第三军医大学学报杂志
Journal of third military medical university 제삼군의대학학보
- 主管单位： 第三军医大学
- 主办单位： 第三军医大学
- 影响因子： 1.01
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-5404
- 国内刊号： 50-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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干性基因Nanog在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞增殖与耐药的作用
目的 探讨胚胎干细胞关键转录因子Nanog在膀胱癌组织中的表达及在膀胱癌5637细胞中的作用.方法 采用免疫组化方法检测Nanog蛋白在46例膀胱癌组织中的表达.应用慢病毒载体上调5637细胞中Nanog的表达,通过克隆形成实验检测细胞增殖,通过MTT法检测细胞对化疗药物顺铂的敏感性.结果 膀胱癌组织中Nanog的阳性率为50％,且其表达与组织的病理分级呈正相关,相关系数为0.989(P＜0.05);Real-time PCR和Western blot结果表明感染慢病毒LV-Nanog的5637细胞株中Nanog mRNA和蛋白的表达明显高于感染慢病毒LV-Con的对照组细胞株.5637-C和5637-Nanog的克隆形成率分别为(4.6±0.9)％和(9.0±1.0)％,显示过表达Nanog的5637细胞克隆形成率上升(P＜0.01).以5、10、20、40 μmol/L顺铂处理细胞72 h,对照组5637-C的存活率分别为(64.5±4.9)％、(53.1±4.6)％、(43.4±3.9)％和(21.0±2.7)％,5637-Nanog的存活率分别为(80.9±5.6)％、(68.5±4.2)％、(47.9±5.1)％和(25.2±4.2)％,在浓度为5 μ.mol/L和10 μmol/L时5637-Nanog对顺铂的敏感性降低.结论 Nanog的表达增高与膀胱癌病理分级相关,Nanog基因的表达升高能增强膀胱癌细胞的增殖能力,降低对顺铂化疗药物的敏感性.
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Ⅰ期自体松质骨移植修复胫骨创伤后骨髓炎骨缺损的临床研究
目的 探讨Ⅰ期自体松质骨治疗胫骨创伤后骨髓炎骨缺损的临床疗效.方法 回顾性分析2010年1月至2012年9月收治的18例胫骨骨髓炎患者,包括11例感染性骨不连.彻底清创后Ⅰ期移植颗粒状自体松质骨,外置锁定钢板作为外固定支架.结果 18例患者随访12 ～34个月,平均21个月.其中15例获得骨愈合;2例患者同时发生炎症复发和骨吸收;1例骨不连患者获得骨愈合但需要再次清创;2例患者发生钉道感染,其中1例同时发生骨吸收需要再次植骨.结论 结合外固定支架,彻底清创后选择一些小节段的骨髓炎骨缺损患者行Ⅰ期自体松质骨移植治疗胫骨创伤后骨髓炎可以取得良好的临床效果.
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乙酰半胱氨酸对硫酸鱼精蛋白诱导的大鼠膀胱炎的作用
目的 探讨乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对硫酸鱼精蛋白(protamine sulfate,PS)诱导的大鼠膀胱炎的治疗作用及可能机制.方法 雌性SD大鼠64只,按随机数字表法分为生理盐水灌注组(NS组)、硫酸鱼精蛋白灌注组(PS组)、NS+PS组、NAC +PS组,每组16只.NS组0.5 mL生理盐水灌入膀胱并在膀胱内保留30 min.PS组采用0.5 mL、30 mg/mL PS灌注大鼠膀胱,方法同NS组.NS +PS组和NAC +PS组大鼠在膀胱灌注PS前2h,经腹腔注射0.5 mL NS或0.5 mL 300 mg/kg NAC溶液,灌注方法同NS组.各组大鼠每周处理3次,持续1个月.病理染色及膀胱湿质量检测分析大鼠膀胱炎症、水肿及肥大细胞浸润改变;尿动力学检测大鼠尿动力各项指标;Western blot法检测大鼠膀胱炎症因子IL-6和TNF-α表达.结果 NAC治疗组大鼠膀胱尿动力指标[收缩间歇(330.02±69.49)s]、膀胱黏膜损伤指数(1.37±0.91)及肥大细胞浸润计数(1.93±1.34)均优于PS灌注组尿动力指标[收缩间歇(161.32±58.17)s]、膀胱黏膜损伤指数(2.75±0.46)及肥大细胞浸润计数(3.40±2.19),Western blot法检测显示NAC治疗组较PS灌注组炎症因子IL-6和TNF-α表达也降低(P＜0.01).结论 NAC可显著改善PS诱导的大鼠膀胱炎,其机制可能是降低PS诱导的膀胱炎TNF-α和IL-6的表达,以及减少肥大细胞浸润.
