脉冲电磁场对废用性骨质疏松大鼠骨密度和血清转化生长因子β1的影响

目的 观察脉冲电磁场(pulsed electromagnetic fields,PEMF)对废用性骨质疏松(disuse osteoporosis,DOP)大鼠骨密度(bone mineral density,BMD)和血清转化生长因子β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)的影响,探讨可能的发生机制.方法 健康4月龄雌性SD大鼠80只,按体质量随机区组法分成4组:正常对照组(INT组)、单纯模型组(DOP组)、降钙素组(CT组)、脉冲电磁场组(PEMF组).INT组大鼠喂养DOP大鼠饲料消耗量的平均水平,后3组均通过改良的局部制动法建立DOP大鼠模型;CT组和PEMF组术后即分别给予降钙素(2 IU/kg,腹腔注射,1次/d)及PEMF 预防性治疗,各组分别于建模后1、2、4、8周时处死5只大鼠,进行骨密度、骨组织学和血清TGF-β1浓度等指标检测.结果 建模后2周时,DOP组大鼠制动侧股骨近端骨密度较INT组明显降低(P<0.01),从建模后4周起,CT组和PEMF组骨密度均明显高于DOP组(P<0.05),8周时PEMF组骨密度较CT组明显增高(P<0.05);DOP组大鼠血清TGF-β1浓度在建模后1周时明显高于INT组(P<0.01),而后逐渐下降至正常水平以下;8周时PEMF组TGF-β1浓度明显高于CT组、DOP组(P<0.01).结论 PEMF及降钙素埘废用性骨质疏松均有治疗作用,且PEMF在后期较降钙素效果更明显:TGF-β1浓度在废用性骨质疏松骨重建过程中呈双相变化,PEMF可能通过促进TGF-β1分泌而影响骨重建过程.

腺苷A2A受体在小鼠大脑中动脉局灶缺血损伤中的作用及机制

目的 探讨阻断腺苷A2A受体对神经元缺血性损伤的影响及其可能机制.方法 将腺苷A2A受体基因敲除(A2ARKO)小鼠24只及同窝野生型(A2ARWT)小鼠24只分为A2ARKO组和A2ARWT组,每组下设脑缺血2 h(各6只)、脑缺血后再灌注22 h(各6只)和脑缺血后再灌注46 h(各12只)3个时相点,另外9只A2ARWT小鼠设为假手术组.线栓法制作大脑中动脉阻寒(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,脑组织切片甲酚紫染色结合网象分析技术测定脑梗死体积,干湿质量法测定脑组织含水量,免疫组化染色榆测钙结合蛋白(Calbindin D-28k,CB)和水通道白4(aquaporin,AQP4).结果 在脑缺血2 h、脑缺血后再灌注22 h和脑缺血后再灌注46 h,测定A2ARKO组的腩梗死体积均小于A2ARWT组的梗死体积;与A2ARWT组比较,A2ARKO组脑内CB表达较多,AQP4表达较少,脑含水较低.结论 阻断腺苷A2A受体对脑缺血急性期和再灌注期损伤均有保护作用,并减轻缺血引起的脑水肿,可能与抑制细胞内钙超载和AQP4的表达有关.

抗结核化合物24-酮帕格甾醇的设计合成

目的 设计合成新型抗结核化合物24-酮帕格甾醇.方法 以猪去氧胆酸为原料,3β-叔丁基二甲基硅基-5β-羟基6β-二甲氧基甲基-24-酮-B-失碳胆甾烷为关键中间体,经甲酯化、格氏异丙基化、去保护等8步化学反应合成目标化合物,其中异丙基化为关键步骤.结果 以42%的总收率合成了目标化合物,其结构为MS、1HNMR、13CNMR和IR所证实.结论 所设计的路线经济合理,收率高,高效合成了目标化合物.

人颗粒溶素活性肽和小鼠白细胞介素-12基因真核穿梭共表达质粒的构建与真核表达

目的 构建含分枝杆菌复制子Orim,可分泌表达人颗粒溶素相对分子质量为9 000的活性肽与小鼠白细胞介素-12(mIL-12)的真核穿梭共表达质粒,并检测其蛋白表达.方法 以含有颗粒溶素cDNA序列的质粒为模板,通过PCR扩增获得相对分子质量为9 000的颗粒溶素活性肽基凶片段后,定向插入真核表达载体pBudCE4.1中,获得重组表达质粒pBudCE4.1-S9K,经双酶切及插入片段测序对质粒进行鉴定.同时,将mIL-12哑克隆入pBudCE4.1另一多克隆位点,构建真核共表达质粒pBudCE41-S9K/mIL-12.然后,将分支杆菌复制子Orim亚克隆入真核共表达质粒pBudCE4.1-S9K/mIL-12,形成穿梭共表达质粒.采用RT-PCR、免疫细胞化学法,检测颗粒溶素活性肽在RAW264.7细胞的瞬时表达与分泌.ELISA检测mIL-12的表达.结果 酶切、PCR及测序鉴定证实,颗粒溶素活性肽基因插入片段正确;RT-PCR和免疫细胞化学检测表明其可以在细胞中瞬时表达;ELISA检测细胞培养上清有mIL-12表达.结论 成功构建穿梭共表达质粒pBM9,并能体外表达.

