放射控导的wt-p53蛋白正反馈基因环路对肺腺癌细胞周期、凋亡及放射敏感性的影响

目的 研究体外环境放射控导的wt-p53蛋白正反馈基因环路对肺腺癌细胞细胞周期、凋亡率及放射敏感性的影响.方法 采用直线加速器8 MV-X线,400 MU/min、4 Gy、源皮距100 cm的照射条件照射治疗组pE6R4-p53-EGFP/H1299转染细胞和对照组H1299(p53~(-/-))、pE6-p53-EGFP/H1299和pR4-p53-EGFP/H1299转染细胞,12 h后收集各组细胞,流式细胞仪分析该环路在放射线诱导下对肺腺癌细胞周期和细胞凋亡率的影响;绘制细胞放射剂量-存活曲线,计算平均致死剂量(Do)值及放射增敏比(sensitive enhancement ratio,SER).结果 4 Gy 8 MV-X线照射治疗组和对照组细胞后12 h,治疗组细胞在照射后(75.13±1.42)%发生明显G_0/G_1期阻滞;照射后各组细胞凋亡率均高于照射前,照射后治疗组细胞凋亡率为(23.73±0.21)%,分别是对照组H1299(p53~(-/-))细胞[(4.17±0.12)%]、pE6-p53-EGFP/H1299细胞[(15.67±0.32)%]、pR4-p53-EGFP/H1299细胞[(9.23±0.15)%]的5.69、1.51倍和2.57倍.治疗组pE6R4-p53-EGFP/H1299细胞和对照组pE6-p53-EGFP/H1299、H1299(p53~(-/-))细胞Do值分别0.91、1.073、1.413 Gy,根据Do值计算SER分别为2.63和1.34.结论 放射可诱导wt-p53蛋白正反馈基因环路上调wt-p53蛋白表达,从而调控肺腺癌细胞发生显著G_0/G_1阻滞,使细胞凋亡比例增加,显著提高了肺腺癌细胞放射敏感性.

结缔组织生长因子在成年和幼年兔关节软骨全层缺损修复中表达的差异

目的 探讨结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在成年和幼年兔膝关节软骨全层缺损修复过程中的表达及意义.方法 成年和幼年新西兰白兔各25只,两年龄组兔分别分为5组(n=5):对照组(未损伤组)、损伤24 h、1周、4周、8周组,制备兔膝关节股骨关节面全层软骨缺损自我修复模型.术后于各时间点处死动物,观察软骨缺损的修复情况,并应用RT-PCR和免疫组化技术分别检测CTGF mRNA及蛋白在成年和幼年兔修复过程中的表达.结果 幼年兔关节软骨全层缺损后可形成透明软骨样修复,成年兔仅为纤维组织修复.各组检测均见CTGF mRNA表达,幼年组表达水平显著高于成年组,差异有统计学意义(P<0.05).免疫组化显示各组软骨细胞均有CTGF蛋白表达,阳性表达主要集中在软骨的中间带及深层带.结论 幼年兔关节软骨全层缺损修复优于成年兔,同时伴有CTGF表达的显著增高,提示CTGF可能在促进关节软骨修复中发挥重要作用.

重庆地区博尔纳病病毒种系发生分析

目的 了解重庆地区博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)基因特征及其种系发生.方法 采用荧光定量巢式实时逆转录聚合酶链反应(fluorescence quantitative nested RT-PCR,FQ-nRT-PCR)检测健康牛、山羊、猪各50例以及病毒性脑炎(viral encephalitis,VE)患者20例外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)BDV p24片段,检出阳性序列和前期检出的5例重庆地区山羊和神经精神患者阳性BDV p24基因序列,与GenBank中5个国家7个动物种属33例BDV p24基因序列进行比对,分析其核苷酸和氨基酸序列同源性,重建基因系统发生树.结果 10例BDV p24 核苷酸序列一部分(1例VE患者)形成重庆独立支系,另一部分(7例动物和2例VE患者)汇聚至德国-瑞士-奥地利-日本-重庆混合支系.与BDV标准病毒株Strain V、H1766及He/80比对,9例核苷酸和氨基酸序列同源相似性分别为94%～100%和82%～100%,1例为95%～98%和89%～93%.结论 重庆地区动物和人宿主可能存在地源性BDV独立株和源于外来疫病病原传入的流行株.