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17β-雌二醇通过上调CXCR4表达促进骨髓间充质干细胞的趋化迁移
目的 研究17β-雌二醇(17β-estradiol,17β-E2)对体外骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)趋化因子受体CXCR4表达的影响及CXCR4表达变化对BMSCs趋化迁移的调控情况.方法 全骨髓法+贴壁法分离、培养BMSCs,不同浓度(10-10、10-9、10-s、10-7、5×10-7、10-6mol/L)的17β-雌二醇诱导经雌激素受体拮抗剂ICI182780处理和未经处理的BMSCs后于不同时相点(24、48 h),用RT-PCR法和Western blot法分别检测细胞趋化因子受体CXCR4的表达情况,利用Transwell小室体外迁移体系观察10-7 mol/L 17β-雌二醇诱导前后的BMSCs对于不同浓度基质细胞衍生因子SDF-1的定向迁移情况,及采用AMD3100阻断SDF-1特异性受体CXCR4后对雌激素诱导前后BMSCs定向迁移的影响.结果 BMSCs在不同浓度17β-雌二醇诱导24、48 h后,其CXCR4mRNA的表达均有不同程度的升高,其中以24h时10-7 mol/L组升高为明显(P＜0.05).CXCR4蛋白表达在24 h各浓度组以升高为主,24 h时5×10-7 mol/L组升高为明显,48 h各浓度组以降低为主.雌激素受体拮抗剂ICI 182780能够明显抑制17ββ-雌二醇对CXCR4表达的影响(P＜0.05).BMSCs对SDF-1的定向迁移有明显的浓度依赖性,且相同条件下17ββ-雌二醇诱导后的BMSCs迁移细胞数显著高于未经诱导的BMSCs,而CXCR4阻断剂AMD3100可明显抑制17ββ-雌二醇干预前后BMSCs的趋化迁移(P＜0.05).结论 17β-雌二醇在一定的诱导时间内可提高BMSCs CXCR4的表达,进而增强SDF-1对BMSCs的体外趋化作用.
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藤黄酸联合舒尼替尼抑制肾癌细胞的增殖
目的 探讨藤黄酸联合舒尼替尼抑制肾癌细胞增殖的作用.方法 单独或联合应用藤黄酸和舒尼替尼分别作用肾癌786-0细胞株,采用MTT比色法、流式细胞技术分别检测细胞活力和周期变化,Western blot检测与细胞周期及血管形成相关的蛋白变化.构建786-0细胞株裸鼠移植瘤模型,以藤黄酸单独或联合舒尼替尼治疗裸鼠移植瘤,测量移植瘤生长情况,免疫组织化学法检测移植瘤生长和血管生长情况.结果 联合应用藤黄酸与舒尼替尼比单药组更显著抑制细胞增殖(P＜0.05),并且更多的细胞周期聚集于sub-G1期(P＜0.05),Western blot显示其与单药组比较Bcl-2表达显著减少,P21表达显著增加,VEGF显著减少(P＜0.05).体内实验显示:联合用药组比单药组更能显著抑制裸鼠移植瘤及血管的形成(P＜0.05).结论 联合应用藤黄酸和舒尼替尼治疗肾癌比单独用药能够更显著抑制肿瘤形成.
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甲磺酸雷沙吉兰治疗原发性帕金森病的随机、双盲、安慰剂对照临床试验
目的 观察甲磺酸雷沙吉兰治疗应用左旋多巴治疗但运动症状有波动的原发性帕金森病患者的疗效和安全性.方法 采用随机、双盲、安慰剂平行对照临床试验观察甲磺酸雷沙吉兰对应用左旋多巴治疗但运动症状有波动的44例原发性帕金森病患者的疗效,观察16周.根据患者日记记录的“关”和“开”期时间、统一帕金森评定量表(UPDRS)各部分评分相对于基线的变化评定疗效.安全性指标为不良反应、血压、心率、实验室检查值和心电图.结果 甲磺酸雷沙吉兰组治疗16周后“关”期时间自基线的(3.18 ±0.65) h/d缩短至(1.90±0.85) h/d,“开”期时间自基线的(10.74±1.44)h/d延长至(12.05±1.72)h/d,与安慰剂组相比差异均有统计学意义(P＜0.05);甲磺酸雷沙吉兰治疗16周后UPDRSⅡ～Ⅳ各量表总评分及各单项评分均得到显著改善.未出现严重不良事件及不良反应.结论 甲磺酸雷沙吉兰治疗应用左旋多巴治疗但运动症状有波动的原发性帕金森病患者有效、安全.
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烧伤患者血浆循环DNA水平的变化及其临床意义
目的 观察烧伤患者血浆循环DNA水平的动态变化,探索血浆循环DNA在判断烧伤后伤情、病情及临床结局中的意义.方法 纳入烧伤面积(BSA)＞ 30％的烧伤患者32例,其中男性25例,女性7例,平均年龄42岁.热力烧伤25例,化学烧伤7例.烧伤至入院中位时间为6.5h.分别于烧伤后1～3、4～7、8～ 14、15 ～ 21 d收集血浆样本共108份,采用血浆DNA提取试剂盒提取血浆样本中的循环DNA,并用PicoGreen荧光染料法测定其浓度,分析其在烧伤病程中的变化规律.结合烧伤伤情(BSA、Ⅲ度烧伤面积、烧伤指数)、急性生理与慢性健康评分(APACHEⅡ),以及多器官功能障碍综合征(MODS)评分,分析血浆循环DNA水平变化的临床意义.结果 32例烧伤患者在入院第1次采血(烧伤后1～3d)的血浆循环DNA水平与BSA、烧伤指数、llⅢ度烧伤面积、APACHEⅡ等伤情参数呈显著正相关(P＜0.01).血浆循环DNA水平随烧伤后时间呈现出先略微抬升而后下降的规律,其中特重度烧伤组及死亡组患者入院时的血浆循环DNA水平分别显著高于同期的重度烧伤组、存活组(P＜0.01).血浆循环DNA水平与患者MODS评分(P＜0.01)及多项临床与实验室指标(P＜0.05)显著相关.入院时血浆循环DNA水平、APACHEⅡ评分、MODS评分、BSA、Ⅲ度烧伤面积及烧伤指数皆与临床结局有显著的正相关.结论 血浆DNA水平与烧伤伤情和病情的变化密切相关,有望作为烧伤后机体受损的严重程度指标与预后指标.
