第三军医大学学报杂志
Journal of third military medical university 제삼군의대학학보
- 主管单位： 第三军医大学
- 主办单位： 第三军医大学
- 影响因子： 1.01
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-5404
- 国内刊号： 50-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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RNAi抑制NANOG表达对肝癌细胞HepG2中MDR1表达及阿霉素敏感性的影响
目的 探讨抑制NANOG表达对肝癌细胞HepG2中多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,MDR1)表达及阿霉素敏感性的影响.方法 将靶向NANOG基因的特异性siRNA转染肝癌细胞HepG2,Real-time PCR和Western blot检测siRNA沉默NANOG基因后NANOG、MDR1 mRNA和蛋白的表达,平板克隆形成实验检测沉默NANOG基因后对细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测沉默NANOG基因后对细胞周期的影响,CCK-8法检测沉默NANOG基因后HepG2细胞对阿霉素的敏感性情况.结果 靶向NANOG基因特异性siRNA转染肝癌细胞HepG2后,能有效抑制NANOGmRNA和蛋白表达,与Mock组比值分别为(0.32 ±0.05)和(0.38 ±0.08)；与Mock组比较,沉默NANOG基因后,细胞克隆形成率下降[(8.51±3.63)％vs(17.13±2.24)％,P ＜0.05],进入G0/G1期的细胞比例增多[(75.33 ±8.21)％ vs(57.81±5.05)％,P＜0.05],HepG2细胞对阿霉素的敏感性增强(P＜0.05),HepG2细胞内MDR1 mRNA和蛋白表达下降,与Mock组比值分别为(0.35±0.06)和(0.41±0.08).结论 抑制NANOG表达可引起肝癌细胞HepG2中MDR1的表达下调并增强细胞对阿霉素的敏感性.
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SELEX技术筛选钙通道特异性核酸适配体及其抗肥大细胞活化的作用
目的 筛选针对Orai1分子第1膜外区蛋白的核酸适配体,探讨适配体通过拮抗钙离子释放激活通道(Ca2+ release activation channel,CRAC)抑制肥大细胞活化的效应.方法 构建随机单链DNA文库,利用不对称PCR对单链DNA文库进行扩增.采用聚苯乙烯酶联板为介质的指数富集配体系统进化(systematic evolution of ligand by exponential enrichment,SELEX)技术筛选核酸适配体.利用酶联免疫吸附实验检测各轮筛选序列与靶蛋白的亲和力,验证适配体与靶蛋白的特异性结合；激光共聚焦显微镜观察适配体对细胞内钙离子浓度变化的影响；利用IgE介导的肥大细胞脱颗粒模型,观察适配体对β-氨基己糖苷酶释放的抑制效应.结果 经过12轮SELEX筛选,获得了7条核酸适配体,其中AptamerY1解离常数(Kd值)为1.72×10-8 mol/L.以终浓度2μg/mL的AptamerY1可抑制由IgE介导的人肥大细胞系LAD2钙离子内流,并对LAD2细胞的β-氨基己糖苷酶释放抑制率达95％.结论 通过SELEX筛选,获得了7条针对Orai1分子第1膜外区的核酸适配体,所获得适配体可对肥大细胞LAD2钙内流有效抑制,进而抑制肥大细胞活化和β-氨基己糖苷酶的释放.
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某医院近5年肝硬化患者冰冻血浆输注回顾性调查分析
目的 调查分析某医院近5年肝硬化患者临床资料,重点探讨冰冻血浆(frozen plasma,FP)使用现状.方法 收集某医院2008年7月至2013年6月所有肝硬化住院患者的病历资料,对FP的输注原因、不同Child-Pugh分级患者FP使用情况以及输注FP前后凝血指标的变化等进行统计分析.结果 共纳入肝硬化患者1 511例,其中输注FP者408例(27.0％),主要为乙型病毒性肝炎肝硬化,其次为酒精性和胆汁淤积性.408例患者共接受2 708次FP治疗,合计输注693 800 mL,每例的输注次数和输注量的中位数分别为5次和1 200 mL.首次输注FP的主要原因为改善凝血功能、支持治疗和预防性输注,分别占51.7％、30.9％和8.8％.Child-Pugh分级为C级的患者FP每例的输注量和输注次数均高于A级和B级(P＜0.01).输注FP前PT主要集中于12.1～20 s(72％),APTT主要集中于30.1 ～46 s(62％).INR≤1.4的患者接受FP输注后INR未见缩短,而INR＞ 1.8者则明显缩短.结论 肝硬化患者输注FP的比例和频次均较高,可能存在一定不合理现象.肝硬化患者FP输注指征有待进一步循证学研究.
