第三军医大学学报杂志
Journal of third military medical university 제삼군의대학학보
- 主管单位： 第三军医大学
- 主办单位： 第三军医大学
- 影响因子： 1.01
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-5404
- 国内刊号： 50-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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γ-氨基丁酸及其A型受体在胃癌SGC-7901细胞的表达及对细胞增殖的影响
目的 观察GABA、GAD65、GABRP在胃癌SGC-7901细胞中的表达及对细胞增殖、细胞周期分布的影响.方法RT-PCR、IF及Western Blot检测胃癌细胞SGC-7901中GABA、GAD65及GABRP mRNA及蛋白表达；1、10、100μmol/L GABA,0.5、5、50 μmol/L Muscimol,0.5、5、50 μmol/L Bicucullin分别作用于胃癌细胞SGC-7901 48 h后,新型四唑氮盐(MTS)比色法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期分布情况.结果 GAD65、GABRPmRNA及蛋白均表达于SGC-7901细胞中；GABA、GABRP及GAD65蛋白定位于SGC-7901细胞细胞膜和细胞质；与空白组比较,1 μmol/LGABA,5、50μmol/L Muscimol作用SGC-7901细胞48 h后,细胞生长的增殖率上升,5、50 μmol/L Bicucullin作用SGC-7901细胞48 h后,细胞生长抑制率上升；1μmol/L GABA可导致细胞Go/G1数量的减少,G2/M期数量的增加；3个浓度的Muscimol可导致G0/G1期数量的减少,5、50μmol/L Muscimol可导致细胞G2/M期数量增加；5、50 μmol/L Bicucullin可导致G2/M期数量的减少(P＜0.05).结论 GABA及其A受体在SGC-7901细胞中的表达可能促进细胞增殖,扰乱细胞周期进程,促使细胞分裂.
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全反式维甲酸增强超声微泡包裹的单纯疱疹病毒胸苷激酶自杀基因治疗荷肝癌裸鼠的效果
目的 探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)能否提高微泡包裹的单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)自杀基因对肝癌的体内治疗作用.方法 用人肝癌SMMC-7721细胞建立皮下裸鼠移植瘤模型,先检测不同剂量ATRA的抗肿瘤效应；再用ATRA联合基因治疗,实验分4组:磷酸盐缓冲液组、ATRA组、HSV-TK组、联合治疗组,各组测量肿瘤体积,计算抑瘤率,Western blot检测输注的目的基因质粒的表达,HE染色行病理学观察,免疫组化法检测连接蛋白Cx32的表达.结果 ATRA在1 mg/kg下无抗肝癌作用,但≥4 mg/kg即具有明显抗肝癌效应；抑瘤率在磷酸盐缓冲液组、ATRA组、HSV-TK组、联合治疗组分别为0、(7.46±7.25)％、(37.65±3.87)％、(59.04±3.08)％,联合治疗组分别与磷酸盐缓冲液组、ATRA组、HSV-TK组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).HE结果显示:采用ATRA联合基因治疗后,肿瘤坏死细胞明显较对照组多,免疫组化结果显示:ATRA处理过的组织中,Cx32蛋白表达增加,且以胞膜表达为主.结论 ATRA具有抗肝癌作用；ATRA能增强超声微泡包裹的HSV-TK自杀基因杀伤肝癌的效果,其可能机制与ATRA促进了Cx32蛋白的正常表达有关.
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RNA干扰Ezrin对肾癌细胞株786-0增殖及侵袭力的影响
目的 探讨膜-细胞骨架联接蛋白Ezrin对肾癌细胞株786-0细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响.方法 以ezrin为靶基因,以Pgenesil-1质粒为载体设计和构建重组体,设计2条发夹式RNA(shRNA),合成后克隆入载体Pgenesil-1,脂质体Lipofectamine2000转染进786-0细胞,观察RNA干扰Ezrin后肾癌细胞株786-0细胞增殖及侵袭能力的改变.结果 稳定转染细胞荧光定量PCR结果显示shRNA-ezrin1对ezrin mRNA的表达量抑制率66.33％,稳定转染细胞Ezrin下调率达93％,shRNA干扰后786-0细胞增殖活性减弱,Go/G1时段明显延长(P＜0.01),PI缩短(P＜0.01),细胞凋亡率增加(P＜0.01)；细胞黏附力减弱,细胞运动、穿孔能力减弱(P＜0.01).结论 RNA干扰Ezrin可有效抑制786-0细胞增殖活性、降低细胞的侵袭力,Ezrin在人肾癌细胞增殖、侵袭中发挥重要作用.
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Ⅰ型胶原/聚乙烯醇共聚纺丝的生物相容性研究
目的 检测Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)/聚乙烯醇(polyvinyl alcohol,PVA)共聚纺丝的生物相容性.方法 使用小鼠成纤维细胞( L-929),分为100％浓度Col- Ⅰ/PVA共聚纺丝浸提液、50％浓度Col- Ⅰ/PVA共聚纺丝浸提液、空白对照、阳性对照4个组,MTT法测定各组细胞在1、2、3、4、5、6、7d的光密度值,计算细胞相对增殖率(relative growth rate,RGR),判定细胞毒性的级别；直接接触共培养L-929细胞,倒置显微镜和扫描电镜观察细胞在Col- Ⅰ/PVA共聚纺丝上的生长情况；将Col- Ⅰ/PVA共聚纺丝和聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)纤维分别植入昆明小鼠皮下,于术后1、3、9周取标本大体观察包膜情况,HE、Mallory三色法进行组织学观察.结果 MTT法:2个实验组细胞在不同时间点的相对增殖率均为90％～123.61％,Col- Ⅰ/PVA共聚纺丝的细胞毒性评级为0～Ⅰ级；直接接触法:细胞与Col- /PVA共聚纺丝直接接触共培养,生长良好、形态正常,并附着生长.皮下植入的Col- Ⅰ/PVA共聚纺丝和PET纤维在1、3、9周均有包膜形成,且随时间的延长包膜透明度增高,包膜周围炎细胞主要为中性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞,随时间的延长炎细胞数量明显减少.结论 Col-Ⅰ/PVA共聚纺丝的生物相容性良好,且细胞毒性和组织相容性均在临床应用的允许范围内.
