第三军医大学学报杂志
Journal of third military medical university 제삼군의대학학보
- 主管单位： 第三军医大学
- 主办单位： 第三军医大学
- 影响因子： 1.01
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-5404
- 国内刊号： 50-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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蛋白激酶C在腺苷A1受体调控缺氧心肌细胞线粒体通透性转换孔开放中的表达和作用
目的 观察腺苷A1受体的活化能否影响缺氧心肌细胞线粒体通透性转换孔的开放及蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)在其中的作用.方法 将原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞分为5组:对照(常氧)组(A组),缺氧组(B组),缺氧+腺苷A1受体激动剂组(C组),缺氧+腺苷A1受体阻断剂组(D组),缺氧+腺苷A1受体激动剂+PKC阻断剂组(E组).缺氧6 h后以免疫荧光和免疫印迹法分析A、B、C、D 4组PKC的表达变化,用酯化钙黄绿素和氯化钴共孵育法检测5组线粒体通透性转换孔(MPTP)开放,用CCK-8法检测细胞活力.结果 缺氧6 h后,B、D、E 3组MPTP显著开放,细胞活力降低,而C组能明显减少MPTP的开放,减轻细胞损害,并能使PKC的表达量增加.结论 缺氧可引起MPTP开放增加,腺苷A1受体激动剂可上调PKC表达,减少缺氧导致的MPTP开放,维持细胞活力.PKC通路可能是腺苷A1受体调控缺氧心肌细胞MPTP开放的重要途径.
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腺病毒介导Cx43基因修饰对急性白血病骨髓基质细胞GJIC功能的影响
目的 观察急性白血病骨髓基质细胞(acute leukemia bone marrow stromal cells, ALBMSCs)经腺病毒介导的间隙连接蛋白43(Cx43)基因修饰后Cx43基因表达的变化以及对细胞间隙连接通讯(GJIC)功能的影响.方法 用重组腺病毒Ad-Cx43-GFP转染ALBMSCs,荧光显微镜观察报告基因GFP的表达并计算转染效率,RT-PCR法、Western blot法和免疫细胞化学法检测ABMSCs 转染前后Cx43基因及蛋白表达情况,通过染料传输实验观察细胞间隙连接通讯功能的变化.结果 荧光显微镜下观察可见ALBMSCs在转染Ad-Cx43-GFP后24 h即有绿色荧光表达,计数绿色荧光细胞的百分率得出转染效率为(82.7±2.16)%;RT-PCR法、Western blot法和免疫细胞化学法检测显示转染Ad-Cx43-GFP后ALBMSCs Cx43基因及蛋白表达较转染前增强(P＜0.01);转染Ad-Cx43-GFP后ALBMSCs GJIC功能较转染前增强(P＜0.01).结论 腺病毒介导Cx43基因修饰ALBMSCs后可上调其Cx43基因的表达并增强GJIC功能.
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青藤碱对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞体外增殖及凋亡的影响
目的 观察青藤碱(sinomenine, SN)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes, FLS)凋亡及增殖的影响,为青藤碱在临床上的应用提供实验依据.方法 光镜和荧光显微镜观察FLS形态的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,MTT比色法检测SN对FLS生长的抑制作用.结果 光镜及荧光显微镜下可见核固缩,变圆,荧光染色增强等凋亡形态学变化.流式细胞仪结果显示,随着SN浓度及作用时间的增加,被处理的FLS的凋亡率增加,未处理组与各处理组比较差异具有显著性(P＜0.05),其中3.2 mmol/L浓度的SN作用48 h对FLS凋亡影响为显著.MTT结果显示,加入不同浓度SN(2.8～3.2 mmol/L),培养的FLS24 h、48 h后对增殖的抑制水平显著高于未处理组,与凋亡率呈现正相关(r=0.787, P＜0.05).结论 SN在一定浓度及作用时间内可抑制RA患者FLS增殖,诱导凋亡,这可能是SN治疗RA机制之一.
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荧光胺示踪氨基葡甘露聚糖的跨细胞膜能力与转运机制
目的 用荧光胺标记来示踪氨基葡甘露聚糖(aminoglucomannan, AGM)的跨细胞膜转运,以此证实氨基葡甘露聚糖跨(细胞)膜能力与转运机制.方法 用荧光胺标记氨基葡甘露聚糖,将标记所得的荧光衍生物与外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC)和HepG2细胞在CO2培养箱中孵育,然后用荧光显微镜(紫光作激发光)观察.结果 PBMC和HepG2细胞内均出现靛色荧光.结论 氨基葡甘露聚糖能跨细胞膜转运进入细胞内.
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滋养层细胞促融合表位肽抗生育作用的初步研究
目的 合成多价抗原肽,观察其体液免疫效果,并初步评估其抗生育潜力.方法 选择人滋养层细胞促融合表位模拟肽与一种通用辅助T细胞表位(PADRE)作为骨架,合成多价抗原肽(MAP)结构的免疫原,与等量弗氏佐剂混悬后免疫雌性C57BL/6小鼠,观察体液免疫反应的特点及抗血清干扰滋养细胞融合的效果.结果 在431A 固相自动肽合成仪上成功地合成了MAP多肽, 并经HPLC纯化、质谱鉴定证实其纯度达95%以上;其在小鼠血清中诱导出的特异性抗体的滴度高达1∶1 024,且可以特异识别滋养层细胞相关抗原表位;在1∶10 稀释的抗血清存在时,forskolin诱导的人绒癌细胞(BeWo)间融合显著减少(P＜0.01).结论 由含有人滋养层细胞促融合表位模拟肽、具有特异性氨基酸序列的新抗原所制备的抗血清可识别滋养层细胞相关天然抗原表位, 并在小鼠体内激发出较理想的特异性体液免疫, 同时,抗血清对BeWo细胞间融合具有一定抑制作用.