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Gasdermin A3基因在小鼠皮肤上皮中对NF-κB表达的影响
目的 探讨Gasdermin A3(简写为Gsdma3)基因在小鼠皮肤上皮中对NF-κB表达的影响.方法 通过组织切片与免疫荧光观察Gasdermin A3突变鼠与正常鼠背部皮肤中NF-κB蛋白的阳性表达区域与强弱情况；免疫荧光观察转染Gsdma3质粒后,小鼠皮肤细胞中Gsdma3与NF-κB蛋白的表达情况；RT-PCR检测Gsdma3基因突变或过表达的情况下,在体或离体小鼠皮肤上皮细胞中NF-κB mRNA的表达变化情况；Western blot检测Gsdma3基因突变或过表达的情况下,在体或离体小鼠皮肤上皮细胞中NF-κB蛋白的表达变化情况.结果 在小鼠皮肤上皮细胞中,Gsdma3基因突变导致小鼠皮肤上皮细胞中NF-κB mRNA表达平均降低39.53％,(P＜0.01),蛋白表达平均降低65.03％ (P ＜0.01),免疫荧光检测NF-κB阳性表达在Gsdma3突变的皮肤上皮中明显减弱；Gsdma3的过表达导致小鼠皮肤上皮细胞中NF-κB mRNA表达平均增强56.25％ (P ＜0.01),蛋白表达平均增强199.6％ (P ＜0.01),免疫荧光检测NF-κB阳性表达在过表达Gsdma3的皮肤上皮细胞中明显增强.结论 在小鼠皮肤上皮中,Gsdma3能促进NF-κB的表达.
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颅内出血的轻型颅脑损伤患者计划性CT复查必要性的探讨
目的 研究入院首次行CT检查发现有颅内出血的轻型颅脑损伤患者,有无必要行计划性头颅CT复查.方法 收集符合标准的病例共117例,分成计划复查组与非计划复查组.计划复查组指伤后即使临床表现稳定,仍在首次CT检查后6h内、24 h、3、5d及7d复查.非计划复查组则在患者出现神经系统症状体征恶化时复查,如无临床表现恶化,则在出院前1d予以复查.比较2组在入院时的基本资料、首次头颅CT检查结果、影像学进展情况、神经外科专科干预比例、住院天数、出院及预后情况.结果 2组入院时基本情况、首次头颅CT检查结果比较无明显统计学差异(P＞0.05).影像学进展比例、进行神经外科专科干预比例、住院天数、出院时GCS评分及6个月后预后评分2组间比较无统计学差异(P＞0.05).结论 首次行头颅CT检查发现有颅内出血的轻型颅脑损伤患者,密切观察神经系统症状体征,则可以不必要进行计划性头颅CT复查.
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miR-4686对A549细胞球增殖的调控作用及其机制研究
目的 研究miR-4686对A549细胞球增殖的调控作用及其相关机制.方法 培养A549细胞,从中分选出CD133+ CD44+ A549细胞并置于无血清培养基中培养,形成细胞球后进行CD133+ CD44+表达检测.Western blot检测A549细胞和A549细胞球中Wnt5a、Wnt2蛋白的表达；合成miR-4686抑制物和阴性对照,分别转染A549细胞球48 h后,应用Real-time PCR检测转染前后miR-4686的表达变化后,使用Real-time PCR和Western blot分析Wnt5a、Wnt2以及β-catenin mRNA和蛋白的表达变化,利用MTT检测12、24、48 h细胞的增殖能力.结果 流式细胞术检测A549细胞球CD133+ CD44+表达为69.800％；A549细胞球分别转染miR-4686抑制物和阴性对照物后,miR-4686的表达以及Wnt5a、Wnt2和β-catenin mRNA和蛋白的表达较对照组和miR-4686阴性对照物组显著下调(P ＜0.05)；A549细胞球转染miR-4686抑制物后12、24、48 h,其OD值显著低于对照组和miR-4686对照物干预组(P＜0.05).结论 miR-4686介导Wnt信号通路发挥调控A549细胞球增殖的作用,其可成为治疗肺癌的潜在靶点.
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达芬奇机器人辅助和传统腹腔镜肾盂输尿管成形术治疗肾盂输尿管连接部梗阻的临床对比分析
目的 对比达芬奇机器人辅助和传统腹腔镜肾盂输尿管成形术治疗肾盂输尿管连接部梗阻(ureteropelvic junction obstruction,UPJO)的临床疗效、安全性、手术时间和住院日.方法 回顾性对比分析78例因UPJO接受肾盂输尿管成形术患者的一般资料、手术治疗有效率、手术时间、出血量、围手术期并发症和住院日.78例患者中,32例患者接受达芬奇机器人辅助腹腔镜肾盂输尿管成形术(RA-LPP),46例接受传统腹腔镜肾盂输尿管成形术(C-LPP).结果 RA-LPP组患者出血量和住院日分别为47.8 mL和5.7d,显著低于C-LPP组患者的72.3 mL和6.9d(P＜0.05,P＜0.01).RA-LPP 组和C-LPP组患者的年龄、性别组成、体质量指数(BMI)和UPJO左右侧分布无统计学差异(P＞0.05).两组患者手术时间、围手术期并发症发生率和手术治疗有效率无统计学差异(P＞0.05).结论 RA-LPP将逐渐替代C-LPP,在有条件的医院成为治疗UPJO的新选择.