重庆地区人群中的健康危险行为簇聚特征研究

目的 掌握重庆地区人群的健康危险行为(HRB)的现状及其簇集性特征研究.方法 采用整群分层抽样的方法,抽取重庆市1263名社区居民作为调晒对象.应用白编的<居民健康行为调查表>进行渊查并对数据进行统计分析.结果 被调查人群中广泛存在吸烟、饮酒、缺乏有效体育运动、超重、不系安全带等行为,且行为簇集性现象明显.其中缺乏有效体育运动(78.1%)排序第1位;男性、体力劳动者和文化程度较低的人群HRB簇聚特征更为明显,吸烟和饮洒的行为伴随现象高.结论 被调查人群中HRB簇集特征明显,迫切需要寻找有效的行为干预措施.

角膜缘上皮细胞与脱细胞角膜材料移植修复碱烧伤角膜的实验研究

目的 探讨应用角膜缘上皮细胞(limbal epithelial cells,LECs)及脱细胞角膜材料(decellularized porcine cornea,DPC)移植修复碱烧伤兔角膜的疗效.方法 培养同种异体兔LECs,鉴定其中的角膜缘干细胞(limbal stem cells,LSCs),制备DPC作为支架材料,将LECs和DPC两者复合培养后板层移植到碱烧伤的兔眼角膜,观察移植后4个月内的角膜修复情况.结果 免疫细胞化学及RT-PCR检测培养的LECs中有表达ABCG2的LSCs.大体观察LECs-DPC移植后碱烧伤角膜的混浊度减轻,新生血管消退.HE、Masson Trichrome染色显示移植后上皮面的细胞复层化生长,炎性细胞浸润减少,DPC纤维整合于碱烧伤的角膜植床,角膜胶原排列趋于规则.透射电镜检查有桥粒及微绒毛结构形成.结论 体外培养的同种异体角膜缘上皮细胞联合脱细胞角膜材料移植能够修复碱烧伤的兔眼角膜.

原位二级脾蒂离断法腹腔镜脾切除术治疗特发性血小板减少性紫癜

目的 探讨原位二级脾蒂离断法腹腔镜脾切除术(laparoscopic spleneetomy,LS)治疗特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenia purpura,ITP)的可行性及临床疗效.方法 对41例ITP患者在腹腔镜下采用解剖二级脾蒂的方法,超声刀切开脾蒂浆膜,自下而上沿脾脏逐支分离脾动、静脉的二级分支,Hem-O-lok结扎夹钳夹2道,在两结扎夹之间用超声刀离断,切除脾脏.结果 41例患者均完成LS,无1例中转开腹.手术时间75～180 min,术中出血量50～800 ml.术中发现并切除副脾7例,2例患者术中脾蒂改为Endo-GIA切割离断.住院时间4～9 d,无严重并发症.术后血小板明显上升,5～7 d到达高峰.随访3～20个月,总有效率达到85.4%(35/41).结论 原位二级脾蒂离断法LS治疗ITP)安全有效、创伤小、并发症少、恢复快、手术费用低,值得临床推广.

Caveolin-1 RNA干扰慢病毒载体的构建及其对肝癌细胞株SMMC7721侵袭的影响

目的 构建人Caveolin-1 RNA干扰慢病毒载体,探讨慢病毒介导的Caveolin-1 RNA干扰对人肝癌细胞株SMMC7721侵袭能力的影响.方法 应用pGCSIL-GFP-Caveolin-1 RNA干扰慢病毒载体感染SMMC7721,检测其转导效率、mRNA和蛋白水平的敲除效率,并检测对SMMC7721侵袭能力的影响.结果 pGCSIL-GFP-Caveolin-1 RNA干扰慢病毒载体感染SMMC7721的转导效率为(96.0±1.2)%;Caveolin-1 mRNA水平的敲除率约90%;Western blot显示感染后Caveolin-1蛋白水平显著下降;感染后SMMC7721的侵袭能力显著下降.结论 慢病毒载体构建的Caveolin-1 RNA干扰能有效敲除SMMC7721中Caveolin-1的表达,显著降低SMMC7721侵袭能力.

