第三军医大学学报杂志
Journal of third military medical university 제삼군의대학학보
- 主管单位： 第三军医大学
- 主办单位： 第三军医大学
- 影响因子： 1.01
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-5404
- 国内刊号： 50-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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腺病毒介导过表达ANT1基因诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡
目的 利用腺病毒载体转染体外培养的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs),研究过表达腺嘌呤核苷酸转位酶1(adenine nucleotide translocase 1,ANT1)对大鼠VSMCs凋亡的影响.方法 用携带ANT1的腺病毒载体(Ad-ANT1)或空载体腺病毒载体(Ad-GFP)感染VSMCs,采用激光共聚焦观察Hoechst33258染色后细胞凋亡情况,流式细胞术检测Annexin V标记细胞凋亡率.Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达.结果 激光共聚焦观察转染Ad-ANT1 后48 h细胞出现凋亡,且凋亡率[(13.40±1.14)%]与转染空载体对照组[(1.80±0.84)%]相比较差异有统计学意义(P<0.01).流式细胞术检测转染Ad-ANT1后48 h细胞凋亡率[(10.66±1.75)%]明显高于转染空载体组细胞[(3.13±0.37)%] (P<0.05).Western blot结果显示转染Ad-ANT1后Bax蛋白表达明显高于转染空载体组,Bcl-2蛋白表达2组比较无明显差异.结论 腺病毒介导过表达ANT1可诱导大鼠VSMC的凋亡,其机制可能通过上调Bax实现.
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土贝母皂苷甲增强人卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性
目的 探讨土贝母皂苷甲(tubeimoside 1,TBMS1)促进人卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂 (cisplatin,DDP)的增敏作用.方法 采用MTT法分别检测顺铂和TBMS1对A2780/DDP细胞作用的半抑制浓度值(IC50),将实验分为对照组:只加等量生理盐水;顺铂组:给予6 μmol/L顺铂处理;联合用药Ⅰ组:6 μmol/L顺铂+ 3 μmol/L TBMS1;联合用药Ⅱ组:6 μmol/L顺铂+6 μmol/L TBMS1.按上述方法处理细胞后,MTT法检测细胞活力;电泳法检测细胞内DNA损伤;流式细胞技术检测细胞凋亡及周期;Western blot分析周期蛋白A(Cyclin A)和周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达.结果 TBMS1(3、6 μmol/L)与顺铂(6 μmol/L)联用使人卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性增强;细胞的DNA损伤随TBMS1浓度的增加而明显增多;细胞周期被阻滞在S期,联合用药Ⅰ和Ⅱ组S期所占比例分别为(51.23±3.53)%、(77.34±2.80)%;细胞凋亡率为(5.19±0.78)%、(7.11±1.06)%;Cyclin A的表达为1.89±0.28及2.91±0.43,Cyclin D1为0.66±0.09及0.28±0.05(P<0.05,P<0.01).结论 TBMS1显著增加顺铂对A2780/DDP细胞增殖抑制作用,Cyclin A、Cyclin D1可能参与其调节.
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SW626细胞染色体动粒变异对其染色体不稳定的影响
目的 探讨恶性肿瘤细胞染色体不稳定性的可能机制.方法 采用本实验室建立的kinetochore-NOR同步银染技术,对SW626细胞染色体kinetochore变异进行分析.结果 与正常人外周血细胞相比,SW626细胞染色体kinetochore缺失[132(0.89%) vs 26(0.18%)]、kinetochore迟滞复制[82(0.55%) vs 14(0.10%)]和kinetochore-NOR融合[153(1.03%) vs 51(0.37%)]频率显著升高(P<0.01),而不对称kinetochore频率二者差异性不显著(P>0.05).此外,在某些SW626细胞染色体上还观察到多重kinetochores现象.结论 kinetochore 缺失、kinetochore迟滞复制和kinetochore-NOR融合可能是SW626细胞染色体非整倍性变异起源的诱因之一;染色体多重kinetochores可能是恶性肿瘤细胞染色体结构畸变产生的重要途径之一.
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急性缺氧对大鼠心肌组织AMPK磷酸化和糖原含量的影响
目的 研究急性缺氧对大鼠心肌组织AMPK磷酸化和糖原含量的影响,探讨急性缺氧时心肌组织的能量代谢状况.方法 用随机数字表将16只健康雄性SD大鼠分为平原对照组(n=8)和急性缺氧组(n=8).急性缺氧组大鼠置于模拟海拔5 000 m高原的低压舱中.24 h后测定2组大鼠血糖、血乳酸以及心肌组织糖原含量,用心导管技术测定大鼠心脏功能,Western blot法检测心肌组织AMPK、磷酸化AMPK(pAMPK)水平以及葡萄糖转运体-4(GLUT4)的表达.结果 与平原对照组相比较,急性缺氧组大鼠肺动脉压显著升高,右心室功能显著增强,左心室功能无明显变化;血糖含量显著升高[(5.6±0.6)mmol/L vs (7.5±0.5 )mmol/L,P<0.05];左、右心室心肌组织GLUT4表达显著增强,糖原含量显著增加[右心室心肌:(4.78±1.29) mg/g vs (6.55±1.20) mg/g,P<0.05;左心室心肌:(4.15±0.77) mg/g vs (5.73±1.57)mg/g,P<0.05];左、右心室心肌组织AMPK含量无明显变化,但pAMPK含量显著降低,pAMPK/AMPK比值显著降低(P<0.05).结论 模拟高原5 000 m急性缺氧静息状态下心肌组织AMPK磷酸化水平降低,说明心肌能量供求处于平衡状态,心肌糖原含量增加可能是AMPK磷酸化水平降低的机制之一.
