第三军医大学学报杂志
Journal of third military medical university 제삼군의대학학보
- 主管单位： 第三军医大学
- 主办单位： 第三军医大学
- 影响因子： 1.01
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-5404
- 国内刊号： 50-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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miR-1182调控胃癌细胞人端粒酶反转录酶的分子机制及其对迁移能力的影响
目的 研究miR-1182在胃癌细胞中调控人端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的机制及对其迁移能力的影响.方法 胃癌细胞MKN28中转染miR-1182类似物,qRT-PCR检测转染后细胞miR-1182的相对表达量,Western blot检测转染后细胞hTERT的表达变化;进一步通过生物信息学预测miR-1182与hTERT mRNA的结合位点,双荧光素酶实验分析miR-1182对hTERT mRNA的作用机制;Transwell实验检测转染miR-1182类似物对MKN28细胞体外迁移能力的影响.结果 qRT-PCR表明miR-1182组的miR-1182的相对表达量(10.168±2.645)明显高于对照组(1.008±0.167) (P ＜0.01).Western blot结果显示在胃癌细胞系中过表达miR-1182后,hTERT的蛋白水平下调.双荧光素酶实验表明miR-1182可与hTERT mRNA的ORF区结合,且其主要结合部位为hTERT mRNA的ORF-1;在Transwell迁移实验中,miR-1182类似物转染细胞后,miR-1182组穿膜细胞数为(23.333±4.509)/视野,对照组穿膜细胞数为(71.000±4.582)/视野,miR-1182组细胞迁移能力明显低于对照组(P＜0.01).结论 miR-1182通过与胃癌细胞hTERT的ORF区结合,从而在转录后水平抑制hTERT的表达,并发现其可抑制胃癌细胞的迁移能力.
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紫绀型先心病患儿心肌组织SOCS3基因启动子甲基化分析及机制研究
目的 探讨紫绀型先心病患儿右心室心肌组织中细胞信号抑制因子3(suppressor of cell signaling 3,SOCS3)基因启动子甲基化水平及其可能机制.方法 选取先心病患儿34例,其中紫绀组18例,非紫绀组16例.取手术中切除的右心室流出道心肌组织作为标本,采用甲基化特异性PCR (methylation specific PCR,MSP)及重亚硫酸盐测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)检测心肌细胞中SOCS3启动子CpG岛甲基化程度.Western blot检测DNA甲基化转移酶3A(DNA methyltransferase,DNMT3A)、DNA甲基化转移酶3B(DNMT3B)蛋白在心肌细胞中的表达情况.结果 与非紫绀组相比,紫绀组SOCS3启动子CpG岛甲基化程度较高,DNMT3A蛋白较高[(0.407±0.469)vs(0.160±0.034),P＜0.05],DNMT3B蛋白无明显差异[(0.054±0.012)vs(0.052±0.093),P＞0.05].结论 紫绀型先心病患儿心肌组织中,SOCS3启动子CpG岛呈高甲基化.高表达的DNMT3A蛋白很可能参与了SOCS3启动子CpG岛高甲基化.高甲基化的SOCS3启动子CpG岛,可能不是调控慢性缺氧适应心肌中SOCS3转录的主要因素.高表达的SOCS3启动子CpG岛以及高表达的DNA甲基化转移酶3A蛋白可能是心肌慢性缺氧适应的一种体现.
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CD44、CD133和TF与肝癌中门静脉癌栓形成及恶性预后相关
目的 探讨肝癌干细胞表面标志物CD44、CD133与组织因子(tissue factor,TF)在肝癌组织中的表达及分析其与肝癌临床病理资料及生存预后间的相互关系.方法 应用免疫组化法检测387例肝癌组织中CD44、CD133和TF的表达,比较其表达与肝癌临床病理资料及预后间的关系.结果 ①387例肝癌组织中CD44、CD133和TF的阳性率分别为60.47％、55.81％和65.12％;CD44与CD133双阳性表达(CD44+ CD133+)阳性率41.60％;CD44、CD133和TF三阳性表达(CD44+ CD133+ TF+)阳性率35.14％;②CD44、CD133与TF单独阳性表达以及CD44+ CD133+和CD44+ CD133+TF+均与肝癌患者门静脉癌栓、TNM分期和Edmendson分级具显著相关性(P＜0.01);③CD90、CD44和CD133蛋白表达呈正相关(P＜0.01);④CD44、CD133和TF阳性组的总生存时间短于阴性组,差异有统计学意义(P＜0.05);CD44+CD133+组总生存时间短于非CD44+ CD133+组总生存时间及CD44+ CD133+ TF+组总生存时间短于非CD44+ CD133+TF+组,差异均有统计学意义(P＜0.01);⑤多因素分析门静脉癌栓、TF+、CD44+ CD133+和CD44+ CD133+ TF+是影响肝癌预后的独立危险因数(P＜0.01).结论 CD44、CD133和TF均与门静脉癌栓形成及恶性预后密切相关,可作为判断患者预后的指标.