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知觉学习治疗大龄弱视患者的疗效观察
目的 观察知觉学习提高大龄弱视患者视力和对比敏感度(contrast sensitivity,CS)的临床疗效.方法 选择60例弱视患者进行知觉学习,训练前分别测量健眼和弱视眼的佳矫正logMAR视力和7组空间频率对比敏感度,然后遮盖健眼对弱视眼进行知觉训练,每天训练1次,每次约30 min.以10 d为一个疗程,一个疗程结束后再对健眼和弱视眼分别进行矫正后logMAR视力检查和对比敏感度测试.结果 训练前健眼logMAR视力0.020 0±0.105 0,训练后健眼logMAR视力0.0044±0.0996,差异有统计学意义(P =0.023 0);训练前弱视眼logMAR视力0.5327 ±0.381 8,训练后弱视眼logMAR视力0.443 9±0.3044,差异有统计学意义(P=0.0000).健眼训练前后7组空间频率对比敏感度均无统计学差异,弱视眼训练前后0.5、1、2所对应的空间频率对比敏感度差异无统计学意义,4、8、12、16所在空间频率对比敏感度差异有统计学意义(P＜0.05).≤12岁的弱视患者,健眼和弱视眼7组空间频率对比敏感度训练前后差异均无统计学差异;＞12岁弱视患者,健眼训练前后7组空间频率对比敏感度仅12、16所在空间频率对比敏感度差异有统计学意义(P＜0.05),而弱视眼训练前后除空间频率2所在对比敏感度外,其他6组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 知觉学习能显著改善弱视患者的各空间频率对比敏感度和视力,显著提高弱视眼的对比敏感度辨别能力,尤其是高空间频率对比敏感度,同时对健眼也有一定程度的改善.但该学习更适用于配合较好的大龄弱视患者.
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淋巴细胞微粒诱导的小鼠气道炎症模型的建立及评价
目的 利用T淋巴细胞微粒诱导建立小鼠气道炎症模型,探讨淋巴细胞微粒在气道炎症发生中的作用.方法 放线菌素D溶液处理6T-CEM细胞24 h,收集淋巴细胞微粒;50 μg/mL的淋巴细胞微粒灌注BALB/c小鼠气道,24 h后处死小鼠并取肺组织;HE染色检测肺组织的形态变化,ELISA、Western blot和荧光定量PCR法分别检测免疫相关分子NLRP3、TLR4、IL-18和IL-1β的蛋白和mRNA表达水平.结果 HE染色显示淋巴细胞微粒处理组小鼠肺泡细胞聚集且伴随淋巴细胞浸润,ELISA结果显示淋巴细胞微粒处理组小鼠肺组织中IL-18和IL-1β的蛋白分泌水平显著高于正常组(P＜0.01),荧光定量PCR和Western blot结果显示处理组小鼠肺组织中NLRP3、TLR4、IL-18和IL-1β的mRNA和蛋白表达水平显著高于正常组(P＜0.01).结论 淋巴细胞微粒能够诱导小鼠气道炎症反应,其炎症反应与NLRP3、TLR4、IL-18和IL-1β等因子有关.
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肺癌耐药相关基因CA916798核心启动子区域的初步鉴定
目的 对肺癌耐药相关基因CA916798的核心启动子区域进行初步鉴定.方法 采用PCR方法对CA916798基因上游不同长度的序列片段0H ～9H进行扩增,以pGL3-basic载体构建基因报告质粒,转染COS7细胞,荧光素酶检测序列启动活性,酶切鉴定、测序及数据库比对确定核心启动子的可能存在位置,并采用生物信息学方法对核心启动子区域结合位点进行预测.结果 成功构建了启动子荧光素酶报告基因;活性实验表明;9H组与阴性对照组比较,相对荧光强度差异具有统计学意义(P＜0.05);0H～ 8H各组与9H组比较,相对荧光强度差异均具有统计学意义(P＜0.05);9H片段为处于CA916798基因片段上游179 bp处,长度为568 bp的序列区;功能预测显示该区存在多种细胞因子的结合位点.结论 9H序列区域具有较强的启动活性,为基因CA916798的核心启动子序列区域.