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152例胶原生物膜联合羟基磷灰石生物陶瓷治疗牙周和根尖骨缺损的临床疗效分析
目的 分析应用海奥胶原生物膜联合羟基磷灰石生物陶瓷人工骨治疗152例牙周及根尖骨缺损患者的临床疗效.方法 临床收集2006年6月至2010年9月重庆医科大学附属口腔医院牙周科牙周骨缺损和或并有根尖骨缺损患者152例,完善根管治疗,常规牙周龈上洁治、龈下刮治、根面平整后,行翻瓣术植入羟基磷灰石生物陶瓷人工骨填充骨缺损,置海奥胶原生物膜,每隔6个月复查,X线片观察植入后的牙周牙槽骨和根尖骨缺损区骨组织愈合情况,检查探诊出血、牙周袋探诊深度、附着丧失、松动度和牙槽骨情况,并进行比较和统计分析.结果 经过1～4年的追踪观察,有效138例,总有效率90.8%,无效14例,占9.2%.术后牙周骨缺损患者中牙周袋深度(periodontal probing,PD)较基线(5.80±0.86)mm明显变浅 [术后6个月PD值(3.33±0.64)mm,P<0.05];术后附着丧失(clinical attachment loss,CAL)较之基线(6.10±0.83)mm变化明显[术后6个月CAL值为(3.52±0.32)mm,P<0.05].结论 海奥胶原生物膜联合羟基磷灰石生物陶瓷作为骨组织支架材料能广泛应用于口腔科骨修复和骨替代等治疗,临床疗效可靠.
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低氧诱导金属硫蛋白对甲状腺乳头状癌上皮间质转化的影响
目的 研究低氧诱导金属硫蛋白(metallothioneins,MTs)对甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响.方法 以人甲状腺乳头状癌NPA细胞为研究模型,将其分为正常氧组(21%O2)、低氧组(5%O2)和MTs-siRNA干扰低氧组,Western blot、RT-PCR方法检测各组细胞MTs、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)和间质细胞波形蛋白(Vimentin)的表达,Transwell/Matrigel方法检测各组细胞侵袭转移细胞数.结果 低氧可诱导NPA细胞表达MTs,并伴随有EMT标志性分子E-cadherin表达的下调和Vimentin表达的升高,侵袭细胞数由正常氧组15.6±2.8增加到40.3±5.1,迁移细胞数由25.1±5.6增加到48.7±7.6,均有统计学差异(P<0.01);MTs靶向干扰可有效抑制低氧诱导的MTs蛋白表达,同时E-cadherin表达回升,Vimentin表达下降,侵袭细胞数仅增加到25.7±4.2,迁移细胞数仅增加到35.5±5.4,与低氧组比较均有统计学差异(P<0.05).结论 低氧所诱导表达的MTs对人PTC细胞发生EMT有促进作用,MTs靶向干扰可使EMT受到部分抑制.
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128层螺旋CT血管成像在颈脑血管疾病中的诊断价值
目的 探讨128层螺旋CT血管成像在颈脑血管疾病中的诊断价值.方法 收集2009年3月至2010年9月,我院临床怀疑颈脑血管疾病981例患者,应用128层螺旋CT进行颈脑血管成像检查,回顾性分析颈脑血管疾病的各种影像学征象.结果 颅内动脉瘤89例,颅内动静脉畸形25例,颈脑血管狭窄524例(颈总动脉狭窄53处,颈内动脉起始段狭窄183处,烟雾病3例,椎动脉起始段狭窄73处,左侧锁骨下动脉起始段狭窄75处,颅内动脉狭窄195处),颅内乙状窦血栓3例,海绵窦瘘3例,血管变异78例,无异常发现259例,阳性检查率73.59%(722/981).结论 128层螺旋CT血管成像诊断颈脑血管疾病,具有高效、无创、诊断准确等优点,对评价其风险,制定治疗计划有重要的临床应用价值.