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内镜下不同治疗方案对食管吻合口狭窄的疗效分析
目的 探讨内镜下不同治疗方案对食管吻合口狭窄治疗的适应证及疗效.方法 回顾性分析我院2008年1月至2013年6月104例食管吻合口狭窄接受不同内镜下治疗方案(内镜下球囊扩张术、微波凝固术、微波凝固联合球囊扩张术、球囊扩张术联合食管支架置入术以及微波凝固、球囊扩张联合支架置入术)的患者,从治疗间期、治疗总时间,治疗次数等方面分析不同治疗方案对各组食管吻合口狭窄的疗效及预后情况.结果 5种治疗方案均能在短期内有效缓解患者吞咽困难症状,术后1周吞咽困难评分均至少降低1分.5种治疗方案中,所需治疗次数＜5次者以球囊扩张术多(86.67％),所需治疗次数＞ 10次者以微波、球囊联合支架置入治疗多(41.18％);长治疗间隔时间不＜3个月比例高的是球囊扩张治疗(80.0％),小的是微波治疗(28.57％);总疗程＞12个月比例高的是微波球囊扩张序贯疗法(35.7％),小的是球囊支架置入序贯疗法(4.8％).结论 根据食管吻合口狭窄发生部位、狭窄口大直径及各种治疗方法的疗效不同,采用单一微波凝固术或球囊扩张术以及微波联合球囊扩张术、球囊联合支架置入术、微波+球囊联合支架置入术在发挥各单一治疗方案的优势的同时,在短期内缓解患者的吞咽困难、减少并发症的发生方面具有积极的意义.
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HCMV PP65抗原核酸适配子的筛选及活性鉴定
目的 以人巨细胞病毒HCMV PP65抗原为靶分子,筛选与其有高亲和力、高特异性的适配子.方法 采用SELEX技术筛选HCMV PP65抗原特异的适配子,进行亲和性检测以及二级结构预测,以筛选获得的优序列作为捕获适配子,建立基于“磁珠-适配子-抗原-荧光单克隆抗体”的夹心检测方法,实现对PP65抗原的初步检测.结果 本实验经过8轮筛选获得6条与靶物质高亲和性,高特异性结合的适配子.结论 适配子的成功筛选,为建立基于适配子检测HCMVPP65抗原的新方法奠定了基础.
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视网膜干细胞体外诱导分化为神经节细胞的初步研究
目的 探讨诱导视网膜干细胞(retinal stem cell,RSC)分化为视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)的体外培养方法,提供视神经损伤后细胞移植治疗所需的种子细胞.方法 悬浮培养胎龄14dLE大鼠来源的RSC,传2代流式细胞仪和免疫荧光鉴定后,用5％血清、BDNF、DAPT、DAPT联合BDNF4组不同方式诱导14 d.流式细胞仪行成熟RGC特异性标志物thy1.1鉴定,并对DAPT联合BDNF组不同诱导时间点行RGC相关标志物math5、brn3b、thy1.1和神经干细胞标志物nestin、ki67表达的鉴定.结果 传2代的RSCs nestin、chx10、ki67表达强阳性,部分细胞math5表达阳性;5％血清、BDNF、DAPT、DAPT联合BDNF组诱导RSCs 14 d后thy1.1阳性率分别为(11.38 ±1.58)％、(19.10±2.29)％、(23.90±1.09)％、(31.31 ±2.98)％,两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).DAPT联合BDNF组诱导3～5d后部分细胞nestin、ki67、brn3b、math5均阳性表达.结论 使用DAPT联合BDNF诱导,可以提高RSCs在体外分化成RGCs的比率,并且诱导3～5d后,RGCs相关标志物出现,细胞仍具有一定增殖能力.
