持续动态颅内压监测在矢状窦、大脑镰旁大型脑膜瘤术后的意义

目啕 持续动态观察矢状窦、大脑镰旁大型脑膜瘤患者术后颅内压的变化,探讨持续动态颅内压监测在其术后的临床意义.方法 回顾性分析我科2009年2-11月的53例矢状窦、大脑镰旁大型脑膜瘤患者(矢状窦旁20例,大脑镰旁23例,窦镰旁10例)术后的颅内压监测值,分析术后颅内压变化的规律及意义,分析其与术后治疗及预后的关系.结果 术后6h内患者颅内压较低甚至为负(5.87 ±7.33) mmHg,6～72 h逐渐升高(10.62±13.21) mmHg,72 h后达高峰并趋于稳定(13.36±11.43) mmHg.6h内ICP与其他时间段比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 通过持续动态的颅内压监测可时时观察患者术后的颅内压变化,指导临床早期发现颅内压升高,及时调整治疗方案.颅内压监测发现颅内压增高早于临床症状观察,结合影像学检查,提高了围手术期治疗的安全性.

眼眶孤立性纤维瘤的CT和MRI诊断价值

目的 探讨眼眶孤立性纤维瘤(solitary fibrous tumor,SFT)的CT和MRI诊断价值.方法 回顾性分析经病理证实的5例眼眶SFT的CT和MXI表现,其中2例只行CT检查,2例只行MRI检查,1例同时有CT和MRI检查.患者中女性3例,男性2例,年龄33 ～ 54(中位年龄46)岁.影像表现主要评价其部分、大小、边缘、CT密度、MRI信号和增强方式.结果 5例病变均表现为边界清楚的软组织肿块,大直径2.1 ～3.5 cm.3例位于球后肌锥外,2例位于球后肌锥内.3例CT上表现为稍高密度或等密度,其中1例其内可见点状钙化；3例MRI检查T1WI表现为萼信号或稍低信号,信号相对均匀,而T2WI则信号稍混杂,其中1例等信号为主,混杂有高、低信号影,另2例肿块大部分表现为明显高信号,其内可见散在斑状、小片状低信号影.增强检查肿块均表现为明显欠均匀强化.结论 眼眶SFT的MRI表现有一定特征性,应纳入眼眶富血供肿瘤鉴别之列.

甲基莲心碱对Tca8113/CBP卡铂耐药性的逆转作用

目的 建立人舌鳞癌卡铂耐药细胞株Tca8113/CBP,探讨甲基莲心碱Nef对Tca8113/CBP卡铂耐药性的逆转作用及其机制.方法 采用逐步递增卡铂浓度、体外间歇诱导法建立Tca8113/CBP耐卡铂细胞株；MTT法检测Nef对Tca8113/CBP卡铂耐药性的逆转作用；RT-PCR法检测Nef作用前后Tca8113/CBP内耐药相关基因肺耐药蛋白LRP与成纤维细胞肌型原肌球蛋白FMT的表达水平；免疫荧光观察Nef作用前后细胞形态结构变化.结果 历时5个月建立的Tca8113/CBP细胞株对卡铂耐药性稳定,耐药指数为4.06.Nef对Tca8113/CBP的卡铂耐药性有逆转作用,逆转倍数达到2.12倍；与Tca8113/CBP细胞比较,经Nef干预后,Tca8113/CBP细胞内LRP与FMT mRNA表达水平明显降低(P＜0.01),细胞内F-actin的含量也明显下降,排列整齐,分布趋于均匀,接近非耐药Tca8113细胞水平.结论 Nef对Tca8113/CBP的卡铂耐药性有逆转作用,其机制可能与干预Tca8113/CBP细胞内LRP和FMT表达,增加Tca8113/CBP细胞内卡铂的含量,改变微丝结构,降低细胞黏附能力,干扰细胞增殖周期有关.

hBMP-7修饰的骨髓间充质干细胞对肾脏BMP-7的影响

目的 观察人骨形态发生蛋白-7( hBMP-7)基因修饰的骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)移植对缺血再灌注损伤( ischemia-reperfusion injury,IRI)肾脏内源和外源BMP-7表达的影响,探讨其对IRI肾脏的保护作用.方法 45只兔采用随机数字表的方法分为对照组(Ⅰ组)、单纯BM-MSCs移植组(Ⅱ组)和基因修饰的BM-MSCs移植组(Ⅲ组)(n=15).构建hBMP-7重组腺病毒并转染兔BM-MSCs,建立肾脏IRI模型后,移植组于肾血流恢复后经肾动脉推注单纯和基因修饰的自体BM-MSCs,对照组同法推注等量生理盐水.3组分别于术后3、7、14d采用随机数字表的方法取5只兔经耳缘静脉采血,检测血清肌酐(Crea)和尿素(Urea),观察肾功能情况；同时取肾组织进行HE染色行肾小管损伤评分,EHSA和RT-PCR法分别检测肾脏hBMP-7和BMP-7的蛋白浓度和mRNA表达.结果 肾脏IRI后3、7、14 d,Ⅲ组Crea和Urea明显低于Ⅰ组和Ⅱ组(P＜0.05)；Ⅲ组肾小管损伤评分均低于Ⅰ组和Ⅱ组(P＜0.05)；Ⅲ组检测到第3、7、14天hBMP-7蛋白[(81.8±25.5)、(107.8±33.4)、(49.6±17.8) pg/mg]和mRNA(0.82±0.12、0.69±0.13、0.42±0.10)的表达并维持至少2周；Ⅲ组第3、7、14天BMP-7 mRNA(1.08±0.33、1.36±0.17、1.64±0.21)和BMP-7蛋白(95.9±21.3、137.0±14.9、192.1±18.0)的表达均高于Ⅰ组和Ⅱ组(P＜0.05).结论 hBMP-7基因修饰的BM-MSCs移植既能携带外源性hBMP-7在缺血再灌注损伤肾脏中表达,又能提高内源性BMP-7的表达,减轻肾脏损伤,促进肾脏修复,改善肾脏功能.