2006年重庆市残疾人抽样调查流行病学特征及康复需求分析

目的 调查重庆市残疾人的流行病学特征及康复需求情况.方法 以2006年全国第2次残疾人抽样调查重庆市的数据库资料为依据,调查残疾人流行病学特征及康复需求现状.结果 残疾人共4 990人,现患率为6.05%.其中男性2 689人,现患率为6.43%;女性2 301人,现患率为5.66%,男性的现患率与女性比较差异有统计学意义(P<0 01).城镇1 262人,现患率为5.27%;农村3 728人,现患率为6.37%,农村的现患率与城镇比较差异有统计学意义(P<0 01).肢体残疾现患率高(33.99%),言语残疾现患率低(1.96%).60岁以上老年人所占比例大(47.13%).残疾人的主要康复需求为贫困残疾人救助与扶持、医疗服务与救助、康复训练与服务、辅助器具;城镇的首位康复需求是医疗服务与救助,农村的首位康复需求是贫困残疾人救助与扶持;曾接受多的康复服务均为医疗服务与救助.康复形式的主要需要是机构康复及社区和家庭服务,康复内容主要为医疗服务和康复训练与服务.结论 重庆市残疾人人数较多,其中肢体残疾现患率高,言语残疾现患率低;男性的残疾现患率高于女性,农村的残疾现患率高于城镇;目前提供的康复服务不能满足残疾人的康复需求.

慢性强迫游泳抑郁模型大鼠类P300电位的变化

目的 探讨大鼠慢性强迫游泳抑郁模型类P300电位改变及其与行为变化的关系.方法 将40只SD雄性大鼠均分为4组:强迫游泳7 d模型组(S1组)、强迫游泳14 d模型组(S2组)和2组对照组(C1组、C2组).观察大鼠体质量、旷场实验和液体消耗实验等行为学指标.在麻醉状态下采用听觉oddball模式刺激诱发大鼠类P300电位,测定N1、N2、P3潜伏期和P3波幅.对大鼠类P300电位变化和行为学检测指标进行相关性分析.结果 模型组大鼠与对照组相比体质量增长率降低(F=253.60, P<0.01),蔗糖水摄入率下降(F=128.38, P<0.01),旷场实验中水平得分 (F=124.73, P<0.01)和垂直得分(F=41.09, P<0.01) 减少,修饰次数(F=15.04, P<0.01) 增加.与对照组比较,S1组和S2组P3潜伏期显著延长[S1组:(469.7±30.69)ms,S2组:(498.9±25.54)ms,C1组:(389.6±49.43)ms,C2组:(378.5±39.77)ms;F=71.534, P<0.01],P3波幅明显降低 [S1组:(19.60±10.62)μV, S2组:(16.00±11.98)μV,C1组:(28.30±22.63)μV,C2组:(28.70±10.71)μV,F=5.187,P=0.029].P3潜伏期和多项行为学指标呈显著负相关,而与修饰行为呈显著正相关(r=0.475, P=0.002).P3波幅与水平得分呈显著正相关(r=0.366, P=0.020),而与修饰次数呈显著负相关(r=-0.343, P=0.030).结论 慢性强迫游泳应激诱发大鼠出现明显抑郁行为,同时抑郁模型大鼠类P300电位发生异常改变,提示抑郁模型大鼠表现情绪障碍的同时可能伴有认知功能损害.

慢病毒介导的CYP3A11基因knock-down小鼠的建立

目的 构建和筛选小鼠P450 3A11基因miR RNAi慢病毒载体,建立CYP3A11基因knock-down小鼠.方法 利用Ravi Sachidanandam's Lab的在线软件设计沉默小鼠P450 3A11基因的miRNA所对应的shRNA序列,PCR扩增后克隆到PCI-GFP-MiR质粒中,其再与慢病毒载体FUW进行重组.将psPAX2和pMD2.G两个载体和FUW-GFP-MiR-shRNA重组慢病毒载体共转染293FT细胞,包装成病毒.用包装好的病毒液感染293FT细胞后,并利用GFP蛋白表达水平进行滴度测定.将上述重组慢病毒载体分别转染FVB/N小鼠肝细胞,转染48 h后,检测P450 3A11基因mRNA表达水平的变化.选取干扰效果好的FUW-GFP-MiR-shRNA1重组慢病毒载体进行制备基因knock-down小鼠模型.用显微注射法将浓缩的shRNA1病毒液注射至FVB/N小鼠12细胞期胚胎透明带下.将注射后发育至22细胞期的胚胎移植至假孕受体母鼠,得F0代小鼠.在紫外光照射下利用滤光片观察GFP在小鼠活体内的表达水平.结果 DNA测序结果显示3个重组慢病毒载体均与所设计的shRNA序列一致.检测的3个浓缩前慢病毒悬液的滴度均≥10~6 TU/ml,经过高速离心对病毒进行浓缩和纯化,其滴度达到10~9 TU/ml以上.转染FUW-GFP-MiR-shRNA1、2的2组肝细胞的P450 3A11基因mRNA表达水平相对于空白对照组均显著下降(P<0.05),而转染阴性对照FUW-GFP-MiR-shRNA-NC的肝细胞P450 3A11基因mRNA表达水平相对于空白对照组无明显改变.选用FUW-GFP-MiR-shRNA1慢病毒载体制备的F0代3A11基因knock-down小鼠,在紫外光照射下,阳性小鼠可见较强的荧光.结论 构建并筛选出小鼠P450 3A11基因有效的靶向miR RNAi慢病毒载体,并成功建立CYP3A11基因knock-down小鼠.