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慢传输型便秘患者乙状结肠雌激素β受体分布的免疫组化观察
目的 初步观察雌激素β受体(estrogen receptor β, Erβ)在慢传输型便秘(slow transit constipation, STC)患者乙状结肠中的分布.方法 用Erβ免疫组织化学技术观察16例STC患者以及10例正常对照组乙状结肠中Erβ的分布情况,并进行半定量分析.结果 Erβ在STC患者以及正常对照组乙状结肠黏膜以及间质细胞中均有不同程度的表达,正常对照组乙状结肠黏膜主要表现为上皮及腺体细胞核及核周细胞质染色,以核周细胞质染色为主.而STC患者主要表现为上皮及腺体细胞核染色为主.与正常对照组相比,STC患者各个区域Erβ均明显减少(P＜0.05).结论 STC乙状结肠Erβ数量显著减少,但Erβ减少是原发性的还是继发于某种其他损害仍有待探讨.
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慢性房颤对风湿性心脏病心房肌细胞ELK-1、p-ELK-1表达的影响
目的 研究风湿性心脏病慢性房颤患者心房肌细胞ELK-1、p-ELK-1的表达,探讨房颤发生与ELK-1、p-ELK-1 表达之间的关系.方法 12例风心病换瓣患者分为2组:①慢性房颤组(6例)房颤持续时间均＞6个月,②窦性心律组(6例)为正常心律.手术中切取少许右心房游离壁组织采用免疫组化和间接免疫荧光技术检测心房肌ELK-1、p-ELK-1的表达与分布.结果 ①免疫组化显示ELK-1主要表达在心房肌细胞质和细胞核,慢性房颤心房肌较窦性心律心房肌表达明显减弱;②间接免疫荧光技术显示ELK-1在窦性心律心房肌细胞核表达相对较高,在房颤心房肌细胞核中表达明显受到抑制;p-ELK-1在房颤心房肌、窦性心律心房肌均表达受抑.结论 转录激活因子ELK-1的表达改变可能在慢性房颤心房肌的分子重构中起着重要的作用.
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PIAS3在人脑胶质瘤中的表达
目的 通过观察PIAS3(protein inhibitor of activated STAT3)在不同级别胶质瘤中的表达,研究PIAS3表达与胶质瘤分化程度的关系.方法 运用免疫组织化学法对50例胶质瘤标本及5例正常脑组织中PIAS3的表达进行对照研究.结果 正常脑组织中未见PIAS3表达,胶质瘤标本中的总阳性率为56%(28/50),两者之间差异有显著性(P＜0.01);不同病理级别的阳性率和标记指数随着肿瘤恶性程度的升高而增加,但Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级胶质瘤PIAS3阳性率无明显差异(P＞0.05),Ⅰ～Ⅲ级与Ⅳ级阳性率之间有显著差异(P＜0.01);Ⅰ级与Ⅱ级的标记指数之间、Ⅲ级与Ⅳ级的标记指数之间均无明显差异(P＞0.05),低度恶性组(Ⅰ～Ⅱ级)与高度恶性组(Ⅲ～Ⅳ级)之间有显著差异(P＜0.05).结论 PIAS3在胶质瘤中有表达,并与肿瘤的病理分级和恶性程度密切相关,提示其可能参与了胶质瘤的发生、发展.
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缓冲液pH值对LSAW-bisPNA传感器检测系统的影响
目的 探讨PBS缓冲液pH值对LSAW-bisPNA基因传感器检测系统的影响.方法 LSAW-bisPNA基因传感器表面固定终浓度为1.0 μmol/L的bis-PNA探针,然后分别在pH 5.8～8.0的PBS缓冲液中和相应的靶序列杂交,记录相位变化及反应所需时间.结果 在不同pH值缓冲液中,bis-PNA与靶序列反应引起的相位变化有明显差异(P＜0.01),pH 6.6与pH 6.8时传感器响应信号大,但两者反应所达到的平衡时间有明显差异(P＜0.05),pH值6.6时检测所需时间更短.结论 选择pH 6.6作为bis-PNA和靶序列dsDNA反应的适pH值,在该pH值条件下传感器响应信号大,反应达平衡时间短.
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轮状病毒感染乳鼠致病机制的实验研究
目的 研究轮状病毒(rotavirus, RV)腹泻发病机制.方法 生后7 d乳鼠经口感染猴RV(SA-11)后不同时间点取小肠组织,观察形态学改变并用软件(Image pro plus 5.1, IPP5.1)测定;免疫组化染色观察RV抗原分布;Phalloidine染色观察小肠绒毛丝状肌动蛋白分布;肠上皮细胞原位凋亡检测.结果 乳鼠感染RV后小肠绒毛轻度充血水肿、上皮细胞广泛空泡状变性,顶部大量脂滴样结构,微绒毛排列紊乱或脱落,而细胞间连结未见明显结构改变;RV抗原分布主要在小肠绒毛的上部;肠组织丝状肌动蛋白含量有明显减少;小肠上皮细胞凋亡增加.结论 RV主要感染小肠成熟绒毛上皮细胞;腹泻的发生与小肠绒毛上皮细胞骨架损害、微绒毛损害、细胞凋亡脱落和绒毛萎缩相关,但与肠上皮细胞间连接损害关系不大.
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自制异体骨腰椎间融合器的力学测评
目的 评价植入自制异体骨腰椎间融合器(异体骨cage)的腰椎节段的稳定性和生物力学性能.方法 将自制异体骨腰椎间融合器植入5具新鲜青壮年尸体标本的L4～L5椎间隙,进行抗弯、抗扭转和抗压缩测试,并与植入前和髓核切除后进行比较.结果 自制异体骨腰椎间融合器植入后,腰椎节段的屈曲和后伸的抗弯强度显著增加(P＜0.01),抗扭转强度也有较显著增加(P＜0.05).其压缩刚度比髓核摘除后高(P＜0.05) .结论 自制异体骨腰椎间融合器植入腰椎节段的稳定性提高.自制异体骨腰椎间融合器具有足够的支撑、维持或增加椎间隙高度的功能,椎间稳定性好,其设计符合椎间隙解剖学特点,可以达到生物力学和临床应用要求,但目前临床应用时仍需加用内固定.