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金黄色葡萄球菌agr基因敲除及其对膜泡毒力影响
目的 利用同源重组技术构建金黄色葡萄球菌RN4220附属基因调节系统(agr)的敲除株,探讨agr基因缺失对金黄色葡萄球菌分泌膜泡毒力的影响.方法 分别扩增agr基因的上下游同源臂,利用重叠PCR获得agr基因上下游同源臂的融合片段,经酶切后连接敲除载体PYT3,构建同源重组质粒pYT3::△agr,电转化至金黄色葡萄球菌RN4220,利用pYT3质粒对温度敏感的特点筛选agr缺失的突变株.分别制备野生菌RN4220和突变株RN4220::△agr的膜泡,小鼠毒力实验观察agr基因缺失后对金黄色葡萄球菌膜泡毒力的影响.结果 同源重组质粒pYT3::△agr通过酶切鉴定证明构建成功；经PCR及DNA测序证实获得金黄色葡萄球菌RN4220 agr缺失突变株,重组效率为5.6％；agr突变株与野生株相比,其分泌膜泡的毒力大大降低,72 h内小鼠存活率为100％.结论 agr基因缺失后能够显著降低膜泡的毒力.
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TCF4对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株生物学行为的影响
目的 探讨T细胞因子4(T cell factor 4,TCF4)小干扰RNA(siRNA)对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株TCF4基因表达的抑制作用及对细胞增殖、迁移、侵袭及周期的影响.方法 转染TCF4 siRNA至A431细胞株.应用RT-PCR检测A431细胞TCF4 mRNA的表达,Western blot检测TCF4蛋白的表达,CCK-8方法检测上述各组细胞增殖率(1、2、3、4d及5d),小室迁移实验检测细胞迁移情况,Transwell实验检测侵袭情况,流式细胞仪检测细胞周期(24 h).结果 与未转染A431细胞株和转染空载体的A431细胞株比较,转染TCF4 siRNA表达载体1、2、3、4d及5d的细胞增殖率明显降低(P＜0.05)；TCF4 siRNA表达载体组细胞迁移和侵袭能力明显下降(P＜0.05)；细胞周期分析发现转染TCF4siRNA使得A431细胞株出现明显的G2/M期阻滞现象.结论 采用TCF4特异性siRNA能够抑制皮肤鳞状细胞癌TCF4的表达,从而抑制皮肤鳞状细胞癌的增殖.
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体外膜肺氧合技术对兔失血性休克肺的保护作用
目的 探索体外膜肺氧合(extracorporeal membrane oxygenation,ECMO)技术对兔失血性休克肺的保护作用.方法 采用兔失血性休克模型(24只,雄性,生理年龄6～7月龄,体质量2～3 kg)；维持休克3h后分为3组,未复苏为A组,单纯采用晶体+输血复苏为B组,体外膜肺氧合联合全血和晶体复苏为C组.复苏2h后分别观察各组血流动力学改变,行肺泡灌洗观察肺通透性,肺组织采取HE染色光镜下观察病理改变并评分；ELISA法检测肺组织髓过氧化酶变化；并进行统计分析.采用DNA断裂原位末端标记法发检测肺组织细胞凋亡情况以及采取Western blot方法观察半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达情况.结果 血流动力学:C组的收缩压、舒张压以及平均动脉压较A组和B组均明显回升(P ＜0.05,P＜0.01).肺组织HE染色光镜下观察C组病变轻,病理评分C组轻(P＜0.05).采用DNA断裂原位末端标记法发检测发现C组凋亡轻(P＜0.05,P＜0.01).Western blot检测结果显示A组Caspase-3表达高,C组轻.肺组织髓过氧化酶检测结果显示A组Caspase-3高,C组轻(P＜0.05).肺灌洗考马斯亮蓝蛋白浓度检测结果显示A组蛋白浓度高,C组低(P＜0.05).结论 采取体外膜肺氧合联合全血和晶体复苏不仅有利于兔失血性休克延迟复血流动力学的改善,还能明显减轻兔失血性休克肺的病理损伤、肺组织髓过氧化物酶的表达、抑制细胞凋亡以及保护其肺通透性.
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聚甲基丙烯酸甲酯静电纺丝纳米纤维的拓扑结构对于PC12细胞神经突生长能力和方向的影响
目的 探讨不同拓扑结构的聚甲基丙烯酸甲酯(polymethylmethacrylate,PMMA)电纺纳米纤维对于PC12细胞神经突生长能力及生长方向的影响.方法 构建具有随机或有序拓扑结构的PMMA电纺纳米纤维并评估其生物相容性；利用PMMA薄膜作为对照,利用慢病毒技术转染绿色荧光蛋白基因作为显色手段,分析PC12细胞在纤维支架上的神经突生长能力和生长方向,以及神经突与纤维结构的依存关系.结果 PMMA电纺纤维具有良好的生物相容性,PC12细胞能够在电纺纤维上顺利贴壁并分化；在PMMA薄膜、随机或有序纤维系统上,PC12分化生成的神经突的长度分别为(60.2 ±29.9)、(64.1-±32.5)、(85.7±39.8) μm,和培养在薄膜及随机纤维上的细胞相比,培养在有序纤维上的PC12细胞能够分化出长度更长、且与纤维延伸方向一致的神经突(P＜0.01)；相比随机电纺纤维,有序纳米纤维对PC12神经突更具引导作用.结论 有序电纺纳米纤维具有作为神经损伤后植入性细胞支架的潜力.