c-Myc在小鼠同步化毛囊周期中的表达

目的 探明转录因子c-Myc在同步化之后的小鼠毛囊周期中表达的规律及可能意义.方法 通过经典的松蜡合剂脱毛法使小鼠背皮毛囊周期同步化,分别采用免疫组织化学、RT-PCR、Western blot检测c-Myc在毛囊周期不同时相点(拔毛后5、10、16、20、25 d)表达的强弱变化及分布规律.结果 在所有5个时相点的皮肤中c-Myc都存在不同强度的表达,RT-PCR与Western blot检测结果呈现出一致的规律,即生长期中期(10 d)、晚期(16 d)和退化期(20 d)表达较强,生长期早期(5 d)和静止期(25 d)表达较弱.免疫组织化学结果显示:c-Myc表达在生长期主要分布于毛囊内根鞘与毛母质,在退化期主要分布于残存的内根鞘,在静止期毛囊中没有表达.结论 c-Myc的表达存在于生长期的内根鞘、毛母质和退化期残留的内根鞘.c-Myc 可能在毛囊角质形成细胞的终末分化过程中发挥重要作用.

非人工通气兔主动脉瓣上狭窄模型的建立及评价

目的 探讨在非人工通气的条件下通过升主动脉缩窄的方法建立主动脉瓣上狭窄模型的可行性并进行评价.方法 将20只新西兰大白兔完全随机分为升主动脉缩窄组(n=12)和假手术组(n=8).在非人工通气的条件下,在主动脉近端根部结扎升主动脉,使其缩窄.假手术组只行开胸手术,不行升主动脉结扎.术后2、4、8、12、16、20、24周行超声心动图检查,测量心室内径及心功能.术后8、24周行光学显微镜及透射电子显微镜检查,观察心肌组织形态学改变.结果 超声心动图检查示:升主动脉缩窄组术后8周时左室质量指数(left ventricular mass index, LVMI)明显增大[(2.30±0.11)mg/g],较术前[(1.02±0.05)mg/g]及假手术组[(0.98±0.01)mg/g]均有显著差异(P<0.01),左室短轴缩短率(fractional shortening, FS%)自术后4周始逐渐下降,术后24周时较术前降低了9.3%,有显著差异(P<0.01).组织学检查示:心肌纤维排列紊乱,心肌细胞肥大,间质胶原纤维显著增生.结论 通过非人工通气升主动脉缩窄的方法成功建立了兔主动脉瓣上狭窄的模型,该方法简单、有效、重复性好.

HepaCAM基因转染对膀胱癌BIU-87细胞株生长及血管内皮生长因子表达的影响

目的 探讨外源性肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)转染对人膀胱癌BIU-87细胞株生长及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factors, VEGF)表达的影响.方法 使用脂质体2000转染法将携带野生型hepaCAM基因的质粒(pEGFPN2-hepaCAM)及空载质粒(pEGFPN2)转染人膀胱癌BIU-87细胞,建立稳定过表达hepaCAM基因的BIU-87细胞株.以转染空载质粒及未转染的BIU-87细胞株作为对照,采用MTT法检测各组细胞生长能力,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测hepaCAM、VEGF mRNA水平的变化,Western blot检测VEGF蛋白水平的变化.结果 MTT实验示:hepaCAM基因转染(实验组)BIU-87细胞生长与空载体组和未处理组细胞比较明显受到抑制(P<0.05);hepaCAM基因在膀胱癌BIU-87细胞不表达,转染后hepaCAM mRNA明显增强(P<0.05);实验组VEGF mRNA表达(0.527±0.031)与未处理组(0.803±0.042)、空载组(0.750±0.040)比较明显下降(P<0.05).Western blot结果示:实验组BIU-87细胞VEGF蛋白表达(0.057±0.015)与未处理组(0.263±0.032)和空载组(0.280±0.036)比较明显下降(P<0.05).结论 转染野生型hepaCAM基因可明显抑制膀胱癌BIU-87细胞的生长能力,并下调VEGF基因及蛋白的表达, hepaCAM基因可能是影响肿瘤的生长及侵袭转移的重要原因之一.