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G-CSF动员循环间充质干细胞及其对小鼠颅脑损伤修复的可行性分析
目的 建立小鼠严重颅脑创伤模型探讨粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor, G-CSF)动员循环间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)的可行性,并观察G-CSF动员的修复效应.方法 以G-CSF作为动员剂,培养骨髓和外周血来源的MSCs,计数动员前后的CFU-F.制作小鼠严重颅脑创伤模型,致伤后采用G-CSF对MSCs进行动员,在2、24、48、96、120、144、192、264、336 h 进行神经行为学评分、运动功能评分,并观察小鼠死亡率和病理组织切片.结果 从小鼠外周血培养出MSCs,G-CSF动员后骨髓和外周血MSCs的CFU-F数量显著高于正常对照组(P＜0.01).致伤后小鼠神经行为学和运动功能评分显著低于正常对照组(P＜0.01),创伤治疗组在144～192 h期间评分显著高于创伤组(P＜0.05).致伤后小鼠死亡率增高,病理切片可见创伤处有出血和空泡.结论 成功培养及用G-CSF动员了外周血MSCs,在成功建立小鼠严重颅脑创伤模型的基础上,显示G-CSF动员可以降低严重颅脑创伤小鼠死亡,参与了创伤修复.
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l-Caldesmon腺病毒的构建及其在ECV304细胞中的表达
目的 构建含有l-Caldesmon基因的重组腺病毒表达载体.方法 以含有l-Caldesmon全长编码序列的pCGN-CaD为模板,PCR扩增l-Caldesmon, T-A克隆,酶切亚克隆到穿梭质粒pAdtrack-CMV上,在BJ5183菌内和pAdeasy同源重组,筛选阳性克隆,酶切鉴定,线性化后脂质体法转染HEK293细胞进行包装、扩增,得到含有l-Caldesmon基因的重组腺病毒,根据报告基因GFP测定病毒滴度.将收集的病毒液感染ECV304细胞,Western blot检测l-Caldesmon蛋白的表达.结果 成功构建了含有l-Caldesmon基因的重组腺病毒载体,病毒滴度可达1×10 9U /ml.重组病毒感染后可使ECV304细胞l-Caldesmon表达较对照组增加5倍.结论 该重组腺病毒载体的构建为研究l-Caldesmon蛋白在内皮细胞中的生物学功能提供了一定的工作基础.
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FLT3靶向RNA干扰对THP-1细胞增殖的影响及其可能机制
目的 研究FAM样酪氨酸激酶3(FLT3)靶向RNA干扰对急性髓细胞白血病细胞株THP-1的细胞增殖和周期的作用,探讨其可能的机制.方法 体外转录合成FLT3靶向短发夹状干扰RNA(FLT3-shRNA),转染THP-1细胞;CCK-8法检测增殖抑制率、绘制增殖曲线,流式细胞法测细胞周期,半定量RT-PCR及Western blot测干扰前后cyclin D1和cyclin A的mRNA、蛋白水平的表达.结果 FLT3-shRNA干扰可抑制THP-1细胞增殖,抑制率为(36.70±3.67)%;干扰后THP-1细胞增殖曲线滞后于对照,曲线低平缺乏典型的指数增殖特征;干扰48 h细胞G0 /G1 期比例(65.51±4.48)%明显增高,S期(25.11±2.70)%下降;干扰后cyclin D1的表达下降,48、72 h对其mRNA的抑制率分别是(37.09±3.76)%、(34.30±7.60)%,对蛋白的抑制率是(37.51±1.58)%、(39.40±5.44)%,cyclin A的mRNA、蛋白的表达无变化.结论 FLT3靶向RNA干扰可抑制THP-1细胞增殖,其机制可能与下调cyclin D1的表达有关.
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牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜Müller细胞凋亡的防护研究
目的 观察高糖培养条件及牛磺酸干预视网膜Müller细胞的凋亡变化,探讨牛磺酸对早期糖尿病视网膜Müller细胞的保护作用.方法 取出生后3 d的SD大鼠视网膜,分离纯化培养视网膜Müller细胞;经预实验选取25 mmol/L葡萄糖作为高糖培养条件,实验分为6组:正常组;高糖+0.1 mmol/L牛磺酸组;高糖+1 mmol/L牛磺酸组;高糖+5 mmol/L牛磺酸组;高糖+10 mmol/L牛磺酸组,用原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测视网膜Müller细胞凋亡并观察牛磺酸的防护效应.结果 神经胶质酸性蛋白(glia1 fibrillary acid protein, GFAP)和S-100荧光双染鉴定纯化培养的视网膜Müller细胞均被双染;牛磺酸干预后TUNEL阳性细胞数量明显减少,并呈一定剂量的关系效应,1～10 mmol/L牛磺酸干预TUNEL阳性细胞显著低于高糖培养组(P＜0.01).结论 牛磺酸能够呈剂量依赖性地抑制高糖所致视网膜Müller细胞凋亡.
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人乳腺浸润性导管癌薄层断面解剖及三维重建
目的 研究数字化虚拟人乳腺浸润性导管癌三维重建方法,探讨肿瘤空间生长特征.方法 对术前穿刺明确诊断的浸润性导管癌手术切除全乳标本进行薄层铣切,取得全乳连续图像,采用3DDOCTOR 软件生成三维立体图,观察肿瘤薄层断面及三维特征.结果 乳腺薄层断面各结构清晰,乳房实体有较强的立体感,通过上下左右不同层面的旋转,可了解肿瘤各个空间方向的生长方式.结论 人乳腺浸润性导管癌铣切图像精确,三维重建图像清晰,可较准确反映乳腺癌在乳房中结构特征及生长方式,对乳腺癌保乳手术切除范围判定有指导意义.