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Aβ25-35诱导PC12细胞内Ca2+浓度升高和自噬发生
目的 研究Aβ25-35对PC12细胞内Ca2+浓度和自噬发生的影响.方法 培养PC12细胞,分别用0、5、10 μmol/L Aβ25-35处理24 h,用MTT法测定细胞存活率,流式细胞仪检测细胞内Ca2+浓度,单丹磺酰戊二胺(monodansylcadaverine,MDC)染色观察自噬泡,共聚焦显微镜检测LC3-Ⅱ表达,透射电镜观察细胞超微结构.结果 5、10μmol/LAβ25-35处理24 h后,PC12细胞存活率分别为(64.6±2.3)％和(41.3±4.1)％,与对照组相比显著下降(P＜0.05),细胞内游离Ca2+浓度升高(P＜0.05).与此同时,随着Aβ25-35浓度升高,显微镜下可见细胞皱缩、变圆,与对照组相比,细胞内MDC阳性颗粒增多,LC3-Ⅱ荧光强度增强(P＜0.05),与Aβ25-35呈浓度依赖关系.电镜下可见单(双)层膜样自噬体.结论 Aβ25-35诱导PC12细胞发生自噬呈浓度依赖关系,其发生可能与细胞内游离Ca2+浓度升高有关.
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舒林酸下调COX-2和乙酰肝素酶对内皮祖细胞迁移趋化能力的影响
目的 探讨舒林酸抑制卵巢癌SKOV-3细胞环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,Cox-2)表达影响共培养体系中内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)迁移趋化能力的可能机制.方法 分离鉴定EPCs；半定量RT-PCR检测不同浓度舒林酸分别作用不同时间后卵巢癌SKOV-3细胞中COX-2基因表达变化及Western blot检测SKOV-3细胞中COX-2蛋白表达变化；处理后SKOV-3细胞与EPCs共培养,观察EPCs迁移趋化能力；Western blot和ELISA检测SKOV-3细胞中乙酰肝素酶(heparanase,HPA)含量.结果 半定量RT-PCR检测显示舒林酸对卵巢癌SKOV3细胞COX-2基因抑制作用存在剂量-时间依赖性(P＜ 0.05)；Western blot结果显示2 mmol/L舒林酸作用48 h后卵巢癌SKOV-3细胞中COX-2蛋白水平显著降低(P＜0.05)；共培养后实验组EPCs迁移趋化能力明显降低(P＜0.05)；Western blot结果分析显示COX-2与HPA表达呈显著正相关(r=0.977,P＜0.01)且迁移趋化能力与SKOV-3细胞表达HPA水平呈显著正相关(r=0.870,P＜0.05).结论 舒林酸可能通过抑制卵巢癌SKOV-3细胞COX-2表达并下调HPA水平,降低EPCs的迁移趋化能力.
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人端粒酶逆转录酶启动子转录活性的磁共振成像研究
目的 探索磁共振成像技术检测人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子靶向转录活性的可行性.方法 构建慢病毒Lenti-hTERT-Fth-flag-Puro和对照Lenti-CMV-Fth-flag-Puro载体,将上述载体分别转染端粒酶阳性的肺腺癌(A549)和端粒酶阴性的原代人牙周膜成纤维(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLFs)细胞.进行免疫荧光染色和Western blot检测细胞Fth-flag表达情况,采用普鲁氏蓝铁染色检测细胞摄铁量,MR扫描观察细胞T2* WI信号和T2*值改变.结果 A549细胞转染Lenti-hTERT-Fth-flag-Puro载体后,免疫荧光染色和Western blot检测结果显示转染细胞表达Fth-flag蛋白,未转染细胞不表达Fth-flag蛋白,普鲁氏蓝铁染色示转染细胞摄铁量较未转染细胞显著增加,MR扫描显示转染细胞T2* WI信号(1 340.86±49.21)和T2*值(12.10 ±0.92)较未转染细胞(2 049.08±87.58),(21.44±1.15)显著降低(P＜0.05)；HPDLFs细胞转染Lenti-hTERT-Fth-flag-Puro载体后,细胞无Fthflag蛋白表达,细胞摄铁量较未转染细胞无变化,T2* WI信号(2 225.42±73.43)和T2*值(24.01 ±1.13)较未转染细胞T2* WI信号(2 148.48 ±54.74)和T2*值(23.39±1.72)无显著差异(P＞0.05).而转染对照Lenti-CMV-Fth-flag-Puro慢病毒载体后,A549和HPDLFs细胞均表达Fth-flag蛋白,转染细胞摄铁量较未转染细胞均显著增加,转染细胞T2* WI信号[A549:(1 137.38 ±60.59),HPDLFs:(1 299.16±53.42)]和T2*值[A549:(9.61±1.17),HPDLFs:(11.54±0.74)]均比未转染细胞显著下降(P＜0.05).结论 MR铁蛋白报告基因成像技术可用于检测hTERT启动子转录活性,构建的慢病毒载体有望为恶性肿瘤的靶向诊断提供一种新的方法.
