BC047440基因通过NF-κB调节HepG2细胞增殖的初步研究

目的 观察BC047440基因能否通过增强NF-κB的活化而促进HepG2细胞的增殖.方法 设计针对BC047440基因的小干扰RNA(siRNA),构建pGenesil-1-BC047440-siRNA真核表达载体,用脂质体法将介导siRNA的真核绿色荧光表达载体pGenesil-1-BC047440-siRNA、pGenesil-1-HK-siRNA转染人肝癌HepG2细胞建立稳定细胞株;实验分为3组:转染siRNA表达载体组、无关质粒组和未处理的亲本HepG2细胞组.采用平板克隆形成实验分析细胞的增殖活性,通过Western blot 检测细胞质p50含量,EMSA检测NF-κB的核转位,荧光素酶试验检测各组细胞的NF-κB活化情况.结果 细胞增殖实验显示转染siRNA组细胞增殖能力明显降低,BC047440基因沉默后的HepG2的细胞质p50含量低于野生株HepG2,NF-κB核转位低于野生株HepG2,其荧光素酶和海肾荧光素酶活性比值只有野生株的1/4.结论 BC047440基因能促进肝癌细胞的增殖,其调节机制可通过NF-κB信号途径实现,提示BC047440基因可能成为抑制人肝癌细胞生长的有效靶点.

体外血脑屏障模型的建立与鉴定

目的 应用原代分离培养BALB/c小鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells, BMVEC)建立体外血脑屏障模型,探讨跨血脑屏障(blood brain barrier,BBB)电阻与屏障渗透功能的动态关系以及佳构建条件.方法 用酶消化、机械分离结合密度离心的方法得到原代BALB/c小鼠脑血管内皮细胞,通过培养在具有特殊质材和孔径的Transwell小室上建立BBB体外实验模型,采用倒置显微镜、电镜观察细胞形态结构和生长规律,紧密连接ZO-1蛋白免疫组化检测,比较血脑屏障形成前后膜两侧电阻动态变化与3H葡萄糖通透性的关系等方法,探讨血脑屏障模型的建立及生长特性.结果 BMVEC培养至汇合后具有典型的"铺路石"样外观;扫描电镜显示细胞形成致密单层,透射电镜、ZO-1蛋白免疫组化证实细胞间形成光滑、连续、高密度的紧密连接;3H葡萄糖的通透量与实时电阻呈负相关,内皮细胞电阻随着通透性的增加而降低,通透率低时跨细胞电阻为(346±10)Ω/cm2. 结论建立的BBB体外模型在形态学、电阻和通透性方面具备了BBB的基本特性.

低剂量X射线辐照小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率的研究

目的 探讨嗜多染红细胞微核率(frequencies of micronucleated polychromatic erythrocytes, fMNPCE)的流式细胞术检测法能否作为1种自动化方法用于检测早期生物低剂量辐照后遭受的遗传损害.方法 每天1次按0.05、0.10、0.40 Gy 3个低剂量X射线辐照小鼠,连续4次,各剂量各时间点为一动物辐照组;每次辐照20 h后采用流式细胞术检测骨髓fMNPCE,观察各时间点和剂量点的微核率动态变化,同时以传统显微镜方法作为对照进行比较.结果 流式细胞术和显微镜方法均在第1天的0.05、0.10、0.40 Gy辐照组检测到骨髓fMNPCE显著升高(P<0.05),以后3 d的各剂量辐照组fMNPCE升高更为显著(P<0.01);2种方法检测结果显示均有较好的剂量、时间依赖性,并呈显著正相关性(r=0.984,P<0.01).结论 骨髓fMNPCE可作为低剂量辐射条件下的辐射生物计量检测指标,并可用流式细胞术自动化检测.