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2,3,7,8-TCDD对B淋巴瘤细胞株CH12.LX抗体分泌功能的毒性效应及机制研究
目的 探讨2,3,7,8-四氯二苯-对-二噁英(TCDD)对B淋巴细胞株CH12.LX的抗体分泌功能的毒性效应,及其可能的受体机制.方法 以B淋巴细胞株CH12.LX为细胞模型,以ELISA法检测系列浓度TCDD处理对LPS活化CH12.LX的IgM分泌功能的影响,以RT-PCR和Western blot 法检测CH12.LX细胞内芳香烃受体(AhR)的表达水平,以及TCDD对细胞色素P450Cyp1a1的诱导效应.结果 较低浓度的TCDD(0.03 nmol/L)即对CH12.LX的IgM分泌能力产生了显著的抑制效应(P＜0.05),同时TCDD(10 nmol/L)可显著诱导CH12.LX细胞内Cyp1a1 mRNA的表达(P＜0.05),并于CH12.LX细胞内发现AhR有一定水平的表达.结论 TCDD对B淋巴细胞株CH12.LX存在显著的抗体分泌抑制效应;同时,推测TCDD的这一免疫毒性效应主要可能由AhR介导.
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糖基化白蛋白促内皮细胞小管样结构形成及其机制
目的 观察糖基化牛血清白蛋白(advanced glycated bovine serum albumin, AGE-BSA)对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)小管样结构(tubule like structure,TLS)形成的影响并探讨其可能机制.方法 实验设实验组、实验对照组和空白对照组.实验组设25、50、100 μg/ml 3个AGE-BSA浓度;同时设置相同浓度的牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)作为实验对照组;内皮细胞完全培养基作为空白对照组.各组设24、48、72 h 3个时相点,采用三维胶TLS形成实验和ELISA方法分别检测不同浓度AGE-BSA作用下HUVEC在Ⅰ型胶原中形成TLS的长度以及HUVEC自分泌血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的浓度.结果 在24～72 h内,浓度为25～100 μg/ml的AGE-BSA比相同浓度的BSA使HUVEC培养上清中VEGF的量和在胶原中分化形成TLS的长度均明显增加(P＜0.05).结论 AGE-BSA可通过刺激VEGF自分泌促进内皮细胞TLS形成,提示糖基化终末产物可能参与糖尿病视网膜血管生成.
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PTZ点燃癫痫大鼠海马NSE和BMP4的表达
目的 观察神经元特异性烯醇酶(neuron-specific enolase, NSE)和骨形成蛋白4(bone morphogenic protein 4, BMP4)基因在戊四氮(pentylenetetrazol, PTZ)点燃癫痫大鼠海马中的表达,并探讨两者与癫痫发病机制和脑损伤的关系.方法 将50只成年雄性SD大鼠分为对照组和实验组.实验组采用PTZ点燃癫痫大鼠,按点燃进程,又随机分为Ⅰ级组、Ⅲ级组、Ⅳ级组和Ⅴ级组.用免疫组化技术、地高辛标记特异性寡核苷酸探针原位杂交组织化学技术和图像分析技术,观察海马NSE和 BMP4表达的变化.结果 发现应用PTZ点燃后,随发作级别的增高,大鼠海马各区NSE和BMP4的表达亦增加.在Ⅲ和Ⅳ级大鼠海马CA3及DG的NSE和BMP4表达明显高于对照组(P＜0.01);Ⅴ级大鼠在发作后海马CA3及DG的NSE和BMP4表达呈逐渐下降.结论 PTZ点燃可诱导癫痫海马内神经元损伤和神经发生增加,这可能是癫痫海马内神经元丢失、神经元可塑性的病理基础;NSE其表达水平与神经元损伤程度和预后密切相关;BMP4可能在PTZ癫痫形成过程中起重要作用.
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TIMP-3在移植物慢性排斥反应血管病变中的作用研究
目的 探讨TIMP-3在移植物慢性排斥反应血管病变中的作用.方法 在大鼠移植段主动脉转染TIMP-3质粒,利用免疫组织化学法测定移植段腹主动脉内MMP-1,2、TIMP-3表达;Northern杂交分析MMP-2表达;酶图分析术后MMP-2的活性.结果 ①同系移植组MMP-1,2、TIMP-3表达均较低;异系移植组MMP-1,2、TIMP-3表达显著增加.②转染TIMP-3的异系移植组术后1、2周时TIMP-3免疫组化染色密度指数为(1.7±1.1)和(0.9±0.4),较单纯异系移植组、同系移植组明显增强,有显著差异(P＜0.05).③转染TIMP-3的异系移植组MMP-2活性相对单纯异系移植组、同系移植组明显降低.结论 调控MMPs与TIMPs之间的平衡,利用TIMP-3可能有效抑制MMPs表达及活性,干预细胞外基质的形成,从而减缓CR的发生.
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广东地区宫颈癌HPV52型E6基因突变分析
目的 调查我国广东地区宫颈癌患者组织中HPV52型的感染率及E6基因突变特性,为制备适合中国人群的疫苗提供流行病学资料.方法 采用HPV通用引物对130例宫颈癌标本中的HPV L1区基因序列进行PCR扩增,并结合基因测序分析;对所获得的HPV52再进行E6基因测序分析.结果 获得HPV52型8例,检出率为6.15%,对其中的3例HPV52 E6基因进行测序分析.结论 与GenBank标准株相比,广东地区发现的1例HPV52 E6基因有多处突变,2例E6基因无突变,与香港发现的HPV52突变株相近.
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缺氧对ECV-304细胞CASK表达及细胞内分布的影响
目的 了解缺氧后ECV-304细胞钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(calcium/calmodulin-dependent serine protein kinase, CASK)蛋白表达及细胞内分布的变化.方法 将培养的ECV-304细胞置于缺氧(5%O2) 条件培养1、3、6、12 h,用Western blot方法检测CASK表达的变化,用免疫组化技术观察CASK在细胞内分布情况.结果 ECV-304细胞的CASK表达随缺氧时间延长而逐渐增高,3 h开始增加,6 h达高峰,12 h下降但仍高于正常.免疫组织化学染色的结果显示,随着缺氧时间的延长,细胞染色加深、并出现CASK向核膜聚集的现象.结论 缺氧可以影响CASK的蛋白表达和细胞内分布,提示CASK可能是一个新的值得关注的缺氧相关蛋白.