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改良肌皮瓣法结合眶隔固定术进行眼袋整形的临床效果观察
目的 观察和探讨改良肌皮瓣法结合眶隔固定术进行眼袋整形的效果.方法 312例受术者分为2组,每组156例,A组受术者分别设计去皮宽度,切开下睑皮肤,分离出上端为皮瓣的肌皮瓣,并成型眶隔表面肌肉瓣,切开并复位固定眶隔后,向上提紧缝合肌肉瓣,适当去皮,对合修整切口皮肤并缝合.B组采用传统肌皮瓣眼袋整形术.结果 术后随访36个月,结果显示:结合了改良肌皮瓣法和眶隔固定术的眼袋整形术在对眼袋、下睑皮肤皱纹、鼻泪沟改善的远期效果明显优于传统肌皮瓣眼袋整形术(P＜0.01),且不会出现下睑凹陷.结论 改良肌皮瓣法结合眶隔固定术行眼袋整形能恢复下睑解剖结构,使术后效果自然、持久,是一种适应证广,并发症少,操作清晰的改良术式.
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阿托伐他汀抑制ApoE-/-小鼠腹腔巨噬细胞LPS刺激下NF-κB p65核转位
目的 观察阿托伐他汀对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激载脂蛋白E基因缺陷(apolipoprotein E knockout,ApoE-/-)小鼠腹腔巨噬细胞NF-κB p65核转位的影响.方法 采用LPS 10 ng/ml刺激分离纯化的ApoE-/-小鼠腹腔巨噬细胞,并给予1、5、10 μmol/L不同浓度的阿托伐他汀进行干预,免疫荧光染色结合激光共聚焦显微镜观察NF-κB p65核转位,Western blot法检测NF-κB p65核内表达,ELASA法检测细胞上清液IL-6水平.结果 激光共聚焦及Western blot均观察到阴性对照组核内NF-κB p65表达较低,其平均荧光强度为(3.71±0.26)；阳性对照组核内NF-κBp65表达较阴性对照组显著增高[(16.12±1.28),P＜0.05]；不同剂量阿托伐他汀干预组细胞核内NF-κB p65表达呈剂量依耐性逐渐降低,其平均荧光强度分别为(10.95±0.71)、(7.61±0.73)、(4.56±0.39),差异具有统计学意义(P＜0.05)；同时可发现药物干预组细胞上清液IL-6分泌量也呈剂量依耐性逐渐降低(P＜0.05).结论 阿托伐他汀能抑制ApoE-/-小鼠腹腔巨噬细胞LPS刺激下NF-κB p65核转位及其随后炎性介质IL-6分泌.
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介入诊疗术后股动脉假性动脉瘤46例临床分析
目的 分析介入诊疗术后股动脉假性动脉瘤(pseudo-aneurysm,PSA)的危险因素及其合理的处理措施.方法 通过回顾性分析西南医院心血管内科2007年1月至2011年4月的46例介入诊疗术后股动脉PSA的基本资料,比较压迫修复法和凝血酶注射法的临床疗效.46例年龄(62.1±13.5)岁,男性16例,女性30例.其中43例合并高血压病或冠心病或糖尿病,32例术后应用抗凝药,4例行同侧股动脉/静脉穿刺.结果 21例行压迫修复疗法,14例成功(成功率66.7％),3例(14.3％)出现严重并发症.25例行凝血酶注射疗法,所有患者治疗成功(成功率100％).无严重并发症.PSA发生后住院时间及随访结果:压迫修复疗法患者的住院时间高于凝血酶注射疗法患者[(3.8±10.5)d vs (1.5±0.6)d,P＜0.05].所有患者随访至少3个月.1例压迫修复好转出院患者,半个月后再次出现PSA.随访期间无局部感染、化脓等并发症.结论 PSA发生原因复杂,凝血酶注射疗法较压迫修复疗法安全有效.
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复元胶囊对兔骨关节炎关节软骨uPA、uPAR、PAI及NF-κB表达的影响
目的 观察复元胶囊(Fuyuan capsule,Fyc)对实验性兔膝骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨中尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,uPA)、uPA受体(uPA receptor,uPAR)、血浆酶原激活酶抑制因子(plasminogen activator inhibitor,PAI)的影响,探讨其对实验性兔膝OA的作用机制.方法 采用膝关节石膏制动法结合d-半乳糖皮下注射6周建立兔衰老骨关节炎模型.48只新西兰兔根据体质量按随机区组法分为健康组、模型组、盐酸氨基葡萄糖胶囊90 mg/( kg·d)组,复元胶囊低、中、高剂量组[1 350、2 700、5 400 mg/( kg·d)],每组8只,造模当日开始灌胃,1次/d,连续10周.HE染色关节软骨Mankin's评分,免疫组织化学法检测各组软骨组织中uPA、uPAR、PAI的表达,Western blot检测各组软骨组织中uPA、NF-κB的表达.结果 复元胶囊高剂量组和盐酸氨基葡萄糖胶囊组的兔OA关节软骨Mankin's评分较模型组明显降低(P＜0.01)；免疫组化检测结果显示,复元胶囊高剂量组和盐酸氨基葡萄糖胶囊组uPA及uPAR表达明显降低,而PAI表达明显升高(P＜0.01)；Western blot检测结果显示,盐酸氨基葡萄糖胶囊组和复元胶囊高剂量组uPA及NF-κB均较模型组显著降低(P＜0.01).复元胶囊高剂量组对uPA的抑制作用与盐酸氨基酸葡萄糖胶囊组比较差异无统计学意义(P＞0.05),但对NF-κB的抑制作用强于盐酸氨基酸葡萄糖胶囊组(P＜0.05).结论 复元胶囊能显著降低兔关节软骨中uPA、uPAR、NF-κB的表达,明显升高PAI的表达,提示复元胶囊可能通过调控uPA系统和NF-κB信号通路对骨关节炎发挥防治作用.
