性变化有关,因此他们具有必然的联系.
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内皮抑素重组腺病毒表达载体的构建及其对血管内皮细胞增殖特性的影响
目的构建含有人内皮抑素(endostatin,ES)基因的重组腺病毒Ad/hEnd,并探讨与感染该病毒的角朊细胞共培养时内皮细胞增殖特性的改变.方法以人胎肝组织mRNA为模板,通过RT-PCR及PCR获得ES基因序列,插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,获得重组质粒pAdTrack-ES.经鉴定后将阳性重组子转化至pAdeasy1受体菌,筛选阳性克隆.脂质体介导转染293细胞,获取Ad/hEnd,经PCR鉴定及上清中ES含量检测后,感染角朊细胞,并采用套皿法与内皮细胞共培养,测定培养液中ES含量、内皮细胞凋亡及细胞抑制率.结果成功获取Ad/hEnd,病毒滴度可达1.65×1012 pfu/L.感染Ad/hEnd的角朊细胞可有效表达并分泌ES,连续培养3 d后,培养液中ES含量可达226 ng/ml;与转基因角朊细胞共培养的内皮细胞凋亡百分数与抑制率分别为(32.7±7.1)%、(60.5±8.3)%,均显著高于对照组[(7.3±2.0)%、(13.8±1.6)%],(P＜0.01).结论与内皮细胞共培养时,转Ad/hEnd角朊细胞可通过分泌ES促进内皮细胞凋亡,并抑制其增殖.
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人脑星形细胞肿瘤微血管组织芯片的构建
目的制作含有不同微血管形态的人脑星形细胞肿瘤组织芯片,并探讨其在血管生成研究中的应用价值.方法从200例人脑胶质瘤组织标本中选择含有不同类型微血管形态组织36例作为供体组织,经打孔、取样、点样等步骤,制作AstMV组织芯片,并进行CD34、FⅧ-RAg和CD105免疫组化标记,观察微血管形态特点和血管生成活性.结果成功制作出了含有不同微血管形态的组织微阵列(组织芯片)AstMV系列,自行制作了取样及点样定位器具.CD34、FⅧ-RAg及CD105均在微血管内皮细胞膜或(和)细胞质表达,不同的内皮细胞标记物所显示的微血管数有所不同,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级星形细胞肿瘤中CD34、FⅧ-RAg标记的微血管数明显多于CD105标记的微血管数,亦明显多于相应Ⅰ级星形细胞肿瘤标记的微血管数.结论构建不同微血管形态的肿瘤组织芯片在血管生成研究中有重要的应用价值.本研究为进一步构建数字化肿瘤微血管以及研究星形细胞肿瘤微血管与血管生成因子间的数学模型关系奠定了基础.
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单克隆抗体Mab03.2C1-C2靶抗原性质的初步研究
目的分析抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原单抗Mab03.2C1-C2靶抗原的性质,探讨该抗原用于实验室检测的可行性.方法制备单克隆抗体,通过SDS-PAGE及Western Blotting法分析该单抗所识别的抗原的分子量.体外诱导形成不同长度的芽管,分析其表面靶抗原的形成情况.不同的生化方法处理芽管,采用间接免疫荧光方法,对单抗靶抗原表位性质进行分析.取口腔念珠菌病患者的真菌涂片标本,用IIF方法观察体外诱导培养之芽管与体内白念芽管表面抗原分布异同.结果体外诱导30 min后白念珠菌芽管表面方可检测到靶抗原.体内白念菌丝与体外诱导菌丝表面靶抗原分布不同.靶抗原表位可能位于N-糖链上.结论Mab03.2C1-C2靶抗原为白念菌丝形成过程中生成的新成分,可能参与白念致病过程.靶抗原为糖蛋白,抗原性显著,对临床应用于系统性白念珠菌感染的检测有意义.