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大鼠增殖抑制基因抑制大鼠胶质瘤细胞的增殖及其机制
目的 观察腺病毒介导的大鼠增殖抑制基因(rat hyperplasia suppressor gene,rHSG)在大鼠胶质瘤细胞(C6)中的表达及其对大鼠胶质瘤细胞增殖的影响,并探讨其作用的机制.方法 用含有rHSG基因的重组腺病毒载体(Adv-rHSG-GFP)转染C6细胞,采用Western blot和免疫细胞化学法检测rHSG蛋白的表达；使用流式细胞仪分析细胞周期,并结合MTT、细胞计数法和平板克隆形成实验观察rHSG对细胞增殖的影响；应用Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期调控蛋白p27 Kip1、p21 cip1的蛋白表达变化.结果 Adv-rHSG-GFP转染组C6细胞中:rHSG蛋白的相对表达量均明显高于未转染组和Adv-GFP转染组(P＜0.01)；流式细胞仪分析结果表明细胞周期被阻滞在Go/G1期,且MTT、细胞计数和平板克隆形成实验显示大鼠胶质瘤细胞增殖受到明显抑制(P＜0.01)；与未转染组和Adv-GFP转染组相比,周期调控蛋白p27kip1、p21Cip1表达升高,PCNA表达降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 rHSG基因过表达能够抑制大鼠胶质瘤细胞增殖,其机制可能是通过参与细胞周期调节发挥作用.
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慢性重型乙型肝炎患者人巨细胞病毒感染及特性分析
目的 研究慢性重型乙型肝炎(chronic severe hepatitis B,CSH)患者人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染特征及基因型分布情况.方法 对2011年4月至2012年12月西南医院感染科住院并诊断为慢性重型乙型肝炎患者132例进行血清HCMV抗体检测,巢式PCR法扩增外周血HCMV DNA(gB基因片段).HCMV IgM或DNA任一阳性定义为HCMV活化,依据结果分为无HCMV活化组(122例)和HCMV活化组(10例),分析2组患者临床特征、gB基因型并构建序列进化树.结果 ①患者HCMV IgG及IgM阳性率分别为100％与3.78％.2组AFP中位值分别为101.75和27.19,差异有统计学意义(P =0.024),其余实验室检查指标差异无统计学意义.无HCMV活化组,男女比例为7.7∶1,死亡2例,前者死于严重的并发症和多种病原体混合感染,后者死于多种并发症和心力衰竭；HCMV活化组(10例),男女比例为4∶1,无死亡病例,其自发性腹膜炎、腹水、肝性脑病、肝肾综合征比率均比无HCMV活化组高；②2组患者MELD评分无显著性差异(P =0.783),无HCMV活化组AFP水平显著高于HCMV活化组(P＜0.05)；③HCMV DNA阳性率5.3％(7/132),其中gB1型占85.71％ (6/7),gB3型占14.29％(1/7),未检测到gB2型和gB4型.HCMV IgM和DNA均阳性2例.结论 CSH患者HCMV DNA检出率高于血清IgM检出率,HCMV基因型以gB1型为主,存在较低比例的HCMV活化,CSH患者发生HCMV活化可能会影响疾病的转归.
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瓣膜置换同期双极射频消融术后呼吸功能变化研究
目的 探讨瓣膜置换术同期双极射频消融术后呼吸机支持时间及术后早期恢复情况.方法 回顾性分析160例2011年瓣膜病伴慢性心房颤动,病史超过6个月的瓣膜手术病例,根据手术方式分为3组,消融组(MVR+ COX):行人工二尖瓣置换同期双极射频消融术75例；二尖瓣置换组(MVR):单纯行二尖瓣置换术42例；双瓣置换组(DVR):行人工主动脉瓣及二尖瓣置换术43例.比较3组术后呼吸机支持时间、动脉血气氧分压(PaO2)、动脉血气氧分压/给氧浓度(PaO2/FiO2)、术后引流量及术后第1、7天胸片结果.用年龄、体质量、体外循环时间、主动脉阻断时间、术前PaO2及手术方式与术后呼吸机支持时间行Logistic回归分析.结果 呼吸机支持时间、术后引流量消融组均比MVR组及DVR组多；术后PaO2及PaO2/FiO2较其他组偏低(P＜0.05)；术后第1天胸片提示肺部感染比例稍高,但第7天胸片检查结果无明显差异；Logistic回归分析显示,手术方式与术后呼吸机支持时间明显相关(P＜0.05).结论 瓣膜置换术同期双极射频消融较单纯瓣膜置换术术后早期呼吸功能恢复稍慢,可能与肺损伤有关.
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婴儿双歧杆菌介导HSV-TK/GCV对裸鼠肾癌组织细胞凋亡及p-Stat3、Bcl-xL表达的影响
目的 评价婴儿双歧杆菌介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)/丙氧鸟苷(GCV)自杀基因治疗系统对裸鼠肾癌的疗效,初步探讨其诱导肾癌组织细胞凋亡及对肾癌组织p-Stat3、Bcl-xL表达的影响.方法 采用肾癌786-O细胞悬液皮下注射法建立裸鼠肾癌模型,将模型裸鼠分为4组,分别经尾静脉注射生理盐水(生理盐水组)、婴儿双歧杆菌(婴儿双歧杆菌组)、携带空质粒pGEX-5X-1的婴儿双歧杆菌(空质粒组)、携带重组质粒pGEX-TK的婴儿双歧杆菌(重组质粒组),再联合腹腔注射GCV.治疗4周结束后,称取各组裸鼠质量及荷瘤质量.TUNEL染色法检测各组肾癌组织细胞凋亡情况.免疫组化染色法检测各组肾癌组织p-Stat3、Bcl-xL蛋白表达情况.Real-time PCR检测各组肾癌组织Stat3、Bcl-xL mRNA表达水平.Western blot检测各组肾癌组织p-Stat3、Bcl-xL蛋白表达水平.结果 治疗后,重组质粒组较空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组裸鼠质量增加(P＜0.05),荷瘤质量降低(P＜0.05).TUNEL染色结果显示重组质粒组凋亡指数明显高于空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组(P＜0.01).免疫组化染色结果显示重组质粒组肾癌组织p-Stat3、Bcl-xL蛋白表达明显低于空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组(P＜0.01).重组质粒组肾癌组织Star3、Bcl-xL mRNA及p-Stat3、Bcl-xL蛋白表达水平较空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组明显下调(P＜0.01).结论 婴儿双歧杆菌介导HSV-TK/GCV自杀基因治疗系统明显抑制裸鼠肾癌生长,可能通过抑制Stat3活化进而阻断Stat3信号转导通路,下调其下游抗凋亡蛋白Bcl-xL的表达来诱导裸鼠肾癌组织细胞凋亡,发挥抑瘤作用.