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退变性脊柱侧凸后路手术治疗的中期效果分析
目的 探讨经后路手术治疗成人退变性脊柱侧凸的中期临床效果.方法 对我科2010年1月至2012年1月采用后路减压并固定融合手术治疗的36例退变性脊柱侧凸患者进行回顾性分析,影像学检查比较治疗前后冠状位Cobb角、腰椎前凸角及脊柱平衡改善情况,评价矫形效果,结合腰腿痛视觉模拟评分法(VAS)与Oswesty功能障碍指数(ODI)评价患者手术前后生活质量.结果 36例患者包括男性11例,女性25例;年龄42～78岁,平均62.5岁.所有病例全程随访平均2.2年(1.5～3.5年).患者术后各随访时间点影像学测量参数、腰腿痛VAS评分及ODI指数与术前相比差异均有统计学意义(P＜0.05);与术后1年相比,手术2年后的末次随访腰痛VAS(1.96±0.90 vs 2.48±0.77,t=2.942,P＜0.05)与ODI(20.04±8.85 vs 26.48±6.99,t=3.648,P＜0.05)皆得到进一步改善.冠状面Cobb角矫正率为39.9％,腰椎前凸角平均增加约10°,末次随访时患者冠状面及矢状面平衡较术后1年得到进一步改善,差异具有统计学意义(P＜0.05).围手术期切口感染3例,硬脊膜破裂3例,外周神经节功能异常5例,对症处理后皆获得满意疗效.1例患者减压后短节段融合术后1年半时脊柱侧凸加重,行延长固定节段的翻修手术后生活质量明显改善.末次随访影像学检查无断钉、断棒,无螺钉松动及假关节形成.结论 采用经后路减压并固定融合责任节段手术治疗退变性脊柱侧凸,可明显缓解患者疼痛,提高其生活质量,相比短节段而言,长节段固定融合能较好纠正畸形的脊柱、延缓侧凸进展.虽然手术相关并发症较高,但通过积极对症支持治疗,皆可得到良好控制,并不影响手术疗效.
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双特异性磷酸酶5对人胎盘滋养层细胞系BeWo增殖和凋亡的影响
目的 探讨双特异性磷酸酶5 (dual specificity phosphatase 5,DUSP5)基因过表达对人胎盘滋养层细胞系BeWo增殖和凋亡的影响及其可能机制.方法 以携带人DUSP5基因的重组慢病毒感染BeWo细胞,用流式细胞仪分选建立过表达DUSP5的BeWo细胞模型,以携带空载体的慢病毒感染的细胞以及未经任何处理的细胞作对照.经荧光实时定量PCR和Western blot检测DUSP5基因mRNA和蛋白的表达,经CCK-8实验和流式细胞术检测BeWo细胞增殖和凋亡的变化,经Western blot检测磷酸化ERK(p-ERK)、p-p38及p-JNK的变化.结果 ①经荧光实时定量PCR和Western blot证实,成功构建了DUSP5过表达的人胎盘滋养层细胞BeWo细胞模型;②CCK-8实验结果显示DUSP5过表达组在第3、4、5天的光密度值D(490)与其他两对照组相比明显增高(P＜0.01);流式细胞仪结果显示顺铂作用48 h后,DUSP5过表达组与空病毒载体组相比,正常细胞的百分比显著增加而早期凋亡细胞百分比则显著减少(P ＜0.01);Western blot结果显示DUSP5过表达组中p-ERK1/2水平显著下降,而p-p38和p-JNK未见明显变化.结论 DUSP5可促进人胎盘滋养细胞系BeWo增殖、抑制细胞凋亡,以上作用可能与DUSP5抑制ERK信号通路有关.
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强力纤维唇侧夹板在上前牙种植术后过渡性修复中的临床应用
目的 分析强力纤维唇侧夹板用于上前牙种植术后过渡性修复的临床效果.方法 收集上前牙种植患者35例,缺失1颗牙者24例,连续缺失2颗牙者11例.种植术前戴活动义齿,术后采用everStick NET强力纤维、复合树脂及人工塑料牙制作唇侧夹板.临床观察3～6个月,评价夹板使用效果,综合评价美观、舒适、便利、咀嚼功能,评价邻牙菌斑指数及龈乳头高度.结果 ①35例观察3个月,其中33例(94.3％)夹板不松动,修复体完好,2例(5.7％)夹板折断.35例患者中有19例因术中进行骨增量术延长观察期至6个月,16例(84.2％)夹板无松脱,无明显染色,3例(15.8％)夹板松脱.②采用自身对照,唇侧夹板组对美观、舒适、便利及咀嚼功能的综合评分明显高于活动义齿组(P＜0.05).③固定前,固定后1、3个月邻牙的菌斑指数及龈乳头高度均无明显差异(P＞0.05).结论 强力纤维唇侧夹板制作简单、无创、效果可靠、患者满意,对邻牙菌斑控制无明显影响,保持了龈乳头的稳定,对患者的咬合无明显要求,值得临床推广.