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钙调神经磷酸酶在逼尿肌肥大发生中的作用研究
目的观察钙调神经磷酸酶(CaN)催化亚单位α、β、γ(CnAα、CnAβ、CnAγ)3种亚型在肥大逼尿肌的表达变化,探讨其在逼尿肌肥大发生中的作用.方法选用10周龄雌性Wistar大鼠实行膀胱出口部分梗阻手术.手术分别于2、4、6周取下大鼠膀胱.以RT-PCR检测3种亚型mRNA表达,Western blot测定亚型蛋白表达量的变化.肥大标志物肌球蛋白重链(MHC)表达变化通过考马斯亮蓝胶染色光密度测定.结果①RT-PCR可检测到CnAα、CnAβ,未检测到CnAγ.②Western blot检测,CnAα手术后2周比对照组表达显著增加(P＜0.01),4周、6周表达下降.CnAβ表达无显著变化.③肌球蛋白重链表达变化与CnAα表达变化具有相关性.结论CnAα在逼尿肌肥大发生中起重要的作用,CnAβ作用不明显.
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周期性牵张诱导逼尿肌细胞高表达Cx43的实验研究
目的探讨周期性牵张对膀胱逼尿肌细胞表达连接蛋白43(Connexin43,Cx43)的诱导作用.方法运用牵张膀胱逼尿肌细胞体外模型,给予逼尿肌细胞周期性20%拉伸度的牵张,持续6 h;采用Western blotting、RT-PCR在蛋白和mRNA水平测定逼尿肌细胞Cx43表达.结果正常对照组Cx43表达量为(11.377 5±0.425 1),Cx43mRNA相对表达量为(0.423 3±0.187 5);而给予20%牵张刺激6 h逼尿肌细胞Cx43表达量增加至(14.015 0±0.526 2),Cx43mRNA相对表达量增加到(0.935 0±0.020 67),二者均较对照组有显著增加(P＜0.01).结论周期性牵张可显著诱导增加逼尿肌细胞Cx43在蛋白和基因水平的表达.
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1例肾移植术后对硝普钠耐受并氰化物中毒患者护理
硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)作为一种速效的血管扩张药物,广泛用于临床,其常见副作用是血压急剧下降,而其代谢产物如氰化物等的毒副作用较少见.本研究就1例肾移植术后患者对硝普钠耐受并氰化物中毒的护理进行探讨.
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显微手术治疗颅-眶沟通瘤的护理
颅-眶沟通瘤是较少见肿瘤.本研究对我科1997-2003年18例颅-眶沟通瘤患者资料进行回顾性总结研究,制定出新的护理方案,以期提高该型肿瘤的疗效,减少术后并发症.
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国产奥沙利铂联合氟尿嘧啶及亚叶酸钙治疗晚期大肠癌疗效观察
大肠癌是常见的恶性肿瘤之一.近年来,我国大肠癌发病率呈上升趋势,病死率也不断上升[1].晚期大肠预愈后差,复发转移和化疗不理想,我们应用奥沙利铂(L-OHP,商品名艾恒,江苏恒瑞制药有限公司生产),联合氟尿嘧啶(5-Fu)、亚叶酸钙(CF)治疗复发转移大肠癌取得较好疗效,现报告如下.
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颊脂垫口外疝1例
患者,女,32岁,因"右颊无痛性包块渐大3月余"于2005年11月14日以"右颊部包块"收入院.病史:2005年8月患者无意发现低头时右颊一豌豆大小包块,正常体位包块消失,后篌包块渐大,行"消炎"治疗包块无缩小,皮肤无异常,全身情况良好.
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奥硝唑牙栓的制备及质量控制
目的制备奥硝唑牙科用栓剂,并建立质量控制标准.方法筛选基质,并确定基质组成比例,采用紫外分光光度法测定牙栓中奥硝唑的含量.结果以奥硝唑为主药,明胶甘油为基质制备成牙用栓剂.平均回收率为100.1%,RSD为0.3%.结论该制剂制备工艺简单可行,质量控制方法准确、可靠,可望为牙周病治疗提供一种新的治疗手段.
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屈光参差性弱视Brodmann17、18、19区的功能磁共振研究
目的利用血氧水平依赖性功能性磁共振成像(blood oxygenlevel dependent-functional magnetic resonance imaging,bold-fMRI)技术,探索屈光参差性弱视对不同级别大脑视觉皮层功能的影响.方法以1.5 T磁共振成像系统采集10例屈光参差性弱视及8例正常志愿者枕叶视皮层兴趣区BOLD-fMRI数据,比较屈光参差性弱视组弱视眼与对侧眼,及弱视眼屈光矫正前后皮层神经元活动范围的不同,并与正常组对比,分析其改变特点及机制.结果弱视眼皮层神经元的活动范围在Brodmann17、18、19区均明显小于对侧眼.弱视眼矫正屈光不正后皮层活动水平明显增高,激活范围明显增大.结论屈光参差性弱视矫正屈光不正可部分提高弱视眼所属视觉皮层的活动能力,但其应高级别纹周皮层、纹旁皮层及低级别纹状皮层仍存在明显的功能损害.