应用孕妇外周血胎儿有核红细胞数量及胎儿脐动脉血流变化预测胎儿慢性缺氧

目的 探讨母血中胎儿有核红细胞(fetal nucleated red blood cells, FNRBC)数量及胎儿脐动脉血流改变与胎儿慢性缺氧的关系.方法 对78例孕妇(正常妊娠组30例、胎儿急性缺氧组18例、胎儿慢性缺氧组30例)的外周血分别进行单密度梯度离心、FNRBC计数;同时行彩色多普勒超声检测胎儿脐动脉血流搏动指数(pulsatility indexes,PI)、阻力指数(resistance indexes,RI)及收缩期大血流速度与舒张末期血流速度的比值(systolic/diastolic, S/D);比较单法检测及二法联检的灵敏度、特异度及诊断正确率等.并通过病理证实胎盘变化.结果 胎儿慢性缺氧组、急性缺氧组、正常妊娠组孕妇外周血中FNRBC计数分别为(15.42±4.11)、(6.92±2.17)、(5.95±1.76)个/6 ml,慢性缺氧组FNRBC计数明显高于其他2组(P<0.05),而后两组间比较无显著性差异(P>0.05).慢性缺氧组脐血流S/D、PI、RI值分别为(3.27±0 66)、(1.12±0.15)和(0.71±0.07),均显著高于正常妊娠组的(2.16±0.25)、(0.69±0.10)和(0.55±0.06)(P<0 05).慢性缺氧组孕妇外周血中FNRBC计数与脐动脉血流参数S/D及PI值呈正相关(r=0.815、r=0.587,P<0.05),而正常妊娠组孕妇外周血中FNRBC计数与脐动脉血流各参数之间均无相关性.与单独检测相比,2种方法联合检测预测胎儿慢性缺氧的灵敏度、诊断正确率高.结论 胎儿慢性缺氧时母血中FNRBC计数、脐动脉S/D、PI值升高,二者呈正相关;二法联检能提高预测胎儿慢性缺氧的灵敏度及诊断正确率.

伴有抑郁症状孕妇睡眠质量分析

目的 了解伴有抑郁症状孕妇的睡眠质量并分析其特点.方法 对2007年6月至2008年6月在大坪医院(所)妇产科门诊进行产检就诊、伴有抑郁症状的孕妇(研究组,n=45)和健康孕妇(对照组,n=45)进行匹兹堡睡眠质量指数量表(Pittsburgh sleep quality index, PSQI)评定及多导睡眠图(polysomonography,PSG)监测.结果 伴有抑郁症状的孕妇PSQI总分(11.46±4.78)分,睡眠质量差的占93.3%,对照组PSQI总分(6.35±3.28)分,睡眠质量差的占26 7%,研究组入睡时间、睡眠时间、睡眠效率、睡眠障碍、日间功能障碍因子分及PSQI总分均明显高于对照组(P<0 05).与对照组比较,研究组总睡眠时间减少,睡眠潜伏期长(P<0.01),觉醒次数及时间增多,睡眠效率明显下降(P<0.05);浅睡(S1期睡眠)增加而深睡(S3、S4期睡眠)减少,S1期睡眠与S3+S4期睡眠组间比较差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05).与对照组比较,研究组快速眼动睡眠(rapid eye movement,REM)潜伏期缩短,REM睡眠时间增多(P<0.05).结论 伴有抑郁症状的孕妇主、客观睡眠质量均差,以入睡困难、易醒、REM潜伏期缩短及REM睡眠时间增多为其特点.

GasderminA3基因突变对小鼠毛囊β-catenin表达的影响

目的 探讨GasderminA3(GSDMa3)基因突变前后β-catenin在毛囊中表达的变化.方法 采用免疫组化S-P法、RT-PCR、Western blot等方法,检测出生后11 d(毛囊生长期)、16 d(毛囊退化早期)、18 d(毛囊退化晚期)、24 d(毛囊静止期)等各个时相点的GSDMa3基因突变鼠和C57BL/6(B6)鼠背皮毛囊β-catenin的表达表化.结果 GSDMa3基因突变鼠和B6鼠β-catenin的表达均从11～24 d逐渐减弱,但GSDMa3基因突变鼠β-catenin的表达在各个时期均强于B6鼠.在生长期,β-catenin表达于内外根鞘和毛母质细胞中,在GSDMa3基因突变鼠的表达强于B6鼠;在退化期,β-catenin主要表达于外根鞘和毛母质细胞中,在突变鼠的表达更强于B6鼠;在静止期,β-catenin主要表达在突变鼠的外根鞘细胞中,而在B6鼠的毛囊中表达很少.结论 GSDMa3基因可能通过调节β-catenin的表达,影响毛囊的生长和发育.