结肠癌中VEGF-D和uPA的表达与侵袭转移的关系

目的 探讨血管内皮生长因子-D(endothelial growth factor-D, VEGF-D)和尿激酶型纤维蛋白酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator, uPA)在结肠癌中的表达特点及临床意义.方法 选取30例结肠癌组织及同一段肠管距离肿瘤组织5 cm以上的正常组织,分别应用免疫组化S-P法、Western blot方法检测VEGF-D和uPA在结肠癌组织和正常组织中的表达特点,分析它们与临床病理分期之间的关系.结果 VEGF-D和uPA在结肠癌组织和正常组织中均有表达,主要表达于细胞质,胞核也有表达,并且在肿瘤组织中的表达明显高于正常组织(P<0.01).VEGF-D或uPA的表达活性在Dukes C+D期明显高于A+B期(P<0.01),在有淋巴结转移组和远处转移组的表达也高于相应无转移组(P<0.05、P<0.01),随着肿瘤组织分化程度的增高活性依次降低(P<0.05).结论 VEGF-D和uPA在结肠癌组织中的高表达可能在结肠癌的发生发展过程中扮演重要角色.

地塞米松磷酸钠温度敏感原位凝胶的体外释药特性

目的 考察地塞米松磷酸钠温度敏感原位凝胶的体外释药特性.方法 采用旋转流变仪测定黏度随温度的变化;无膜溶出法测定地塞米松磷酸钠温度敏感原位凝胶的溶蚀行为,以pH 7.2的磷酸盐缓冲溶液为释放介质,温度(37±0.5)℃,水平振荡(频率50 r/min,振幅2.5 cm);采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定凝胶的释药行为,色谱柱:DiamonsilTM C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相:三乙胺水溶液-甲醇-乙腈(38∶28∶34),流速1.0 ml/min,紫外检测波长242 nm.结果 当温度接近相转变温度时,黏度陡然上升.以2 ml pH7.2的磷酸盐缓冲溶液为释放介质,体外凝胶的溶蚀和药物的释放均遵循零级动力学方程,其累积溶蚀百分量(Q1)和累积释放百分量(Q2)对时间t的回归方程分别为Q1=0.823 8 t (r=0.999,P<0.01)和Q2=0.843 1 t(r=0.999,P<0.01),且2者线性相关,Q2=1.023 2Q1(r=0.998,P<0.01).结论 采用无膜溶出法测定地塞米松磷酸钠温度敏感型原位凝胶的累积溶蚀百分量与其累积释放百分量相等,体外的溶蚀行为与释放行为遵循零级动力学方程,二者间存在良好的线性关系.

三维数字虚拟人体肝脏系统的建立及其应用

目的 建立基于中国可视化人(Chinese visible Human, CVH)的三维虚拟肝脏系统.方法 选取CVH的腹部断层图像数据,利用三维可视化技术,联合运用表面重建与体积重建的方法,建立数字虚拟肝脏系统,并赋予该系统多种交互功能,利用该系统对肝脏解剖进行研究.结果 成功建立数字虚拟肝脏系统.该系统具有任意移动、旋转、缩放、切割和多种多重显示等功能;具备多种测量功能和一定的虚拟手术功能,可准确揭示尾叶及肝外门、腔静脉间隙的解剖情况.结论 数字虚拟肝脏系统能真实展示肝内外重要结构的解剖特征,为肝外科虚拟手术的发展提供可视化平台.

纺锤体检查点蛋白BubR1在肝癌组织和肝癌细胞株HepG2中的表达

目的 观察纺锤体检查点蛋白BubR1在人类肝癌组织、正常肝组织以及肝癌细胞系(HepG2)、正常肝细胞系(LO2)有丝分裂期表达水平的差异,以探讨BubR1蛋白在肝癌发生中的作用.方法 用荧光定量PCR和Western blot检测BubR1基因在肝癌组织、正常肝组织,以及在2种细胞中用Nocodazole处理前后的mRNA和蛋白的表达水平.结果 BubR1基因在正常组织中的表达高于肝癌组织,在Nocodazole处理前2种细胞中表达无显著差异,在处理后2种细胞中表达均增高,但在LO2细胞中上调水平大于HepG2细胞.结论 BubR1基因低表达可能在肝癌的发生过程中起重要作用.