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99Tcm标记红细胞检测肝功能衰竭患者肝移植术中的有效血容量变化
目的研究肝功能衰竭患者肝移植术中有效血容量变化情况.方法利用体外法99Tcm标记红细胞(RBC)检测22例施行肝移植手术的肝功能衰竭患者术中有效血容量的变化.时相点:手术开始30 min(T1),无肝期90min(T2),新肝期30 min(T3),手术关闭腹腔(T4).结果尽管HCT、HR、SAP、CVP、MPAP、PCWP等指标保持相对稳定的情况下,BV仍然存在较为显著的变化,T2、T2、T4和T1相差有显著性意义(P＜0.05),T3、T4和T2之间相差有显著性意义(P＜0.05).结论在肝功能衰竭患者施行肝移植术中,在无肝期90 min、新肝期30min期间机体将产生较为显著的血容量异常分布,大量晶体将进入第三间隙并成为术后肺水肿、肺部感染、肾衰等的诱导因素,应该及时进行相应处理.
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睾丸扭转误诊探讨
目的探讨睾丸扭转误诊率高的原因,旨在提高诊治水平.方法回顾性分析20例睾丸扭转患者的临床资料.结果20例中误诊15例,误诊率75%,20例均有睾丸突然疼痛病史,第1次就诊均在发病后2 h内,13例转入我科时距发病已超过12 h.手术探查结果与彩超检测相符,5例6 h内确诊(25%),其中3例复位成功(15%),17例行睾丸切除(85%),均行对侧固定.结论睾丸扭转的早期诊断甚为重要,彩超睾丸血流检查简便易行,临床医生提高对该病的认识是减少误诊提高诊治水平的关键.
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经单鼻孔-蝶窦入路手术切除垂体腺瘤131例的临床分析
我科于1987年11月率先在国内应用Criffith等[1]经单鼻孔-蝶窦入路行垂体腺瘤切除[2],至2004年12月共手术131例.在临床实践中我们对手术器械、具体入路、肿瘤切除后重建鞍底和鼻腔填塞等技术作了改进,现总结如下.
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5例主动脉夹层动脉瘤破裂猝死的尸检分析
主动脉夹层动脉瘤是一种严重的心血管疾患,起病急,病情凶险,可突然破裂引起猝死.临床表现复杂多样,较难确诊,尤其在基础医疗单位,常会因误诊误治而引发医疗纠纷.本研究选择近几年工作中遇到的5例主动脉夹层动脉瘤猝死尸检病例结合文献分析报告如下.
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溶菌霉等10种标准蛋白质在高效离子交换色谱上的复性研究
目的研究变性蛋白质在高效离子交换色谱(high performance ion exchange chromatography,HPIEC)上的保留行为及复性效率.方法分别用盐酸胍(GuHCl)、尿素(Urea)和十二烷基磺酸钠(SDS)将溶菌酶(Lys)等10种标准蛋白质变性,然后在流动相为氯化钠的条件下,用HPIEC对变性蛋白质进行复性,并测定其保留时间、Z值、质量及活性回收率.结果10种变性蛋白质中的4种在HPIEC上得到复性,其保留时间、峰形、Z值与天然蛋白基本一致,其中溶菌酶和核糖核酸酶的质量和活性回收率高,复性效果好.结论用HPIEC对变性的标准蛋白质进行复性,得到较好的复性效果,为HPIEC用于蛋白质复性的实际应用奠定了基础.
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长期接触贫铀对大鼠遗传毒性的初步研究
目的研究贫铀植入/摄入3个月后对大鼠的毒性作用.方法观察大鼠精子畸形率,骨髓微核率的改变,睾丸的超微结构和病理形态学改变以及采用显性致死突变试验观察贫铀对大鼠的生殖毒性.结果植入/摄入贫铀后大鼠精子畸形率和微核率均有增加,睾丸超微结构均有不同程度的改变,而病理形态学观察则未见显著影响.植入组大鼠受孕率明显低于对照组.结论贫铀长时间暴露可对大鼠产生生殖毒性损害以及超微结构的损伤.