胞外钙及胞内钙库钙在膀胱ICCs细胞自发性钙瞬变中的作用

目的 观察离体活膀胱肌条铺片中卡哈尔间质细胞(interstitial cells of cajal,ICCs)自发性钙瞬变,并检测胞外钙及胞内钙库钙对ICCs细胞自发性钙瞬变的影响,探讨ICCs细胞自发性钙瞬,变产生的机制.方法 制作离体膀胱肌条铺片,生理液灌流保持肌条铺片活性.待肌条自发性收缩活动出现后,Fluo-4负载肌条铺片,激光共聚焦显微镜观察其中ICCs细胞自发性钙瞬变,随后观察尼莫地平(Nimodipine)、2-氨基乙基二苯硼酸盐(2-aminoethoxydip henylborate,2-APB)、雷诺丁(Ryanodine)、毒胡萝卜素(Thapsigargin)及无钙、高钙生理液对ICCs细胞自发性钙瞬变的影响,探讨ICCs细胞自发性钙瞬变产生的机制.结果 可见离体活膀胱肌条铺片中平滑肌细胞和ICCs细胞均产生节律性A发性钙瞬变,平滑肌细胞钙瞬变频率较快,而ICCs细胞钙瞬变频率相对较慢.尼莫地平能完全抑制平滑肌细胞的自发性钙瞬变,但对ICCs细胞的自发性钙瞬变无显著影响.2-APB、雷诺丁、毒胡萝卜素及无钙生理液均可完全抑制ICCs细胞的自发性钙瞬变,高钙生理液可显著增加ICCs细胞自发性钙瞬变的频率.结论 细胞外钙离子通过非L型钙离子通道入胞及细胞内钙库放钙均参与ICCs细胞自发性钙瞬变的产生.

椎弓根螺钉内固定结合自固化硫酸钙灌注治疗胸腰椎骨折28例

目的 探讨椎弓根钉技术结合硫酸钙灌注椎体成形治疗胸腰椎骨折的临床价值.方法 对近2年多收治的28例胸腰椎骨折患者行后路椎弓根螺钉复位固定及硫酸钙人工骨灌注椎体成形手术治疗,其中A型21例,B型3例,C型4例.结果 本组平均随访16个月.随访期内无内固定松动及断裂现象,无慢性腰痛,伤椎高度无丢失,注入椎体内的人工骨均在3个月内吸收.结论 采用椎弓根螺钉技术复位固定及硫酸钙灌注椎体成形治疗胸腰椎骨折是一种安全、有效,术后能提供早期负重,维持良好椎体高度的较理想方法.

急性低氧加重氰化钠对大鼠离体肝线粒体能量代谢的抑制作用

目的 通过观察不同浓度的NaCN对模拟高原急性低氧大鼠离体肝脏线粒体呼吸氧耗、膜电位和复合酶Ⅳ活性的影响,探讨急性低氧条件下氰化物中毒大鼠线粒体能量代谢变化特点.方法 16只SD大鼠按简单完全随机分组法分为对平原照组和急性低氧组,急性低氧组大鼠暴露于低压舱内,模拟海拔5 000 m高原,23 h/d,连续3 d;对照组大鼠于常压和常氧环境中同时喂养.用差速离心法提取肝线粒体,分别在0、0.01、0.1、0.25 mmol/L NaCN条件下采用Clark 氧电极法测定线粒体呼吸氧耗和复合酶Ⅳ活性并计算Ⅲ态呼吸(state 3 respiration,ST3)、Ⅳ态呼吸(state 4 respiration,ST4)、呼吸控制率(respiratory control rate,RCR)、氧化磷酸化效率(oxidative phosphorylation,OPR)和复合酶Ⅳ耗氧率,用Rhodamine123法测定线粒体膜电位(the mitochondrial membrane potential,MMP).结果 0.01、0.1、0.25 mmol/L NaCN均可显著抑制线粒体呼吸功能,降低线粒体膜电位,且呈剂量依赖关系.与相应NaCN浓度的对照组比较,急性低氧组线粒体功能受抑制程度显著增加.结论 急性低氧加重NaCN对大鼠肝脏线粒体能量代谢的抑制作用,其机制可能与急性缺氧大鼠线粒体氧化磷酸化脱偶联、呼吸链复合体Ⅳ功能降低及线粒体膜电位改变有关.

肠出血性大肠埃希菌O157:H7 tccP基因敲除菌株的构建

目的 构建肠出血性大肠埃希菌O157:H7介导和宿主细胞的粘附与擦拭(A/E)损伤相关基因tccP敲除菌株.方法 根据GenBank公布的肠出血性大肠埃希菌O157:H7基因序列,设计PCR引物,分别扩增克隆tccP基因两端外侧的DNA片段,并与氯霉素耐药基因Cam连接后亚克隆于pBluescriptSK Ⅱ质粒,通过同源重组替换野生型tccP基因,采用PCR、RT-PCR以及Western blot分别从DNA、RNA及蛋白质水平鉴定tccP基因是否被敲出.结果 在DNA、RNA及蛋白质3个水平均证实Cam片段已成功替换tccP基因而整合进入O157:H7基因组中.结论 成功构建肠出血性大肠埃希菌O157:H7 tccP基因敲除菌株.