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ABCG2在非小细胞肺癌厄洛替尼耐药中的作用
目的 探讨ABCG2在非小细胞肺癌厄洛替尼耐药中的作用.方法 厄洛替尼不同浓度(1、5、25 μmol/L)处理A549细胞及其获得性耐厄洛替尼细胞(A549/ER) 12、24、48 h后,荧光实时定量PCR观察ABCG2 mRNA表达变化,Western blot检测p-AKT、ABCG2蛋白表达变化.PI3 K/AKT通路激活剂(IGF-1)和抑制剂(LY294002)分别作用于A549细胞及A549/ER细胞24 h后,荧光实时定量PCR和Western blot方法分别检测ABCG2mRNA及p-AKT、ABCG2蛋白表达变化.流式细胞仪检测加入IGF-1和LY294002后ABCG2外排作用.结果 与未加入厄洛替尼的A549、A549/ER细胞相比,厄洛替尼(1、5、25 μmol/L)作用12、24、48 h后,随着剂量的增加和作用时间的延长,ABCG2的表达与p-AKT水平呈正相关.加入IGF-1 24 h后,A549细胞中ABCG2表达量升高,而加入LY294002的A549/ER细胞,ABCG2表达量下降,并且IGF-1作用24 h后ABCG2外排明显增高.LY294002作用24 h后A549/ER细胞ABCG2外排明显降低.结论 ABCG2经由PI3 K/AKT信号通路介导非小细胞肺癌中厄洛潜尼耐药,且阻断PI3K/AKT通路可逆转由ABCG2介导的耐药.
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Radixin定点突变过表达对HepG2细胞膜转运蛋白Bsep的影响
目的 构建pcDNA3.1-RDX定点突变真核过表达质粒,研究其在胆汁淤积时对HepG2细胞膜转运蛋白胆盐输出泵(bile salt export pump,Bsep)定位表达的影响.方法 从含有RDX野生型质粒中,利用PCR方法钓取RDX野生型基因片段并以野生型为基础进行定点突变,PCR扩增后转入pcDNA3.1载体,其产物转化DH-5α感受态细胞.对长出的单克隆进行菌落PCR鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和比对分析,比对正确即为构建成功的目的质粒.将目的质粒转染HepG2细胞,经G418筛选构建稳转细胞株.提取各株细胞的总蛋白,检测磷酸化RDX是否影响HepG2细胞膜上转运蛋白Bsep的表达.结果 PCR和测序结果均证实pcDNA3.1-RDX WT、pcDNA3.1-RDX T564D、pcDNA3.1-RDXT564A过表达载体构建成功.蛋白免疫印迹表明,与转染pcDNA-3.1-RDX-WT的HepG2相比,转染pcDNA-3.1-T564D的HepG2的Bsep膜蛋白表达量显著增加(P＜0.05),而转染pcDNA-3.1-T564A的HepG2的Bsep膜蛋白表达量有所下降(P＞0.05).结论 成功构建了pcDNA3.1-RDX WT、pcDNA3.1-RDX T564D、pcDNA3.1-RDX T564A过表达载体,并证实RDX的磷酸化能增强HepG2细胞膜上Bsep的表达.
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Nm23-H1在小细胞肺癌中的表达及其与预后的关系
目的 探讨肿瘤转移抑制因子Nm23-H1在小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)中的表达及其与预后的关系.方法 通过免疫组化S-P法检测71例SCLC组织和22例正常肺组织中Nm23-H1蛋白表达情况,根据染色强度和阳性肿瘤细胞数目所占百分比,将其分为高、低表达两组,使用SPSS 19.0软件统计分析Nm23-H1的表达与临床病理及预后的关系.结果 正常肺组织中Nm23-H1蛋白表达显著高于SCLC组织(90.9％ vs 57.7％,P＜0.01);局限期患者Nm23-H1蛋白表达显著高于广泛期患者(66.7％ vs 39.1％,P＜0.05).多因素Logistic回归分析显示,Nm23-H1蛋白可作为SCLC是否转移的独立保护因素(OR=0.32,95％ CI =0.12 ～0.90,P＜0.05).亚细胞定位在正常肺组织与肺癌组织中没有差异,在不同分期之间也没有差异.多因素COX风险回归分析表明只有临床分期为广泛期和年龄≥60岁是SCLC患者总生存的劣势预后因素(年龄:HR=1.03,95％ CI=1.00 ～ 1.05,P＜0.05;临床分期:HR=1.85,95％ CI=1.03 ～ 3.33,P＜0.05).Nm23-H1蛋白表达及亚细胞定位与SCLC患者生存期都没有显著相关性.结论 Nm23-H1在SCLC组织中以细胞质表达为主的低表达,低表达与SCLC的远处转移密切相关,可能是SCLC预后不良的指标之一.