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LPCES对慢性低压缺氧兔颏舌肌肌球蛋白重链和SR Ca2+摄取-释放动力学的影响
目的 研究超低频复合生理频率慢性电刺激(lower physiological frequency chronic electrical stimulation,LPCES)对慢性低压缺氧兔颏舌肌肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)亚型表达和肌浆网(sarcoplasmic reticulum,SR)Ca2+摄取-释放动力学的影响.方法 成年日本大白兔24只,按随机数字表法分为4组(n=6):A:正常对照组,B:慢性低压缺氧组,C:2.5 Hz电刺激组,D:(2.5+40)Hz电刺激组.B、C、D组兔在构建慢性低压缺氧模型后,给予C、D 2组慢性电刺激,刺激频率分别为超低频2.5 Hz和超低频复合生理频率(2.5+40)Hz.采用Western blot分析4组兔颏舌肌MHC亚型表达变化,采用荧光光度测定法测定SR Ca2+摄取-释放动力学.结果 ①同正常对照组[(72.16±2.98)%]比较,慢性低压缺氧组[(80.45±1.26)%]兔颏舌肌MHCⅡa亚型比例明显增加(P<0.05),MHCⅠ亚型比例明显减少[(10.86±1.26)% vs (18.61±3.19)%,P<0.05],SR Ca2+摄取-释放速率明显下降,摄取-释放量也明显减少(P<0.05).②同慢性低压缺氧组比较,慢性电刺激后各组兔MHCⅡa和MHCⅠ亚型比例明显增加(P<0.05),MHCⅡb亚型比例明显减少(P<0.05),(2.5+40)Hz电刺激组较2.5 Hz电刺激组更为显著(P<0.05);SR Ca2+摄取-释放速率加快,摄取-释放量增加(P<0.05),(2.5+40)Hz电刺激组较2.5 Hz电刺激组更为明显(P<0.05).同2.5 Hz电刺激组比较,(2.5+40)Hz电刺激组MHCⅡa和MHCⅠ亚型比例差异无统计学意义(P>0.05).结论 慢性电刺激后慢性低压缺氧兔颏舌肌MHC呈现Ⅱb型向Ⅱa型和Ⅰ型的转变,SR Ca2+摄取-释放功能增强,其中超低频复合生理频率组变化更加明显.
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雌激素上调神经营养因子增加雄性小鼠中脑多巴胺神经元数量的实验研究
目的 观察雌激素处理对成年雄性小鼠黑质多巴胺神经元数量的影响及可能的调控机制.方法 选用雄性C57/BL6小鼠10只,分成对照组、雌激素组(E2),采用免疫组化检测雌激素处理对小鼠黑质多巴胺神经元与calbindin阳性神经元数量的改变;采用RT-PCR分析雌激素处理对小鼠中脑内多巴胺转运蛋白(DAT)、胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)与脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA水平的影响.结果 雌激素处理可以增加小鼠黑质多巴胺神经元数量[E2组(119.7±2.9)个vs对照组(93.5±5.1)个,P=0.004],并增加小鼠中脑内DAT的表达水平(P<0.05),而对calbindin阳性神经元数量无影响[E2组(88.0±2.0)个vs对照组(86.2±1.5)个].雌激素处理同时可以上调小鼠中脑内IGF-1R与BDNF mRNA水平(P<0.05).结论 雌激素通过调节IGF-1R与BDNF的表达增加小鼠中脑内多巴胺神经元数量.
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mEGF乙醇脂质体的制备和特性研究
目的 制备mEGF乙醇脂质体,并研究mEGF乙醇脂质体囊泡的包封率和物理性质.方法 采用高效液相色谱法(HPLC)测定mEGF乙醇脂质体的包封率、精密度、回收率、稳定性,运用扫描电镜、原子力显微镜、透射电镜和激光粒度分析仪观察和分析mEGF乙醇脂质体囊泡的外观、粒径和均一度.结果 mEGF乙醇脂质体的包封率大约为38%,精密度小于5%,30 d内包封率波动在36%～38%之间.运用原子力显微镜和透射电镜观察到粒径分布于40～60 nm 的乙醇脂质体囊泡.并且在激光动态光散射仪下测定显示囊泡的粒度分布较为均一,mEGF乙醇脂质体的折光度为4.6,囊泡粒径大约分布在100～500 nm之间.结论 成功制备了mEGF乙醇脂质体,建立了测定包封率的色谱方法,该给药系统稳定性较好,乙醇脂质体囊泡粒径分布均匀.
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Caveolin-1的低表达与乙型肝炎病毒感染相关肝细胞癌的关系研究
目的 研究小窝蛋白-1(Caveolin-1)的表达与乙型肝炎病毒(HBV)感染以及相关肝细胞癌(HCC)的关系.方法 免疫组化法检测HBV相关HCC中Caveolin-1表达量.构建Caveolin-1重组质粒,用Western blot检测转染了重组质粒的HepG2.2.15细胞中Caveolin-1表达量,并用ELISA法检测转染后培养上清中的HBsAg.结果 免疫组化结果显示Caveolin-1在95% HBV相关HCC 组织中表达低于癌旁组织(P<0.05).Caveolin-1重组质粒构建成功并在HepG2.2.15中成功表达.ELISA检测发现用Caveolin-1重组质粒转染HBV感染稳定模型HepG2.2.15细胞48、72 h后,细胞培养上清中的HBsAg浓度相对未转染细胞分别下降了46.2%和48.8%(P<0.05).重组质粒转染HBV感染急性细胞模型48、72 h 后,HBsAg浓度相对未转染细胞分别下降了41%和50%(P<0.05).结论 Caveolin-1在HBV相关HCC中呈低表达,Caveolin-1的高表达抑制了HBV HBsAg的分泌.