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人毛囊细胞来源双层皮肤替代物的构建和组织学特征
目的 探索人毛囊细胞构建的双层皮肤替代物的组织学特征.方法 用毛乳头细胞、真皮鞘细胞分别与外根鞘细胞构建复合壳多糖双层皮肤替代物,分析其体外和移植至大白鼠后的组织学特征.结果 毛囊来源细胞构建的皮肤替代物中表皮细胞排列更紧密、角化突出,真皮内可见与表皮相连的上皮细胞柱及球形膨大细胞团形成.结论 毛囊细胞是构建皮肤替代物的良好细胞来源.
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缺氧调节基因/产物参与CoCl2预处理对分化SH-SY5Y细胞缺氧损伤的保护
目的 探讨缺氧调节基因/产物在CoCl2化学缺氧预处理抵抗神经型细胞缺氧损伤中的作用.方法 分化的SH-SY5Y细胞分为对照组、化学缺氧预处理组(细胞先用50 μmol/LCoCl2预处理3 h,换液后常氧培养1 h,然后在2%的低氧孵箱内缺氧28 h)、缺氧组(2%的低氧孵箱内缺氧28 h).RT-PCR测VEGF、GLUT-1、EPO、LDH-A的mRNA表达.通过应用重组人VEGF纯品,进一步确定VEGF在化学缺氧预处理组中的保护作用.结果 化学缺氧预处理组细胞GLUT-1、EPO mRNA表达显著高于缺氧组(P＜0.05),VEGF mRNA表达显著高于缺氧组(P＜0.01),LDH-A mRNA表达在两组之间没有显著性差异(P＞0.05).MTT细胞活力测定显示,重组人VEGF可模拟预处理组的保护作用.结论 CoCl2化学缺氧预处理很可能通过促进VEGF、GLUT-1、EPO等缺氧调节基因/产物表达,发挥其神经保护作用.
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异黄酮类化合物F11抗癌活性的实验研究
目的 研究经结构修饰后的异黄酮类化合物F11是否具较好的体外、体内抗癌活性.方法 采用MTT法,以5,7,4'-三羟基异黄酮(genistein, GEN)作为对照,研究化合物F11对Hela细胞的抗增殖作用;采用荷瘤裸鼠模型,以GEN和环磷酰胺作为对照,研究化合物F11在体抗癌效应.结果 MTT实验结果显示,在相同的作用浓度下,F11处理组Hela细胞形态异常改变,死细胞明显增多,细胞存活率显著低于GEN作用组(P＜0.05).荷瘤动物实验结果表明与GEN相比,F11对Hela细胞裸鼠移植瘤的生长有显著的抑制作用(P＜0.01),效果与环磷酰胺相当,且未观察到毒副反应.结论 异黄酮类化合物经过特定结构修饰,可显著增强其抗癌效应,有值得进一步研究开发的潜在价值.
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整合素β1基因剔降血管内皮细胞株的建立及其增殖活力研究
目的 构建人整合素(integrin)β1基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体(pGenesil-integrinβ1),建立integrin β1剔降血管内皮细胞株,观察integrin β1对EA.hy926细胞株增殖的影响.方法 合成integrin β1 siRNA模板,经退火后插入到pGenesil-1荧光载体.阳性重组质粒经DoTAP转染至EA.hy926细胞中.蛋白印迹观察pGenesil-integrinβ1表达载体对目的蛋白integrin β1 表达的抑制效率,绘制转染基因前后细胞生长曲线.结果 经酶切、测序验证,pGenesil-integrinβ1重组质粒构建成功.转染细胞后,可明显抑制integrin β1的表达.整合素β1基因剔降血管内皮细胞株细胞增殖减慢,与EA.hy926细胞株相比,生长曲线右移.结论 成功构建了pGenesil-integrin β1 重组质粒,建立了integrin β1下调细胞株,下调integrin β1表达对血管内皮细胞增殖产生负调控作用.
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诺帝对体外内皮细胞三维成型的抑制作用
目的 观察自行研制的抗肿瘤制剂诺帝(Nordy)对三维胶原体外培养条件下恶性胶质瘤细胞诱导ECV304细胞血管生成的抑制作用.方法 采用不同浓度、不同时相点给药;观测在恶性胶质瘤细胞系SHG-44诱导 ECV304细胞生长和小管样结构形成的过程中,ECV304细胞增殖周期、凋亡率以及小管样结构形成数目、大小等指标.比较诺帝对SHG-44细胞诱导ECV304细胞形成小管样结构作用的差异.结果 诺帝对SHG-44细胞诱导的体外三维培养ECV304细胞小管形成具有明显的抑制作用,主要表现在细胞增殖周期、凋亡率以及小管样结构形成数目、大小等指标都有不同程度的改变.结论 诺帝通过对细胞核增殖的抑制和诱导部分凋亡作用来抑制小管结构的形成,是一种具有抗体外血管生成作用的良好制剂.
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原代绒毛滋养层细胞的培养及转染研究
目的 探索绒毛组织滋养层细胞原代培养、纯化的有效方法及佳转染方法.方法 分离妊娠7周内的人工流产胚胎的绒毛组织进行滋养层细胞的培养和纯化.用细胞免疫化学方法对培养细胞进行鉴定;用MTT实验方法绘制滋养层细胞的生长曲线;用细胞贴壁率找到适pH;用细胞存活分数评价转染的佳脂质体用量.结果 成功寻找到滋养层细胞原代培养和纯化的有效方法;细胞消化传代后的12～48 h滋养层细胞处于对数生长期,pH 6.8～7.0为培养液适pH范围;并找到质粒转染滋养层细胞的佳脂质体用量.结论 成功培养和纯化滋养层细胞,并找到滋养层细胞的佳转染方法.