新型组合式腰椎间融合器的研制和体内融合实验的初步研究

目的 介绍新型组合式腰椎间融合器的设计原理和构型,建立羊腰椎体间融合器融合模型,对其进行体内融合评价,并探讨模型建立的手术要点和评估方法.方法 采用聚醚醚酮(polyetheretherketone,PEEK)材料研制1种具有组合式构型的腰椎间融合器,对16只羊建立侧前方手术入路的腰椎体间融合器融合模型,术中、术后分别进行生命监测、医疗管理、影像学评估.结果 新型融合器构型独特,羊融合模型手术顺利,实验动物伞部存活,术后影像评估融合效果良好,动物模型满足了实验要求.结论 新型组合式腰椎间融合器显示有良好的融合效果,通过腰椎侧前方手术入路,能够建立实验动物安全、有效的腰椎融合器模型.

不同来源基质细胞对骨髓瘤KM3细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察人脐血基质细胞及骨髓瘤患者骨髓基质细胞对骨髓瘤KM3细胞生物学特性的作用.方法 体外分离培养骨髓瘤骨髓基质细胞和人脐血源基质细胞,与骨髓瘤KM3细胞共培养.采用扫描电镜观察共培养后基质细胞和KM3细胞的位相关系;应用CCK-8、P I染色流式细胞仪和Annexin V/P I双标法检测不同培养条件下KM3细胞的增殖、细胞周期和凋亡率.结果 人脐血基质细胞比骨髓瘤患者骨髓基质细胞有更强的抑制KM细胞增殖的作用;共培养后骨髓瘤患者骨髓基质细胞使KM3细胞阻滞于G0/G1期[(59.70±1.28)%],人脐血基质细胞使S期的KM3细胞比例增高[(46.07±2.46)%];KM3/MM-BMSCs组KM3细胞凋亡率为(3.26±0.12)%明显低于KM3/hUCBDSCs组KM3细胞凋亡率(4.76±0.12)%(P<0.01);KM3/MM-BMSCs组KM3细胞Bax mRNA的表达较KM3/hUCBDSCs组明显下降(P<0.01);KM3/hUCBDSCs组KM3细胞Bcl-2 mRNA的表达较KM3细胞悬浮培养组下降(P<0.05),KM3/MM-BMSCs组KM3细胞Bcl-2 mRNA的表达则明显升高,为悬浮培养组的1.982倍(P<0.01).结论 骨髓瘤基质细胞微环境抑制骨髓瘤细胞凋亡和死亡;而人脐血源基质细胞有更强的抑制骨髓瘤细胞增殖的作用,并促进其凋亡.

胃癌、食管癌中NY-ESO-1抗原特异性免疫应答与生存率的关系研究

目的 分析胃癌、食管癌中NY-ESO-1抗原基因的表达分布、NY-ESO-1157-165表位引发的特异性细胞免疫应答的状态与生存率的关系.方法 利用RT-PCR方法检测112例胃癌和76例食管癌患者肿瘤标本和正常胃黏膜中NY-ESO-1抗原基因的表达,应用多色流式分析结合HLA-A2限制性表位肽/五聚体复合物技术对胃癌、食管癌患者外周血NY-ESO-1157-165表位特异性CTL进行精确定量.回顾分析20例NY-ESO-1+/HLA-A2+患者,随访3年,比较不同免疫应答状态对生存率的影响.结果 食管癌患者中NY-ESO-1 mRNA表达频率(36.8%)明显高于胃癌(13.4%).在20例检测到的NY-ESO-1+HLA-A2+患者中,强反应者(CD8+pentamer+cells ≥0.5%)生存率明显高于弱反应者(CD8+pentamer+cells<0.5%)(P<0.01).结论 胃癌、食管癌患者均有不同程度表达NY-ESO-1,其特异性免疫应答被检测到,并与生存率有关.

负压创缘治疗对慢性创缘HIF-1α和VEGF表达的影响

目的 观察临床负压创缘治疗(negative pressure wound therapy,NPWT)对创缘及创缘的影响,探讨负压创缘治疗促进慢性创缘血管生长的可能机制.方法 临床选取慢性创缘病例12例,完全随机分为实验组和对照组,实验组为负压创缘治疗组,对照组为传统方法治疗组,即常规换药(生理盐水敷料)组.分别于治疗前1 d,治疗后1、4、7 d取创缘全层皮肤组织,逆转录聚合酶链反虚(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)测样本组织低氧诱导冈子-1αmRNA(hypoxia inducible factor-1α mRNA,HIF-1α mRNA)的表达,免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)测样本组织的HIF-1α及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达.结果 实验组HIF-1α mRNA相对含量,HIF-1α、VEGF的阳性表达细胞数均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),VEGF阳性表达与HIF-1α阳性表达呈正相关(r:0.854,P<0.01,n=48).结论 负压创缘治疗能诱导HIF-1α高表达,通过HIF-1α上调VEGF的表达促进创缘血管生长,进而促进创缘愈合.