肝细胞癌cathepsin L表达分析

目的 探讨cathepsin L蛋白在肝细胞癌中的表达及其与肿瘤临床病理特征的关系.方法 58例肝细胞癌中病理分级高分化18例、中分化18例、低分化22例;临床分期Ⅰ+Ⅱ期26例、Ⅲ+Ⅳ期32例.采用免疫组织化学染色、RT-PCR法检测cathepsin L表达,结合患者临床病理指标及预后进行分析.结果 cathepsin L表达阳性率为72.4%(42/58),不同病理分级、临床分期及转移分组cathepsin L表达阳性率差异显著.cathepsin L mRNA检出阳性率65.5%(38/58),cathepsin L mRNA的表达与肝细胞癌的病理分级、临床分期及淋巴转移有相关性.结论 cathepsin L 在肝细胞癌的生长浸润、侵袭转移中发挥重要作用,可作为肝细胞癌预后判断的客观指标之一.

眼球飞弹伤后脉络膜体积和血管形态变化的研究

目的 观察和测定兔眼飞弹伤后脉络膜的血管形态、体积变化,为研究飞弹伤后眼球血循环变化提供病理依据.方法 利用气钉枪在6 kg/cm2始动气压下打击眼球建立兔眼飞弹伤模型,于伤后1、3 d和1、2、4周取眼球进行HE染色观察脉络膜病理学改变,并采用生物体视学方法测定脉络膜的体积和脉络膜血管的体积密度、体积.结果 伤后1 d,脉络膜血管体积与正常眼球相比明显减小,在伤后3 d达到低值,之后逐渐恢复,在伤后4周仅为正常值的55.99%.脉络膜体积在伤后各时间点均较正常值显著减小,各时间点之间无统计学差异.结论 飞弹伤后脉络膜受到明显损害,脉络膜血管体积明显减小,可能导致脉络膜循环血量减少,从而影响飞弹伤后视网膜功能的恢复.

人源肺腺癌噬菌体抗体库的构建及初步筛选

目的 构建人源肺腺癌噬菌体单链抗体库,并筛选肺腺癌细胞A549特异性单链抗体.方法 利用肺腺癌患者癌旁淋巴结组织构建肺腺癌噬菌体单链抗体库.从该抗体库中筛选特异性识别A549细胞的单链抗体,将阳性克隆菌转化E.coli HB2151进行可溶性表达.抗体亲和层析纯化后经SDS-PAGE、Western blot鉴定,通过ELISA法鉴定其与人肺腺癌细胞结合的特异性.结果 成功构建了1个4.6×107 的噬菌体抗体库.在筛选过程中,肺腺癌噬菌体单链抗体得到富集,收获率逐轮得到提高,第5轮为第1轮的181倍.在E.coli HB 2151中实现了单链抗体的可溶性表达.SDS-PAGE与Western blot结果显示抗体相对分子质量为30×103左右.细胞ELISA测定结果显示可溶性抗体具有较高的特异性,能与A549细胞结合,而不与MDA-MB-435细胞结合.结论 从肺腺癌病人癌肿周围淋巴结扩增免疫球蛋白基因成功地构建人源肺腺癌噬菌体单链抗体库,并从中筛选到肺腺癌特异性抗体.

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对大鼠缺血性心肌损伤后心室扩张及心衰的干预效应

目的 研究核因子-κB(nuclear factor-κB, NF-κB)抑制剂--吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC)对异丙肾上腺素(isoprenaline, ISO)所致大鼠缺血性心肌损伤后心室扩张、心衰的防治作用及其作用机制.方法 应用大剂量ISO建立大鼠缺血性心肌损伤模型.70只雄性Wistar大鼠利用随机数字表法分为3组:对照组20只,实验组(ISO组)30只,治疗组(ISO +PDTC组)20只.检查心肌病理形态学、心肌NF-κB激活情况、心肌单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA表达情况及血清MCP-1水平,并在实验第14天进行超声心动图检查,观察心室扩张及心功能变化情况.结果 ISO所致大鼠缺血性心肌损伤后心肌NF-κB被激活,心肌MCP-1 mRNA表达增加(P<0.01),血清MCP-1增高(P<0.01);PDTC能够抑制NF-κB的激活,下调心肌MCP-1 mRNA的表达及血清MCP-1水平(P<0.01),减轻心肌炎症反应,减小心肌细胞损伤范围,但同时可导致肉芽组织替代受损心肌延迟;实验第14天,治疗组左心室收缩末期内径(LVESD)较实验组减小(P<0.05),射血分数(EF)优于实验组(P<0.05).结论 应用PDTC能够对心肌缺血性损伤后的心室扩张、心功能损害起到一定的防治作用,该作用可能主要得益于在心肌损伤急性期对心肌细胞的保护作用,其机制可能与抑制NF-κB的激活进而下调MCP-1的表达、减轻心肌炎症损伤有关.