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shRNA干扰β-catenin对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化的作用
目的 构建特异性针对β-catenin基因的shRNA干扰载体,转染TGF-β1诱导的人近端肾小管上皮细胞株HKCs,研究其对肾小管上皮细胞转分化的影响.方法 将构建的shRNA-β-catenin干扰载体转染TGF-β1诱导的HKC细胞,RT-PCR、Western blot检测β-catenin的mRNA及蛋白表达水平,筛选抑制效果佳载体；RT-PCR、细胞免疫荧光、Western blot检测肾小管上皮细胞转分化相关蛋白E-cadherin、α-SMA的mRNA及蛋白表达水平.结果 经酶切和测序鉴定,成功构建的shRNA-β-catenin表达载体转染HKC细胞,β-catenin在mRNA及蛋白表达水平均低于转染空白载体组(P＜0.05),并筛选shRNA-β-catenin-1进入实验组；转染shRNA-β-catenin-1组细胞β-catenin在mRNA及蛋白表达水平均低于TGF-β1诱导组和空载体组(P＜0.05),且β-catenin转核显著减弱(P＜0.05)；E-cadherin的mRNA及蛋白表达水平较TGF-β1诱导组和空载体组显著上调(P＜0.05)、α-SMA的mRNA及蛋白表达水平较TGF-β1诱导组和空载体组显著下调(P＜0.05).结论 运用shRNA-β-catenin干扰载体转染TGF-β1诱导的HKC细胞,能够抑制肾小管上皮细胞-间充质转分化.
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改良三瓣法额肌瓣悬吊术治疗重度上睑下垂临床观察
目的 探讨改良三瓣法额肌瓣悬吊术矫正重度上睑下垂的临床效果,恢复上睑功能和视功能,同时达到美容的目的.方法 对36例(47只眼)重度上睑下垂患者行改良三瓣法额肌瓣悬吊的手术治疗.结果 36例(47眼)中,满意38眼,占80.85％,良好8眼,占17.02％,失败1眼,占2.13％.半年后对失败的上睑下垂患者予以2次手术,上睑下垂得到矫正.术后获随访6个月,均获得满意的效果,无并发症.结论 改良三瓣法额肌瓣悬吊术治疗重度上睑下垂,力度分散,并发症少,效果良好,重睑自然,恢复快.
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沉默缺氧诱导因子对人胶质瘤SHG44细胞糖酵解及细胞增殖的影响
目的 探讨沉默缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α)对缺氧状态人胶质瘤SHG44细胞糖酵解及细胞增殖的影响及机制.方法 用氯化钴( CoC12)模拟缺氧,并应用小分子RNA干扰(siRNA)技术沉默HIF-1 α基因表达.将细胞分成4组:正常培养组、缺氧培养组、阴性对照组和siRNA干扰组.各组又分为常糖组(2g/L)和高糖组(5g/L).Real-time PCR、Western blot法分别检测肿瘤细胞HIF-1α和糖酵解酶的mRNA及蛋白表达；生物发光法检测细胞内ATP水平；激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜电位；MTT法检测细胞增殖；流式细胞技术检测细胞凋亡、坏死及细胞内活性氧的变化.结果 ①缺氧条件下,HIF-1α siRNA干扰沉默HIF-1α基因的效率达到71％.②缺氧培养组HIF-1α和糖酵解酶的mRNA和蛋白表达高于正常培养组(P＜0.05),细胞内ATP水平减少、细胞坏死和凋亡均增加,而细胞增殖能力明显增强(P＜0.05),同时线粒体膜电位升高(P＜0.05).③siRNA干扰组HIF-1 α和糖酵解酶的表达量低于缺氧培养组、阴性对照组(P＜0.05)；ATP水平低于缺氧培养组,细胞增殖率下降(P＜0.05),细胞坏死率高于缺氧培养组(P＜0.05),线粒体膜电位恢复.结论 缺氧诱使肿瘤细胞表达HIF-1α,促进肿瘤恶性进展；siRNA干扰沉默HIF-1α能加重缺氧状态下SHG44细胞的生长抑制和坏死,其机制与抑制糖酵解、恢复线粒体功能有关.