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腹腔镜下Roux-en-Y胃旁路术治疗肥胖2型糖尿病患者的近期疗效分析
目的 观察腹腔镜下Roux-en-Y胃旁路术(laparoscopic Roux-en-Y gastric bypass,LRYGB)在肥胖2型糖尿病患者治疗中的近期临床疗效和安全性.方法 纳入我院近3年来行LRYGB手术的肥胖2型糖尿病患者12例,其中男性4例,女性8例;年龄(43.8±10.6)岁;糖尿病病程(8.3±3.9)年;体质量指数(31.3±5.6) kg/m2;空腹血糖(9.4±1.9) mmol/L;HbA1c(8.4±1.6)％.患者均完成术后12个月的随访.以术后停用所有降糖治疗,空腹血糖＜7.0 mmol/L和HbA1c＜6.5％者,判定为2型糖尿病临床完全缓解.观察手术后患者体质量、血糖、血脂、血压、用药用量等变化以及术后相关并发症情况.结果 LRYGB术后12个月患者显著降低体质量(20.4±9.7)kg,显著缩小腰围(23.4±14.1)cm,同时降低HbA1c(2.1±1.7)％.2型糖尿病临床完全缓解7例(58.3％),临床部分缓解5例(41.7％).合并有高血压病、血脂异常的患者术后均停用所有降压、降脂药物.与临床部分缓解组相比,临床完全缓解组的糖尿病病程更短[(4.6±3.3)年粥(10.6±3.7)年,P＜0.05].12例患者无1例死亡.患者术后近期并发症发生1例(8.3％),远期并发症发生1例(8.3％).结论 LRYGB治疗肥胖2型糖尿病患者的近期临床疗效满意,能有效控制患者的血糖、血脂及血压.
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TLR4通过下调ABCA1表达促进平滑肌源性泡沫细胞形成
目的 探讨Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)促进平滑肌源性泡沫细胞的形成是否与三磷酸腺苷-结合盒转运子A1(ATP-binding cassette transporter,ABCA1)表达异常相关.方法 组织贴块法培养原代血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs);细胞分为野生型(Wild type)空白对照组、Wild type氧化低密度脂蛋白(oxLDL)组、TLR4敲除(TLR4-/-)空白对照组和TLR4-/-oxLDL组;油红O染色观察VSMCs内脂质聚集,并用异丙醇萃取油红O测定光密度值;RT-qPCR、Western blot检测VSMCs中TLR4、ABCA1、IL-1β及TNF-α mRNA和蛋白表达水平;细胞免疫荧光染色鉴定原代VSMCs及观察核转录因子-kappa B(NF-κB)核转位.结果 ①Wild type oxLDL组中见细胞内大量脂滴形成,油红O光密度值为Wild type空白对照组的2.3倍(P＜0.01);TLR4-/-oxLDL组中只见少许脂质沉积于细胞内,油红O光密度值与TLR4-/-空白对照组相比无明显变化(P＞0.05).②Wild type oxLDL组ABCA1 mRNA及蛋白表达水平较Wild type空白对照组分别下降61％ (P ＜0.05),44％ (P ＜0.01);TLR4-/-oxLDL组ABCA1 mRNA及蛋白表达水平分别为TLR4--空白对照组的2.3倍(P＜0.05),1.7倍(P＜0.05).③Wild type oxLDL组VSMCs中NF-κB核转位明显增多,IL-1β和TNF-α mRNA表达较Wild type空白对照组分别升高3.9倍(P＜0.05),1.7倍(P＜0.05);TLR4-/-oxLDL组VSMCs中无明显NF-κB核转位,仅IL-1β mRNA表达较TLR4-/-空白对照组升高1.2倍(P＞0.05).结论 TLR4及其调节的炎性反应参与平滑肌源性泡沫细胞形成过程中ABCA1表达异常.
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Frizzled4在小鼠毛囊周期中的表达
目的 探讨Wnt蛋白的受体分子Frizzled4在小鼠毛囊周期中的表达、功能及其意义.方法 利用实时定量PCR、RT-PCR、Western blot和免疫荧光等技术分别检测Frizzled4 mRNA和蛋白在毛囊生长期(P1d、P3d、P8d)、退化期(P16d)和静止期(P21d)中的表达.免疫荧光技术检测Frizzled4在小鼠皮肤上皮细胞JB6 cl30-7b中的定位,MTT检测用抗Frizzled4抗体处理JB6 cl30-7b细胞后的增殖情况.结果 在毛囊生长期早期,Frizzled4 mRNA和蛋白在P1d的小鼠背部皮肤中表达明显,膜表达于Bulge、毛囊外根鞘及毛球外侧.在P3d,Frizzled4蛋白表达明显上调,主要表达于Bulge、毛囊外根鞘、内根鞘、precortex、部分毛球外侧.在生长中期(P8d),Frizzled4蛋白的表达强,集中在毛囊Bulge、外根鞘上段及内根鞘.当毛囊进入退化期(P16d),Frizzled4 mRNA和蛋白的表达显著降低(P＜0.05),此时主要定位于Bugle.而在静止期,Frizzled4 mRNA和蛋白表达低(P＜0.05),只有少量Frizzled4阳性细胞出现在毛囊Bulge.免疫荧光技术检测Frizzled4蛋白同样也在JB6 cl30-7b细胞膜中表达.MTT结果显示与对照组相比,10μg/mL的抗Frizzled4抗体处理JB6cD0-7b细胞后光密度值明显降低(P＜0.05),而20 μg/mL的抗Frizzled4抗体处理后的光密度值降到低(P＜0.05).结论 Frizzled4在毛囊周期中的表达具有时空特异性.伴随着毛囊的生长,Frizzled4的mRNA和蛋白水平都呈现高表达,随着毛囊的退化而表达降低,直至静止期维持低表达水平.拮抗Frizzled4蛋白的作用促使细胞增殖受到明显抑制,提示Frizzled4的表达与毛囊细胞的增殖和分化相关.