64层螺旋CT血管成像在咯血诊疗中的临床价值

目的 利用64层螺旋CT血管成像(CT angiography,CTA)研究咯血相关血管的影像学特征及其临床价值.方法 回顾性分析41例因反复或大量咯血行胸部增强扫描的病例,包括原发性支气管肺癌13例,支气管扩张(以下简称支扩)或慢性炎症21例,支气管肺癌合并支扩2例,肺内血管畸形2例,肺隔离症3例,采用容积显示(volume rendering,VR)、多平面重建(multi-planar reformat,MPR)及大密度投影(maximum intensity projection,MIP)等后处理技术对咯血相关血管进行观察和分析.结果 肺癌、支扩及慢性炎症36例中,供应病灶的支气管动脉均显示异常,15例伴有肺外体循环动脉供血;供应病灶的动脉共117支,其中支气管动脉占71.8%(84/117),10支存在异位起源,肺外体循环动脉占28.2%(33/117),其来源和数目与病灶所处位置、累及范围及胸膜病变密切相关;肺动静脉瘘1例,表现为瘤样扩张的血管囊及与其相连的供血动脉及引流静脉;支气管动脉畸形1例,表现为丰富的支气管动脉血管网伴多个动脉瘤形成;肺隔离症3例,表现为肺外体循环动脉异常分支供血病灶.结论 64层螺旋CTA能够提供咯血供血动脉的来源、数目等详细数据,有效评价咯血相关血管的三维影像特征,在咯血的诊断及治疗中具有重要价值.

白藜芦醇苷对缺氧复氧HK2细胞损伤保护作用的研究

目的 探讨白藜芦醇苷(polydatin, PD)对缺氧复氧(hypoxia/re-oxygenation, H/R)肾小管上皮细胞损伤的保护作用.方法 在缺氧仓中充入95% N2、5% CO2混合气体模拟缺氧环境,将人近曲肾小管上皮细胞(human kidney proximal tubular epithelial cell, HK2)根据不同处理分为4组:正常对照组、H/R组、PDTC组和PD处理组,除对照组外每组均予以先缺氧24 h后复氧6 h处理;MTT法检测细胞成活数,免疫组化法检测NF-κB p65蛋白表达情况,RT-PCR检测ICAM-1 mRNA转录,ELISA法检测ICAM-1蛋白表达情况.结果 PD处理组各对应时间点HK2细胞数量明显增多于H/R组,统计学差异显著(P<0.05).PD处理组NF-κB p65蛋白阳性表达,ICAM-1 mRNA转录及ICAM-1蛋白表达均明显低于对照组,有统计学差异(P<0.05).PD处理组与PDTC组各对应时间点的各项检测指标比较均无显著统计学差异(P>0.05).结论 PD对H/R诱导的HK2细胞损伤具有一定的保护作用.

AP-1活化在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的 探讨转录活化蛋白-1(activator protein-1, AP-1)在高糖诱导的肾小管上皮细胞表型转化中的作用.方法 将体外培养的人肾小管上皮细胞(human kidney proximal tubular epithelial cell, HK2)分为正常对照组、高糖组、AP-1阻断组.光镜、透射电镜观察细胞形态的改变,免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和细胞角蛋白(cytokeratin,CK)的表达,用凝胶电泳迁移率改变分析法(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测HK2细胞AP-1的改变,RT-PCR法检测CK mRNA的表达,Western blot检测α-SMA蛋白的表达.结果 高糖作用48 h后,HK2细胞由椭圆形贴壁生长变为长梭形,胞体拉长,透射电镜下,细胞表面微绒毛明显减少,胞质内粗面内质网丰富,而AP-1阻断组较高糖组明显减轻;EMSA结果分析表明,在高糖刺激下,AP-1结合活力较正常对照组增加79.22%(P<0.05),而AP-1阻断剂可明显抑制AP-1的活化,较高糖组降低51.19%(P<0.05);免疫细胞化学和RT-PCR检测显示,高糖组和AP-1阻断组CK mRNA和蛋白水平明显降低(P<0.05),而AP-1阻断组显著高于高糖组(P<0.05);免疫细胞化学和Western blot检测显示,高糖组和AP-1阻断组α-SMA蛋白表达明显高于正常组(P<0.05),而AP-1阻断组显著低于高糖组(P<0.05).结论 高糖能够导致肾小管上皮细胞AP-1活化,诱导其表型转化.