法尼酯X受体可下调肝细胞中肝型脂肪酸结合蛋白的表达

目的 研究法尼酯X受体( farnesoid X receptor,FXR )对肝型脂肪酸结合蛋白(liver fatty acid-binding protein,L-FABP)表达的影响.方法 用终浓度为50、100 μmol/L的鹅脱氧胆酸(chenodesoxycholic acid,CDCA)以及1、5 μmol/L 的GW4064分别处理人胚胎肝细胞LO2和人肝癌细胞株HepG2后,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测FXR特异靶基因小异二聚体配体(small heterodimer partner,SHP)和L-FABP mRNA表达,再用Western blot法检测L-FABP 蛋白水平的变化.结果 LO2和HepG2细胞经FXR特异性激动剂CDCA以及GW4064刺激后,细胞内的SHP mRNA 水平均明显升高,表明FXR在这两种细胞中是有功能活性的;而L-FABP mRNA和蛋白水平显著下降(P<0 05).结论 激活后的FXR可抑制L-FABP的表达活性.

Cyr61在人肿瘤组织中的表达

目的 观察分析富含半胱氨酸61(cysteine-rich61, Cyr61)在人类肿瘤组织中的表达情况.方法 采用HE染色、免疫组化的方法检测多组织肿瘤组织芯片和30例肿瘤组织标本 (包括食管癌、胃癌、直肠癌、肺癌、乳腺癌和肝癌组织标本各5例)中Cyr61的表达.结果 组织芯片中79%(38/48)的肿瘤组织Cyr61表达阳性,93%(28/30)肿瘤组织标本中Cyr61表达阳性.其中神经、食管和甲状腺等肿瘤组织中呈强阳性表达,胃、肝、结肠、直肠、肺、肾、子宫、皮肤、卵巢、乳腺等组织的肿瘤呈阳性表达,在膀胱、前列腺和胰腺等肿瘤组织中表达较弱.结论 Cyr61在多数肿瘤组织中均过表达,在不同肿瘤组织中表达程度不同,Cyr61可能成为新的肿瘤标志物应用于多种肿瘤的诊断.

~(99)Tc~m-MAG_3-K237的制备及其在健康动物体内的药代动力学和分布研究

目的 探讨~(99)Tc~m标记血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2,KDR)小分子拮抗肽K237的方法,研究标记物在健康动物体内的药代动力学特性及体内分布特点.方法 化学方法合成制备MAG_3-K237,并用~(99)Tc~m标记;鉴定标记物的理化性质;测定标记物经新西兰大白兔静脉注射后不同时相血液放射性浓度,得出佳房室模型与药代动力学参数;分别测定经尾静脉注射7.4 MBq标记物后的昆明小鼠各器官质量和放射性计数,经参考源校正后计算各脏器每克组织百分注射剂量率(%ID/g);经耳缘静脉注射37 MBq标记物,在SPECT下观察其在兔体内的动态分布.结果 ~(99)Tc~m-MAG_3-K237的放化纯度为(97.98±0.76)%,比活度为(3.54±0.03) TBq/mmol;室温(25 ℃)下保存8 h后放化纯度为(96.15±0.37)%;半胱氨酸置换率为0.2%～0.37%;不与血清蛋白结合;兔体内动力学过程符合权重为1/c2的三室模型,快分布相半衰期(t_(1/2α))、慢分布相半衰期(t_(1/2β))及消除相半衰期(t_(1/2γ))分别为(4 00±3 53)、(24.48±9.84)、(852.24±444.00) min,清除率(CL)为(1.833±0.408) ml/min;标记物在健康小鼠体内清除迅速,肾脏、肝脏及肠道分布较多,但肝脏30 min后分布很少. 结论本研究制备的~(99)Tc~m-MAG_3-K237的放射化学纯度高,体内外稳定性好,血液清除速度快,通过肾脏和肝脏双重途径代谢.

幽门螺杆菌感染对胃内正常菌群结构的影响

目的 比较分析不同人群胃内菌群的特点,探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)感染对胃内菌群结构的影响,探讨胃内菌群与Hp相关疾病的关系.方法 分别采集Hp阴性者、Hp正常携带者和Hp感染患者的胃黏膜标本220例,采用多种选择性培养基分别在需氧、微需氧、厌氧情况下分离培养细菌,结合Hp感染情况,分析胃内主要菌群的结构组成及定植数量.结果 220例胃镜受检者中,Hp阴性82例,Hp阳性138例,Hp检出率为62.73%;乳杆菌检出率在Hp阴性者(59.76%)和Hp感染患者(27.84%)比较,差异有统计学意义(P<0.05),其余细菌在3类人群中检出率差异无统计学意义(P>0.05);细菌总量在Hp阴性者胃内的定植量显著高于Hp正常携带者和Hp感染患者(P<0 05);Hp阴性者中的乳杆菌、肠杆菌、链球菌所占比例分别为41.39%、16.90%、18.28%,检出数量和所占比例明显均高于Hp感染患者(P<0.05);厌氧菌在Hp感染患者的检出率高,所占比例为43.77%,显著高于Hp阴性者(P<0.05). 结论 Hp感染严重影响胃内菌群变化,胃内菌群(特别是乳杆菌与厌氧菌)与Hp致病性密切相关.