西地那非治疗婴幼儿先天性心脏病重度肺动脉高压疗效观察

目的 观察西地那非对先天性心脏病合并重度肺动脉高压患儿的临床疗效.方法 收集我科2009年1月至2010年11月收治的先天性心脏病合并重度肺动脉高压患儿70例,均为左向右分流型先天性心脏病.将患儿以简单随机化法分为西地那非组(n=37)和对照组(n=33),2组患儿年龄、肺动脉压无显著性差异.均在强心、利尿基础上,西地那非组给予口服西地那非(每次0.5 mg/kg,每4小时1次)；对照组给予外周静脉前列腺素E-1维持[5 ng/(kg·min),6～8 h/d].2组均用药7～10 d,比较用药前后肺动脉收缩压(PASP)、血压(BP)、动脉氧分压[p(O2)]、血氧饱和度( SaO2)等指标的变化.结果 西地那非组患儿治疗7～10d后肺动脉压降低[(74.6±9.8) mmHg vs (58.3±7.7) mmHg,P＜0.05]、动脉氧分压升高[(76.6 ±7.6) mmHg vs(88.3±5.8) mmHg,P＜0.05]、血氧饱和度增加[(89.3士2.4)% vs(94.6±3.4)%,P＜0.05],而对体循环血压无明显影响[(92.8±12.3)% vs(93.3±15.6)%,P＞0.05],治疗后西地那非组与治疗前相比肺循环改善,而且治疗效果与对照组无显著性差异.结论 西地那非能有效减轻先天性心脏病合并重度肺动脉高压患儿的肺动脉压力,增加手术矫正心脏畸形的安全性,且给药方便、价格便宜,利于临床推广.

儿童颅骨骨膜窦12例临床分析

目的 探讨儿童颅骨骨膜窦的临床特点及治疗.方法 回顾性分析并总结我科2000年1月至2010年12月收治的12例颅骨骨膜窦患儿的临床资料,无症状、可复性、中线附近的头皮下肿块为其典型临床表现,其中位于顶部4例,额部3例,枕部3例,颞部2例.所有患儿均行CT、颅骨三维重建、MRI、CTA或MRV检查.手术切除颅骨外血窦,封堵沟通静脉孔或修补颅骨缺损.结果 头颅CT显示颅骨外软组织肿块影,增强后可见点片状强化,肿块下方颅骨变薄或缺损.三维重建显示局部颅骨变薄,虫蚀样改变.CTA显示局部异常血管团通过板障静脉／导静脉与硬脑膜静脉窦相通,其血供来源于硬脑膜静脉窦,且终回流至硬脑膜静脉窦.MRI显示T1加权像呈蜂窝状等信号或低信号改变,T2加权像可见等信号或高信号改变,3例显示病灶穿透颅骨内板与颅内相交通.MRV显示颅外肿块与静脉窦沟通,并有局部硬脑膜静脉窦明显增粗.病理检查结果显示,大量扩张的无肌层血管组成的囊腔,腔壁内衬单层扁平内皮细胞或结缔组织.12例术后肿块消失,头颅外形满意,无颅高压症状,复查CT颅内无血肿形成,随访6个月至5年,均无复发.结论 结合大小随颅内压改变的可复性头皮下包块的临床表现和CT、MRI、CTA或MRV等影像学检查,易于诊断儿童颅骨骨膜窦,该病通过手术切除治疗可获得良好效果.

重组人生长激素长疗程治疗特发性矮小症疗效观察

目的 探讨基因重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH)对特发性矮小症(idiopathic shortstature,ISS)儿童长疗程治疗的疗效.方法 60例ISS患儿(男性21例,女性39例),每晚皮下注射rhGH 0.15～0.18IU/( kg·d),疗程1～3年.评价治疗前后身高、生长速度、身高标准差计数(SDS)、骨龄、预测成年身高变化及副作用.结果①rhGH治疗1～3年期间,60例患儿生长速率由治疗前的每年(4.51±0.46)cm分别提高到(10.97±2.53)、(8.11±1.54)cm和(7.13 ±2.07)cm；身高SDS由治疗前(-2.60 ±0.57)增至(-1.62 ±0.64)、(- 1.29 ±-0.89)及(-0.12 ±0.45)；预测成人身高由治疗前(151.62 ±8.46) cm分别增加为(157.33±8.50)、(160.72±10.31)cm和(165.81±7.46)cm(P＜0.05).②不同青春期开始治疗的疗效比较,TannerⅠ、Ⅱ、Ⅲ期患儿生长速率相接近,明显高于Ⅳ期.③骨龄增长低于身高年龄增长(P＜0.05),而与年龄增长相一致(P＞0.05).结论 长疗程rhGH治疗对ISS有明显的促生长效应,增加了预测成年身高；青春期前、青春早中期开始治疗的疗效优于青春晚期；长疗程的rhGH治疗未引起骨龄和青春期提前.

全反式维甲酸增强携单纯疱疹病毒胸苷酸激酶基因的超声微泡对SMMC-7721细胞的旁观者效应

目的 观察经全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导后,单纯疱疹病毒胸苷酸激酶／丙氧鸟苷系统(HSV-TK/GCV)对人肝癌细胞SMMC-7721旁观者效应的影响.方法 免疫组化法观察经全反式维甲酸诱导前后SMMC-7721细胞连接蛋白Cx32的表达；将含有HSV-TK基因的质粒通过静电吸附在脂质微泡表面上,采用超声辐照转染并用倒置显微荧光镜及RT-PCR观察TK基因的转入及表达；MTT法观察经全反式维甲酸诱导后HSV-TK/GCV对肝癌细胞SMMC-7721的旁观者效应.结果 经全反式维甲酸诱导后SMMC-7721细胞膜上Cx32表达明显增加,而胞质内仅少量表达；通过超声辐照后HSV-TK基因可顺利转入SMMC-7721细胞中并稳定表达；与对照组相比,经全反式维甲酸诱导组可明显提高HSV-TK/GCV对肝癌细胞SMMC-7721的旁观者效应(P＜0.05).结论 全反式维甲酸可提高SMMC-7721细胞中连接蛋白Cx32的表达且能正确定位于细胞膜上,这可能与其能增强HSV-TK/GCV系统对肝癌细胞SMMC-7721的旁观者效应有关.