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成人髓核细胞特征性表达基因的筛选与验证
目的 筛选及验证成人健康髓核细胞特征性的表达基因.方法 取2012年4月至2013年12月于我科行脊柱骨折内固定手术患者的髓核及终板软骨组织共13例实验标本.分别对10例标本髓核细胞和终板软骨细胞进行单层培养,提取总RNA、反转录,进行微阵列基因芯片对比分析.通过Real-time PCR分析表达差异较大的基因在转录水平的表达.取余下3对标本经单层培养后对差异表达大的基因进行Western blot检测,分析蛋白水平的表达.结果 通过对髓核细胞和终板软骨细胞进行微阵列基因芯片分析得到15个表达差异在20倍以上的基因.随后通过对这些基因进行Real-time PCR分析,发现POTEB在两种细胞间表达差异大.Western blot检测证明POTEB在髓核细胞中的表达明显高于软骨细胞.结论 POTEB可作为髓核组织工程种子细胞特征性的表达基因.
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急性戊型肝炎病毒感染患者血清中IL-22水平及其临床意义
目的 探讨急性戊型肝炎病毒(hepatitis E vrius,HEV)感染患者血清IL-22水平与肝功能损害、疾病进展和转归的关系.方法 回顾性筛选纳入西南医院感染科收治的2003年2月至2013年6月住院诊断为急性HEV感染患者47例,男性40例,女性7例,年龄(46.4±13.8)岁.根据感染HEV前是否有肝硬化基础分为肝硬化重叠HEV组(n=26)及单纯HEV组(n=21),根据病程中是否发生慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure,ACLF)将肝硬化重叠HEV组分为ACLF组(n=13)及无ACLF组(n=13),同时设置健康对照组(n=15).每3～7天收集患者外周血血清,ELISA检测各组血清IL-22、IL-6、IFN-γ水平,全自动生化仪检测生化指标,结合病情分析IL-22水平与急性HEV感染患者肝损害的关系.结果 与健康对照组相比,单纯HEV组IL-22与IL-6水平升高(P＜0.01),IFN-γ水平无明显升高.与单纯HEV组相比,肝硬化重叠HEV组IL-22、IL-6水平均显著升高(P＜0.01),而IFN-γ水平无差异.ACLF组较无ACLF组IL-22、IL-6及IFN-γ水平更高(P＜0.01).急性HEV感染患者IL-22水平与TBIL、IL-6及MELD评分水平呈正相关,与PTA呈负相关.6例急性HEV感染后发生ACLF的患者IL-22水平随ALT、AST、TBIL及PTA等指标的改善下降.结论 IL-22参与急性HEV感染后肝脏炎性损伤的过程,与肝损害严重程度及病情转归相关.
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缺氧对PC12细胞中miR-210的表达及对细胞线粒体功能的影响
目的 研究缺氧环境下miR-210在PC12细胞中的表达、调控细胞应对缺氧的相关机制以及缺氧对线粒体功能的影响.方法 PC12细胞在1％ O2、94％ N2、5％ CO2条件下进行缺氧培养,采用CCK-8检测缺氧暴露后细胞生存率的变化;用qRT-PCR方法检测PC12细胞中miR-210的表达水平;用Western blot检测线粒体相关蛋白ISCU1/2和COX10的表达情况;采用流式细胞仪测定缺氧暴露后PC12细胞线粒体膜电位的变化;利用高效液相色谱法(HPLC)测定细胞中ATP、ADP和AMP的含量.结果 缺氧暴露降低了PC12细胞存活率,缺氧24 h组和48 h组细胞存活率仅为(63.2±0.1)％和(48.7±0.4)％,显著低于正常对照组(P＜0.05).利用罗丹明123和高效液相色谱法的检测结果表现出缺氧组较对照组线粒体膜电位下降,线粒体内ATP含量显著降低,而ADP、AMP含量显著升高.用qRT-PCR方法检测出在缺氧暴露后PC12细胞中miR-210的表达显著升高.Western blot结果提示ISCU1/2和COX10作为miR-210的靶基因,其表达显著降低(P＜0.05),与缺氧暴露存在着时间-效应关系.结论 缺氧导致PC12细胞线粒体功能障碍,缺氧诱导的miR-210高表达对其靶基因线粒体相关蛋白ISCU1/2和COX10的调控可能是重要途径之一.