肺炎链球菌毒力蛋白DNA疫苗优势抗原组合筛选及鉴定

目的 探讨肺炎链球菌DNA疫苗候选抗原联合免疫的优势抗原组合方式.方法 分子克隆肺炎链球菌表面蛋白A(PspA)N端及肺炎链球菌溶血素(Ply)基因序列,构建重组质粒pcDNA3.1-PspA'和pcDNA3.1-PBD(PBD为Ply 点突变减毒体),免疫印迹(Western blot)检测重组质粒在哺乳动物BHK-21细胞中的表达(包括前期工作中构建的重组质粒pcDNA3.1-PsaA).将3种重组基因疫苗以不同方式组合肌肉注射免疫150只BALB/c小鼠(B组:pcDNA3.1-PsaA+pcDNA3.1-PspA',C组:pcDNA3.1-PsaA+pcDNA3.1-PBD,D组:pcDNA3.1-PspA'+pcDNA3.1-PBD,E组:pcDNA3.1-PsaA+pcDNA3.1-PspA'+pcDNA3.1-PBD),检测各组小鼠血清特异性抗体IgG水平,观察免疫小鼠鼻咽部肺炎链球菌D39携带改变和D39腹腔攻击小鼠21 d生存情况.结果 成功构建3种重组真核表达载体,ELISA检测结果显示B组小鼠血清特异性IgG抗体水平与E组相似(P>0.05),均明显高于A、C、D组[A组:对照空质粒组pcDNA3.1(+)]小鼠(P<0.01);免疫小鼠鼻咽部D39携带菌落计数提示B组小鼠相似于E组小鼠(P>0.05),并明显少于C、D组和阴性对照组(A组和PBS组,P<0.01),并且D39腹腔攻击小鼠21 d生存时间分析亦提示其中位生存时间明显长于C组及阴性对照组(A组和PBS组,P<0.01).结论 PspA'联合PsaA的抗原组合方式具有高效的协同保护效能,可作为肺炎链球菌DNA疫苗的优势候选抗原组合.

3,6-二羟黄酮降低白血病细胞HL-60抗氧化酶活性并影响MAPKs信号通路

目的 观察3,6-二羟黄酮对白血病细胞HL-60抗氧化酶活性及MAPKs信号通路的影响,探讨其抗肿瘤作用分子机制.方法 采用CASY-TT亚流式细胞分析技术测定3,6-二羟黄酮对白血病HL-60细胞存活率的影响;化学比色法测定3,6-二羟黄酮作用HL-60细胞后,细胞内抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px的活性变化;Western blot检测胞内ERK、p38MAPK及JNK蛋白磷酸化水平变化.结果 3,6-二羟黄酮显著降低HL-60细胞存活率,其作用呈剂量和时间依赖性;20 μmol/L 3,6-二羟黄酮作用于HL-60细胞,胞内抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px活性显著降低,MDA含量显著升高(P<0.05);Western blot检测结果表明,20 μmol/L 3,6-二羟黄酮作用HL-60细胞2、8、24 h,P-ERK蛋白水平明显降低(P<0.01)、P-p38MAPK和P-JNK的蛋白水平则显著升高(P<0.01).结论 3,6-二羟黄酮可显著降低HL-60细胞内抗氧化酶活性,增加胞内氧化应激压力,并由此影响MAPKs信号通路,这可能是其诱导HL-60细胞凋亡和增殖抑制的重要分子机制.

24-亚甲基-胆甾-3β,5α,6β-三醇的合成

目的 高效合成海洋天然产物24-亚甲基-胆甾烷-3β,5α,6β-三醇.方法 以猪去氧胆酸为原料,△5-3β-四氢吡喃氧基胆甾-24-酮为关键中间体,格氏试剂异丙基化为关键步骤,经7步反应合成目标分子.结果 以53%的总收率合成目标分子,其结构为MS、1HNMR、13CNMR、IR所证实.结论 以本法合成24-亚甲基-胆甾烷-3β,5α,6β-三醇,原料廉价易得、路线简短、收率高、符合原子经济性.

荧光原位杂交检测尿脱落细胞染色体异常诊断膀胱肿瘤的研究

目的 探讨通过荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测3、7、9、17号染色体数目畸变诊断国人膀胱尿路上皮癌的可行性和有效性.方法 采用3、7、17号染色体着丝粒探针和9p21区带探针对140例患者尿液脱落细胞核行荧光原位杂交,并同时行经腹部超声和尿脱落细胞学检查,以膀胱镜病理检企确诊,比较分析各种方法的敏感性和特异性.结果 ①肿瘤组80例膀胱尿路上皮癌全部经病理检杏确诊,其中68例FISH结果阳性,26例尿脱落细胞学阳性,71例经腹部超声诊断为膀胱癌.②非肿瘤对照组30例,其中29例FISH结果阴性,1例假阳性;尿脱落细胞学检查全部阴性;绛腹超声检查23例阴性,7例假阳性.FISH、尿脱落细胞学、经腹部超声的灵敏度分别为85.00%、32.50%、88.75%,特异度分别为96.67%、100.00%、76.67%.结论 使用FISH技术检测尿脱落细胞3、7、9、17号染色体数目畸变具有敏感度高、特异性强的优点,并具无创性,对国人膀胱尿路上皮癌的诊断具有重要的临床应用价值.