TNF-α在实验性蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中的作用

目的 探讨TNF-α抑制剂在大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后早期脑损伤中的保护作用及其机制.方法 健康成年雄性SD大鼠48只,体质量250～300 g,按随机数字表法分为假手术组、SAH组、安慰剂组和TNF-α抑制剂组.采用经视交叉前池注血法建立SAH模型,各组于处理后24h,对实验动物临床行为进行评估；应用免疫组化方法检测大鼠脑皮层TNF-α表达；应用Western blot方法检测大鼠脑皮层MMP-9蛋白表达.结果 免疫组化显示:SAH组大鼠皮层神经元TNF-α表达明显升高,显著高于假手术组；TNF-α抑制剂组TNF-α表达明显下降(P＜0.01).Western blot检测结果显示:假手术组大鼠MMP-9蛋白表达较低[(2.03±0.21)%］；SAH组大鼠皮层MMP-9含量明显升高[ (98.92±8.33)%,P＜0.01]；TNF-α抑制剂组MMP-9蛋白表达降低[(52.12±6.25)%],与SAH组相比差异有统计学意义(P＜0.01).临床行为评估显示:TNF-α抑制剂组大鼠临床行为得到明显改善(P＜0.01).结论 大鼠SAH后早期脑损伤过程中TNF-α通过调节MMP-9蛋白表达参与SAH后早期脑损伤的病理过程.TNF-α抑制剂能够改善大鼠临床行为,对早期脑损伤发挥保护作用.

TLR4/MyD88信号通路在树突状细胞-肾癌786-0细胞株融合瘤苗中的作用

目的 探讨TOLL样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)/髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)信号通路在树突状细胞(dentric cell,DC)-肾癌786-0细胞融合瘤苗中的变化及作用.方法 用正常人外周血诱导不成熟的树突状细胞(immature dentric cell,imDC),利用聚乙二醇法(PEG)制成imDC-肾癌-786-0细胞融合瘤苗；用透射电镜观察imDC融合前后变化情况；RT-PCR检测单纯imDC组,肾癌786-0细胞组,imDC-肾癌-786-0融合瘤苗组在6、12、24、48 h中TLR4及MyD88 mRNA变化情况；用激光共聚焦检测imDC中核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)在融合前后转位情况；流式细胞仪检测imDC在融合前后CD86、HLA-DR变化；噻唑盐(MTT)法检测各组体外刺激T淋巴细胞的增殖能力及刺激的细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)的杀瘤活性.结果 透射电镜显示融合细胞中imDC转变为mDC;TLR4及MyD88 mRNA在肾癌中不表达,在单纯imDC中呈低表达(TLR4/β-actin灰度比值0.40±0.03,MyD88/GAPDH灰度比值0.33±0.03),在融合瘤苗组中6h表达强(TLR4/β-a1ctin灰度比值0.73±0.18,MyD88/GAPDH灰度比值为0.45±0.18),明显强于各组(P＜0.05),此后在融合细胞中逐渐减弱,48 h基本不表达；激光共聚焦显示NF-κB在融合前位于imDC细胞质,融合后转移至细胞核；流式细胞仪提示融合瘤苗HLA-DR、CD86表达分别为81%、80%,明显高于imDC组(63%、59%)及肾癌细胞组(P ＜0.05)；MTT法示融合疫苗在体外刺激T淋巴细胞增殖能力[D(570)值(1.95±0.22)]强于imDC组(1.31±0.35)及肾癌786-0组(1.28±0.33) (P＜0.05),并且其诱导产生的CTLs对自体肾癌细胞具有显著的杀伤活性.结论TLR4/MyD88-NF-κB信号通路在imDC与肾癌786-0细胞融合过程中促使树突状细胞成熟发挥了非常重要的作用,并且此信号通路能促使树突状细胞功能发生转变.

颈筋膜中层的解剖特点及其在颈椎前路手术中的意义

目的 了解颈筋膜中层的解剖特点及其与周围结构的关系,并对颈椎前路手术入路的方法提出一些改进.方法 成人尸体标本22具,于颈中部纵形切开,显露颈动脉鞘和舌骨下肌群,观察颈筋膜中层的形态、质地及与颈动脉鞘的关系.向两侧分离脏器鞘和颈动脉鞘,观察二鞘之间连结组织的多少、质地,分析其可能对颈椎前路手术中钝性分离的影响,观察喉返神经、甲帙腺下动脉与颈筋膜中层的解剖关系,观察喉返神经、甲状腺下动脉与颈动脉鞘的解剖关系.结果 颈筋膜中层在颈总动脉的前外侧融入颈动脉鞘,层次、边界清楚.除颈筋膜中层外,脏器鞘和颈动脉鞘之间仅有少量疏松组织,容易分离.在颈右侧,喉返神经在约胸1椎体水平自颈动脉鞘内、后缘穿出椎前筋膜,始终不与颈筋膜中层接触.双侧甲状腺下动脉均在约颈6椎体水平自颈动脉鞘内、后缘穿出椎前筋膜,始终不与颈筋膜中层接触.结论颈筋膜中层的解剖特点及其与周围结构的关系应被充分理解与利用,使颈前手术入路更合理和安全.

自制肝保护液对梗阻性黄疸大鼠门静脉阻断所致肝细胞损伤的保护作用

目的 探讨自制肝保护液对梗阻性黄疸大鼠门静脉阻断所致肝细胞损伤的作用及对肝细胞MAPKs信号途径的影响.方法 72只Wistar系大鼠完全随机分为4组:A组:胆道再通、门静脉周围游离、切除肝尾状叶,90 min后关腹腔；B组:胆道再通、肝尾状叶分流门静脉、余肝门静脉血流阻断90 min、恢复正常门静脉血流、切除肝尾状叶,关腹；C组:B组+门静脉肝侧灌注4℃乳酸林格氏液；D组:B组+门静脉肝侧灌注4℃自制肝保护液(home-made liver solution,HMLS).术后0、6、24h获取各组大鼠组织标本.采用RT-PCR和Western blot分别测定肝组织A20 mRNA和蛋白表达,测定肝组织中p-JNK、p-ERK、p-p38、Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白表达情况,TUNEL法检测肝细胞凋亡指数.结果 D组大鼠A20 mRNA和蛋白表达均明显增加(P＜0.05),p-JNK、Bax、Caspase-3蛋白表达明显下降(P＜0.05),而p-ERK、Bcl-2蛋白表达明显增加(P＜0.05).C、D组大鼠与B组相比肝细胞凋亡率明显下降(P＜0.05),其中D组下降更明显.结论 自制肝保护液经门静脉在体持续低温灌注肝脏,可以促进A20 mRNA及其蛋白的高表达,由此激活ERK信号转导通路,抑制JNK信号转导通路,反向调节线粒体途径Bcl-2/Bax蛋白平衡的逆转,降低了其下游的凋亡执行蛋白Caspase-3,从而起到抗凋亡、保护肝细胞的作用.