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Cbfβ人工miRNA干扰载体构建及稳定细胞株系的获得与鉴定
目的 构建Cbfβ基因干扰载体,获得Cbfβ人工miRNA干扰载体和稳定细胞株系,检测其对间充质干细胞C3H10T1/2细胞成骨分化的影响.方法 设计特异性干扰小鼠Cbfβ基因的人工miRNA序列,构建Cbfβ干扰载体Blockit miRNA-cbfβ-miRNA1/miRNA2,将其转入C3H10T1/2细胞获得稳定细胞株;用BMP-2诱导3d后采用荧光定量PCR(qRTPCR)和Western印迹检测Cbfβ、Runx2和成骨标志基因ALP表达水平.结果 成功构建成骨转录因子Cbfβ的干扰载体并获得了稳定细胞株系,成骨标志基因ALP和Cbfβ的mRNA和蛋白表达水平明显下降(P＜0.05),而Runx2下降不显著(P＞0.05).结论 miRNA-cbfβ-miRNA1/miRNA2载体可以抑制成骨转录因子Cbfβ的功能,进而降低成骨标志基因ALP蛋白和mRNA的表达,并获得可以影响成骨过程的稳定细胞株系.
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沉默PKCδ表达对L02肝细胞脂肪变性和内质网应激的影响
目的 研究蛋白激酶Cδ亚型(protein kinase Cδ,PKCδ)与肝细胞脂肪变性、内质网应激的关系,探讨其在非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)发病机制中的作用.方法 用混合脂肪酸构建人正常肝细胞L02脂肪变性模型,油红O染色和甘油三酯(TG)试剂盒检测细胞脂变程度,实时荧光定量PCR检测PKCδ、Bip、XBP-1smRNA表达,Western blot检测其蛋白表达.通过siRNA瞬时转染技术沉默PKCδ在L02细胞中的表达后观察上述指标表达变化.结果 油酸和棕榈酸酯2∶1混合比例能够成功诱导肝细胞脂肪变性,与对照组单个细胞脂变面积(14.47±9.28)和TG含量(2.30±0.62) μ,g/mg相比,脂肪酸16 h组脂变面积(333.06±42.36)和TG含量(30.86±6.24) μg/mg均显著增加(P＜0.05).脂肪酸组肝细胞PKCδ、Bip,XBP-1s mRNA和蛋白表达水平较对照组显著升高(P＜0.05),具有时间依赖性.在相同脂肪酸诱导液处理的条件下,PKCδ siRNA转染组细胞脂变程度(30.92±1.29)％较对照组(55.32±6.58)％明显减轻(P＜0.05),且PKCδ siRNA转染组Bip、XBP-1s的表达较对照siRNA转染组明显降低.结论 PKCδ在NASH形成发展中发挥重要作用,沉默PKCδ能够通过抑制内质网应激减轻肝细胞脂肪变性程度.
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缬沙坦对糖尿病肾病血液透析患者血压及血压变异性的影响
目的 探讨不同剂量缬沙坦对糖尿病肾病血液透析患者血压和血压变异性的影响.方法 患者来源于承德医学院附属医院血液透析室,诊断为糖尿病肾病(慢性肾衰竭尿毒症期),共54例,其中男性28例,女性26例,入选时间为2006年12月至2012年6月.征得患者同意后将患者分为缬沙坦80 mg晨起顿服治疗组(n=25)和160 mg晨起顿服治疗组(n=29),监测、对比、分析2组治疗前及治疗后12周24h动态血压及各项相关实验室指标.结果 治疗12周后2组患者血压、血压变异性和24h尿蛋白定量水平较治疗前均明显降低(P＜0.05),缬沙坦160 mg治疗组的夜间平均收缩压(night systolic blood pressure,nSBP)(124.76±7.64 vs 138.57±10.98)mmHg,夜间平均舒张压(night diastolic blood pressure,nDBP)(74.45±7.25 vs 79.86±7.08)mmHg,夜间收缩压标准差(night systolic blood pressure variability,nSBPV)(0.0698±0.011 3 vs 0.074 6±0.012 5),夜间舒张压标准差(night diastolic blood pressure variability,nDBPV)(0.085 7±0.009 4 vs 0.095 2±0.008 9)及24h尿蛋白定量水平(1.08±0.39 vs 1.65±0.52)g较80 mg治疗组降低更为显著(P＜0.05).结论 高剂量缬沙坦(160 mg)更能有效控制血压和降低血压变异性,并具有优越的肾脏保护作用.