重庆市不同年龄健康人结膜囊需氧菌定性及定量研究

目的 调查重庆市不同年龄健康人结膜囊需氧菌种类及数量.方法 湿棉拭于33例儿童、31例青年人、30例老年人双眼结膜囊取标本(取材前后称量棉拭运送管,差值即为标本质量)行细菌培养,阳性者进行细菌鉴定及定量计算:菌落数(colony forming units,CFUs)/标本质量.结果 老年组结膜囊细菌检出率(93.33%)显著高于儿童组(45.45%)及青年组(50.00%),差异有统计学意义(P<0.01),且表皮葡萄球菌、类白喉棒状杆菌、金黄色葡萄球菌在老年组检出率均较高;老年组单眼共生细菌种类显著多于另外2组(P<0.01);儿童组结膜囊菌群数量明显少于青年组及老年组(P<0.01);类白喉棒状杆菌数量随年龄增长而增加,表皮葡萄球菌数量在老年组显著多于儿童组(P<0.01).结论 老年人结膜囊需氧菌种类、数量均高于青年及儿童,应该引起眼科医师重视.

拉米夫定联合乙肝免疫球蛋白阻断肝移植后HBV再感染的荟萃分析

目的 系统评价拉米夫定与乙肝免疫球蛋白联合应用阻断肝移植后HBV再感染的疗效.方法 应用Meta 分析的方法比较治疗组(联合应用LAM和HBIG)与对照组(单一应用LAM或HBIG)对移植后HBV再感染率的差异,以比值比(OR)为效应量进行合并分析.结果 共纳入研究文献7篇,研究样本360例.OR及95%可信限(95%CI)为0.34(95%CI:0.18,0.64),2组间HBV复发率的差异具有统计学意义(Z=3.33,P=0.001).各研究之间具有同质性(P=0.310).结论 拉米夫定与乙肝免疫球蛋白联合应用可有效阻断肝移植后HBV再感染,且联合用药的效果优于单一用药.

Wnt10b在小鼠毛囊周期中的表达

目的 初步探讨Wnt10b在小鼠毛囊生长周期中的表达变化规律及其意义.方法 首先用RT-PCR检测Wnt10b在小鼠皮肤中的表达情况,然后以免疫组化检测Wnt10b在毛囊生长周期各阶段的表达定位及变化,同时检测了核增殖抗原Ki67在毛母质中的表达情况.结果 Wnt10b在生后第1周期生长期皮肤的mRNA表达量显著高于退化期和静止期(P<0.01),生长中期达到峰值,退化期和静止期呈低表达;第2周期生长早期表达量略高于退化期和静止期.Wnt10b蛋白特异性表达于生长期毛囊的毛母质(Matrix)部位;退化期和静止期在整个毛囊都不表达;第2周期生长早期主要表达于毛囊次级毛芽.Ki67在毛母质中的表达变化情况与Wnt10b具有一致性.结论 Wnt10b的表达具有严格的时空特异性,生后第1周期特异性表达于生长期毛囊的毛母质细胞,第2周期生长早期表达于毛母质细胞的祖细胞次级毛芽,提示Wnt10b可能对毛母质细胞增殖起作用,进而调控毛囊的生长并维持毛囊周期.

Endoglin在评价卵巢上皮性肿瘤血管生成中的意义

目的 探讨Endoglin在卵巢上皮性肿瘤管生成中的意义.方法 采用免疫组织化学方法,对本院2000年12月至2003年12月手术切除的70例卵巢上皮肿瘤标本分别标记CD34和Endoglin,并分别进行微血管密度(microvessel density,MVD)计数.结果 CD34标记的MVD在良性和恶性卵巢上皮性肿瘤间无统计学差异(P>0.05),而Endoglin标记的MVD在良性和恶性肿瘤间差异有统计学意义(P<0.05);恶性卵巢上皮性肿瘤临床Ⅰ～Ⅱ期CD34和Endoglin标记的MVD均高于Ⅲ～Ⅳ期;CD34标记的MVD在恶性卵巢上皮性肿瘤病理分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级间无统计学筹异(P>0.05),而病理分级Ⅲ级Endoglin标记的MVD明显高于Ⅰ～Ⅱ级.结论 Endoglin标记计数的MVD优于CD34、CD31和Von Willebrand因子等标记的MVD,可作为肿瘤血管生成状态的评价指标.

安氏Ⅱ2伴单侧颞下颌关节弹响患者正畸治疗的疗效分析

目的 探讨安氏Ⅱ2错(牙合)畸形伴单侧颞下颌关节弹响症状患者正畸治疗前后影像学及开闭口髁突运动轨迹的变化.方法 选取安氏Ⅱ2伴有单侧关节弹响症状患者20例和个别正常殆23例,正畸治疗前后拍摄矫正薛氏位片,利用CADIAX记录开闭口运动过程中髁突运动轨迹,并进行定性定量分析.结果 58.33%安氏Ⅱ2正畸治疗后髁突位置由后位恢复至中位;治疗前髁突运动轨迹明显垂直化,平滑度及对称性均较差,治疗后则明显改善;治疗前后除(transversal condyle inclination,TCI)及5 mm时水平面髁突倾斜度TCI变化不明显,其余研究指标改变均有统计学意义.结论 安氏Ⅱ2伴有单侧关节弹响症状患者正畸治疗可使盘突关系恢复正常,且髁突运动也更加协调.