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pSiRNA-Notch1逆转录病毒载体的构建及对恶性脑胶质瘤细胞的作用
目的 建立逆转录病毒介导的人Notch1基因RNA干扰体外表达体系并观察对恶性脑胶质瘤细胞的作用.方法 将人Notch1基因RNAi双链转录DNA片段重组到逆转录病毒质粒Psilencer 5.1-H1 Retro中,构建成携带人Notch1基因RNAi逆转录病毒载体pSiRNA-Notch1,经PT6细胞包装后,产生的重组逆转录病毒感染U251和CHG-5恶性脑胶质瘤细胞,用WST-8、RT-PCR和Western blot分别检测对转染细胞活性、人Notch1 mRNA和蛋白表达的影响.结果 重组pSiRNA-Notch1质粒经测序鉴定正确.重组逆转录病毒滴度可达224×10 4cfu/ml,感染U251和CHG-5恶细胞后3 d能明显抑制细胞生长,RT-PCR和Western blot检测人Notch1 mRNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照组和未干扰组.结论 携带人Notch1基因RNAi双链转录DNA片段的逆转录病毒有明显的抑制恶性脑胶质瘤细胞生长作用,为下一步开展基因治疗恶性脑胶质瘤奠定了基础.
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高效液相色谱法测定去甲二氢愈创木酸的含量及其有关物质
目的 建立测定去甲二氢愈创木酸(NDGA)含量和检查有关物质的HPLC方法.方法 采用Zorbax SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),检测波长为282 nm.含量测定以三氟醋酸-水-乙腈(0.05∶45∶55,pH 3.5)为流动相,有关物质检查采用梯度洗脱,以三氟醋酸-水(0.05∶100)为流动相A,三氟醋酸-乙腈(0.05∶100)为流动相B,洗脱梯度:0～15 min,流动相B的比例为40%～70%,15～30 min,流动相B的比例为70%.结果 NDGA浓度为5.0～100.0 μg/ml时,峰面积与其浓度呈良好的线性关系(r=0.999 9),检测限为1.2 ng(S/n=3),含量测定重复性试验RSD为0.54%(n=6).有关物质检查重复性试验RSD1.8% (n=6).结论 本法简便、准确、快速、灵敏,可用于NDGA的质量控制.
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脓毒症模型大鼠循环内皮细胞与肝功能状态间关系的相关性研究
目的 探讨大鼠脓毒症中循环内皮细胞(circulating endothelial cells, CEC)数量的变化及其与肝功能改变的关系.方法 利用盲肠结扎穿孔模型(CLP)在大鼠制作脓毒症模型.观察CEC数量、白细胞数量的变化、以及肝组织病理组织学、血天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)的改变.并探讨CEC数量与AST和ALT的相关关系.结果 CLP 6 h后动物肝细胞明显肿胀,24 h组肝细胞大量空泡变性,乃至坏死.CLP 3 h组白细胞和CEC数量比对照组明显升高.而CLP 6 h后AST、ALT才出现明显增高.CEC数量与AST和ALT水平呈负相关,Pearson相关系数(r)分别为-0.774 和-0.734(P＜0.01).用非线性回归分析CEC数量与AST和ALT的关系,发现CEC数量对ALT的佳拟合曲线为幂函数(P＜0.05),其方程为ALT=33.052 681+24.097 309 CEC -1.CEC数量对AST的佳拟合曲线为对数函数,但无统计学意义(P=0.607).结论 在大鼠脓毒症模型中,比起常规肝功能指标,CEC数量更能敏感反映肝脏病理进程.当肝功能指标高于正常阈值时肝细胞已经出现了显著损伤.因此,早期监测CEC数量结合已有的肝功能指标有助于早期提示肝功能损害,及时针对治疗.
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准分子激光角膜屈光术后皮质类固醇性高眼压泪液蛋白变化的初步研究
目的 探讨准分子激光角膜屈光手术前、术后不同时间点和术后激素性高眼压患者泪液总蛋白和各主要蛋白成分的变化.方法 准分子激光角膜屈光术后激素性高眼压患者23例,正常眼压患者术前、术后1周地塞米松组、术后1周氟米龙组、术后1个月、术后3个月各10例,分别取基础泪液5 μl,采用BCA法测泪液总蛋白浓度,SDS-PAGE 法鉴定泪液中各主要蛋白成分的变化,采用SPSS 10.0统计软件进行分析.结果 泪液总蛋白的浓度检测结果显示:术后1周地塞米松组明显高于其他各组(P＜0.05),1个月降至术前水平,术后1周氟米龙组明显低于术后1周地塞米松组;高眼压组变化同正常眼压组,与正常眼压组对应时间点之间无显著差异(P＞0.05).SDS-PAGE结果显示:高眼压组泪液乳铁蛋白、溶菌酶浓度均高于其他各组(P＜0.05),其它蛋白组间无显著差异(P＞0.05).结论 准分子激光角膜屈光术后1周泪液总蛋白含量明显增加,高眼压者泪液总蛋白变化趋势同正常眼压组;准分子激光角膜屈光术后激素性高眼压患者泪液溶菌酶及乳铁蛋白含量增加.