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双侧子宫动脉栓塞术治疗晚期妊娠胎盘植入患者临床分析
目的 探讨胎盘植入患者行子宫动脉栓塞术的临床特点、疗效及并发症.方法 回顾性分析2006年1月至2012年12月我科110例胎盘植入患者中的晚期妊娠患者80例[子宫动脉栓塞(uterine artery embolization,UAE)组40例,子宫切除组9例,保守治疗组12例,剔除病例19例]的临床结局、栓塞治疗有效率(如出血减少或停止、月经复潮或再次妊娠)和失败率(如2次栓塞、子宫切除或产妇死亡),并比较3组患者的出血量、输血量、住院时间、胎盘排出和月经复潮时间.结果 3组的年龄、孕周、孕次差异均无统计学意义(P＞0.05).经子宫动脉栓塞术后38例成功止血,有2例未能止血而行子宫切除术.栓塞术后未出现器官局部缺血坏死、神经损伤等严重并发症,发热、下腹痛为常见并发症.3组的出血和输血量、手术时间、住院时间的差异有统计学意义(P＜0.05).对UAE组患者进行为期1年的随访,除9例失访病例,其余患者在随访时间内恢复正常月经,并有2例再次妊娠者.结论 子宫动脉栓塞术治疗胎盘植入的术前准备时间与手术时间短,出血控制迅速且并发症少,保留患者子宫,提高其生活质量.
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乙肝病毒X蛋白通过激活c-myc诱导肝卵圆细胞的恶性转化
目的 研究c-myc对乙型肝炎病毒X蛋白(Hepatitis B virus X,HBx)诱导肝卵圆细胞恶性转化的影响.方法 通过HEK293细胞扩增腺病毒获得高滴度的Ad-EGFP和Ad-HBx,分别感染肝卵圆细胞株WB-F344细胞,通过RT-PCR和Western blot验证HBx蛋白对c-myc表达的影响.应用特异性对应c-myc基因的siRNA转染各组细胞.运用体外成瘤法、流式细胞术、细胞迁移实验,观察c-myc特异性siRNA对HBx诱导卵圆细胞恶性转化的影响.结果 与空白对照组Ad-EGFP相比,实验组转染Ad-HBx后,细胞中的c-myc表达水平增高;WB-F344-HBx细胞Go/G1期细胞比例显著降低、S期细胞比例显著升高;第1天3组细胞都以单细胞形式悬浮生长,随着时间延长,WB-F344-HBx细胞逐渐形成致密的细胞球体并且数量逐渐增多、体积逐渐增大;WB-F344-HBx细胞的迁移能力显著高于对照组.WB-F344-Mock和WB-F344-EGFP组之间各项指标均无明显差异.c-myc基因沉默后,3组细胞间各项指标均无明显差异.结论 乙型肝炎病毒X蛋白通过激活c-myc基因从而诱导肝卵圆细胞恶性转化.
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大承气汤联合嗜酸乳杆菌对重型颅脑损伤小鼠胃肠动力的影响
目的 探讨大承气汤联合嗜酸乳杆菌对重型颅脑损伤(severe head injury,SHI)小鼠胃肠动力的影响.方法 将75只雄性C57BL/6小鼠成功制模后按随机数字表法分为5组:假伤组、大承气汤组、嗜酸乳杆菌组、联合用药组(大承气汤+嗜酸乳杆菌)和生理盐水组,每组15只.于伤后4h干预,干预后1、3、7d取材,检测血浆胃动素(motilin,MTL)含量和小肠推进率,同时采用HE染色法观察脑组织形态学变化.结果 MTL含量:伤后1d,同假伤组比较,生理盐水组明显降低(P＜0.05),而嗜酸乳杆菌组明显高于生理盐水组(P＜0.05);伤后3d,联合用药组均高于生理盐水组和大承气汤组(P＜0.05);伤后7d,生理盐水组较假伤组低(P＜0.05),大承气汤组明显高于生理盐水组、嗜酸乳杆菌组和联合用药组(P ＜0.05,P＜0.01).小肠推进率:伤后3d,生理盐水组明显低于假伤组(P＜0.01);嗜酸乳杆菌组明显高于生理盐水组和假伤组(P＜0.05,P＜0.01);大承气汤组和联合用药组均明显高于假伤组和生理盐水组(P＜0.01).与生理盐水组比较,大承气汤组、嗜酸乳杆菌组和联合用药组脑组织形态均有改善.结论 大承气汤和嗜酸乳杆菌联合应用可通过调节MTL和肠推进功能有效改善SHI小鼠胃肠动力.