地塞米松和法舒地尔对油酸致小鼠急性肺损伤伤情的影响

目的 探讨地塞米松和法舒地尔(fasudil)对油酸致小鼠急性肺损伤的影响及ROCK(Rho-associated coiledcoil forming kinase)在其中的作用.方法 采用油酸致C57小鼠急性肺损伤模型,观察伤后24 h各组肺组织病理及肺含水率、ROCK活性、ROCK1和ROCK2蛋白含量及IL-1β mRNA的变化.结果 地塞米松和法舒地尔均可显著减轻油酸肺组织中炎性细胞浸润、肺出血等病理变化,降低肺含水率(P<0.05),抑制肺组织ROCK活性(P<0.05).降低IL-1β mRNA的表达水平;地塞米松对ROCK1的表达水平无影响,但可增强ROCK2的表达,法舒地尔对ROCK1和ROCK2的表达水平均无影响.结论 地塞米松和法舒地尔均可通过抑制肺组织内炎性细胞浸润明显减轻油酸引起的急性肺损伤,而地塞米松的治疗作用可能与对其ROCK活性的抑制有关.

抗甲型流感病毒短发夹状RNA分子的体外生物合成及功能鉴定

目的 制备抗甲型流感病毒短发夹状RNA分子(short hairpin RNA,shRNA),并鉴定其功能.方法 针对甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)核壳蛋白(nucleoprotein,NP)和酸性RNA多聚酶(acidic RNA polymerase,PA)编码mRNA高度保守区序列设计并制备编码shRNA的双链DNA转录模板,分别将其插入pGenSil-1质粒,构建NP-shRNA和PA-shRNA表达载体,测序正确后,采以T7转录试剂盒制备NP-shRNA和PA-shRNA.将所制备的2种shRNAs分别或联合转入人气道上皮细胞(human bronchial epithelium,HBE),然后感染IAV A/PR8株,通过测定HBE细胞病变效应(cytopathogenic effect,CPE)、培养上清液病毒滴度以及NP、PA mRNA与蛋白表达水平,评估所制备的shRNAs对IAV A/PR8在HBE细胞中复制的抑制效果.结果 编码shRNA的2种舣链DNA转录模板序列正确.通过体外转录技术制备的NPshRNA、PA-shRNA每100 μl含量分别为59.4、50.6 nmol,纯度均在2.0以上,浓度和纯度均高.与未转染shRNA的对照组比较,NP-shRNA、PA-shRNA、NP-shRNA+PA-shRNA转染组细胞内NP mRNA分别减少41.7%、44.1%和68.5%,PAmRNA分别减少43.4%、60.9%和73.7%,NP蛋白表达分别降低92.3%、84.0%和91.7%,CPE显著减轻,培养上清液病毒滴度显著下降.结论 成功构建了2种抗IAV短发夹RNA分子,所制备的NP-shRNA、PA-shRNA对IAV A/PR8株在HBE细胞中复制有显著的抑制效果.

CO2气腹对乙酰肝素酶、血管内皮生长因子在裸鼠胃癌组织中表达的影响

目的 通过建立人胃癌裸鼠腹腔种植瘤模型,探讨CO2气腹对胃癌组织中乙酰肝素酶(HPA)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及意义.方法 27只裸鼠分3组:对照组、5 mmHg CO2气腹组及8 mmHg CO2气腹组,每组9只.人胃癌细胞SGC-7901裸鼠腹腔注射后建立CO2气腹胃癌细胞裸鼠腹腔种植模型,气腹持续1 h.处理后4周处死解剖裸鼠,记录腹腔各脏器、穿刺口和腹壁切口成瘤情况和肿瘤数,测量肿瘤大直径、总质量,并检测胃癌种植瘤组织中HPAmRNA和蛋门表达及VEGF蛋白的表达.结果 各组裸鼠腹腔种植瘤结节数、平均大直径、质量相比无统计学差异(P>0.05).各组裸鼠胃癌组织中HPA和VEGF的表达水平相比无统计学差异(P>0.05).结论 5 mmHg和8 mmHgCO2气腹对胃癌细胞裸鼠腹腔内增殖和侵袭转移无明显影响,也未明显促进种植瘤组织中HPA和VEGF的表达.