HCN2阳性细胞在小鼠胃肠道肌间神经丛内的分布

目的 探讨超级化激活环核苷酸调控的阳离子通道(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel 2,HCN2)阳性细胞在小鼠胃肠道肌间神经丛的分布.方法 成年昆明小鼠的胃肠道,包括胃、小肠、结肠,制作全层铺片,免疫细胞化学染色HCN2阳性细胞、胆碱能神经及Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal, ICCs).结果 成年小鼠胃肠道肌间神经丛的HCN2阳性细胞成簇紧密排列,多数阳性细胞为Dogiel Ⅱ型神经元,阳性产物分布在细胞质和细胞膜,每个神经节内可见数个至数十个阳性细胞;神经突起虽可见HCN2阳性产物,但主要存在于较粗的突起.HCN2阳性神经元分布密度在胃肠道各段存在较大差异(P<0.05):以结肠密度高,胃次之,小肠略低.利用胆碱能神经元标志物胆碱乙酰转移酶(ChAT)和ICCs的标志物(c-kit蛋白)分别与HCN2通道进行双重免疫染色,可见HCN2存在于胆碱能神经元,未见HCN2存在于ICCs的胞体,ICCs的突起与HCN2阳性神经元距离很近.结论 HCN2离子通道广泛表达于肌间神经丛,主要表达于胆碱能神经元,可能参与该神经元调控胃肠神经活动、神经递质的释放以及胃肠功能的调节.

人皮肤成纤维细胞的搅拌及移行培养的初步研究

目的 建立人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblasts,HDFs)的简易三维搅拌、移行培养系统,鉴定所培养的HDFs生物学特性.方法 酶消化包皮后进行原代、传代培养,选取第5～8代HDFs进行搅拌培养,设置静态培养对照组.倒置相差显微镜和扫描电镜进行HDFs在微载体上的生长情况、细胞形态以及后续移行培养的观察,免疫组织化学法进行细胞抗原表型的鉴定,ELISA法间接检测移行培养液中Ⅰ型胶原的含量.结果 HDFs在微载体上的贴壁速度快,贴壁状况好,镜下观察细胞形态与静态培养均无差异.移行培养过程中HDFs能从微载体上移行到培养瓶底面进而较快增殖,呈梭形或多角形的正常形态和放射状、漩涡状贴壁生长,Ⅰ型胶原蛋白含量的间接测定呈现与细胞量变化相应的趋势均表明该体系培养的HDFs具有正常的生物学合成和分泌功能.结论 成功建立的HDFs简易搅拌、移行培养系统是一种能进行活体外快速扩增细胞的培养方法,培养的细胞形态和功能良好,能满足组织工程皮肤实验和生产各阶段对种子细胞的需求.

锌指蛋白A20突变体转基因小鼠脓毒症肺损伤的研究

目的 了解锌指蛋白A20突变体(A20△)转基因小鼠脓毒症肺损伤的特点,探讨A20△对小鼠脓毒症肺损伤的影响.方法 以A20△转基因脓毒症小鼠为动物模型(A20△转基因组),采用流式细胞仪测定肺组织单核巨噬细胞浸润,ELISA测定肺组织A20△、TNF-α、IL-1β水平,结合肺体指数和病理检查对炎症及其损伤程度进行鉴定.实验同时设LPS对照组(LPS组)和生理盐水对照组(对照组). 结果给予LPS后6、12、24 h,A20△转基因组小鼠肺体指数较LPS组明显下降(P<0.01,P<0.05);A20△转基因组小鼠肺组织浸润单核/巨噬细胞数较LPS组明显下降(P<0.01).给予LPS后3、6 h,A20△转基因组小鼠肺组织炎症细胞因子TNF-α水平较LPS组明显下降(P<0.01);IL-1β水平也较LPS组明显下降(P<0.05,P<0.01);给予LPS后12、24 h,TNF-α和IL-1β水平差异无统计学意义(P>0.05).病理学观察表明A20△转基因组小鼠肺组织充血程度、肺泡积液及肺间质增厚程度均较LPS组轻. 结论 A20△转基因小鼠在一定程度上具有抵御LPS诱导性肺损伤的能力,其机制可能是通过抑制单核细胞向肺组织浸润和降低肺内炎症细胞因子水平实现的.