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接合物蛋白CrkⅠ在卵巢癌恶性潜能中的作用
目的 证实接合物蛋白CrkⅠ在卵巢癌恶性潜能中的作用.方法 采用Western blot法检测卵巢癌组织、卵巢良性肿瘤组织、正常卵巢组织中Crk和Dock180蛋白的表达;用免疫沉淀法检测3种卵巢癌细胞株中Crk与Dock180蛋白的内源性结合;用小干扰RNA敲低SKOV3细胞中内源性的Crk,检测Crk表达缺失性细胞Crk蛋白表达水平、Rac1酶活性和侵袭力的变化.结果 Dock180与CrkⅠ的表达强度呈现明显的一致性,卵巢癌组织中二者的表达均显著高于卵巢良性肿瘤组织和正常卵巢组织(P<0.05);而在卵巢良性肿瘤组织与正常卵巢组织之间未发现明显差异(P>0.05).3个卵巢癌细胞株中Dock180主要表现出与CrkⅠ的内源性结合.和对照相比,敲低Crk基因的细胞表现出侵袭能力和Rac1酶活性明显下降(P<0.05),而敲低CrkⅠ的细胞和同时敲低CrkⅠ和CrkⅡ的细胞相比无明显差异(P>0.05).结论 卵巢癌的恶性生物学行为与Crk/Dock180/Rac1信号通路相关,其中CrkⅠ在卵巢癌中扮演着主要角色.
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高糖诱导人脐静脉内皮细胞fractalkine表达及其凋亡的研究
目的 探讨高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVECs)fractalkine(FKN)表达与细胞凋亡的可能机制.方法 对数生长期的HUVECs,分为正常组(N)、高糖组(HG)、氯化锂(lithium chloride,LiCl)组(LiCl)、高糖+LiCl组(HG+LiCl).5.5 mmol/L的低糖DMEM培养的HUVECs种板10 h后按以上分组加入10 mmol/L 的LiCl预处理2 h,再用33.3 mmol/L的高糖干预48 h后,用TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化SABC法检测β-catenin及p-GSK-3β(Ser9),免疫荧光FITC法检测FKN蛋白水平变化,RT-PCR检测GSK-3β和FKN mRNA水平变化.结果 ①与正常组比较,高糖诱导的HUVECs凋亡率明显增加(P<0.05).与高糖组比较,LiCl可明显降低高糖环境下HUVECs的凋亡率(P<0.05),但仍高于正常组(P<0.05).②与正常组比较,高糖组HUVECs β-catenin及p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达降低(P<0.05);GSK-3β mRNA水平及FKN蛋白和mRNA水平升高(P<0.05).③与高糖组比较,LiCl+高糖组HUVECs β-catenin及p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达升高(P<0.05),GSK-3β mRNA水平(P<0.05)及FKN蛋白和mRNA(P<0.05)水平降低.结论 高糖诱导的HUVECs凋亡可能与Wnt信号通路抑制和抑制FKN表达上调有关.
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IL-17+T细胞及其相关细胞因子在香烟烟熏致小鼠呼吸道炎症中的变化和作用
目的 观察IL-17+T淋巴细胞及相关细胞因子在香烟烟熏导致的呼吸道炎症中的变化,IL-17的细胞来源以及IL-17+T细胞亚型的比例,初步说明其在疾病进程中的作用.方法 采用随机数字表法将24只C57/BL6小鼠分为4组:对照组(C),烟熏10 d(CS10)、20 d(CS20)、30 d(CS30)组;HE染色观察肺组织病理变化;ELISA法检测血清和支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BLAF)中相应细胞因子IL-17、IL-22和IL-23的表达水平.流式细胞术检测分泌IL-17的Th17细胞和γδT细胞比例.结果 随着烟熏时间的延长,小鼠肺组织中淋巴细胞浸润增多、上皮细胞倒伏及支气管壁变厚增生;IL-17、IL-22和IL-23表达量在各烟熏组之间差异有统计学意义(P<0.05);Th17、IL-17+γδT细胞比例较对照组都有不同程度的增高(P<0.05).结论 IL-17+T细胞及其相关细胞因子可能是烟熏导致的支气管炎症的始发因素之一,其含量的变化对支气管炎的发展和预后都具有重要提示作用.
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异源接种建立小鼠和兔包虫病动物模型的初步探讨
目的 采用人工接种羊源细粒棘球绦虫原头蚴感染法建立小鼠与兔包虫病动物模型.方法 6周龄昆明小鼠经皮穿刺腹腔内接种羊源细粒棘球绦虫原头蚴悬液,新西兰大白兔于腹部手术后肝脏接种羊源细粒棘球绦虫原头蚴悬液.接种原头蚴6个月后剖检动物,观察小鼠腹腔和新西兰大白兔肝脏内包虫囊生长情况.结果 接种羊源细粒棘球绦虫原头蚴6个月后,小鼠腹腔内包囊生成率为95%,新西兰大白兔肝内包囊生成率为50%.光镜观察见在小鼠腹腔和兔肝脏形成的囊泡具有与羊肝脏棘球蚴囊壁类似的类上皮细胞层和板层状结构.3种动物体内棘球蚴均有原头蚴.结论 以羊源细粒棘球绦虫原头蚴悬液接种昆明小鼠腹腔和新西兰大白兔肝脏,可以建立小鼠和兔包虫病动物模型.