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猪颈动脉支架植入术后PPAR-γ的表达变化及对血管平滑肌表型转化的影响
目的 探讨核转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPAR-γ)在猪颈动脉支架植入后的表达及对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型转化的影响.方法 小型猪12只,为3组:①正常对照组(4只)；②支架植入组(4只)；③罗格列酮(ROSI)治疗支架组(4只).应用血管造影观察血管形态；应用免疫组织化学方法观察支架段血管病理组织形态及PPAR-γ的表达；Western blot检测支架段血管中PPAR-γ平滑肌22α(smooth muscle 22 alpha,SM22α)蛋白的表达并分析其与血管重构过程中VSMC表型转化的关系.结果 ①血管造影显示3个月后支架植入组狭窄程度较ROSI治疗支架组显著[分别为(1.46±0.14)、(0.91±0.13)mm,(P＜0.05)].②HE染色结果发现支架植入组血管内膜平滑肌增生较ROSI治疗支架组明显；免疫组化示支架植入组血管中PPAR-γ的表达评分较正常对照组、ROSI治疗支架组低[分别为(0.90 ±0.22)、(5.85 ±0.29)、(5.04±0.46),P＜0.05,ROSI治疗支架组与正常对照组间PPAR-γ表达无显著差异(P＞0.05)].③Western blot检测结果显示:支架植入组PPAR-γ/SM22α的表达水平值低于正常对照组[分别为(3.12±1.42)％/(16.72 ±5.34)％、(19.87±5.33)％/(68.85 ±9.73)％,P＜0.05],VSMC表型由收缩型向合成型转化；ROSI治疗支架组PPAR-γ/SM22α的表达[(23.17±4.23)％/(58.63±12.81)％]高于支架植入组(P＜0.05),VSMC表型由合成型向收缩型转化；ROSI治疗支架组PPAR-γ/SM22α表达水平与正常对照组相比无显著差异(P＞0.05).结论 PPAR-γ参与了支架植入术后VSMC表型转化过程,PPAR-γ可能是治疗支架植入术后再狭窄的潜在靶点之一.
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MRI诊断Lhermitte-Duclos病1例
Lhermitte-Duclos病(lhermitte-duclos disease,LDD),又称小脑发育不良性神经节细胞瘤,是一种罕见的起源于小脑皮层的缓慢进展性占位性病变,早由Lhermitte和Duclos报道并命名[1].LDD在MRI上常有典型的影像学表现.本院收治1例,经MRI诊断和病理证实,现报告如下.1 临床资料患者,男性,因头部不适在当地医院查头颅MRI发现右侧小脑占位,为求进一步治疗来我院就诊,以"右侧小脑占位"于2013年10月15日收入院.体格检查:神志清,查体合作,四肢活动可,肌力V级,病理征阴性.头颅MRI示:右侧小脑半球及桥小脑结合臂片状长T1混杂长T2信号,其内弥漫性夹杂不规则线条样更长T1短T2信号影,病变整体呈斑纹状(图1A、B),DWI高b上呈等信号;相邻脑干、四脑室受压变形,局部中线结构稍向左侧偏移.
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2型脯氨酸羟化酶在结直肠癌中的表达及临床意义
目的 检测脯氨酸羟化酶(proline hydroxylase domain 2,PHD2)在结直肠癌及癌旁肠黏膜中的表达,探讨分析其临床意义.方法 应用组织芯片技术结合免疫组化法检测本校3所附属医院收治的结直肠癌患者术后149例组织标本以及相应50例癌旁肠黏膜和50例结直肠癌原发及转移灶中PHD2蛋白的表达.结果 PHD2在149例结直肠癌组织中阳性表达率显著低于癌旁肠黏膜(48.9％ vs 72.0％,P＜0.01),并与肿瘤的分化程度、临床分期、转移等密切相关(P＜0.01)；在50例结直肠癌原发灶中阳性表达率高于相应转移灶(64.0％ vs 46.0％,P＜0.01).结论 PHD2在结直肠癌组织中表达低于癌旁肠黏膜,在结直肠癌原发灶中表达高于相应转移灶,在结直肠癌的恶性进展中发挥着重要作用.