胎猪皮肤前体组织异种移植模型的研究

目的 探讨胎猪皮肤前体组织异种移植模型及移植后发育过程.方法 取精确胎龄为56 d的胎猪皮肤前体组织,分组进行移植,①背部创面模型组:制备成微粒皮后移植到BALB/c裸鼠背部创面,以人尸体皮覆盖;背部皮下模型组:制备成小张邮票皮,植入裸鼠背部皮下;耳廓皮下模型组:制备成微粒皮植入裸鼠耳廓皮下.各组于移植后观察其生长发育特性,并于移植后6周和12周取材行HE染色观察其组织结构形态.新生组织块大小采用双样本t检验.结果 各模型的胎猪皮肤前体组织移植后均能存活并继续生长,背部创面模型组生长能力显著大于耳廓皮下模型组,新生皮肤组织均具有真皮和表皮,耳廓皮下模型的真皮附属器仅见毛囊(毛发),偶见皮脂腺,未见汗腺,但是背部创面模型组及背部皮下模型组不仅能发育成毛囊(毛发)、还见大量皮脂腺和汗腺.结论 背部创面移植模型适合于胎猪皮肤前体组织异种移植及移植后发育的研究.

辛伐他汀对阿霉素肾病大鼠的治疗作用及白细胞介素-1β表达的影响

目的 观察炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1 beta, IL-1β)在阿霉素肾病大鼠发生肾小球硬化过程中的表达,探讨辛伐他汀保护阿霉素肾病大鼠肾脏的机制.方法 雄性SD大鼠分为正常对照组、阿霉素肾病组(模型组)和阿霉素肾病辛伐他汀治疗组(治疗组),分别灌胃给药11周.免疫组化法观测肾组织中IL-1β的定位表达,半定量RT-PCR技术检测肾组织IL-1β mRNA的表达,酶联免疫吸附法检测血清和肾组织中IL-1β的水平,光镜观察肾小球硬化的情况.结果 模型组肾组织IL-1β的表达明显增强(P<0.01),伴有明显的肾小球硬化及肾功能损害(P<0.01);与模型组比较,治疗组肾组织IL-1β的表达、肾小球硬化及肾功能损害均减轻(分别P<0.05、P<0.01、P<0.05).结论 辛伐他汀可能通过降低肾组织内IL-1β的表达,对肾脏起保护作用.

抑制UPS对缺血再灌注大鼠心肌Hsp27和TNF-α的影响

目的 研究泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system, UPS)对心肌缺血再灌注大鼠热休克蛋白27(heat shock protein,Hsp27)的影响及与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的关系,探讨抑制UPS后可能的心肌保护作用机制,为降低心肌缺血再灌注损伤提供新的干预途径.方法 64 只SD大鼠结扎左冠状动脉前降支 30 min制作心肌缺血再灌注模型.缺血再灌注+治疗(I/R+T)组于再灌注前 5 min静脉注射蛋白酶体抑制剂MG-132 0.75 mg/kg,缺血再灌注(I/R)组、缺血(I)组及假手术(Sham)组注射与之相同容积的生理盐水.观察各组心肌梗死范围、再灌注6 h后各组大鼠心肌组织Hsp27 及TNF-α的表达.结果 与I/R组相比,I/R+T组大鼠心肌梗死范围明显减少(P<0.05),Hsp27 表达显著增加[mRNA水平分别为(95.37±18.38)和(68.14±17.58),P<0.01;蛋白质积分光密度值分别为(82.57±6.39)和(39.96±7.28),P<0.001].TNF-α表达降低[mRNA分别为(45.53±10.65)和(76.52±19.12),P<0.01;蛋白质积分光密度值分别为(60.12 ± 9.32)和(42.33 ± 5.95),P<0.01].结论 适当抑制UPS能够显著升高Hsp27的水平,抑制TNF-α表达,减少心肌梗死范围,具有心肌保护作用.