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2型糖尿病合并高血压下肢动脉硬化闭塞症临床分析
目的 探讨老年2型糖尿病合并高血压患者下肢动脉硬化闭塞症的临床特点.方法 回顾分析2004年1月至2010年12月浙江大学第一附属医院内分泌科及血管外科住院下肢动脉硬化闭塞症患者319例,其中男性223例,女性96例,平均年龄68岁以上.根据既往有无高血压及糖尿病分为对照组(无高血压及糖尿病,n=50)、糖尿病组(DM组,n =48)、高血压组(HNT组,n=80)、糖尿病合并高血压组(DM-HNT组,n=141),均初步行彩色多普勒超声检查或磁共振动脉成像(MRA),其中248例患者行下肢动脉造影.分析比较4组患者一般情况、生化指标间的差异及各组下肢动脉闭塞的特点,并对糖尿病下肢血管病变危险因素采用Logistic回归方法进行分析.结果 ①DM-HNT组年龄、空腹血糖、糖化血红蛋白、血压、心血管及脑血管并发症发生率均高于对照组(P＜0.01)；与其他3组相比,DM-HNT组TG、TC及LDL-c高(P ＜0.05)而HDL-c低(P ＜0.05)；DM-HNT组糖尿病病程明显较DM组长(P＜0.05)；②DM-HNT组髂、股、小腿动脉段闭塞率分别为41.4％、72.7％、75.6％,高于HNT组(27.2％、41.3％、28.3％,P＜0.05)及对照组(19.7％、27.9％、16.4％,P＜0.01).DM-HNT组髂、股动脉段闭塞率高于DM组(P＜0.05),但小腿动脉段闭塞率差异无统计学意义(P＞0.05).③多因素Logistic回归分析显示收缩压、TC、LDL、糖尿病病程是糖尿病患者发生下肢动脉病变的独立危险因素.结论 与非糖尿病患者相比,2型糖尿病患者以小腿动脉闭塞为主,而2型糖尿病患者合并高血压后发生髂动脉段及股动脉段闭塞率亦高,这可能与血压、血脂、糖尿病病程等多种危险因素有关.
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肺结核患者外周血中CD4+ CD25+ FoxP3+调节T细胞增多并抑制抗结核免疫
目的 研究肺结核患者外周血中CD4+ CD25+ FoxP3+调节T细胞是否增多,这些调节T细胞是否抑制结核的特异细胞免疫反应.方法 使用细胞分离、流式细胞分析及细胞增殖及增殖抑制等实验方法,对20例肺结核患者及17例健康人群外周血中CD4+ CD25+ FoxP3+调节T细胞的数量及免疫学特征作研究.结果 肺结核患者外周血中CD4+CD25+ FoxP3+调节T细胞数占CD4+细胞总数的比例显著高于健康人群(P＜0.01).在体外,肺结核患者外周血单个核细胞在BCG及ESAT-6的刺激下增殖能力比健康对照人群明显增强(P＜0.01),产生的γ-干扰素比健康人群也明显增强(P＜0.05)；清除调节T细胞后的肺结核患者外周血单个核细胞对BCG刺激下产生γ-干扰素及白介素-10比没有清除时显著增强(P＜0.05)；从肺结核患者外周血分离CD4+ CD25+调节T细胞和CD4+ CD25 -细胞,CD4+ CD25 -细胞对BCG及ESAT-6刺激产生γ-干扰素和白介素-10的能力因CD4+ CD25+调节T细胞加入后而显著减弱(P＜0.05).结论 肺结核患者CD4+ CD25+ FoxP3+调节T细胞增多,通过抑制结核患者细胞免疫反应,参与肺结核的发病.
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热休克蛋白B1在U251细胞株及其干细胞中的差异性表达对肿瘤细胞凋亡的影响
目的 探讨热休克蛋白B1(heat shock protein B1,HSPB1)在U251细胞株及其干细胞中差异性表达对肿瘤细胞凋亡的影响.方法 采用无血清培养基培养U251细胞,获得U251干细胞；应用细胞免疫荧光染色法检测CD133和nestin鉴定胶质瘤干细胞；应用iTRAQ技术对U251细胞株及其干细胞进行HSPs差异性分析；应用MTT法、Western blot和RT-PCR观察经卡莫司汀干预后,肿瘤细胞凋亡与HSPB1蛋白、基因表达变化的关系.结果 在未经卡莫司汀干预的胶质瘤与胶质瘤干细胞的HSPB1的蛋白比值为0.523；经卡莫司汀干预U251及其干细胞后,HSPB1蛋白含量分别升高了1.4、3.3倍,HSPB1 mRNA分别升高1.5、3.6倍,经相同浓度的卡莫司汀干预后的U251细胞生长受到抑制,而U251干细胞无明显抑制.结论 HSPB1参与U251胶质瘤干细胞化疗抵抗过程,对肿瘤细胞增殖、凋亡起着重要的调控作用.
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胃食道反流性咳嗽临床诊断评分系统的建立
目的 综合胃食道反流性咳嗽(gastro-esophageal regurgitation cough,GERC)患者临床特征,建立1个GERC诊断的评分系统,以期为临床GERC经验性诊疗提供简便、快捷的辅助诊断方法.方法 我院呼吸内科诊断慢性咳嗽患者,结合患者的临床特征选择拟诊为GERC、咳嗽变异性哮喘(cough variability asthma,CVA)和上气道咳嗽综合征(upperairway cough syndrome,UACS)的患者进行经验性治疗后随访,对随访后确诊病例按本研究建立的GERC评分系统评分比较,确定诊断GERC的判断折点.结果 对终确诊为GERC、UACS和CVA病因的122例患者进行临床特征分析提示:3组患者的年龄、咳嗽严重程度和病程差异无显著性；CVA组患者合并鼻炎/鼻窦炎病史的比例显著高于GERC组(P=0.019);GERC组合并胃病病史的比例显著高于UACS组(P =0.023)；3组中GERC组干咳的比例高于其他2组；GERC组和UACS组夜间咳嗽比例显著低于CVA组(P=0.000)；GERC组反流症状的比例显著高于UACS组(P =0.002)和CVA组(P =0.007)；GERC组胃病症状的比例也均显著高于UACS组(P=0.001)和CVA组(P =0.027)；UACS组和CVA组的鼻炎、鼻窦炎相关症状较GERC组高.GERC评分值比较提示GERC、CVA和UACS 3组间差异存在显著性(P ＜0.001).以GERC评分≤4为判断折点预测GERC的诊断特异性为83.3％,敏感性为84.0％.结论 建立的GERC评分体系可以不依赖食道pH电极监测等检查而获得较好的GERC病因预测.