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弥散张量联合荧光素钠指导功能区胶质瘤手术治疗价值
目的 探讨术前弥散张量成像(diffusion tensor imaging,DTI)联合术中荧光素钠显像指导功能区胶质瘤手术治疗价值.方法 对2010年2月至2011年6月在我院采用DTI联合荧光素钠手术和传统手术治疗且获得随访月份≤24个月的功能区胶质瘤患者的病历资料进行回顾性分析,DTI联合荧光素钠组21例术前均行增强MRI、DTI联合术中应用荧光素钠显像,传统组22例术前均行增强MRI.术后第1天均行增强MRI检查患者肿瘤切除程度、术后2周用Karnofsky评分评价患者生存质量、术后均行同步放化疗3个月以上,观察患者术后2年的生存率.结果 术后增强MRI示观察组在肿瘤的全切率上显著高于对照组,术后2周Karnofsky评分观察组显著高于对照组,观察组术后2年的生存率显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 弥散张量成像联合荧光素钠显像技术能确保术中低程度破坏功能纤维束而大程度切除肿瘤,提高患者生存质量和生存时间.
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有晶状体眼后房悬浮型人工晶体植入术后晶状体前囊混浊1例
1 临床资料患者,男性,19岁.于2013年6月13日在我院眼科屈光中心检查:视力:右0.06,左0.04;眼压:右13 mmHg,左12 mmHg;屈光度:右-25.25 ～4.00 DC×15→0.2,左-25.00～2.50 DC×15→0.2;角膜厚度:右542 μm,左537 μm;眼部B超提示双眼玻璃体混浊,双眼高度近视眼底改变,角膜内皮细胞计数:右2 631个/mm2,左2 610.4个/mm2;超声生物显微镜(UBM)显示:前房深度右3.04 mm,左3.08 mm,晶状体位正,全周房角开放,睫状体未见明显脱离回声.
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ERβ1影响乳腺癌上皮间质转化和侵袭迁移的初步实验研究
目的 探讨雌激素受体β1(estrogen receptor β1,ERβ1)能否通过调控E-钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad)的表达影响乳腺癌细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的发生,ERβ1在乳腺癌细胞侵袭迁移中的作用.方法 通过脂质体法将ERβ1真核表达质粒和特异性siRNA-ERβ1转染至人乳腺癌MDA-MB-231细胞中,干预细胞中ERβ1的表达,采用RT-PCR、Western blot法分别在mRNA和蛋白水平观察干预ERβ1后对E-cad表达的影响,进行体外侵袭迁移实验,观察干预细胞中ERβt的表达对乳腺癌细胞恶性生物学行为的改变.结果 过表达ERβ1后,ERβ1及E-cad在mRNA[(0.823±0.028) vs (0.554±0.044),P=0.025;(0.944±0.04) vs (0.724±0.28),P=0.026]和蛋白[(1.331±0.019)vs(0.463±0.019),P=0.001；(1.428 ±0.005) vs (0.500±0.010),P＜0.01]水平均表达升高,侵袭[(45.8±7.4) vs (70.4±13.3),P=0.039]迁移[(75.6±8.8)vs(111.8±15.1),P=0.021]力显著下降,干扰ERβ1表达后,ERβ1及E-cad在mRNA[(0.314 ±0.029) vs(0.554 ±0.044),P=0.030;(0.444 ±0.042) vs (0.724±0.28),P=0.001]和蛋白[(0.353 ±0.017) vs (0.463 ±0.019),P=0.032;(0.397±0.034) vs (0.500±0.010),P=0.024]水平均表达降低,侵袭[(193±22.6) vs (70.4±13.3),P＜0.05]迁移[(264.2±53.7) vs (111.8±15.1),P=0.002]力显著增强.结论 ERβ1可能参与乳腺癌的EMT过程,进而影响乳腺癌细胞的侵袭转移能力.
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长期尿道皮肤瘘形成的罕见会阴部包块1例
骑跨伤和骨盆骨折是导致男性尿道损伤的主要原因,若能得到及时诊治多数患者预后良好[1-2].本研究报告1例因骑跨伤引起尿道损伤未及时就诊,长期尿道狭窄伴尿道皮肤瘘导致25年后会阴部形成罕见的炎性包块,结合文献简要分析尿道损伤的并发症及诊治问题.1 临床资料患者,男性,55岁,主诉:25年前不慎摔倒后会阴部坐于树桩上,伤后会阴部出血,尿道溢血,未行任何处理.2个月后出现排尿困难,尿线变细,一直未作处理.现病史:查体在肛门与阴囊之间发现8 cm×7cm×5cm球状新生物(图1A),质中,无明显触痛,顶部可见一针尖样小孔,排尿时有尿液溢出.既往史:平时体质较好,否认传染病病史,否认药物过敏史.检查:排泄性尿道造影显示球部尿道狭窄,狭窄段近端结石形成(图1B).临床诊断:①尿道狭窄伴窦道形成;②尿道结石;③会阴部包块.治疗计划:经充分术前准备,行尿道狭窄段切除端端吻合术、窦道切除术、会阴部包块切除术.术中可见窦道源于自尿道狭窄段近端(图1C).病理诊断:切除包块病理诊断为慢性炎症伴窦道形成(图2).随访:经定期尿道扩张,6个月后排尿恢复正常,自由尿流率测定大尿流率达17 mL/s.