甘草酸18α体上调p53的表达保护肾脏缺血再灌注损伤的实验研究

目的 探讨甘草酸18α体对肾脏缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury, IRI)后肾小管上皮细胞p53蛋白表达的影响及其意义.方法 将成年(2月龄)野生型鼠[p53(+/+)]和p53基因敲除[p53(-/-)]鼠分成4组:p53(+/+)鼠生理盐水组、p53(+/+)鼠甘草酸治疗组、p53(-/-)鼠生理盐水组和p53(-/-)鼠甘草酸治疗组;建立左肾IRI模型,于再灌注后0、1和7 d处死动物,制作双肾(右肾作自身对照)标本.HE染色观察肾组织病理变化,免疫组化法检测NF-κB蛋白的表达,Western blot定量检测p53的表达,并用EIG综合图像分析系统对NF-κB的表达进行半定量分析.结果 缺血再灌注损伤肾脏主要表现为肾小管坏死,半定量分析结果显示甘草酸治疗组比生理盐水组轻、p53(+/+)鼠组比p53(-/-)鼠组轻(P<0.01).各组IRI肾NF-κB蛋白的表达在IRI后0 d即开始增加,1、7 d点,NF-κB蛋白的表达在p53(+/+)鼠比p53(-/-)鼠显著减少,甘草酸治疗组比生理盐水组显著减少(P<0.01);p53(+/+)鼠甘草酸治疗组p53蛋白的表达比生理盐水组显著增多(P<0.01).p53的表达与肾小管坏死和NF-κB的表达呈显著负相关(P<0.01).结论 甘草酸可能主要通过对小鼠IRI肾脏p53表达的上调,抑制NF-κB的表达,减轻肾小管坏死,从而对IRI肾脏产生保护作用.

RNA干扰survivin基因对K562细胞化疗敏感性的影响及机制

目的 应用小分子干扰RNA(siRNA)技术抑制survivin基因的表达,观察其对K562细胞化疗敏感性的影响,为临床白血病治疗提供理论依据.方法 实验分为RNA干扰组、脂质体对照组、空白对照组.转染48 h后用RT-PCR法,免疫组化法分别检测survivin在mRNA及蛋白水平的表达;MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性;流式细胞仪检测细胞内阿霉素的药物浓度;免疫组化法检测K562细胞中3种耐药相关蛋白P-gp、TOPO-2、GST-π的表达.结果 ①RNA干扰组K562细胞的survivin基因表达水平明显下降;②RNA干扰组K562细胞对阿霉素敏感性增高;③RNA干扰组K562细胞中阿霉素浓度增高;④RNA干扰组K562细胞耐药蛋白GST-π表达水平下降, 而P-gp,TOPO-2的表达与对照组比较无显著差异.结论 特异性siRNA能够有效抑制survivin基因的表达,并可能通过降低耐药蛋白GST-π的表达增加K562细胞对阿霉素的敏感性.

炎性介质脂多糖、γ干扰素活化星形胶质细胞效应

目的 研究炎性介质脂多糖(LPS)、γ干扰素(IFN-γ)刺激离体星形胶质细胞的效应.方法 LPS、IFN-γ刺激离体培养纯化的小鼠星形胶质细胞,ELISA检测细胞分泌TNF-α,Griess法测定NO浓度,激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)检测细胞内游离钙浓度([Ca2+]i).结果 LPS(500 ng/ml)、IFN-γ(100 U/ml)刺激星形胶质细胞24 h后, NO和TNF-α的分泌显著升高,联合应用有协同作用;延长IFN-γ作用时间,分泌量升高.CLSM检测LPS、IFN-γ刺激24 h后的星形胶质细胞[Ca2+]i的荧光值,显示荧光相对值比正常细胞明显升高;LPS、IFN-γ急性刺激正常培养细胞发现[Ca2+]i振荡上升;而作用于IFN-γ刺激24 h后的细胞,[Ca2+]i上升明显减缓.结论 LPS、IFN-γ可以活化星形胶质细胞,表现为[Ca2+]i升高,TNF-α和NO分泌上调.