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阿托伐他汀抑制心房肌细胞CTGF及Cx43的表达
目的 探讨阿托伐他汀(atorvastatin)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心房肌细胞结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)及缝隙连接蛋白43(Connexin 43,Cx43)表达的影响.方法 18只雌雄对半1周龄左右Wistar大鼠,用于体外心房肌细胞的分离培养与鉴定.设置6组(n=18):正常对照组、AngⅡ(终浓度1 μmol/L)组、AngⅡ+二甲基亚砜(DMSO)组、AngⅡ+atorvastatin(0.1、1.0、10 μmol/L)组,作用72 h后RT-PCR分别检测CTGF、TGF-β1 及Cx43的mRNA表达.结果 与正常对照组相比,AngⅡ组CTGF、TGF-β1和Cx43 mRNA表达呈显著增加(P<0.05),阿托伐他汀逆转上述变化,10 μmol/L组作用强(P<0.05),而作为溶剂的DMSO无明显作用(P>0.05).结论 阿托伐他汀可能通过抑制AngⅡ诱导的心房肌细胞CTGF mRNA的高表达来减轻心房纤维化,同时可能通过下调Cx43 mRNA的表达来逆转缝隙连接蛋白的重构,终减低房颤发生率.
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肾移植受者外周血中CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞比例在评价其免疫状态中的作用
目的 结合转移体内迟发超敏反应检测法初步探讨外周血中CD4+CD25+FoxP3+Treg的比例对亲体肾移植受者免疫状态评估的作用.方法 收集西南医院肾科门诊随访的2005-2008年间手术的亲体肾移植供者和受者各30例,进行转移体内迟发超敏反应检测(trans-vivo delayed type hypersensitivity-assay,Trans vivo-DTH)实验,根据实验结果将患者分为耐受组和排斥组;运用流式细胞技术检测2组中受者外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4+CD25+FoxP3+Treg比例.结果 耐受组和排斥组裸鼠掌肿胀(同时注入受者PBMCs和供者抗原的脚掌)厚度分别为(1.72±0.44)×10-2、(8.05±2.26)×10-2mm,前者明显高于后者(P<0.05),2组受者外周血中CD4+CD25+FoxP3+Treg的比例分别为(9.23±1.79)%和(1.03±1.04)%,耐受组明显高于排斥组(P<0.05).耐受组和排斥组裸鼠脚掌皮下炎性水肿的厚度均与外周血中CD4+CD25+FoxP3+Treg的比例呈负相关(P<0.05,r分别为0.82 和0.87).结论 受者外周血中CD4+CD25+FoxP3+Treg的比例能够反应受者T细胞对供者抗原发生免疫反应的程度.外周血中CD4+CD25+FoxP3+Treg的比例在发现移植受者是否已有耐受方面有一定的参考价值.
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pEGFP-N1-DCN重组质粒抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖和侵袭
目的 构建 pEGFP-N1-DCN真核表达载体并转染胃癌细胞SGC-7901,观察其对细胞增殖、周期、迁移、侵袭的影响.方法 将细胞分为3组,分别为空白对照组、pEGFP-N1组及pEGFP-N1-DCN组,质粒通过脂质体转染SGC-7901,RT-PCR及Western blot方法检测表皮生长因子受体(EGFR)及TGF-β1的表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,Transwell检测核心蛋白聚糖(DCN)对细胞迁移及侵袭能力的影响.结果 RT-PCR及Western blot检测结果显示,DCN使EGFR及TGF-β1的表达均降低(P<0.05);MTT法检测发现72 h时空白对照组、pEGFP-N1组及pEGFP-N1-DCN组细胞D(490)值分别为(1.190±0.037)、(1.169±0.052)、(0.572±0.021),DCN使细胞增殖受到明显抑制(P<0.05);流式细胞仪分析细胞周期空白对照组、pEGFP-N1组及pEGFP-N1-DCN组细胞G0～G1的细胞数分别为(46.12±0.63)、(46.07±0.82)、(56.36±0.92),DCN使细胞阻滞在G0～G1(P<0.05);Transwell迁移、侵袭实验显示DCN使细胞迁移和侵袭能力均降低(P<0.05).结论 DCN通过抑制肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭等起到抗肿瘤作用.
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Klotho基因启动子区域定位及活性分析
目的 构建含不同长度klotho基因启动子片段的报告基因载体,研究其在不同细胞系中的转录活性.方法 以人全血基因组DNA为模板,克隆长短不同的klotho基因启动子片段,命名为klothoⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ;分别克隆入荧光素酶报告基因质粒pGL3-Basic构建真核表达载体;采用Lipofectamine 2000将重组质粒分别和pRL-TK共转染HEK293和HeLa细胞,分析不同长度的klotho基因启动子片段在细胞内的转录活性.结果 双酶切和测序鉴定均显示表达载体构建成功;klotho基因的核心启动子区域位于-504～-6;双荧光素酶活性检测显示klothoⅢ在2种细胞中的转录活性明显高于klothoⅠ、Ⅱ(P<0.05),而klothoⅣ的转录活性在HEK293细胞中能维持高水平,在HeLa细胞中显著下降(P<0.01).结论 klotho基因启动子在不同细胞中的转录活性不同,-973～-504区域可能是导致HeLa细胞中klothoⅣ转录活性下降的原因.