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豚鼠双任务眨眼条件反射中的听觉惊吓反射特征参数及其对眨眼条件反射的影响
目的 研究双任务眨眼条件反射建立过程中豚鼠听觉惊吓反射(acoustic startle reflex,ASR)特征参数,及其对眨眼条件反射(classical eyeblink conditioning,EBC)的影响.方法 18只健康雄性英国种白化豚鼠分成3组(n=6)∶单任务-延迟性眨眼条件反射组、单任务-痕迹性眨眼条件反射组、双任务组.实验采用不同音频的正弦波纯音(3 kHz和1 kHz)作为条件刺激(conditioned stimulus,CS),100 ms束状氧气流作为非条件刺激(unconditioned stimulus,US)对动物进行配对训练,观察实验各组ASR的特征参数.结果 双任务组中,豚鼠对3 kHz-CS表现出的ASR率与对1 kHz-CS表现出的ASR率相比差异具有显著性(F=198.685,P＜0.01),前者显著高于后者,相应的,豚鼠对3 kHz-CS训练的痕迹性眨眼条件反射表现出更高的习得率.单任务组中的延迟性眨眼条件反射组和痕迹性眨眼条件反射组的ASR率组间差异无显著性(F=2.544,P＞0.05),其眨眼条件反射学习规律与其他研究类似.结论 在双任务眨眼条件反射训练过程中,高音频CS会抑制低音频CS的ASR反应,进而影响低音频CS对应的条件反射的学习.
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缺氧对人小细胞肺癌H446细胞基因组DNA甲基化水平的影响
目的 研究缺氧对人小细胞肺癌H446细胞基因组DNA甲基化水平的影响.方法 体外培养人小细胞肺癌细胞H446,置于缺氧(3％O2)条件下培养,分别于0、12、24、48、72 h后提取细胞基因组DNA,用甲基化敏感性随机引物PCR(MS-AP-PCR)方法检测基因组DNA甲基化状态.结果 在缺氧状态下,H446细胞经酶解后的扩增谱带明显增多,且荧光强度较强,以24h后明显,表明H446细胞基因组DNA甲基化水平在缺氧24h后即发生明显升高,主要表现为多位点的异常甲基化.结论 缺氧可能是造成肿瘤细胞内甲基化失衡的重要原因之一.
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海洛因成瘾大鼠硫化氢/胱硫醚β-合酶体系的变化
目的 观察海洛因成瘾对大鼠硫化氢( hydrogen sulfide,H2S)/胱硫醚β-合酶(cystathionine-β-synthase,CBS)体系产生的影响.方法 实验大鼠分成健康对照组、heroin组、heroin+硫氢化钠(NaHS)组,每组10只.heroin组、heroin+ NaHS组按剂量递增原则皮下注射海洛因9d,对照组按同样方式注射等量生理盐水,heroin+ NaHS组在每次注射海洛因前30 min腹腔注射NaHS,第10天纳洛酮腹腔注射观察戒断症状.采用亚甲基蓝比色法测定大鼠血浆及海马组织H2S含量,Real-time PCR检测海马组织CBS mRNA表达量.结果 heroin组与健康对照组比较,血浆及海马H2S含量均明显降低(P＜0.05),CBS mRNA表达量显著增高(P＜0.05);heroin+ NaHS组与健康对照组比较,海马H2S含量明显降低(P＜0.05)；heroin+ NaHS组与heroin组比较,血浆及海马H2S含量明显增高(P＜0.05),CBS mRNA表达量明显降低(P＜0.05).结论 海洛因依赖可导致大鼠体内H2S水平下降,内源性H2S与CBS之间存在负反馈调节作用,使内源性H2S维持在生理浓度水平.
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水化治疗对糖尿病肾病患者对比剂肾病的预防作用
目的 观察水化治疗对使用非离子等渗对比剂的糖尿病肾病患者对比剂肾病的预防作用.方法 2007年1月至2010年12月本科收治的糖尿病肾病患者80例,其中男性30例,女性50例,年龄(64.4±9.3)岁,分为2组:①水化治疗组(n=39),在使用非离子等渗对比剂(碘克沙醇320 mg/ml)进行多检测器行列螺旋式计算机体层摄影(multidetector-row helical computerized tomography,MDCT)检查前后12 h内予0.9％盐水以1ml/(kg·h)的速度滴注进行水化,静脉补液量根据患者的体质量及患者心功能进行调整,要求患者24h尿量达到2L以上以达到充分水化.②常规治疗组(n=41),按患者正常治疗流程,不额外增加患者的饮水量及静脉液体输入量.记录和分析2组患者在检查前后48、72、168 h的血清肌酐浓度(SCr)变化情况.结果 水化治疗组的血肌酐基础值为(160.9±62.7)μmol/L,给予非离子对比剂后48、72、168 h的血肌酐值分别为(145.8±78.7)、(143.1±47.6)、(153.8 ±59.8) μmol/L.水化治疗组的4次血肌酐值差异无统计学意义(P＞0.05).常规治疗组的血肌酐基础值为( 180.3±91.4) μmol/L,给予非离子对比剂后48、72、168 h的血肌酐值分别为(185.5±71.3)、(188.7 ±104.3)、(188.3 ±90.6) μmol/L,常规治疗组给予对比剂前后的4次血肌酐值差异也无统计学意义(P＞0.05).但水化治疗组对比剂肾病发生率低于常规治疗组(P＜0.05).结论 水化治疗可减少对比剂肾病的发生.
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医学干预对某特区部队军事训练伤的影响
目的 探讨医学干预对南方某特区部队战士训练伤发生情况的影响.方法 随机将一营区陆军部队,按照干预措施施训,作为干预组；另一营区陆军部队按照以往常规方法进行训练,不加任何干预措施,作为对照组.观察3个月内的训练伤发生情况.结果 骨关节、软组织、下腰部的损伤为常见.实施医疗干预可有效降低军事训练伤的发生率(21.34％vs30.60％),其主要效果在于大幅度降低了新兵的训练伤发生率(41.04％vs27.37％),并降低了骨关节损伤的发生率(37.79％vs32.82％)和软组织损伤的发生率(26.74％ vs 22.90％).结论 实施医学干预可以有效降低军事训练伤的发生率.