Hsa-miR-193b抑制人子宫内膜腺癌细胞株HEC-1B侵袭能力

目的 探讨Has-miR-193b对人子宫内膜腺癌细胞系HEC-1B侵袭的影响及其相关机制.方法将HsamiR-193b模拟物(mimics)、Has-miR-193b抑制剂(inhibitor)转染HEC-1B细胞,Real-time PCR证实转染是否成功；Transwell小室法检测转染Has-miR-193b mimics后HEC-IB细胞的侵袭能力；通过miRGen、Targetscan、Pictar数据库筛查Has-miR-193b指向与侵袭相关的靶基因；Real-time PCR检测转染Has-miR-193b mimics转染组和对照组mRNA水平；Western blot检测各组GRB7蛋白表达的水平.结果 ①Has-miR-193b mimics、Has-miR-193b inhibitor转染HEC-1B细胞成功,两转染组Has-miR-193b表达水平与未转染组比较差异有统计学意义(P＜0.05).②转染Has-miR-193b mimics组与对照组比较,肿瘤细胞的侵袭能力明显降低(P＜0.05).③转染后,靶基因GRB7蛋白Has-miR-193b mimics组表达下降(P＜0.05)、Has-miR-193b inhibitor组表达增加(P＜0.05),且各组GRB7 mRNA水平无显著变化.结论在HEC-1H中转染Has-miR-193b mimics能下调GRB7蛋白表达,并抑制HEC-1B细胞的侵袭.

槲皮萦联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨槲皮素单独及联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法 选取对数生长期的卵巢癌SKOV-3细胞作为研究对象,实验分6组:阴性对照组(生理盐水),槲皮素低(25μmol/L)、中(50 μmol/L)、高剂量组(100 μmol/L),顺铂组(10 μmol/L),联合组(槲皮素50 μmol/L+顺铂10 μmol/L).采用MTT 法检测不同浓度槲皮素单独及联合顺铂对SKOV-3细胞的增殖抑制作用；流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡率；免疫细胞化学法检测槲皮素作用于SKOV-3细胞Bcl-2及MtP53蛋白表达水平的变化.结果 与阴性对照组相比,槲皮素可明显抑制SKOV-3细胞的增殖,并具有显著的时间和剂量依赖关系,槲皮素高剂量组在72 h的抑制率可达63.49% (P＜0.05)；流式细胞仪分析发现槲皮素可使G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少(P＜0.05),提示其将细胞周期阻滞于G1期；槲皮素还可明显诱导SKOV-3细胞凋亡,高剂量组的凋亡率可达29.51%；槲皮素作用后,Bcl-2及MtP53表达则明显降低(P＜0.05).结论 槲皮素在体外可抑制SKOV-3细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,其机制可能与降低凋亡相关蛋白MtP53和Bcl-2的蛋白表达水平有关；槲皮素与顺铂联用有协同作用.

重庆地区汉族人群TRB3基因+251A/G多态性与多囊卵巢综合征的相关性分析

目的 了解中国重庆地区汉族人群TRB3基因外显子+251A/G的基因型分布,探讨该基因多态性与多囊卵巢综合征(PCOS)及其糖脂代谢、胰岛素抵抗等的相关性.方法 应用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCRRFLP)方法对139例PCOS患者和120例正常对照者TRB3基因第2外显子+251A/G位点进行基因分型,同时进行人体测量学及代谢指标的检测,并对其中的107例PCOS患者和20例正常对照行高胰岛素—正葡萄糖钳夹实验.结果TRB3基因+251A/G多态性位点的3种基因型AA、AG、GG频率在PCOS组中分别为62.59%、33.09%、4.32%,与对照组(60.83%、36.67%、2.5%)相比,差异无统计学意义(x2=0.88,P=0.64).PCOS组和对照组等位基因频率分布差异亦无统计学意义(P=0.99).PCOS组AG/GG基因型的LDL-c和HDL-c水平明显低于AA基因型(P=0.028,P=0.036).结论TRB3基因+251A/G多态性与重庆地区汉族人群多囊卵巢综合征的发生无关,但可能与PCOS患者血脂代谢紊乱有关.

前列腺癌组织中DNMT1的表达与GSTP1、APC甲基化状态的关系及临床意义

目的 探讨前列腺癌组织中DNA甲基转移酶l(DNA methyltransferase 1,DNMT1)的表达与谷胱甘肽S转移酶P1(glutathione S transferase P1,GSTP1)、结肠腺瘤性息肉病(adenomatous polyposis coli,APC)甲基化状态的关系及临床意义.方法 采用RT-PCR的方法检测56例前列腺癌(prostate cancer,Pca)组织和10例前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)组织中DNMT1和GSTP1、APC的mRNA表达,采用甲基化特异性PCR( MS-PCR)的方法检测GSTP1、APC的启动子区CpG岛甲基化状态.结果 大多数Pca组织中DNMT1 mRNA高表达(在低分化癌中阳性率为90.0%),而GSTP1和APC低表达(在低分化癌中阳性率分别为23.3%和33.3%),BPH组织中DNMT1 mRNA低表达(40.0%),而GSTP1和APC高表达(分别为90.0%和80.0%),低分化癌与BPH相比,差异有统计学意义(P＜0.05)；大多数Pca组织中GSTP1、APC启动子区CpG岛呈高甲基化状态(在低分化癌中阳性率分别为83.3%和73.3%),而BPH组织中呈低甲基化(阳性率分别为10.0%和20.0%),低分化癌与BPH相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论Pca组织中GSTP1、APC失活的机制可能与DNMT1的高表达导致其启动子区CpG岛异常高甲基化有关.