重组人β防御素4的原核表达、纯化及抗铜绿假单胞菌活性初探

目的制备原核表达的重组人β防御素4(human beta defensin 4,HBD4),初步探讨其对铜绿假单胞菌的体外抗菌活性.方法将编码HBD4的DNA片段连接到大肠杆菌表达载体pET42a中,构建好的表达质粒pET42a-HBD4转化到表达菌株BL21(DE3)中,0.5 mmol/L IPTG诱导表达4 h,亲和纯化融合蛋白后经Western blot鉴定,再以肠激酶酶切融合蛋白,镍柱亲和层析分离HBD4;采用打孔法初测其抗铜绿假单胞菌活性,并用微量稀释法测定HBD4与3种抗生素的小抑菌浓度(MIC)和小杀菌浓度(MBC),比较其抗铜绿假单胞菌活性并异.结果 GST-HBD4在大肠杆菌中以可溶形式成功表达,纯化的重组HBD4体外对铜绿假单胞菌有抗菌活性,其效能略低于亚胺培南,而高于哌拉和环丙沙星.结论采用基因工程技术成功表达了重组HBD4,其对铜绿假单胞菌有较强的杀菌活性,具有烧伤创面感染治疗的应用前景.

微流控免疫芯片富集/捕获肠出血性大肠杆菌O157:H7的研究

目的 探讨基于免疫微珠的微流控芯片识别捕获EHEC O157:H7的效率.方法 采用化学共价连接的方法将抗EHEC O157:H7抗体固定于粒径为50 μm的玻璃微珠上,再将微珠填充于PDMS/玻璃复合芯片中,建立由流体控制、免疫反应构成的细菌分选芯片;通过对进样流速、冲洗流速及冲洗时间的优化,在降低芯片对细菌的非特异性吸附的同时,增加芯片的特异性捕获效率.结果 在10μl/min和5 min的佳冲洗流速和冲洗时间下,该芯片在10 min内可完成对EHEC O157:H7的捕获,捕获效率达到40.00%～63.96%,且实验组与对照组有统计学差异(P<0.01).结论 本研究构建的 EHEC O157:H7识别芯片具有较高的捕获效率.

盐酸氯丙嗪促进药物直肠吸收机制研究

目的 应用Caco-2细胞(the human colon adenocarcinoma cell lines)考察盐酸氯丙嗪对直肠黏膜上皮细胞完整性与稳定性的影响.方法 以不同浓度的盐酸氯丙嗪作用Caco-2细胞后,采用Bradford法测定上清液吸光度值[D(595)],计算细胞膜破坏百分率以r解Caco-2细胞膜完整性的变化;应用DPH(1,6-diphenyl-1,3,5-hexatriene)荧光探针法测定细胞膜脂质DPH的荧光强度并计算荧光偏振度,评价细胞膜流动性的变化,以了解其对Caco-2细胞膜稳定性的影响.结果 盐酸氯丙嗪浓度>140 μmol/L时能影响Caco-2细胞膜完整结构,使细胞内容物释出,且浓度与对膜破坏程度呈现S型曲线.盐酸氯丙嗪浓度<112 μmol/L时Caco-2细胞膜脂质荧光偏振度值随浓度的增高及作用时间的延长,呈逐渐下降的趋势(P<0.05).结论 盐酸氯丙嗪在低浓度时能够增大Caco-2细胞膜的流动性,使其结构紊乱,影响膜的稳定性;当超过一定浓度时可破坏细胞膜的完整性,使细胞内容物释出;这些改变很可能是盐酸氯丙嗪促进药物跨膜转运吸收的机制之一.

女性Kallmann综合征1例

Kallmann综合征又称促性腺激素分泌不足的性腺功能减退伴嗅球丧失症,是一种先天性的遗传病[1].

类风湿性关节炎肺损伤合并侵袭性肺曲霉病1例

患者,男性,68岁.因间断咳嗽30 d,发热14 d于2007年3月7开入院.患者8年前被我院确诊为"类风湿关节炎",半年前曾服"来氟米特、甲氨碟呤"等免疫抑制剂治疗.

肝右动脉、胆囊动脉及肝圆韧带变异1例

作者在解剖一具男性尸体时发现其双肝右动脉、双胆囊动脉且肝圆韧带变异,现报告如下:肝固有动脉发出肝右动脉,距肝右动脉起始端1.3 cm处,发出1支胆囊动脉,管径0.22 cm,该动脉在胆囊三角内走行1.2 cm后,发出前、后2条分支,前支长3.5 cm,管径0.13 cm,分布于胆囊前壁;后支长2.6 cm,管径0.11 cm,分布于胆囊后壁.在胃十二指肠动脉起始端1.6 cm处,发出 1条副肝有动脉,长5.2 cm,管径0.32 cm,该动脉先水平走行,后转向后上,在胆囊管与肝总管交汇处的后方注入肝实质(图1).

不同数量大鼠L6骨骼肌成肌细胞移植对心肌梗死疗效的影响

心肌梗死是导致中老年人死亡的主要疾病之一.近年来,用正常细胞移植修复梗死心肌,改善心功能,越来越受到国内外学者关注[1],但移植细胞数量与心肌梗死面积间的关系尚未明确.

颅内多发性静脉窦血栓形成1例

颅内静脉窦血栓形成(cerebral venous sinus thrombosis,CVST)是一类特殊的脑血管疾病,因其临床上无特异性表现而易被误诊或漏诊[1].现将我科近期收治的1例颅内多发静脉窦血栓形成病例报告如下.

关于数字的用法