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实验性蛛网膜下腔出血大鼠儿茶酚胺氧位甲基转移酶表达的变化及意义
目的 观察实验性蛛网膜下腔出血( SAH)后早期大鼠儿茶酚胺氧位甲基转移酶(catechol-O-methyltrans-ferase,COMT) mRNA和蛋白表达、血浆儿茶酚胺(catecholamine)含量、基底动脉管径和管壁厚度的变化规律,探讨SAH后早期大鼠COMT表达变化的意义.方法 以视交叉前池单次注血法构建大鼠SAH模型.采用RT-PCR、Western blot法检测大鼠SAH后早期各个时相点(SAH后6、12、24、48、72 h)纹状体组织内COMT mRNA和蛋白表达.采用高效液相色谱法测定大鼠相应时相点血浆CA含量.HE染色后测量大鼠相应时相点基底动脉管径和管壁厚度.结果 与健康对照组和假手术组比较,SAH组大鼠在建模后6h见COMT mRNA和蛋白表达开始增高(P＜0.01),12 h时达到高峰(P＜0.01),24h后开始下降(P＜0.01),48 h时仍高于健康对照组和假手术组相应时相点水平(P＜0.01),至建模后72 h时接近正常水平(P＞0.05).SAH组大鼠在建模后6h即见血浆CA含量升高,24h时达到峰值,24h后开始下降,至72 h后仍高于健康对照组和假手术组相应时相点水平.SAH组大鼠在建模后12 h基底动脉的管径明显缩小和管壁明显增厚(P＜0.01),至建模后24h明显(P＜0.01)并持续至建模后48 h(P＜0.01)；建模后72 h,基底动脉的管径和管壁厚度已接近正常大小(P＞0.05).结论 实验性SAH可以诱导SAH后早期大鼠纹状体COMT表达增高；SAH后早期CA含量明显升高并伴有CVS发生；SAH后早期CVS和血浆CA含量增高可能与SAH后早期COMT表达增高不够充分和持久有关.
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双侧同步节律性慢波在幕上肿瘤患者继发癫痫中的的易感性研究
目的 探讨脑电图中出现双侧同步节律性慢波(bilateral synchronous rhythmic slow wave)在幕上肿瘤患者继发癫痫中的易感性.方法 回顾性分析我院自2008年1月至2010年7月255例幕上肿瘤患者的动态脑电图(active electroencephalogram,AEEG)结果,根据术前是否伴有癫痫发作,将病例分为A组(有癫痫发作),B组(无癫痫发作).将脑电图中仅有双侧同步节律性慢波定义为变量a,以痫样放电为参照,对仅出现痫样放电定义为变量b,同时具有双侧同步节律性慢波和痫样放电定义为变量a+b.分析三变量在2组间的差异,探讨变量a与幕上肿瘤继发癫痫的易感性.结果 ①术前变量a在幕上肿瘤患者中的出现率为56.86％.②术前变量a在A组中的出现率高于B组(66.23％vs52.81％,P＜0.05)；A、B两组变量b和a+b出现率比较差异均有显著性(29.87％ vs 9.55％,66.23％ vs 7.30％,P＜0.05).进一步分析两变量之间癫痫发生率的差异显示:A组中出现变量a+b略高于变量b(P ＜0.05).③术后45例出现早期癫痫,其中35例(77.78％) AEEG中描记到变量a或变量a+b,将术后双侧同步节律性慢波的出现率与术后癫痫发作率进行一致性分析得知两者有高度一致性(k=0.600 2).结论 双侧同步节律性慢波可能增加幕上肿瘤患者癫痫发作的易感性.
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丙型肝炎病毒核心蛋白对Wnt信号抑制因子SFRPs甲基化修饰的影响
目的 探讨丙型肝炎病毒核心蛋白是否通过对Wnt信号抑制因子SFRPs的甲基化修饰,从而活化Wnt信号通路.方法 将编码HCV核心蛋白的腺病毒(AdCore)或GFP对照腺病毒(AdGFP)感染SMMC-7721细胞,采用逆转录PCR(RT-PCR)方法检测SFRPs基因mRNA的表达；用5-氮杂-2′-脱氧胞苷(DAC)对AdCore或AdGFP腺病毒感染的SMMC-7721细胞进行去甲基化处理,进一步采用甲基化特异性PCR (MSP)和DNA甲基化测序,检测SFRPs基因启动子区CpG岛的甲基化程度,Western blot检测甲基化转移酶Dnmts的表达.结果 在HCV核心蛋白过表达的SMMC-7721细胞系中,SFRP2和SFRP5基因mRNA的表达量与对照组相比明显降低(P＜0.05)；甲基化分析结果表明:SFRP5基因启动子区CpG岛呈现高甲基化修饰；甲基化转移酶Dnmt1、Dnmt3a表达量增加(P＜0.05).结论 HCV核心蛋白可以促进SFRP5基因启动子区CpG岛的甲基化修饰,参与HCV相关疾病的发生.