多药耐药基因转染骨髓单个核细胞移植联合化疗治疗乳腺癌的实验研究

目的 研究外源性人多药耐药基因(human multidrug resistance gene 1,hMDR1)转染骨髓单个核细胞(mononuclear cells,MNCs)移植联合超剂量表阿霉素化疗在4T1乳腺癌治疗中的骨髓保护和治疗作用.方法 用携带目的基因hMDR1和绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)报告基因的复制缺陷型重组腺病毒(rAd-hMDR1-GFP)转染原代培养的MNCs以获取hMDR1基因修饰的MNCs( MNCs-rAd-hMDR1-GFP),将修饰后的MNCs移植到4T1乳腺癌模型体内,在表阿霉素超剂量化疗中观察骨髓造血功能的保护和肿瘤的治疗效果.结果 hMDR1基因成功转入小鼠骨髓单个核细胞,体外转染率达26.2%；转染细胞移植后能定植于受体骨髓中并功能性表达.在超剂量化疗中,hMDR1基因能有效保护受体骨髓的造血功能,荷瘤动物能耐受3倍剂量表阿霉素化疗,外周血白细胞数能维持在(5.7±0.6)×109/L;同时超剂量化疗能迅速杀灭肿瘤细胞,使荷瘤动物存活时间明显延长(P＜0.05),治愈率明显提高(P＜0.05).结论 hMDR1基因转染骨髓造血细胞移植能明显提高受体骨髓对化疗药物的耐受性,联合超剂量化疗能快速、有效的杀灭肿瘤细胞,提高恶性肿瘤的治愈率.

丹参素对PDGF-BB刺激下肝星状细胞的抑制作用

目的 观察丹参素对PDGF-BB刺激下大鼠肝星状细胞活化增殖,Ⅰ、Ⅲ型胶原合成与分泌,ERK1/2和PI3K通道蛋白表达的影响,探讨丹参素抑制肝纤维化的分子机制.方法 用不同浓度丹参素(0.250、0.125、0.062 mmol/L)、ERK通道特异性抑制剂U0126(20 nmol/L)和PI3K通道特异性抑制剂LY294002(20 nmol/L)分别作用于经血小板衍生生长因子PDGF-BB( 10 ng/ml)处理的大鼠肝星状细胞(HSC)48 h,CCK8法检测HSC增殖活性,免疫化学染色法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原合成,酶联免疫吸附法观察Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌,Western blot测定ERK1/2、p-ERK1/2、AKT和p-AKT蛋白表达.结果PDGF-BB 10 ng/ml处理后,HSC增殖明显增加(0.139 ±0.009),丹参素能抑制PDGF-BB刺激大鼠HSC增殖的作用,并随丹参素浓度增加(0.062、0.125、0.250 mmol/L)细胞增殖受到的抑制作用越强(0.102±0.008、0.083±0.007、0.066±0.014,P＜0.05),Ⅰ、Ⅲ型胶原合成及分泌均显著减少(P＜0.05),p-ERK1/2和p-AKT蛋白表达均显著降低(P＜0.05).结论 丹参素可通过抑制PDGF-BB诱导的HSC增殖和活化,同时抑制与肝纤维化密切相关的MAPK、PI3K途径中ERK、AKT蛋白的磷酸化,负性调控肝纤维化过程,其机制可能与抑制ERK1/2和PI3K信号转导通路有关.

替米沙坦对脂多糖诱导3T3-L1脂肪细胞炎症通路的影响

目的 研究替米沙坦对脂多糖诱导3T1-L1脂肪细胞炎症通路的影响,探讨替米沙坦的抗炎机制.方法将3T3-L1脂肪细胞诱导至90%成熟,按随机数字表法分为6组:对照组、LPS组、LPS+替米沙坦(0.01、0.1、1和10μg/ml)组(n=18),向对照组细胞中加DMSO,LPS+替米沙坦组细胞中加入不同浓度替米沙坦,孵育2h后,LPS组和LPS+替米沙坦组再加入脂多糖(1 μg/ml),孵育1h,Western免疫印记法比较各组核蛋白NF-κBp65、总蛋白p-IκBα、IκBα、p-ERK1/2、ERK1/2、P-p38MAPK、p38 MAPK的表达水平.结果 脂多糖刺激后IκBα磷酸化蛋白表达增强(P＜0.05),细胞核内NF-κBp65蛋白表达增多(P＜0.05),MAPK通路相关蛋白ERK1/2磷酸化和p38MAPK磷酸化水平明显增强(P＜0.05),替米沙坦可抑制IκBα磷酸化和NF-κBp65核转位,p-IκBα蛋白表达和核蛋白NF-κBp65表达均降低,大剂量替米沙坦(10 μg/ml)作用时该作用明显(P＜0.05).替米沙坦干预后,p-ERK1/2和p-p38MAPK蛋白表达也受到明显抑制(P＜0.05),大剂量(10μg/ml)时作用明显(P＜0.05).结论 在3T3-L1脂肪细胞中,替米沙坦可以抑制NF-κB通路中IκBα蛋白磷酸化、NF-κBp65蛋白核转位以及MAPK通路中ERK1/2蛋白和p38MAPK蛋白的磷酸化,从而发挥抗炎作用.

deltex-1腺病毒载体的构建及其在大鼠bMSCs中的表达

目的 构建deltex-1基因腺病毒载体并研究其在大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,bMSCs)中的表达.方法 采用高保真酶PCR扩增deltex-1基因并测序,亚克隆至pAdTrack-CMV腺病毒穿梭载体后在BJ5183细菌中进行重组,挑选正确的重组子在FT293细胞中包装成病毒.以CsCl2方法纯化病毒,并进行滴度测定.将目的基因病毒感染bMSCs细胞后收集总RNA及蛋白,用PCR及Western blot方法检测目的基因表达水平.结果 ①成功扩增了大小为1883bp的大鼠deltex-1,并成功构建了大小为4.5kb的同源重组腺病毒穿梭载体,滴度为1.23×1011 IU/ml；②对培养的大鼠bMSCs进行流式检测,结果为CD90、CD44阳性表达,分别为99.57%和85.66%,而CD45达阴性,阳性率为0.35%；③荧光显微镜观察deltex-1转染效率为60%～ 70%,RT-PCR及Western blot检测结果显示转染后deltex-1表达明显增强,说明转染成功.结论 成功构建deltex-1基因腺病毒载体并能在bMSCs中高表达.