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蒙药"通拉嘎-5"对脂肪细胞葡萄糖摄取的影响及其机制研究
目的 探讨"通拉嘎-5"对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响及其作用机制.方法 将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为脂肪细胞后,"通拉嘎-5"作用于3T3-L1脂肪细胞24 h,用3H标记的2-脱氧-葡萄糖([3H]2-DG)示踪检测胰岛素介导的3T3-L1脂肪细胞摄取葡萄糖的情况;"通拉嘎-5"作用3T3-L1脂肪细胞48 h后,用Real-time PCR检测PPARγ和LXRα的基因表达,用Western blot检测PPARγ和LXRα的蛋白表达.结果 "通拉嘎-5"能促进胰岛素介导的3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖摄取(比阴性对照组高1.915倍,P<0.05);能明显上调3T3-L1脂肪细胞和LXRα基因(比阴性对照组高2.895倍,P<0.01)和蛋白(比阴性对照组高1.977倍,P<0.01)表达;而对PPARγ基因和蛋白表达无明显的影响.结论 "通拉嘎-5"可能通过提高3T3-L1脂肪细胞LXRα的基因和蛋白表达,促进胰岛素介导的葡萄糖摄取功能,改善胰岛素抵抗,可能为"通拉嘎-5"治疗非酒精性脂肪肝(NAFLD)的作用机制之一.
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血清CEA水平与EGFR-TKI治疗晚期非小细胞肺癌疗效及预后分析
目的 探讨非小细胞肺癌患者血清癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)水平与EGFR-TKI治疗疗效及预后之间的关系.方法 收集88例(腺癌69例,非腺癌19例)经吉非替尼或厄罗替尼治疗、疗效可评价的晚期非小细胞肺癌患者,有完整的血清CEA检测结果,分析CEA水平与EGFR-TKI药物治疗反应及预后之间的关系.结果 血清CEA＜5 ng/ml者的有效率(CR+PR)为18.2%(6/33),稳定率(SD)为18.2%(6/33),进展率为63.6%(21/33);CEA≥5 ng/ml者的有效率为30.9%(17/55),稳定率为43.6%(24/55),进展率为25.5%(14/55).2组EGFR-TKI治疗的疗效差异有统计学意义(P=0.003).血清CEA水平高的患者,服用TKI药物后疗效更好,而较低CEA值的患者效果较差.生存分析结果表明,血清CEA≥5 ng/ml组患者经EGFR-TKI治疗后有更长的无疾病进展时间及生存优势,差异有统计学意义(P=0.020,P=0.019).结论 血清CEA水平可作为预测晚期非小细胞肺癌患者服用EGFR-TKI药物疗效及预后指标.
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表面等离子体免疫传感器同步定量尿液中多种微量蛋白的研究
目的 探讨并建立表面等离子体免疫传感器芯片同步定量尿液中多种微量蛋白的方法.方法 采用EDC/NHS方法将微量白蛋白(MA)、α-1微球蛋白(A1M)、β-2微球蛋白(B2M)、尿IgG的单克隆抗体固定于免疫传感器芯片之上,并用表面等离子体共振传感器(surface plasmon resonance,SPR)检测样本中微量蛋白的含量.利用4种微量蛋白的标准血清建立标准曲线,然后对其进行灵敏度、特异性等指标的方法学评价.以免疫散射比浊方法为参考方法,检测125例临床患者24 h尿液样本的微量蛋白浓度,比较2种方法检测相同样本时的结果差异.结果 该表面等离子体共振免疫传感器芯片具有良好的操作性能和检测特异性.其标准曲线的R2均在0.98以上.其检测灵敏度分别是A1M为5 μg/L,B2M为7.3 μg/L,MA为11.5 μg/L,IgG为22 μg/L.所有4项指标可在20 min之内同步完成.与微量蛋白检测的经典方法免疫散射比浊法相比,两者的相关性和一致性较高.结论 表面等离子体免疫传感器芯片可实现尿液中多种微量蛋白的快速、准确、同步定量.
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人缝匠肌肌构筑特征与肌内神经分布及其临床意义
目的 研究缝匠肌肌构筑特征和肌内神经分支分布.方法 用大体解剖法解剖并观察测量20 具尸体缝匠肌的肌构筑学特征;用改良Sihler's 肌内神经染色法,探讨10具尸体缝匠肌肌内神经分支分布.结果 缝匠肌是一块由长肌束平行排列构成的带状肌,肌质量(97.9±13.3)g,肌长(47.3±4.3)cm,肌纤维长(40.0±3.8)cm,羽状角0°,生理横切面积(2.0±2.3)cm2;缝匠肌有2支一级神经支支配,发出分支支配肌的上部和中下部,且两部肌内神经分支分布相互独立.缝匠肌中下部肌内神经分支少,吻合少,区域性分布较明显.结论 缝匠肌肌内神经的分支分布与肌构筑学特点有关.