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食管静脉曲张内镜下不同治疗方法对门脉高压性胃病的影响
目的 探讨食管静脉曲张的不同内镜治疗方式对门脉高压性胃病的影响程度.方法 回顾性总结2007年1月至2012年12月间在我院接受食管静脉曲张内镜下治疗的307例肝硬化患者的临床资料,根据治疗方式,将上述患者分为套扎组(210例),硬化组(97例),对其术前、术后的门脉高压性胃病的程度进行对比分析.结果 内镜下套扎组无论是短期(1周)还是远期的(3个月后)对门脉高压性胃病都有影响,造成新增门脉高压性胃病或者门脉高压性胃病程度的加重,而硬化治疗组则对门脉高压性胃病的影响不大.两组间比较仅术后1周的差异具有统计学意义(P＜0.05).结论内镜下套扎相对于硬化治疗对门脉高压性胃病的影响更大,可能与引起胃血流的急性改变有关.
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2型糖尿病患者糖化血红蛋白水平控制及胰岛素使用对认知功能的影响
目的 通过“神经认知功能评估量表”的测评,探讨糖化血红蛋白水平(hemoglobin A1c,HbA1c)和胰岛素治疗对2型糖尿病患者认知功能的影响.方法 分析2012年4-11月我科门诊及住院2型糖尿病患者102例,其中男性55例,女性47例,年龄(56.80±10.85)岁.根据糖化血红蛋白分为:糖化血红蛋白≤7％组(52例)及糖化血红蛋白＞7％组(50例),行神经心理认知评估量表分析;根据是否采用胰岛素治疗分为使用胰岛素组(63例)与未使用胰岛素组(39例),行神经心理认知评估量表分析.结果 ①糖化血红蛋白＞7％组微血管神经病变发生率高于糖化血红蛋白≤7％组(P＜0.05);②糖化血红蛋白≤7％组在蒙特利尔认知评估量表(Montreal Cognitive Assessment Scale,MoCa)评分结果中视空间(3.83±0.92)分,画钟表(2.62±0.49)分,定向(5.79±0.67)分;糖化血红蛋白＞7％组在视空间(3.32±1.25)分,画钟表(2.34±0.82)分,定向(5.40±0.86)分,前者明显高于后者并具有统计学意义(P＜0.05);③在是否使用胰岛素组中,未使用胰岛素组在连线测试B中所花费时间为(250.33±73.16)s,使用胰岛素组在连线测试B中花费时间为(220.75±85.11)s,前者花费时间较后者明显延长并具有统计学意义(P＜0.05);④使用胰岛素组中使用人胰岛素与未使用胰岛素类似物两组认知评分结果不具有统计学意义(P＞0.05).结论 糖化血红蛋白控制在7％以下能延缓2型糖尿病患者认知功能下降;无论是人胰岛素还是胰岛素类似物的使用对2型糖尿病的认知功能具有保护作用.
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BK通道对大鼠膀胱Cajal间质细胞兴奋性的调控作用
目的 观察BK通道在大鼠膀胱Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)中的表达,探讨其对膀胱ICCs的调节功能.方法 健康雌性清洁SD大鼠48只,Western blot和免疫荧光双标观测膀胱ICCs BK通道表达情况,膜片钳记录膀胱ICCs BK通道电流,激光共聚焦检测膀胱ICCs钙内流.结果 膀胱ICCs表达起主要功能的BK通道α、β1亚基,记录到ICCs上BK通道外向电流.通道特异性阻断剂蝎毒素(IBTX)可明显抑制膀胱ICCs细胞BK电流,+80 mV下药物作用后相对电流由(23.627±3.897) pA降低为(3.603±1.885) pA(P ＜0.05).IBTX可增加膀胱ICCs钙离子内流,胞内钙荧光强度(F1/F0)从(1.00±0.07)增加到(1.84±0.45),(P＜0.05).结论 膀胱ICCs表达BK通道,阻断BK通道可增加膀胱ICCs的兴奋性.