甘露糖修饰超顺磁纳米颗粒的制备及体外特性分析

目的 探讨以甘露糖(mannose)修饰超顺磁纳米颗粒(superparamagnetic iron oxide nanoparticles,SPION)的制备方法并检测其理学性质,通过体外实验探讨该体系能否被网状内皮系统吞噬.方法 采用共沉淀法制备Fe3O4纳米颗粒,然后加入甘露糖溶液,在通氮条件下90℃剧烈搅拌2h,得到甘露糖包被的SPION.透射电镜测量其大小和分布,傅里叶红外光谱判断甘露糖修饰效果,采用原子吸收分光光度计检测样品中铁含量,体外白细胞吞噬实验检测其能否被白细胞吞噬,细胞毒性实验检测样品的安全性.结果 所得样品为球形或类球形,分散性好,核心为Fe3 O4晶体,核心粒径为( 12.89 ±3.29)nm,包被甘露糖后的整体颗粒直径不超过20 nm；样品的铁含量为69.84 mg/L；红外吸收光谱测定结果表明甘露糖成功结合到Fe3O4的表面；体外白细胞吞噬实验表明白细胞对甘露糖修饰的SPION的吞噬率较高,细胞毒性实验表明其对细胞的IC50为100.44μg／ml.结论 制备的mannose-SPION具有粒径小、分散性好、超顺磁性等优点,容易被吞噬细胞吞噬,且细胞毒性较低.

IL-6通过SOCS3诱导小鼠髓源性DCs分化成熟障碍的分子机制研究

目的 观察IL-6诱导小鼠髓源性DCs分化成熟障碍过程中SOCS3的表达变化并探讨其分子机制.方法分离小鼠骨髓细胞,采用黏附法结合GM -CSF和IL-4刺激法在体外培养髓源性DCs (BMDCs).用LPS诱导iDCs成熟,采用Real-Time RT-PCR和Western blot方法,观察IL-6处理前后LPS诱导的BMDCs中SOCS3表达的变化,并用甲基化特异性PCR观察SOCS3启动子CpG岛的甲基化状态.结果 Real-Time RT-PCR和Western blot结果显示,LPS能显著诱导BMDCs SOCS3 mRNA和蛋白的表达上调；而经过IL-6处理后,LPS诱导BMDCs SOCS3 mRNA和蛋白表达上调的能力被显著抑制(P＜0.05).甲基化特异性PCR与单独用LPS处理的BMDCs相比,经IL-6处理后的BMDCs SOCS13启动子区CpG岛被甲基化.结论 IL-6通过诱导SOCS3基因启动子区CpG岛的甲基化来抑制SOCS3表达,进而阻遏iDCs分化成熟,促进胃癌等肿瘤细胞侵袭转移.

急性胆囊炎腹腔镜胆囊切除术中胆道损伤的预防

腹腔镜胆囊切除术(laparoscopic cholecystectomy,LC)创伤小、恢复快,已成为胆囊切除术的首选方案.然而,与传统的开腹胆囊切除术相比,腹腔镜胆道损伤的发生率高[1-2],特别在急性炎症时,胆囊三角区组织水肿黏连,解剖欠清晰,更易发生胆道损伤[3].故如何预防胆道损伤成为关注的主要问题.我们自2005年10月到2011年4月共完成急性胆囊炎腹腔镜胆囊切除术98例,无1例胆道损伤,现将体会报告如下.

小儿髋部巨大脂肪瘤1例

脂肪瘤常见于中年,有2种类型:①皮下生长缓慢的肿瘤,约在数厘米大后自限,持续为软的、可移动的、无症状的表浅肿块,有时成群生长,但都是良性;②深部脂肪瘤,见于肢体近端,大约起于骨外脂肪组织,生长缓慢但可累及近股骨全长,有软而光滑的包块,有的可触及分叶状及假性波动.小儿髋部巨大脂肪瘤少见,我们收治1例,现报告如下.

替吉奥胶囊联合多西他赛治疗铂类失败晚期胃癌的临床观察

虽然近年来随着新药的发展,胃癌的治疗取得了一些进步,但晚期胃癌的总体疗效却不令人满意,特别是对于含铂方案治疗失败的患者,迄今其治疗仍是个难题.本研究收集我院2009年5月至2010年5月含铂类方案治疗失败晚期胃癌22例,予以DS方案化疗,疗效较好,现将结果报告如下.

LASIK术后迟发性角膜瓣层间感染误诊为继发性圆锥角膜1例

准分子激光原位角膜磨镶术(laser in situ keratomileusis,LASIK)目前已成为激光矫正近视成熟的手术方式,但其术后仍有与角膜瓣相关的一些并发症出现,角膜瓣层间感染和继发性圆锥角膜均为LASIK术后严重的并发症[1],但前者发生时间一般较早,以眼疼痛等角膜刺激症状为早期主要临床表现,而后者的发生时间一般较长,早期诊断常常依赖于角膜地形图.一般情况下两者的诊断都比较明确,但在特定条件下仍然可能出现误诊.现将我科1例报告如下.

丹参对胆道损伤修复过程中α-SMA表达的影响及其意义

胆管损伤后愈合常见的并发症为瘢痕挛缩和管腔狭窄,其后果严重,治疗颇为棘手,如何防治胆道损伤修复后发生瘢痕狭窄具有重要意义.已有研究证明胆管损伤后主要的修复细胞是肌成纤维细胞(myofibroblast,MFB),其功能持续活跃存在,可导致胆管瘢痕挛缩及良性胆管狭窄形成,而α-SMA是其存在的标志[1-2］.国内多项研究证明丹参具有促进创伤组织修复和良好的抑制瘢痕增生的作用[3-5].本研究在犬胆管损伤早期应用丹参粉针剂,比较观察丹碜对胆管损伤愈合瘢痕中α-SMA表达的强度影响,探讨丹参对胆道损伤修复的作用.

七氟烷吸入并喉罩气道管理在儿童牙科畏惧症中的应用

牙科焦虑症( dental Anxiety,DA)是指患者对牙科诊治过程或其中某些环节的紧张焦虑和害怕.DA在儿童患者中发生率非常高,给临床诊疗工作带来极大困难,妨碍了儿童口腔疾病的有效防治.鲋于儿童DA患者,仅仅使用儿童行为诱导方式往往收效甚微,欧美国家的儿童口腔医师普遍开展了笑气、氧气联合镇静技术,虽然取得了不错的效果,但是仍然有不少DA儿童无法在笑气氧气联合镇静下完成治疗［1].七氟烷是一种新型麻醉药,它对患者气道刺激小,同时诱导快速、术后清醒快速、术中可控性好、血流动力学稳定［2］.我院于2010年6月至2011年1月采用七氟烷吸入麻醉并喉罩气道管理对128例DA儿童患者进行常规口腔疾病治疗,临床取得满意的效果,报告如下.