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皮肤点刺、总IgE和EOS对儿童哮喘的诊断价值
目的 评价标准皮试用变应原皮肤点刺试验(skin prick test,SPT)、血清总IgE(TIgE)测定及嗜酸性粒细胞计数(eosinophil count,EOS)在儿童哮喘临床诊断中的价值.方法 收集2007-2010年在本院儿科门诊及住院部就诊怀疑哮喘的所有儿童,选取均检测SPT、TIgE、外周血EOS水平和肺功能的患儿549例,以临床标准(临床症状和肺功能)作为金标准终确诊358例为哮喘(包括咳嗽变异型哮喘),191例为其他疾病,包括上呼吸道感染、肺炎、湿疹、荨麻疹、慢性咳嗽(非咳嗽变异性哮喘)、过敏性鼻炎、结核等.作出受试者工作特征曲线(ROC曲线),确定诊断截断点(cut off points)TIgE为88 IU/ml,EOS为288×106个/L.结果 应用非参数法估计儿童哮喘的3种检验方法曲线下面积:EOS为0.699(95%CI 0.655～0.744),TIgE为0.827(95%CI 0.793～0.862),SPT为0.806(95%CI 0.766～0.847).检验的灵敏度、特异度、正确率、阳性预测值、阴性预测值,TIgE分别是85.5%、64.7%、77.2%、77.9%、75.9%;SPT分别是87.5%、71.8%、81.6%、83.8%、77.5%;而EOS分别是77.5%、46.8%、61.9%、58.7%、68.1%;TIgE+SPT平行试验分别是81.4%、75.2%、79.6%、89.1%、61.8%;TIgE+SPT系列试验分别是94.2%、64.1%、79.2%、72.6%、91.6%.结论 TIgE与SPT的灵敏度、特异度、正确率、阳性预测值、阴性预测值相似,且均优于EOS,无论是平行试验还是系列试验,TIgE+SPT的组合均优于各组中的其他组合,TIgE+SPT的联合试验对变应性哮喘的诊断意义较大.
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阿洪病致双侧手指严重受损1例
阿洪病(ainhum)在我国并不常见,导致双侧手指严重缺失者则更为罕见.该病的治疗方式取决于临床分期,其中是否存在骨骼改变与治疗方式的选择密切相关.X线检查能够准确判断阿洪病引起的骨骼形态改变和骨质疏松,具有重要的临床指导价值[1].本研究报告1例发生于双侧手指的阿洪病患者,结合文献重点分析不同分期阿洪病的临床和X线表现,以指导临床治疗计划的制定.
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过量误服甲磺酸伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病达到遗传学缓解1例
甲磺酸伊马替尼(商品名:格列卫)是慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)的分子靶向性药物,对慢性粒细胞白血病慢性期患者剂量为400 mg/d,对急变期和加速期患者剂量为600 mg/d.我院收治的1例CML慢性期患者过量误服甲磺酸伊马替尼1200 mg/d,连续10 d,并无明显的药物副反应发生,且快速达到部分细胞遗传学缓解,现报告如下.
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心内及心上混合型完全性肺静脉异位引流MDCT诊断1例
1 临床资料患者女性,25岁,因"发现房间隔缺损25年"于2010年7月2日入院.患者刚出生时发现哭闹后出现嘴唇及指甲紫绀,当地医院B超检查发现"房间隔缺损".后发现活动后均出现紫绀,不能剧烈运动.
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1例贲门失弛缓在内镜下行食道环形肌切开术的护理
贲门失弛缓症(achalasia)是由于食管壁内肌间神经丛即auerbach神经节细胞和迷走神经运动核细胞变性所引起的食管功能障碍性疾病.临床表现主要为吞咽困难、呕吐和反流,长期吞咽困难可造成营养不良和消瘦[1].我科针对1例贲门失弛缓症患者率先采取内镜下行食道环形肌切开术(peroral endoscopic myotomy,POEM),取得较好的治疗效果,现将护理体会报告如下.
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吡拉西坦治疗75例高血压脑出血术后患者的临床疗效
高血压脑出血死亡率高,幸存者往往留下严重后遗症,如何选择合理的治疗方案使患者安全度过围手术期,减少继发性脑损伤,大限度地促进脑功能恢复是治疗的关键.本科自2007年8月至2010年7月采用大剂量吡拉西坦氯化钠注射液对75例高血压脑出血术后患者进行高颅压的控制及神经营养治疗,疗效满意,现报告如下.
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直肠子宫内膜异位症误为间质瘤1例
1 临床资料患者,女性,38岁,因"间断性肛门坠胀不适1年余,加重3个月余"就诊.患者于2008年12月无明显诱因在月经前1 d出现肛门坠胀不适,月经来后,肛门坠胀感减轻.此后每次月经来前均有此症状,但大便次数及性状未见明显改变.