1,25二羟维生素D3靶控VDRE-ERα表达载体对MDA-MB-231细胞周期的影响

目的 探讨1,25二羟维生素D3靶控的雌激素受体α表达载体(VDRE-Tk-ERα)对雌激素受体阴性的MDA-MB-231乳腺癌细胞周期进程的影响及其机制.方法 利用MTT法检测1,25二羟维生素D3联合他莫西芬对转染VDRE-Tk-ERα表达载体的MDA-MB-231细胞增殖能力的影响,通过流式细胞仪法检测1,25二羟维生素D3联合他莫西芬对转染该表达质粒的MDA-MB-231细胞周期相的分布.用RT-PCR、Western blot和免疫沉淀法检测细胞Rb及其磷酸化水平、Cyclin D1、CDK4的表达以及Cyclin D1/CDK4激酶复合物的结合力变化. 结果 1,25二羟维生素D3联合他莫西芬能够有效抑制转染该质粒的MDA-MB-231细胞的增殖活性并将其细胞周期进程阻遏于G0/G1期.与此同时,Cyclin D1的表达则显著降低,其与CDK4的结合力亦显著降低.Rb的表达虽无显著变化,但其磷酸化水平显著下降.结论 1,25二羟维生素D3可通过靶控MDA-MB-231细胞内外源性雌激素受体α的表达进而对G1/S期相关分子的表达和活性进行调控从而阻止雌激素受体α阴性的乳腺癌细胞的周期进程并恢复对他莫西芬的化疗敏感性.

缩宫素对子宫良性病变滋养血管频谱变化的超声观察

目的 超声观察子宫肌瘤及局限性子宫腺肌病应用缩宫素前后滋养动脉频谱形态变化,评价肌层良性病变子宫对缩宫素的反应.方法 子宫肌瘤(30例)及局限性子宫腺肌病(15例)静滴缩宫素(0.04 U/min)前后行彩超检查,对比滋养动脉频谱形态变化.结果 应用缩宫素后,子宫肌瘤(24/30)及局限性子宫腺肌病(10/15)出现异型频谱,包括单向楔形、单向圆钝、双向楔形及热带鱼样等;子宫肌瘤及局限性子宫腺肌病频谱变化包括异型持续(19/30,6/15)、异型交替(5/30,4/15)、正常舒缩变化(6/30,5/15);不同类型肌瘤周边与内部动脉均出现频谱变化;所有患者子宫弓状动脉与双侧子宫动脉均未检测到频谱变化.结论 多普勒超声检测滋养动脉频谱形态变化有助于评价肌层良性病变子宫对缩宫素的反应;异型频谱的出现可能是由于子宫肌层收缩导致滋养血管发生狭窄或痉挛.

64层螺旋CT血管成像在下肢动脉硬化性闭塞症诊断中的价值

目的 探讨64层螺旋CT血管成像技术在下肢动脉硬化性闭塞症(arteriosclerotic occlusive disease, ASO)诊断中的技术方法及应用价值.方法 对59例临床疑有ASO的患者行64层螺旋CT血管成像检查,将数据在AW 4.1工作站行容积再现(volume rendering, VR)、大密度投影(maximum intensity projection, MIP)及其反转像(Inverse-MIP)、曲面重建(curved planar reformation, CPR)及高级血管分析(advanced vessel analysis, AVA)等多种后处理并结合原始图像进行综合分析.结果 59例的血管重建图像显示良好,正常4例,55例存在不同程度的阻塞,呈节段性或跳跃性,闭塞动脉周围较多代偿侧支血管.结论 64层螺旋CT血管成像检查可清楚地观察下肢动脉的血管形态及管壁的钙化斑块,了解下肢动脉狭窄程度及闭塞情况,对下肢动脉硬化性闭塞性病变的术前评价、诊断和筛选有较大的帮助.