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瘦素增强脂蛋白酯酶和肝脂酶表达加速胰岛素抵抗肝细胞模型内脂肪代谢
目的 在体外模型中探讨胰岛素抵抗情况下,瘦素(leptin)对脂代谢的影响及途径.方法 用1μmol/L胰岛素诱导LO2(人正常肝细胞)细胞,构建肝细胞胰岛素抵抗模型,并用0、50、100、250 μg/L瘦素以及2μmol/L瘦素拮抗剂(leptin-A)分别处理细胞.实时定量PCR检测细胞中肝脂酶(hepatic lipase,HL)和脂蛋白酯酶(lipoprotein lipase,LPL) mRNA表达;蛋白质免疫印迹法检测细胞中HL和LPL蛋白表达;油红O染色观测细胞内油脂的堆积程度.结果 ①高浓度胰岛素处理LO2细胞后,处理组细胞对一定浓度胰岛素的响应比对照组有显著下降,其代谢葡萄糖效率显著下降,细胞产生胰岛素抵抗.②胰岛素抵抗细胞中HL和LPL mRNA和蛋白水平明显低于对照组细胞.瘦素处理胰岛素抵抗细胞24h后,HL和LPL mRNA和蛋白水平有明显回升,细胞内油脂堆积明显减少.③瘦素拮抗剂能明显抑制瘦素诱导的HL和LPL mRNA和蛋白的上调,导致细胞内油脂明显堆积.结论 肝细胞胰岛素抵抗模型中瘦素通过增强HL、LPLmRNA和蛋白水平的表达加速细胞内脂肪的代谢.
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尖吻蝮蛇AaHⅣ催化结构域和非催化结构域免疫保护性比较
目的 表达尖吻蝮蛇出血性P-Ⅲb型金属蛋白酶AaHⅣ催化结构域和非催化结构域,并鉴定其免疫小鼠后抗体的中和保护性.方法 采用基因合成的方法合成尖吻蝮蛇P-Ⅲ6型金属蛋白酶AaHⅣ的催化结构域和非催化结构域cDNA,分别重组在质粒pET28a(+)上,转入BL21(DE3)中表达,产物经亲和层析纯化.昆明小鼠随机分为催化结构域蛋白免疫组、非催化结构域蛋白免疫组、AaHⅣ免疫组、PBS免疫组,每组6只[4周龄,体质量(20 ±2)g,雌雄各半],3次免疫后分离血清,与AaHⅣ体外孵育后行出血中和实验.结果 ELISA显示重组表达的AaHⅣ催化结构域和非催化结构域均具有免疫原性.出血中和实验显示:催化结构域免疫组和非催化结构域免疫组均较PBS免疫组显著减少出血面积(P ＜0.05);AaHⅣ免疫组与催化结构域免疫组之间无统计学差异(P＞0.05),而与非催化结构域免疫组之间存在统计学差异(P＜0.05).结论 AaHⅣ催化结构域免疫小鼠产生的抗体在中和AaHⅣ出血毒性方面效果更为显著.
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原发性扩张型心肌病患者QRS波时限与心室机械同步性运动的关系
目的 应用实时三维超声心动图(real-time three-dimensional echocardiography,RT-3DE)分析研究原发性扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)患者QRS波时限与左心室机械收缩同步性的关系.方法 筛选2012年9月至2013年6月于第三军医大学西南医院心血管内科诊断为DCM的63例患者,依据QRS波时限将患者分为:①A1组,QRS＜ 120 ms(n =36),男性22例,女性14例,年龄(52.17 ±13.30)岁;②A2组,120 ms≤QRS＜ 150 ms(n=17),男性12例,女性5例,年龄(58.71 ±9.43)岁;③A3组,QRS≥150 ms(n=10),男性9例,女性1例,年龄(54.10±10.57)岁.应用RT-3DE获取左心室达到16、12、6节段小收缩容积时间的标准差及大差值,同时获得标化值.将Tmsvl6-SD％视为收缩不同步指数(systolic dyssynchrony index,SDI),以5.12％作为截点值判断左室收缩同步与否,以SDI＜ 5.12％视为心室机械收缩同步,SDI ＞5.12％视为心室机械收缩不同步.结果 ①A1、A2、A3组SDI分别为(6.26 ±4.08)、(8.53 ±4.12)、(10.82 ±6.24),A1组A3组差异显著(P＜0.05),A1与A2,A2与A3随QRS波时限的增宽,SDI呈逐渐增高趋势(P＞0.05);②A1、A2、A3组SDI与QRS波时限、LVEDV、LVEF、LVESV之间无相关性(P＞0.05).结论 DCM患者中宽QRS波患者比窄QRS波患者心室收缩不同步性检出率高,QRS波时限与左室机械收缩同步性无相关性.