慢性坐骨神经缩窄性损伤后大鼠脊髓背角神经节上BKca-α的表达变化

目的 通过建立慢性坐骨神经缩窄性损伤模型(chronic constriction injury of the sciatic nerve model,CCI),观察神经病理性疼痛状态下大鼠脊髓背角神经节(dorsal root ganglion, DRG)神经元大电导的钙激活钾通道α亚基(large calcium-activated potassium channel alpha subunits, BKca-α)的表达.方法 雄性SD大鼠70只,体质量180~230 g,分为空白对照组、假手术和手术组(CCI组).CCI组于右后肢结扎坐骨神经制作CCI模型,假手术组仅做钝性分离,空白对照组不做任何处理.于术前及术后1、3、7、10、14、17、21 d测定各组机械缩爪阈值和热缩足潜伏期(radiant heat stimulation,PWHL).于术后7、14、21 d采用RT-PCR和Western blot检测各组大鼠脊髓L_4～L_6段DRG上BKca-α mRNA和蛋白表达水平变化.结果 ①与空白对照组和假手术组比较,CCI组术后3~21 d热痛阈和机械痛阈明显降低(P<0.01);空白对照组和假手术组间热痛阈和机械痛阈差异没有统计学意义(P>0.05).②与空白对照组和假手术组比较,术后7、14、21 d CCI组DRG上BKca-α mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05),空白对照组和假手术组间BKca-α表达水平无明显统计学差异(P>0.05).结论 在坐骨神经慢性缩窄性损伤后,大鼠DRG神经元上BKca-α表达明显下降,可能削弱了BKca对神经元兴奋的负反馈,在大鼠神经病理性疼痛中发挥作用.

三甲益肝颗粒含药血清对HSC-T6细胞形态、增殖和凋亡的影响

目的 观察三甲益肝颗粒(San Jia Yi Gan granula,SJG)含药血清对HSC-T6细胞形态、增殖和凋亡的作用,探讨SJG抗肝纤维化的细胞学基础.方法 雄性SD大鼠30只按随机数字表法分为5组,每组6只,分别为生理盐水对照组(Control)、水飞蓟宾组(Sily)、低剂量SJG组(SJG-L)、中剂量SJG组(SJG-M)和高剂量SJG组(SJG-H).SJG按低、中、高(1.7、3.4、6.8 g/kg)3个剂量灌胃大鼠制备含药血清,并用不同体积分数(5%、10%、20%、40%)SJG含药血清干预HSC-T6细胞株,用倒置相差显微镜观察HSC-T6细胞形态学的变化,MTT法检测SJG药物血清对HSC-T6细胞增殖的影响,流式细胞仪检测SJG药物血清诱导HSC-T6细胞早期凋亡.结果 含药血清干预后,细胞形态发生明显改变:药物组细胞较对照组细胞明显减少,细胞间隙较宽,细胞皱缩,核染色质浓集呈球形.MTT实验结果显示各组药物血清均可抑制HSC-T6细胞的增殖,SJG-M、SJG-H组对HSC-T6细胞增殖的抑制均显著高于Sily组(P<0.05),SJG-L组与Sily组对HSC-T6 细胞增殖的抑制无显著差异(P>0.05).SJG-M、SJG-H组凋亡率分别为(7.09±1.04)%、(11.63±1.53)%,显著高于Sily组[(4.38±1.07)%]、SJG-L组[(4.17±0.30)%]和对照组[(1 74±0 11)%].与对照组比较,各药物血清干预组细胞凋亡数明显增加,以SJG-H组增加为明显.结论 SJG含药血清可显著抑制HSC-T6细胞的活化、增殖,并诱导其凋亡.

原发性睾丸非霍奇金淋巴瘤1例

睾丸肿瘤比较少见,占全身恶性肿瘤的1%~([1]).原发性睾丸非霍奇金淋巴瘤更为少见,仅占睾丸肿瘤的1%～9%,占非霍奇金淋巴瘤的1%~([2]).第三军医大学新桥医院泌尿外科于2009年10月收治1例,现报告如下.

肺淋巴管平滑肌瘤病1例

肺淋巴管平滑肌瘤病(pulmonary lymphangiomyomatosis,PLAM)是一种罕见的呈进行性发展的弥漫性肺间质疾病,其病因至今未明~([1]).为提高对本病的认识,现报告经病理证实的1例PLAM.

罕见咽结核导致全咽腔狭窄闭锁1例

咽结核多为肺结核患者痰中的结核杆菌接触损伤的咽部黏膜而发病,临床病例报道不多~([1]).咽结核合并全咽腔狭窄、闭锁的病例更为罕见,本科2008年12月10日收治1例,现报告如下.

肩胛骨平滑肌瘤1例

骨平滑肌瘤极其少见,我科在2007年收治1例肩胛骨平滑肌瘤患者,现报告如下.1 临床资料患者,男性,21岁,因"反复左肩痛1年余"入院.病程中无发热、盗汗史,无明显夜间痛及身体消瘦,查体除肩胛区局部轻微肿大及压痛外,无其他阳性体征.