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抗C1q抗体及抗ENA抗体与系统性红斑狼疮疾病活动和肾脏受累的关系
目的 探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者血清中抗C1q抗体及抗ENA抗体与SLE疾病活动状态和肾脏受累的关系,揭示抗C1q抗体、抗ENA抗体在疾病诊断及评判中的临床价值.方法 将来自本院123例SLE患者按疾病活动状态以及是否满足狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)诊断条件分为LN活动组、非LN活动组、LN稳定组和非LN稳定组.患者24h内收集血、尿标本,分别用ELISA法检测抗C1q抗体；斑点印迹法检测抗ENA抗体；干式化学法检测尿蛋白；用全自动生化分析仪检测血β2微球蛋白(β2-MG)和肌酐(CREA).结果 β2-MG阳性率:LN活动组与非LN活动组(88.6％ vs 59.4％)、LN稳定组与非LN稳定组(66.1％ vs 47.4％)比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01)；CREA阳性率:LN稳定组与非LN稳定组相比差异有显著性(27.8％ vs 0.0％,P＜0.01)；尿蛋白“++++”阳性率:LN活动组(42.9％)与非LN活动组(12.5％)、非LN稳定组(2.6％)比较差异有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01)；抗C1q抗体阳性率:LN活动组与非LN稳定组相比差异有统计学意义(68.6％ vs 36.8％,P＜0.05).抗C1q抗体阳性与阴性组间尿蛋白“++++”、“+”阳性率比较差异有显著性(26.2％ vs 11.3％,14.8％ vs 38.7％,P＜0.05).结论 SLE患者肾脏损害常发生于疾病活动期,抗C1q抗体和部分抗ENA抗体可能是加重肾脏损害的因素.实验室监测抗C1q抗体及β2-MG的水平对预测SLE患者肾脏损害有积极指导意义.
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Calpain2调节自噬相关基因ATG7的表达在非酒精性脂肪性肝病中的作用
目的 明确Calpain 2及自噬相关基因7(autophagy related gene7,ATG7)在非酒精性脂肪性肝病中的表达变化及意义.方法 应用高脂饮食喂养SD大鼠建立非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)在体模型,并按时相点分为4、8、12周及16周组,同时设立正常饮食组为对照组,每组6只.检测各组大鼠血清ALT、AST、FFA水平,通过HE染色观察肝脏脂肪变情况,利用Real-time PCR及Western blot检测Calpain 2及ATG7的表达变化.结果 ①HE染色提示肝脏脂肪变程度随高脂饮食喂养时间的延长而加重.NAFLD大鼠模型各时相点血清ALT、AST、FFA水平均较对照组有不同程度的升高,在16周组时分别为(165.95±7.24 )U/L、(249.52±4.20) U/L、(0.83±0.05) mmol/L,与对照组比较均有明显的升高(P＜0.01).②以正常饮食组为对照组,肝组织Calpain 2 mRNA相对表达量在高脂饮食喂养后开始上调,在16周时升高为明显(9.83±0.85,P＜0.01)；ATG7的mRNA相对表达量在4周组(0.82±0.02)即开始下降,在16周组(0.20±0.03)降至低,与对照组比较降低显著(P＜0.01).③与对照组比较,Calpain 2蛋白相对表达水平与mRNA表达水平一致,4周组(2.32±0.45)时开始上调,16周组明显上升(9.87±1.20,P＜0.01).而ATG7的蛋白相对表达水平则随肝脏脂肪变性的进展明显下降,16周时降低为明显(0.18±0.05,P＜0.01).结论 脂肪肝发生过程中,Calpain 2的表达上调抑制了白噬相关基因ATG7的表达,进而减弱了自噬对细胞的保护作用,导致肝细胞的损伤加重,自噬可能参与了NAFLD的发生.
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急性外伤性广泛前壁心肌梗死救治成功1例
1病例资料患者,男性,26岁,主因发现意识不清36 h,间断性胸痛、气短、发憋24h于2011年3月24日入院.心电图提示:窦性心律,V1-V5 ST段抬高0.1～0.3 mV.查体:血压103/55 mmHg,双肺呼吸音粗,可闻及湿性罗音,叩心界向左侧扩大,心率105/min,心音低钝,各瓣膜听诊区未闻及杂音.心肌酶谱测定:CK2 969 U/L,CK-MB 146 U/L.入院诊断:①冠心病,急性外伤性广泛前壁心肌梗死,killip3级;②肺部挫裂伤.入院后给予抗血小板聚集、抗凝、利尿、减轻心脏负荷等对症治疗.心脏彩超:节段性室壁运动异常,左室扩大(69 mm),左心功能减低(EF=35％),心包积液.
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颈动脉肌纤维发育不良1例
肌纤维发育不良(fibromuscular dysplasia,FMD)是一种非炎症性、非动脉硬化性、节段性、多灶性动脉血管病.约25％的FMD患者表现为脑血管受累,其中颈内动脉受累较为常见,临床可表现为短暂性脑缺血发作(transient ischemic attack,TIA)或脑梗死[1].该病多见于中年女性.本例报道的是l例青年男性患者,提示颈动脉肌纤维发育不良是青年脑卒中患者颈动脉狭窄的常见病因之一.1临床资料患者男性,26岁,因“突发左侧肢体无力伴言语不清3d”于2010年11月入西南医院神经内科.既往体健,无特殊病史及长期服药史,少量饮酒、吸烟.
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1例白塞氏病并发上消化道出血及多发动脉瘤的临床护理体会
白塞氏病( Behcets' Disease,BD)是一种以口腔溃疡、外阴溃疡、眼炎及皮肤损害为临床特征,累及多个系统的慢性疾病[1].临床上少见,其所致上消化道出血及多发动脉瘤更为罕见.我科2010年5月收治1例,经过精心治疗和护理,效果满意,现报告如下.1临床资料患者,男性,55岁,因“腰部疼痛伴左下肢放射性疼痛逐渐加重5d”于2010年5月11日入我院康复科.18日晨起床出现突发性黑蒙、头晕、胸闷、大汗,血压110/80 mmHg,血红蛋白81 g/L,红细胞2.88 g/L,患者近日排柏油样便,留置胃管引流出血性液,考虑上消化道出血,次日转入我科.查体:T36.8℃,P74次/min,血压115/75 mmHg,神志清楚,精神差,贫血貌,胃管4h引流出鲜红色液体约100ml,全腹无压痛,给予止血补液等对症治疗.消化道出血逐渐停止,患者仍诉左股外侧区疼痛,21日我院动脉CT示:肾下腹主动脉瘤,瘤内血栓形成;左髂内动脉瘤.既往病史:白塞氏病史4年,左下肢深静脉血栓1年.于6月23日在局麻下行腹主动脉瘤覆膜支架置入术、左髂内动脉瘤封堵术.患者术中顺利,术后恢复良好,于7月21日痊愈出院.随访6个月,无异常情况发生.