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生长激素预处理对体外循环大鼠肝脏炎性反应的影响
目的 探讨生长激素(growth hormone, GH)预处理对体外循环(cardiopulmonary bypass, CPB)大鼠肝脏炎性反应的影响及机制.方法 建立大鼠CPB模型,分为GH预处理组(GH组)、CPB对照组(CPB组)和假手术组(SM组),按照CPB后不同时间取静脉血及肝组织,检测血清LPS、TNF-α浓度及肝功能,RT-PCR法检测肝组织CD14 mRNA、TNF-α mRNA.结果 CPB后CPB组、GH组LPS、TNF-α浓度比CPB前血清LPS(0.25±0.03) IU/L和TNF-α(0.95±0.38) μg/L显著升高,肝组织CD14 mRNA、TNF-α mRNA的表达明显增多,肝功能损害明显;GH组同时相点血清LPS和TNF-α浓度以及肝组织CD14 mRNA、TNF-α mRNA的表达均比CPB组显著降低(P＜0.05, P＜0.01),肝功能损害明显减轻.结论 GH预处理可明显降低CPB后血清LPS水平,减少肝组织CD14 mRNA、TNF-α mRNA的表达,从而降低血清TNF-α浓度,改善CPB后机体炎症反应,减轻肝损害.
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CT-B Conjugates顺行示踪显色α-晶状体蛋白对损伤后视神经纤维保护作用的实验研究
目的 观察α-晶状体蛋白对损伤后视神经纤维的保护作用.方法 将成年Long evens大鼠26只,其中10只用于提取α-晶状体蛋白,另外16只分成4组,分别为正常对照组和伤后2,4,6周组,每组4只.损伤神经后分别右眼经玻璃体腔注射浓度为1×10 -5g/L的α-晶体蛋白5 μl,左眼牛血清白蛋白5 μl,分别于伤后2,4,6周进行视神经取材.取材前48 h,在每只眼玻璃体腔中注射CT-B(霍乱毒素B亚单位)Conjugates 2.5 μl,取材固定脱水并行冰冻切片后进行激光共聚焦照相(488 nm波长光)观察.结果 CTB Conjugates标记的夹伤视神经中可见线状条索神经纤维染色,并呈现一定扭曲,夹杂点状或者小团块状染色.α-晶状体蛋白组的荧光强度显著高于牛血清白蛋白组.结论 CTB Conjugates顺染视神经示踪技术是观察和研究损伤后视神经病理变化的有效和简便的方法,α-晶状体蛋白对损伤后的视神经纤维具有保护作用.
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利用简并PCR克隆烟草节杆菌02181肌酸酶基因
目的 用简并PCR从烟草节杆菌02181中扩境出肌酸酶部分序列,以期获得其全长编码基因.方法 从NCBI查询已发表的肌酸酶蛋白序列,将其递交到Bolck Maker服务器,利用工具软件CODEHOP设计简并引物,以烟草节杆菌02181基因组DNA为模板做PCR.结果 将所得目的片段(414 bp)在NCBI上BLASTx,结果表明,所得序列与不同菌种来源的肌酸酶高度同源,其中与节杆菌属肌酸酶基因的同源性高,一致性达到了71%.结论 从烟草节杆菌02181中成功克隆出了肌酸酶基因的部分序列.
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改进性DEN诱发大鼠肝癌模型的建立与病理形态学研究
目的 建立改进性二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine, DEN)诱发大鼠原发性肝癌模型,探讨肝癌形成过程的病理变化特点.方法 用1‰DEN溶液间断喂养Wistar大鼠诱发肝癌,对大鼠肝脏不同诱癌阶段的病理变化和超微结构进行动态观察.结果 16周以后诱癌组大鼠成癌率为96%(24/25),大鼠肝癌癌变过程大致经过肝细胞损伤期、肝细胞增生硬化期和肝细胞癌变期等3个时期,不同时期肝细胞的核、核仁、细胞质内糖原以及细胞质内细胞器的病理形态学改变有一定规律,观察到肝细胞吞噬细胞现象.结论 该模型是动态研究肝癌发生的理想动物模型.诱癌间歇期不会改变DEN诱癌的进程.肝细胞癌变过程中存在自噬(autophagy)机制.
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3例部分断耳再植成功的体会
耳廓损伤较常见,而离断则不多.它多由撕脱、切割或咬伤等引起,使耳廓受伤的部分完全离体,无任何组织相连,它包括全耳廓离断和部分耳廓离断.受伤后如果处理不当,很容易造成手术失败,遗留耳廓缺损、畸形.我科近10年收治3例部分断耳,经再植手术均获得成功,现报告如下.
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米索前列醇在绝经后妇女取宫内节育器中的应用
妇女绝经后由于卵巢功能明显减退,雌激素水平降低,导致子宫萎缩,宫颈变硬,宫颈口变窄甚至封闭.随着绝经时间延长,这种变化更加明显,而宫内节育器(intrauterine contraceptive device, IUD)的大小不变.这样既导致IUD取出困难,也使绝经后妇女对取节育器产生顾虑和恐惧.我院对绝经后妇女在取节育器前1 h给予口服米索前列醇,取得满意效果,现报告如下.
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379例胸外伤临床分析
1 临床资料收集本科1997-2006年共379例胸外伤患者.男性280例,女性99例,年龄8～70岁,平均46岁,车祸伤248例,高空坠落伤26例,挤压伤59例,牛角撬伤2例,刀刺伤36例,爆震伤8例.肋骨骨折260例(其中:单侧肋骨骨折162例,双侧肋骨骨折65例,双侧多根多处肋骨骨折33例).合并食管裂伤5例,肺挫伤215例,血气胸183例,连枷胸20例,膈肌破裂12例.合并失血性休克36例,颅脑损伤7例,心脏损伤5例,四肢骨折19例,肝破裂7例,脾破裂18例.
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1例双瓣置换术后4次心室颤动成功救治的体会
室性心律失常是心瓣膜置换术后常见并发症之一.一旦发生恶性室性心律失常,如心室颤动(室颤),死亡率很高 [1].因此,对瓣膜置换术后室颤的积极抢救有重大的意义.我科已开展心脏外科手术上万例,但在心脏手术后发生多次室颤并抢救成功的仅此1例.现将成功救治这例双瓣置换术后重症监护中4次室颤的体会报告如下.