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经舟骨骨折月骨掌侧脱位1例
1 临床资料患者,女性,33岁.于2013年7月4日因头部及左腕部被坠落的巨石砸伤就诊于当地医院,诊断为"左侧额部头皮挫伤,左腕皮肤挫伤,全身多处软组织伤",予以头皮及左腕皮肤挫裂伤清创缝合治疗.患者左腕部肿胀、屈伸活动受限症状无好转,复查左腕部CT三维重建检查示:可疑头掌骨稍显脱位.于2013年8月16日就诊于我院.查体:一般情况可.左腕部明显肿胀,桡背侧见一处长约3 cm疤痕,可触及一处骨性突起,腕周压痛明显.左腕部主被动活动均受限,背伸、掌曲、尺偏、桡偏不能.左手掌指关节屈曲因疼痛部分受限,指间关节活动尚可.行左腕部CT三维重建检查示:左腕部舟骨骨折,近端骨折块背侧脱位,月骨掌侧脱位(图1).入院诊断:左腕舟骨陈旧性骨折.
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宫内大量胎骨残留致不孕1例
胎骨残留是少见的并发症,多继发于中期妊娠钳刮术后,少量胎骨残留即可导致继发不孕,国内外文献偶有报道,多可通过宫腔镜诊断治疗.现报告1例我院诊治的胎骨残留患者,其宫腔镜下可见近乎完整的大量胎儿骨骼残留,类似病例中极为罕见.1 临床资料患者,女性,30岁,G3 P0,因"中期妊娠引产术后不孕9年",拟行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)术,要求行宫腔镜检查于2011年10月25日就诊.患者于2002年6月因"妊娠15周"在当地医院行引产术,具体情况不详,术后月经规则,10 ～15/28～30 d,经量中等,无痛经.术后性生活正常,未避孕,一直未孕,男方精液检查正常.
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γδT细胞淋巴瘤/白血病1例
1 临床资料患者,男性,23岁,因反复发热半个月,加重3d于2012年9月22日入我科.入院前半月患者出现发热、畏寒、发热多在午后及夜间,伴盗汗,不伴皮肤瘙痒、无咳嗽、咳痰.入院前3d类似症状再发,体温达40℃,在我科门诊查血常规:WBC 7.6×109,RBC 2.44×1012,Hb 85g/L,PLT 93×109,异形细胞13％,单核细胞18％,以炎琥宁、依替米星治疗,症状无缓解收入院.查体:体温37.5℃,血压96/68 mmHg,皮肤黏膜稍苍白,无皮疹及出血点,巩膜无黄染,颈部、锁骨上、腋窝、腹股沟未触及肿大淋巴结,腹软,肝脾肋缘下未扪及.实验室检查:血常规:WBC 6.47×109,Hb 79g/L,PLT 84×109,异常细胞12％,网织红细胞6.4％;生化:白蛋白27 g/L,总胆红素43.5 μmol/L,间接胆红素33.9 μmol/L,LDH 2069 U/L,钾3.1 mmol/L;降钙素原1.42 ng/mL,血沉100 mm/h,ASO 113 IU/mL(-),CRP127 ng/mL,EBV-IgM(+),EBV-IgG(+);结核抗体阳性.超声:双侧腹股沟、颈部、左侧腋窝小的肿大淋巴结,肝稍大,脾大(长径129 mm,厚59 mm).骨髓涂片:淋巴瘤细胞25％,提示淋巴瘤细胞白血病可能.骨髓流式分型:异常T淋巴细胞增殖,主要表达CD2、CD3、CD7、CD11b、CD11c、CD16、CD38、TCRγ/δ(dim),综合判断γ/δδ-T淋巴瘤等相关T系淋巴瘤/白血病.诊断为γδT细胞淋巴瘤,淋巴瘤细胞白血病.
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复合左旋肉碱在梗阻性无精症中的应用
目的 观察梗阻性无精症患者应用复合左旋肉碱后精子质量变化及行卵细胞胞浆内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection-embryo transfer,ICSI-ET)助孕治疗的临床结局.方法 回顾性分析2010年1月至2013年6月,在西南医院生殖中心诊断为梗阻性无精症,并要求行ICSI助孕治疗患者共129例,移植周期共100例,根据是否服用复合左旋肉碱分为两组,其中研究组服用复合左旋肉碱,共计64例,未服用复合左旋肉碱者36例作为对照组,对比两组治在用药前后经皮附睾穿刺抽吸术(percutaneous epididymal sperm aspiration,PESA)获得的精子活动率、前向运动精子率及经PESA-ICSI治疗后的平均受精数、卵裂数、有效胚胎数、优质胚胎数和临床妊娠率的差异.结果 两组患者男女双方平均年龄、不孕年限无明显差异(P＞0.05)；治疗组精子活动率、前向运动精子比例均较治疗前有明显提高(P＜0.05),治疗组平均获卵数、(metaphase Ⅱ,MⅡ)卵数、2PN数、有效胚胎数、优质胚胎数与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05),但治疗组的临床妊娠率(73.13％)明显高于对照组(36.1％P＜0.05).结论 复合左旋肉碱可改善梗阻性无精症患者的精子质量,提高ICSI助孕治疗的临床妊娠率.