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FGF2对破骨细胞体外分化以及骨吸收功能的直接调控作用
目的 研究成纤维细胞生长因子2(fibroblast growth factor 2,FGF2)对于破骨细胞(osteoclast,OC)体外分化与功能的直接调控作用.方法 分离野生型C3H/HeJ小鼠骨髓单核细胞,利用核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)以及巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)诱导向破骨细胞分化,同时在实验组中加入FGF2,观察骨髓单核细胞向破骨细胞分化发育过程,鬼笔环肽(phalloidine)染色观察破骨细胞肌动蛋白环(actin ring)变化,Real-time PCR检测破骨细胞Trap、Mmp9、Ctsk以及Clcn7表达,破骨细胞与骨片共培养检测骨吸收功能变化,并用Western blot检测相关信号通路分子表达情况.结果 ①TRAP染色显示实验组与对照组破骨细胞数量无明显差异(P＞0.05);②鬼笔环肽染色提示实验组与对照组肌动蛋白环均正常;③实验组Trap、Mmp9及CtskmRNA表达量均高于对照组(P＜0.05),而Clcn7 mRNA表达2组无明显差异;④体外骨片吸收实验提示实验组骨吸收陷窝面积显著大于对照组(P＜0.05);⑤Western blot检测实验组磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)较对照组表达明显增多.结论 FGF2不影响破骨细胞前体细胞向破骨细胞的分化以及肌动蛋白环的形成,但可以通过ERK信号通路正向调控成熟破骨细胞的骨吸收功能.
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视神经损伤后SDF-1及其受体CXCR4在大鼠视网膜中的分布和表达规律
目的 观察Long Evans大鼠视神经损伤后不同时间基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)及其受体CXCR4在视网膜中的分布及表达变化.方法 将21只成年Long Evans大鼠分为正常组和视神经损伤后1、3、5、7、15d及30 d组,每组3只,采用免疫荧光染色和免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠视网膜SDF-1、CXCR4的分布及表达变化.结果 免疫荧光染色发现视神经钳夹伤大鼠SDF-1主要定位表达于视网膜内、外界膜之间的星形胶质细胞及Müller细胞,并与GFAP共表达,SDF-1阳性细胞数量随视神经损伤时间延长先增多后减少,伤后5d达高峰.CXCR4主要表达于视网膜神经节细胞层、外核层及内核层;Western blot证实视网膜SDF-1的水平随视神经损伤出现先升高后降低的趋势,与正常组相比,视神经损伤组第1、3、5、7天水平显著升高(P＜0.05).而CXCR4的表达在视神经损伤后各时间点无明显改变(P＞0.05).结论 视神经损伤后,视网膜星形胶质细胞及Müller细胞中的SDF-1表达先增强后减弱,且与视神经损伤后胶质活化相关.
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胰岛素自身免疫综合征1例的诊断和治疗
目的 探讨胰岛素自身免疫综合征(insulin autoimmune syndrome,IAS)的发病机制、临床表现、诊断方法和治疗措施.方法 我院收治1例中年男性患者,反复发生低血糖性昏迷,诊断为IAS,结合相关文献复习,对该病的临床特点进行分析.结果 患者因“Graves病”服用甲巯咪唑治疗1个月后,出现“Whipple”三联征,75 g葡萄糖耐量试验发现血糖水平升高,而空腹及餐后免疫活性胰岛素显著增高,餐后胰岛素大于1 000 mU/L.患者胰岛素自身抗体(IAA)阳性.停用甲巯咪唑后,给予泼尼松30 mg/d治疗,并逐渐减量,患者低血糖症状缓解,1年后复查血糖和胰岛素水平恢复正常,IAA阴性.结论 胰岛素自身免疫综合征是一种导致低血糖反复发作的少见病因,可由甲巯咪唑引起,胰岛素水平和胰岛素自身抗体的测定有助于诊断.
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筛窦原发性黑色素瘤1例
黑色素瘤是一种高度恶性的肿瘤,多见于皮肤,较少发生于黏膜.原发性鼻腔鼻窦黏膜黑色素瘤甚为少见,在全身黑色素瘤中所占比例不到1％,在鼻腔鼻窦恶性肿瘤中约占4％[1],且鼻腔多于鼻窦,而在鼻窦中,上颌窦较筛窦更易受累[2].本院收治1例筛窦原发性黑色素瘤,现报告如下.1 临床资料患者,女性,71岁,因鼻塞伴涕中带血3个月入院.
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肺假鼻疽伯克霍尔德菌败血症1例
类鼻疽(melioidosis)是由假鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia seudomallei)所致的地方性传染病,该病世界范围内主要流行于澳大利亚中部、东南亚等热带、亚热带地区,在美洲、欧洲等地也有病例报道[1].在我国,假鼻疽伯克霍尔德菌主要分布在海南、广西、广东和福建等地区[2],其他地方罕有报道.本研究对重庆发现的1例假鼻疽伯克霍尔德菌感染病例报告如下.
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2型糖尿病患者合并成人Still病1例
1 临床资料患者,女性,73岁,以“口渴多饮8年,加重伴发热、尿痛1周”为主诉入院.入院1周前因吹空调着凉后出现发热,体温波动在37.5～39.4℃,伴有尿痛症状,查体温39.0℃,尿常规:白细胞＞ 40/HP,血常规:WBC 17.5×109/L,GR 88.5％,静滴喹诺酮类药物3d症状未见明显好转入院治疗.入院时:口渴多饮,尿频量多,乏力,发热,咽痛,尿痛,手足麻凉,无恶心、呕吐等症状.既往史:冠心病史30年.无家族遗传病史.入院时查:体温37.8℃,脉搏72次/min,呼吸18次/min,血压90/50mmHg.患者神清语明,形体肥胖,气息平稳.全身皮肤黏膜无黄染及出血点,面、颈、躯干及四肢散在红色斑丘疹,以胸背部及双侧大腿为甚,全身浅表淋巴结无肿大.