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脑出血患者甘露醇降颅压的量化公式研究
目的 监测脑出血患者颅内压水平,研究降颅压效果与甘露醇用量以及其他影响因素的关系.从而推断甘露醇使用的个体剂量.方法 无创监测72例脑出血患者每日颅压,采用多元逐步回归方法分析降颅压效果与性别、年龄、出血部位、出血量以及甘露醇的有效用量关系.再将各影响因素进行多元协方差分析.结果 降颅压效果与性别、年龄无统计学意义(P＞0.05),与出血部位、出血量以及甘露醇用量有统计学意义(P＜0.05).幕上出血比幕下出血的降颅压效果好.结论 可以将脑出血患者入院时的高颅压,出血部位和出血量,代入公式计算患者所需的甘露醇总用量.
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5种血清标志物的不同组合对提高乳腺癌诊断的意义
目的 探讨血清标志物CA15-3、CA125、CEA、CYFRA21-1和TPS的不同组合在乳腺癌诊断中的临床应用价值.方法 采用ELISA法测定20例乳腺良性病变以及48例乳腺癌患者治疗前血清CA15-3、CA125、CEA、CYFRA21-1和TPS的检测值.结果 乳腺癌组血清中5种标志物的水平及阳性率均明显高于良性病变组(P＜0.05),CA15-3、CA125、CEA、CYFRA21-1和TPS对乳腺癌诊断的阳性率分别为54.2%、47.9%、29.1%、43.75%、31.25%,CA125与CA15-3联合检测阳性率可达到87.50%.结论 CA125和CA15-3的联合检测是筛查乳腺癌的较好的组合,可以互相弥补单一指标的不足,以互补的方式较为显著地提高乳腺癌的检出率.
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乳腺癌淋巴结转移、微转移和孤立肿瘤细胞状态下肌动蛋白和PTEN的表达及意义
目的 探讨肌动蛋白和PTEN蛋白在乳腺癌腋窝淋巴结中从单个肿瘤细胞或者肿瘤细胞团到明显肿瘤细胞转移发展过程中的意义.方法 收集92例女性乳腺癌术后淋巴结共293枚,采用免疫组化的方法对常规HE染色未发现转移的淋巴结行细胞角蛋白19(CK19)以及肌动蛋白染色,筛选出含有微转移、孤立肿瘤细胞的淋巴结.对筛选出的淋巴结行PTEN检测,观察不同转移情况下PTEN的表达情况.结果 所有293枚淋巴结中,有明显转移的84枚(28.67%),有微转移的42枚(14.33%),含孤立肿瘤细胞者22枚(7.51%);所有明显转移灶周围均有肌动蛋白表达,34枚(80.95%)含有微转移的淋巴结中微转移灶周围有肌动蛋白表达.PTEN在84枚含有明显转移的淋巴结中均呈低表达,在38枚含有微转移的淋巴结中呈低表达,其余4枚未见PTEN表达.结论 淋巴结内间质反应中肌动蛋白表达变化在乳腺癌细胞进入淋巴结发展为微转移灶及进一步发展为明显转移形成的过程中可能发挥重要的作用.PTEN蛋白的低表达可能是促进淋巴结内肿瘤细胞生长和侵袭的重要原因之一.
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毛细支气管炎患儿血清IL-6、IL-8、INF-γ和TNF-α水平动态变化与病情关系的研究
目的 探讨毛细支气管炎患儿血清的IL-6、IL-8、INF-γ和TNF-α水平动态变化在呼吸道合胞病毒性毛细支气管炎发病中的作用.方法 检测74例住院毛细支气管炎患儿急性期与恢复期血清的IL-6、IL-8、INF-γ和TNF-α水平,并与正常对照组进行比较.结果 患儿组急性期血清IL-6、IL-8、和TNF-α水平显著高于恢复期和对照组(P＜0.05),恢复期与健康对照组间无显著差异(P＞0.05);患儿组急性期血清INF-γ水平显著底于恢复期和对照组(P＜0.05),恢复期与健康对照组间无显著差异(P＞0.05).结论 Th1/Th2失衡致IFN-γ水平降低在毛细支气管炎发病中起重要作用;IL-6与IL-8和TNF-α可以作为预测毛细支气管炎病情的实验室指标.
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茎突综合征手术分类和命名的探讨
茎突综合征也称Eagle综合征、Eichen综合征和茎突过长症 [1].茎突切除术是其主要的治疗方法.我们对我院10余年来茎突手术情况进行了回顾性分析,根据不同的手术处理情况,认为可将茎突手术可分成4种类型,现报告如下.
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205例新生儿高胆红素血症病因分析
新生儿黄疸是新生儿期常见的症状之一.我国足月儿约60%,早产儿约80%,均可出现不同程度的黄疸.引起黄疸的病因复杂,若不及时诊治,严重的高胆红素血症可引起核黄疸,造成严重的中枢神经系统后遗症.现将我科2003年1月至2006年8月收治的205例新生儿高胆红素血症(简称高胆)病因分析报告如下.
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乌鸡白凤口服液对雄激素致不孕大鼠子宫内膜及肌层的影响
转化生长因子β1(TGF-β1)协同其它细胞因子共同调节子宫内膜功能,维持子宫内膜组织内环境的稳定 [1].乌鸡白凤口服液具有补气养血、调经止带之功能.本研究观察乌鸡白凤口服液对雄激素致不孕大鼠(ASR)模型子宫内膜(腺细胞、间质细胞)和肌层转化生长因子β1及其受体(TGF-βRⅠ)表达的影响,进而探讨该药如何调节子宫的功能.
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经鼻内镜上颌窦囊肿手术疗效观察
上颌窦囊肿多位于上颌窦底和内壁.多为单侧,生长极缓慢,常无症状,多在鼻窦影像学检查时无意中发现 [1].传统的手术方法为柯-陆氏手术,随着鼻内镜手术的广泛开展,现多采用鼻内镜手术治疗.本研究总结我科从2000-2004年在鼻内镜下治疗68例上颌窦囊肿手术情况,并探讨鼻内镜下上颌窦囊肿手术的优越性.