19例眼眶植物性异物临床和CT影像特征分析

眼眶植物性异物的发生率较金属异物低,金属性异物在眼眶异物中占76%以上,而植物性异物不足10%.由于眼眶植物性异物对眼球危害较大,容易误诊及出现并发症~([1]),因此对其早期诊断和治疗极为重要.现分析我院2000年5月至2009年9月诊治的19例眼眶植物性异物患者的临床资料,以期增加对CT诊断眼眶植物性异物的认识.

无骨折脱位型颈脊髓损伤手术治疗39例

无骨折脱位型颈脊髓损伤的概念早由Pang等~([1])提出,作为脊髓损伤的一种特殊类型也日益引起人们的高度关注和重视.该类损伤并非所有患者手术疗效都确切.因此对无骨折脱位型颈脊髓损伤手术治疗的适应证有进一步探讨的必要.

血卟啉衍生物介导的光动力疗法对人肺腺癌细胞杀伤效应的实验研究

目的 研究血卟啉衍生物(hematoporphyrin derivative, HpD)介导的光动力疗法(photodynamic therapy, PDT)对在体和离体人肺腺癌细胞A549的杀伤作用.方法 以MTT法检测HpD-PDT对A549细胞增殖抑制的量效关系,应用流式细胞术分析其对细胞凋亡的影响.进一步构建A549细胞裸鼠移植瘤动物模型,通过绘制肿瘤生长曲线观察HpD-PDT对肺癌生长的抑制作用,并应用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡.结果 HpD-PDT作用后,A549细胞增殖受抑,凋亡增加,显著高于对照组(P<0.05),且其抑制效率依赖于HpD浓度及激光剂量;裸鼠移植瘤动物模型肿瘤生长受抑、凋亡增加,也与对照组存在显著性差异(P<0.01).结论 HpD-PDT可有效杀伤肺腺癌细胞,其作用机制可能与抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡有关.

转化生长因子-β和结缔组织生长因子在翼状胬肉中的表达

目的 研究正常结膜组织、原发性和复发性翼状胬肉组织中转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)和结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的表达,探讨翼状胬肉的发病机制.方法 采用免疫组化法检测10例正常结膜组织、30例原发性和20例复发性翼状胬肉组织中TGF-β和CTGF表达情况,Spearman等级相关分析翼状胬肉组织中TGF-β和CTGF阳性表达间关系.结果 正常结膜组织中TGF-β和CTGF没有或轻度表达.翼状胬肉组织中TGF-β和CTGF的表达均明显高于正常对照组,差异有显著性意义(χ~2=7.593,χ~2=13.187,P<0.01).原发性翼状胬肉组织中TGF-β和CTGF阳性表达分别为66.7%和70.0%,复发性翼状胬肉组织中TGF-β和CTGF阳性表达分别为80%和85%.翼状胬肉组织中TGF-β和CTGF阳性表达间存在显著正相关(r=0.4,P<0.01).结论 TGF-β和CTGF在翼状胬肉中高表达,提示这两种细胞因子可能参与了翼状胬肉的发生、发展过程.

鼻咽癌细胞株侧群细胞染色条件的优化及其表面标记物的测定

目的 探讨鼻咽癌细胞株侧群细胞所需荧光染料Hoechst33342佳的孵育时间和浓度;研究细胞密度对侧群细胞比例的影响;测定其表面标记物CD133和ABCG2蛋白的表达.方法 荧光染料Hoechst33342孵育细胞,选择不同的时间(30、60、90、120、150、180 min)及不同的浓度(3、4、5、6、7、8 mg/L),用流式细胞仪检测,倒置荧光显微镜观察选择合适的孵育时间和浓度.选取不同生长密度(70%、100%)的细胞,流式细胞仪检测侧群细胞比例的变化.荧光抗体CD133和ABCG2共孵育Hoechst33342, 流式细胞仪测定细胞表面标记物CD133和ABCG2蛋白的表达.结果 Hoechst33342孵育时间为70 min,侧群细胞染色效果较佳.不同的鼻咽癌细胞株,合适孵育终浓度不同, 如CNE2为6 mg/L,而CNE1为2 mg/L.另外,侧群细胞的比例呈生长密度依赖性.CD133蛋白总含量恒定在0.1%~0.2%,侧群细胞和主群细胞表达量没有显著差异,CD133并不富集于侧群细胞中.而侧群细胞ABCG2蛋白较主群细胞优势表达,比例达80%以上.结论 鼻咽癌细胞株侧群细胞佳的荧光染料染色时间为70 min,不同细胞株孵育终浓度不同.侧群细胞的比例呈密度依赖,与ABCG2密切相关.

医学论文前言写作的基本要求

党委高度重视全校齐心合力第三军医大学圆满实现教学评价"保优争先"目标