23例创伤性连枷胸的救治体会

创伤性连枷胸是一种常见的严重闭合性胸部创伤,常合并心肺挫伤、血气胸等损伤.可引起严重的呼吸、循环功能障碍,死亡率高迷20%～50%[1］.我科于2004年1月至2010年10月收治23例严重胸部创伤(连枷胸)患者,收到较好的效果,现总结报告如下.

经十二指肠镜治疗小儿先天性胆总管末端囊肿3例

胆总管囊肿又称先天性胆总管扩张症,好发于婴幼儿,男女比为1:4 ～5,治疗以手术切除囊肿加胆肠吻合术为首选[1].胆总管末端囊肿发生率较少,手术难度大.本研究报告我科自2005年以来收治3例胆总管末端囊肿患儿,经十二指肠镜直视下切开囊肿内引流治疗,效果好.现报告如下.

不同手术方法对良性前列腺增生伴膀胱结石疗效的影响

良性前列腺增生症是一种中老年男性常见的疾病,50岁以上的男性约有一半会出现临床症状.增生的前的腺挤压尿道,导致一系列排尿障碍症状,如尿频尿急、尿流细弱、尿不尽等,严重影响患者的生活质量,不及时治疗会导致许多严重并发症(如急性尿潴留、膀胱结石、肾功能不全等),甚至会危及患者的生命[1].近年来,我院泌尿外科对66例良性前列腺增生伴结石采用不同方法进行治疗,观察不同方法之间的临床疗效,现报告如下.

单操作孔电视胸腔镜手术治疗凝固性血胸21例

凝固性血胸(coagulated hemothorax,CH)临床较常见,是胸部创伤患者的主要并发症,手术仍然是其有效的治疗方法.但用传统的开胸手术治疗凝固性血胸,创伤巨大,术后恢复慢,且并发症较多.上个世纪末,腔镜技术逐渐得到了外科医师的认同,被广泛运用于外科的各个领域.目前,电视胸腔镜手术(video-assisted thoracoscopic surgery,VATS)已成为胸外科主要手术方法之一,但手术方式尚需逐步改良,在同等疗效下以求进一步的微创.近来有报道,电视胸腔镜手术治疗其效果较好[1].本研究自2007年8月至2010年12月,采用单操作孔电视胸腔镜手术治疗凝固性血胸21例,现报告如下.

脑内颈动脉狭窄支架植入术后血管重构特点与血流动力学的改变

脑内颈动脉硬化与狭窄对颈动脉影响很大,可直接侵害颈动脉,在这些部位形成动脉粥样硬化斑块[1],其结果会造成严重脑卒中或脑缺血,甚至会危及生命[2].本研究对脑内颈动脉狭窄患者行自膨胀式支架植入术,在术后3d、l、3个月用彩色多普勒超声测鼍支架近心端、中间段、远心端内径,以及支架内新生内膜厚度、颈内动脉收缩期峰值流速及舒张期大流速、颈总动脉收缩期峰值流速等各参数,通过对各数据进行统计分析,探讨颈动脉狭窄支架植入术后血管重构与血流动力学的改变.

颈阔肌瓣+下颌骨外侧骨皮质切除术修复颊癌术后缺损的临床分析

颊癌是常见的口腔癌,多数为中等分化的鳞状细胞癌,少数为腺癌.手术是治疗颊癌的主要方法,配合放化疗等可取得较好的治疗效果.颊癌术后将遗留颊部缺损,需及时进行修复.对此,临床常采用前臂瓣、额瓣、颞肌筋膜瓣等修复,但这些方法均有其缺点,如严璧影响美观、技术要求较高等.因此,有学者采用颈阔肌瓣结合下颌骨方块切除术修复颊癌术后缺损,并取得了较好的治疗效果.但该手术方式也有缺点:双侧面部明显不对称、颈阔肌瓣蒂部易受压影响成活等.对此,本研究采用颈阔肌瓣加下颌骨外侧皮质切除术对颊癌患者进行手术治疗,探索颊癌术后缺损新的修复方式,现报告如下.

特异性标签序列快速鉴定乙肝病毒B、C基因型的方法及应用

目的 建立一种乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)基因分型方法,并观察其临床应用效果.方法 利用HBV大S区的型间特异性位点密集序列,建立了一种直接多重PCR方法,并对重庆地区250例临床样本进行应用性观察.结果 使用该方法对重庆地区250例随机临床HBV阳性血清进行了检测,结果显示B基因型占73.6% (184/250),C基因型占16.4% (41/250),BC混合型占6.4% (16/250),总检出率为97%左右,与重庆周边地区HBV基因型的区域分布具有一致性.结论该方法能够快捷而准确地鉴定乙肝病毒B、C基因型.

腹腔镜手术中不同CO2气腹压力对不孕症患者卵巢激素的影响

目的 研究选择不同CO2气腹压力行腹腔镜手术对不孕症患者卵巢激素功能的影响.方法 选择诊断为不孕症患者58例,单盲区组随机法分为4组:A组CO2气腹压力10 mmHg(n= 16),B组11～12 mmHg(n= 15),C组13～14 mmHg(n= 13),D组15 ～ 16 mmHg(n= 14).观察手术的并发症,分别于腹腔镜手术前,术后第1、3次月经来潮的第3～5天检测血清雌二醇(E2)、孕激素(P)、黄体生成素(LH)、睾酮(P)和卵泡生成激素(FSH).结果 CO2气腹腹腔镜手术对雌二醇、卵泡生成素及黄体生成素有影响,主要表现在术后第1次月经期.其中,卵泡生成素及黄体生成素随着CO2气腹压力的增加而增加(P＜0.05),但在术后第3次月经期均恢复至术前水平.对于孕激素、睾酮而言,CO2气腹腹腔镜手术并未影响其浓度.结论 不同CO2浓度的气腹可使术后第1次月经期的黄体生成素和卵泡生成素有一定程度的升高,术后第3次月经期已恢复到术前水平,但均在正常范围内.