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金属网杯结合植骨技术在髋臼骨缺损中的应用
随着人工髋关节置换术(total hip arthroplasty, THA)的广泛开展,患者生存期的延长,目前全髋关节的翻修病例也在不断增加.我院翻修患者的手术,已经占全髋关节置换的15%.有效修复髋臼处骨缺损的部位,重建髋臼处的解剖结构,将直接影响到翻修假体的稳定性和远期效果,是髋关节翻修术成功的关键因素.我科自2008年1月至2010年8月,采用颗粒打压植骨及结构植骨技术,根据髋臼缺损金属加强网和加强杯特点,依据Paprosky髋臼骨缺损的不同分型,结合使用金属网和金属杯进行髋臼缺损重建22例,随访效果满意,报告如下.
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亲子鉴定中Amelogenin基因荧光定量分析检出克氏综合征1例
我鉴定中心在对一亲子鉴定案例进行鉴定分析时发现,其中一份检材的短串连重复序列(short tandem repeat,STR)分型图上性别基因座分型异常,经Amelogenin等位基因XY荧光定量分析,疑为克氏综合征(Klinefelter syndrome),后经染色体核型分析证实为克氏综合征,现报告如下.
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颅内14例恶性黑色素瘤的临床诊断及治疗体会
颅内恶性黑色素瘤(malignant melanoma,MM)是中枢神经系统中极其罕见的肿瘤,分为原发性颅内MM和转移性颅内MM[1].其恶性程度高,病程短,进展快,诊断困难,误诊率高,早期明确诊断和综合治疗可改善预后.现回顾分析1990年7月至2010年7月本院收治的14例病理确诊的颅内MM患者的临床资料,对其影像及诊治进行探讨,现报告如下.
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放射治疗与89Sr核素治疗对椎骨转移癌性疼痛的临床疗效对比研究
目的 比较放射治疗与89Sr核素治疗对椎骨转移癌疼痛的临床疗效.方法 回顾分析我院2005年1月至2010年5月期间治疗的椎骨转移癌疼痛患者143例,其中放疗组115例,根据单次剂量不同分为常规分割、中分割、低分割3组,89Sr核素治疗组28例.对放疗组之间、放疗组与89Sr治疗组之间的疼痛缓解有效率、起效时间进行比较.结果 常规分割、中分割、低分割3组疼痛缓解有效率分别为90.63%(29/32)、84.21%(32/38)、80.00%(36/45),放疗总体疼痛缓解有效率84.35%(97/115),89Sr核素治疗疼痛缓解有效率78.57%(22/28).不同放疗分割组间、放疗组与89Sr核素治疗组间疼痛缓解有效率无统计学差异(P＞0.05).常规分割、中分割、低分割组和89Sr治疗组缓解疼痛的起效时间分别为(14.21±2.51)、(7.78±2.96)、(2.83±1.56)、(9.27±2.88)d,4组间的差异具有统计学意义(H=90.152,P=0.000).结论 放射治疗与89Sr核素治疗对缓解椎体的骨转移性疼痛疗效相当,低分割放疗疼痛缓解的起效时间短,常规分割起效时间长.
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丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠核因子-κB、环氧合酶-2表达的影响
目的 检测慢性脑缺血老龄大鼠核因子-κB(nuclear factor κB,NF-κB)、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的表达,探讨丁基苯酞(DBT)在慢性脑缺血中的抗炎作用.方法 健康Wistar大鼠60只,按随机数字表分为4组,分别为对照组、模型组、缺血高剂量DBT组、缺血低剂量DBT组,每组15只.采用光镜及免疫组织化学方法对各组大鼠海马CA1区及颞叶皮层组织形态学、NF-κB及COX-2的表达进行检测.结果 与模型组比较,丁基苯酞不同剂量治疗1个月后,大鼠海马CA1区及颞叶皮层神经元变性、坏死不同程度减轻;NF-κB p65、COX-2阳性细胞数表达减少(P<0.01),高低剂量组阳性细胞数差异有统计学意义(P<0.01).结论 丁基苯酞可以减轻慢性脑缺血老龄大鼠神经元变性、坏死;减少NF-κB p65、COX-2的表达,可能是丁基苯酞抑制炎症反应的途径之一.
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不同固定液对细胞骨架荧光染色标记效果的影响
目的 比较不同固定液对细胞骨架荧光染色的差异,选择佳固定方法.方法 分别采用4%甲醛、2%戊二醛、95%乙醇和4%多聚甲醛/MES 4种固定液,对人肺腺癌细胞H1299进行固定,对其微管和微丝荧光标记后,在共聚焦显微镜下观察其形态结构.结果 4%多聚甲醛/MES对细胞的微管和微丝都有很好的固定作用.4%甲醛、2%戊二醛、95%乙醇对细胞的微丝基本能起到固定作用,而4%甲醛对微管的固定效果略差,2%戊二醛、95%乙醇固定的细胞看不到微管的具体形态结构.结论 细胞骨架的固定中需加入骨架稳定剂,且根据实验目的,选择适当的固定液获得佳标记效果.