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162例院前急救胸痛患者的病因分析
急性胸痛是急诊就诊较为常见症状之一,因其病因复杂,一些危及生命的病因,如急性心肌梗死、主动脉夹层动脉瘤破裂、肺动脉栓塞和食管穿孔等预后较差,如不及时鉴别、处理,常导致病情迅速发展,从而失去后续治疗时机.因此,尽快鉴别胸痛的病因,对于挽救患者生命非常重要.现对我科2010年4月至2011年4月以胸痛为主诉的162例院前急救患者的病因进行总结,报告如下.
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20例Wernicke脑病的病因、临床表现和影像学特点分析
Wernicke脑病是各种原因引起维生素B(硫胺)缺乏所致的严重的中枢神经系统疾病,其典型的临床“三联症”是精神障碍、眼肌麻痹和眼球震颤、共济失调.早期诊断、及时给予大剂量维生素B能有效阻止疾病进展,甚至可获痊愈[1].但仅约1/3的患者有典型的“三联症”,因此,临床诊断有一定困难,容易误诊、漏诊,延误病情,导致严重致残甚至死亡.有尸检研究证实其生前诊断率仅为20％[2].现对本院诊断的20例Wernicke脑病患者的病因、临床表现、影像学特点进行回顾性分析,以提高对本病的认识,避免漏诊、误诊而延误治疗.
关键词： Wernicke脑病 磁共振成像 -
Plk1和P53蛋白在肾上腺皮质肿瘤中的表达及临床意义
目的 研究Polo样激酶1(polo-like kinase 1,Plk1)和P53在肾上腺皮质良、恶性肿瘤组织中的表达情况及其临床意义.方法 应用免疫组化两步法检测56例肾上腺皮质肿瘤中Plk1和P53蛋白的表达情况.结果 Plk1和P53蛋白在肾上腺皮质癌( adrenocortical carcinoma)患者中的阳性率分别是73.33％和40.00％,在肾上腺皮质腺瘤(adrenocortical adenoma)患者中的阳性率分别是29.27％和4.88％,Plk1和P53蛋白在肾上腺皮质癌组织中的表达高于肾上腺皮质腺瘤组织(P＜0.05).P53蛋白的表达在不同年龄、性别、临床分期、术后生存时间的肾上腺皮质癌患者中差异无统计学意义(P＞0.05)；Plk1蛋白的表达在不同年龄、性别、临床分期的肾上腺皮质癌患者中差异无统计学意义(P＞0.05),在不同术后生存时间的肾上腺皮质癌患者中差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Plk1和P53在肾上腺皮质癌中的表达具有一定的肿瘤特异性,可能是肾上腺皮质癌治疗的理想靶点.
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去甲斑蝥素体外抑制NCI-H446细胞迁移、增殖及促进凋亡
目的 研究去甲斑蝥素(Norcantharidin,NCTD)体外抑制人小细胞肺癌H446细胞迁移、增殖和诱导其凋亡作用.方法 以不同浓度NCTD处理H446细胞24h后,采用细胞划痕试验检测NCTD对H446细胞侧向迁移能力的影响；采用细胞计数检测对体外培养的H446细胞的抑制增殖作用；选用不同浓度的NCTD作用H446细胞48 h后,以Hoechst33258染色观察H446细胞形态的变化,研究NCTD对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的诱导作用.结果 经较高浓度的NCTD干预24h后,H446细胞的侧向迁移速度明显减慢(P＜0.01).细胞计数结果显示NCTD作用于H446细胞后其细胞群体倍增时间延长.NCTD作用H446细胞48 h后,部分凋亡细胞出现染色质凝集、核固缩、核碎裂等形态学改变,细胞凋亡率增加(P＜0.01).结论 NCTD能明显影响人小细胞肺癌H446细胞迁移、抑制其增殖并诱导其发生凋亡.
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视网膜铺片小胶质细胞2种染色计数方法的比较
目的 比较2种视神经损伤后行视网膜铺片小胶质细胞染色计数方法的准确性.方法 取Long Evans大鼠6只,荧光金经双侧上丘及外侧膝状体逆行标记视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs),7d后制作视神经钳夹伤模型.钳夹伤后2周麻醉处死大鼠,将大鼠灌注固定后取眼球剥离完整视网膜,置于4％多聚甲醛中后固定2h,3只大鼠行视网膜铺片对荧光金标记的小胶质细胞进行计数,其余3只在视网膜固定后运用CD11b单克隆抗体免疫组化双重标记小胶质细胞后再行铺片计数.结果 视神经损伤后,活化的小胶质细胞吞噬了死亡RGCs碎屑而被荧光金着色,联合小胶质细胞免疫组化的染色方法能够更加清楚地在视网膜铺片上分辨出活化的小胶质细胞和存活的RGCs,荧光金标记与双重标记小胶质细胞的计数分别为(240.0±7.9)、(406.0±9.1)个/mm2.结论 运用荧光金联合免疫组化双重标记小胶质细胞能够较为准确地对视神经损伤后活化的小胶质细胞进行计数,是研究小胶质细胞更准确有效的染色方法.