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C型臂X线机辅助定位下喉深部组织金属异物取出1例
1 临床资料患者,男性,46岁,因颈部外伤后疼痛不适6h以颈部外伤就诊.患者6h前和家人玩耍气弹枪时不慎被铅弹击中颈部正中,顿感疼痛不适,说话费力,吞咽稍有困难,但无明显咳嗽、咯血、气喘,伤后即被送往当地医院就诊.颈椎正侧位片检查提示:颈椎骨质增生,颈5/6椎间隙平面前方可见类圆形高密度影,考虑喉部异物.初步诊断为“颈部外伤、喉部异物”,为行手术治疗遂转来我院.入院时查体:生命体征平稳,颈前正中可见一直径约0.5 cm类圆形弹孔(图1A),少量渗血,局部未见血肿,触痛明显,未触及明显异物.颈部正侧位X线片可见颈椎前方金属异物(图1B、C);颈部CT提示颈部椎体平面前方可见类圆形高密度影,考虑(喉部)异物(图1D).三维成像提示异物存留位置在右侧劈裂或杓间区.电子喉镜检查提示右侧劈裂明显肿胀,未见血迹及黏膜破口.
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颌下腺导管巨大结石1例
1 临床资料患者,女性,42岁,因左侧颌下区反复肿胀疼痛1年余,加重5d,于2014年2月19日到我院口腔科门诊就医.患者1年前出现左侧颌下区肿胀伴疼痛,进食时肿痛愈发明显,1年来肿胀疼痛反复发作,经外院多次静脉输液抗感染治疗,5d前患者复又出现左侧颌下区肿胀,外院抗感染治疗后肿胀未消退,遂到我院求治.检查发现患者左侧颌下区肿胀,可扪及颌下腺肿胀,触痛明显,挤压左侧颌下腺导管口无明显液体溢出.口内见左侧舌下一黄白色质硬物,如图1可见该硬物位于第三磨牙舌侧,部分穿出颌下腺导管及口底黏膜外露于口底.于局麻下行左侧颌下腺导管结石摘除术.
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后侧柱锁定钢板治疗胫骨平台后方骨折11例临床疗效分析
近年来随着CT在临床中的广泛应用以及胫骨平台三柱理论的提出[1],临床医师发现胫骨平台骨折合并内外侧髁后侧劈裂塌陷者并不罕见,但以往没有专门用于胫骨平台后侧柱的内固定钢板系统.我院2010-2012年收治胫骨平台后方骨折11例,应用专利产品胫骨平台后侧柱锁定钢板固定,取得了良好的临床效果,现报告如下.
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120例输卵管妊娠保守性手术和药物保守治疗的生育结局分析
近年来随着人们生活方式和生活水平的提高,异位妊娠发生率居高不下,其中输卵管妊娠是常见的异位妊娠,占95％～98％[1].由于年轻或未生育患者逐年增多,患病后的生育问题越来越受到人们的关注.输卵管妊娠可采用药物保守治疗,也可采用腹腔镜下输卵管保守性手术治疗[2].为探讨何种治疗方式能更好地改善患者的生育结局,我们对以往病例资料进行了回顾性分析,并将研究结果报告如下.
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腹腔镜全胃切除术后早期拔出胃管对患者恢复的影响
传统认为胃肠减压是腹部手术后减少误吸,促进胃肠道功能恢复,预防吻合口瘘发生的重要手段[1].近年来,为了促进患者快速康复,提高患者的生活质量,有文献报道全胃切除术患者可以不置胃管,但尚存在争议[2-3].本研究分析2011年11月至2012年11月我科行腹腔镜全胃切除患者的临床资料,探讨早期拔出胃管的安全性和可行性.
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回生口服液对卵巢癌患者化疗疗效及凝血功能的影响
中医药治疗肿瘤在我国具有悠久的历史,近半个世纪以来,与现代医学相结合,形成了独特的中西医结合肿瘤治疗体系,对进一步提高手术和放化疗的治疗效果、减少其毒副作用以及提高患者生活质量显示出了积极意义.本研究运用辨证与辨病相结合的原理,将回生口服液联合化疗用于卵巢癌的治疗,着重考察其对化疗近期疗效和凝血功能的影响,现报告如下.
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腹膜外途径结肠造口在Miles术中的应用
目的 探讨Mlies术中腹膜外途径结肠造口的临床意义.方法 回顾性分析经腹膜外和经腹腔结肠造口的210例行Mlies手术患者的临床资料.腹膜外组107例,男性68例,女性39例;包括腺癌98例,腺鳞癌2例,肛管鳞癌7例.腹腔组103例,男性60例,女性43例;包括腺癌91例,腺鳞癌3例,肛管鳞癌9例.比较2组术后近期及远期造口并发症发生情况.结果 腹膜外组比腹腔组造口旁疝(3 vs 19,x2=13.634,P＜0.01)及造口脱垂(0vs5,P=0.027)发生率低,术后近期并发症、造口狭窄和造口回缩等发生率及术后首次排气、排便时间之间的差异均无统计学意义.结论 经腹膜外结肠造口方法简单,可明显降低造口旁疝及造口脱垂的发生率,临床值得推广.