缺氧缺血性脑损伤后丰富环境刺激对大鼠海马CA1区神经元凋亡的影响

缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)相关疾病迄今为止尚无理想的治疗方法.本实验通过研究丰富环境刺激对缺氧缺血性脑损伤大鼠海马CA1区JNK、bad(ser 128)和神经元的影响及其可能机制,为临床缺氧缺血性脑病的治疗提供实验基础.

镍钛记忆合金肋骨环抱器治疗连枷胸18例

我科自2005年3月至2007年8月对18例连枷胸患者进行了积极的手术内固定治疗,术后患者呼吸痛消失,胸廓畸形恢复,无ARDS发生,临床取得较满意疗效.

经纤支镜冷冻取出支气管内义齿1例

1 临床资料患者,男性,64岁.因"刺激性咳嗽、咯血、发热13 d"入院.患者于13 d 前睡觉时突然出现呛咳.之后逐渐出现刺激性咳嗽,咯血及发热,体温达39.6 ℃.查体:右下肺呼吸音降低,未闻及干湿啰音.胸片示右主支气管走形区可见金属高密度影,右下肺部分不张伴感染(图1),结合病史考虑系患者假牙及其牙套.

旋转腓肠肌皮瓣治疗胫前软组织缺损39例

胫前软组织缺损为临床常见损伤,由于该部位组织薄弱,易受暴力冲击而致缺损,因其皮下即为胫骨骨嵴不宜植皮,游离植皮也难成活.我科在2004-2007年度收治胫骨前侧皮肤缺损病例39例,取得较好效果,现报告如下.

以眼眶绿色瘤起病伴t(8;21)的儿童M4Eo 1例及文献复习

目的 报告1例以眼眶绿色瘤起病的伴t(8;21)的儿童M4Eo,并综合国内外文献进行讨论,以提高对该病的认识.方法 对此例患儿的临床表现、实验室检查、诊断和治疗进行分析,结合文献讨论该病的临床特征、遗传学特点及诊断.结果 本例以眼眶绿色瘤起病的儿童急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)经血象、骨髓象确诊为M4Eo,染色体核型分析为40-45,XY,t(8:21)(q22,q22),常规化疗及大剂量阿糖胞苷治疗疗效欠佳.结论 眼眶绿色瘤是急性髓性白血病的一种特殊临床表现,除常见于AML-M2型外,也可见于M4Eo;AML-M4Eo的染色体核型除了常见的inv(16)外,也可以是t(8;21).通过对该例患儿的临床特点及治疗经过的分析,提示以眼眶绿色瘤起病、伴t(8;21)及亚二倍体核型改变的儿童M4Eo可能是一种预后不良的临床亚型.

重组呼吸道合胞病毒G蛋白基因工程菌的发酵条件研究

目的 研究呼吸道合胞病毒 (respiratory syncytial virus,RSV) G蛋白基因工程菌的发酵工艺.方法 通过摇瓶培养初步确定工程菌的适生长条件和表达条件,以此为基础在发酵罐中比较、筛选影响菌体生长和目的 蛋白表达率的各种条件,对发酵工艺进行改良优化.结果 确定了RSV G 蛋白基因工程菌发酵罐培养的各项条件的佳组合:在LB+葡萄糖的培养基中,搅拌速度为200 r/min,培养温度为37 ℃,pH值为7.0,诱导时温度为25 ℃,IPTG浓度为0.01 mmol/L,优化后工程菌菌体的产量可以达到39.20 g/L,目的 蛋白表达率平均为18.1%.结论 建立了稳定高效的重组RSV G工程菌发酵工艺.

对颌面部创伤救治中几个难点问题的认识

口腔颌面部损伤不仅威胁生命,而且影响咀嚼、语言等功能,破坏容貌,造成心理伤害.根据国内外大宗病例报道[1],颌面颈部伤已占创伤患者总数的30%以上,致伤原因以交通事故伤多.

《第三军医大学学报》对一稿两投和重复发表问题处理的声明