早期肾活检在尿检正常型儿童紫癜性肾炎中的临床意义

目的 回顾性分析早期尿检正常型紫癜性肾炎患儿肾活检病理及预后情况,探讨早期肾活检的重要性.方法 选择早期尿检正常但尿微量蛋白阳性的紫癜性肾炎69例患儿,按照以早期尿微量蛋白持续阳性或病程中出现尿蛋白作为肾活检指标,分为2组:早期肾活检组(n=29)、肾活检组(n=40),探讨其肾活检病理及预后差别.结果 所有早期尿检正常型紫癜性肾炎,反复尿微量蛋白异常≥3次,肾活检发现肾脏均有不同程度损害,其中Ⅱ级37例,Ⅲ级27例,Ⅳ级5例；早期肾活检组的病理损害程度低于肾活检组(P＜0.05),并且早期肾活检组9例病程中出现蛋白尿,治疗后尿蛋白转阴时间( 14.43±10.21)d,肾活检组20例病程中出现蛋白尿,治疗后尿蛋白转阴时间(31.26±19.65)d,早期肾活检组蛋白尿转阴时间显著短于肾活检组(P＜0.01).结论 以尿微量蛋白持续阳性作为肾活检指标,进行早期肾活检,能及早发现肾脏损害,改善预后.

半枝莲中的黄酮抗幽门螺杆菌作用研究

目的 从中药半枝莲中分离提取具有抗幽门螺杆菌(helicobacter Pylori)活性的成分,并对其抗菌活性进行验证.方法 以活性为导向,采用硅胶、Sephadex LH-20、ODS RP-18反向硅胶等柱色谱方法进行分离纯化,后通过对照品进行色谱法比对鉴定化合物结构,并通过测定小抑菌浓度( MIC)明确其活性.结果 从中药半枝莲中分离得到活性明确的黄酮类化合物3个,分别为山奈酚-3-O-鼠李糖苷(MIC 15.63 μg/ml)、山奈酚-3-O-葡萄糖苷(MIC 15.63 μg/ml)、山奈酚-3-7-二鼠李糖苷(MIC 31.25 μg/ml).结论 从半枝莲中分离得到的这3个化合物均具有较好的抗幽门螺杆菌活性,并能降低氨苄西林对幽门螺杆菌的MIC,具有较好的开发应用前景.

4126例腹腔镜胆囊切除术的临床分析

目的 分析腹腔镜胆囊切除术并发症发生的原因,结合文献及自身体会探讨如何从细节着手避免副损伤.方法 回顾性分析我科2004年5月至2010年4月腹腔镜胆囊切除术4 126例资料.其中男性1 078例,女性3 048例,年龄8～102岁,平均51岁.急性胆囊炎409例,胆囊结石伴慢性胆囊炎2 872例,胆囊息肉样病变786例,非结石性胆囊炎59例.结果 4 126例腹腔镜胆囊切除术并发症共33例,约占0.8%.其中胆道损伤4例,术中胆囊动脉或胆囊床出血25例,术后戳孔处出血2例,术后继发胆总管结石2例.另外,病理检查发现胆囊癌5例.结论 腹腔镜胆囊切除术术后有一定的并发症,应该从手术开始、术中处理的多处细节预防.

生物共振诊断治疗仪检测变应性鼻炎变应原的初步评估

目的 探讨摩拉生物共振诊断治疗仪(MORA-super)检测变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)变应原的准确性及临床意义.方法 选取2010年5 - 12月就诊于我院变态反应科的139例AR阳性病史的患者为研究对象,以常见的10种变应原测试液为抗原,依次进行生物共振诊断治疗仪检测及皮肤点刺试验检测(skin prick test,SPT),以AR阳性病史及SPT阳性结果与病史相符为AR诊断标准,并以确诊为AR患者的SPT检测结果为标准,评价生物共振诊断治疗仪检测结果.结果 139例患者中SPT阳性且与病史相符124例,确诊为AR,以确诊为AR的124例SPT检测结果为对照,生物共振诊断治疗仪检测屋尘螨符合率为83.8%,灵敏度78.6%,特异度88.2%,阳性预测值84.6%,阴性预测值83.3%；艾蒿符合率为85.5%,灵敏度80.0%,特异度89.2%,阳性预测值83.3%,阴性预测值86.8%.结论 生物共振诊断治疗仪检测变应性鼻炎变应原的检测结果与SPT结果符合率较高,其用于变应原检测确实可行.

石蜡包埋制作猫眼球切片方法的改良

目的 探讨和改良石蜡包埋制作猫眼球切片方法.方法 取健康猫眼球10只,AFA(甲醛-乙醇-冰醋酸)固定液固定,乙醇梯度脱水,氯仿透明,石蜡包埋制作眼球切片,厚度7 μm,HE染色,观察并记录.结果 ①石蜡包埋的猫眼球不变形,外观无明显收缩,结构完整,可获得整个眼球；②HE染色切片观察,眼球壁各层结构清晰,角膜、角膜缘、巩膜静脉窦、睫状肌等组织结构完整,视网膜无明显剥离,层次清楚,各层细胞排列整齐、容易辨认.结论 采用此方法对猫眼球进行石蜡包埋,可获得较满意的眼球组织切片.

反相高效液相色谱法临床监测心脏瓣膜置换术后患者血浆华法林的含量

目的 建立心脏瓣膜置换术后患者血中华法林浓度的快速、准确的高效液相色谱法(HPLC),便于华法林临床药物浓度监测,实现个体化给药.方法 收集西南医院、重庆医科大学附属第一医院人工机械瓣膜置换术后口服华法林抗凝治疗达稳态的患者100例的血浆样品,经正己烷-二氯甲烷(9:1)萃取富集处理后,在310 nm紫外检测波长；流动相:甲醇:水=75:25(含0.2 ml冰乙酸)；流速:0.9 ml/min；柱温:25℃条件下,经过Hypersil BDS C18(200 mm ×4.6 mm,5μm)色谱柱分离测定.结果 华法林的保留时间为6.41 min,样品浓度线性方程为C=3.12 ×10-3·R ±0.038,r=0.9998,线性范围为20～2000 ng/ml,平均回收率为97.5%,日内与日间相对精密度均小于5%.对重庆地区100例心脏瓣膜置换术后患者血浆华法林测定,其血药浓度是( 845.48±388.16) ng／ml.结论HPLC法能快速、准确地测量心脏瓣膜置换术后患者血中华法林浓度,并能进行临床监测.

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