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川西獐牙菜醇提物上调HepG2细胞膜转运蛋白MRP3、核转录因子SP1及核受体CPF、PXR表达
目的 体外培养HepG2细胞观察川西獐牙菜醇提物(Swertia mussitii Franch)对多药耐药相关蛋白3(multidrug resistance protein 3,MRP3)、核转录因子SP1 (specificity protein 1 transcription factor,SP1)及核受体孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)、CYP7A启动子结合因子(CYP7A promoter-binding factor,CPF)表达的影响.方法 用MTT比色法检测川西獐牙菜醇提物的佳作用浓度,再分别于0、12、24、48、72h刺激HepG2细胞,抽提细胞的RNA、总蛋白和核蛋白,采用荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测膜转运蛋白MRP3、转录因子SP1及核受体PXR、CPF在转录与蛋白水平的表达变化.每个时间点设立阴性对照DMSO组和阳性对照熊去氧胆酸(ursodeoxycholic acid,UDCA)组.结果 川西獐牙菜醇提物可显著诱导HepG2细胞膜转运蛋白MRP3的mRNA和蛋白水平的高表达,其作用强于UDCA(P＜0.05).川西獐牙菜醇提物也可明显上调核转录因子SP1及核受体PXR的mRNA和蛋白表达水平,作用强于UDCA.对CPF表达的上调作用与UDCA相当(P＜0.05).结论 川西獐牙菜醇提物可刺激HepG2细胞膜转运蛋白MRP3上调,且有可能是通过核转录因子SP1及核受体PXR、CPF上调其表达.
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miR-199a-5p在血管紧张素Ⅱ致心肌肥大细胞中的表达变化
目的 研究miR-199a-5p在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)导致肥大心肌细胞中的表达变化.方法 雄性SD大鼠30只,采用完全随机方法将其分为假手术组、模型组、氯沙坦组[10 mg/(kg·d)],每组10只.制备腹主动脉缩窄致心肌肥大模型,在术后第28天,检测心脏质量指数和左心室质量指数,HE染色观察左心室心肌细胞肥大情况,qRT-PCR方法测定左心室miR-199a-5p表达.取10只1～3 dSD乳鼠,消化获得心肌细胞,分为对照组、模型组(1×10-7 mol/L AngⅡ)和氯沙坦组(1 ×10-7 mol/L AngⅡ+1×10-6mol/L氯沙坦钾),qRT-PCR方法测定心肌细胞miR-199a-5p表达;分别转染miR-199a-5p模拟物或者抑制物,观察[3H]-亮氨酸的掺入情况.结果 腹主动脉缩窄大鼠左心室心肌细胞明显肥大,左心室miR-199a-5p表达显著升高(P＜0.05),AngⅡ受体拮抗剂氯沙坦可显著逆转上述变化.体外实验发现氯沙坦可显著降低AngⅡ刺激致乳鼠心肌细胞所致的miR-199a-5p显著升高(P＜0.05),采用转染miR-199a-5p抑制物的方法抑制miR-199a-5p表达可显著抑制AngⅡ刺激所致的心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入(P＜0.01);且转染miR-199a-5p模拟物增加miR-199a-5p表达可显著增加[3H]-亮氨酸掺入(P＜0.01).结论 miR-199a-5p是介导AngⅡ致心肌细胞肥大的重要调节分子,可能在该信号通路中发挥重要作用.
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miR-144过表达慢病毒对关节炎模型小鼠滑膜组织病理进程的影响
目的 探讨miR-144过表达慢病毒对于关节炎模型小鼠滑膜组织病理进程的作用及其可能的机制.方法 将Ⅱ型胶原乳剂注射至BALB/c小鼠尾根部皮下构建由Ⅱ型胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠模型,再以miRNA-144高表达慢病毒进行尾静脉注射,然后对模型小鼠滑膜组织进行免疫组化检测Cadherin-11和TNF-α的表达和分布,并用HE染色检测滑膜组织的病理变化特点.结果 模型小鼠滑膜组织表现出与类风湿性关节炎病理学进程相似的特点,miRNA-144高表达慢病毒处理较生理盐水和空载慢病毒处理组模型小鼠的滑膜组织的炎症反应明显减轻,且TNF-α表达较生理盐水和空载体慢病毒处理组显著下调(P＜0.05),进一步检测Cadherin-11的表达亦显著降低(P＜0.05).结论 机体中miRNA-144增加可减弱或抑制关节炎模型小鼠中滑膜组织的炎症反应,并下调其TNF-α的表达,且这一作用可能是miRNA-144抑制滑膜细胞中Cadherin-11的效应.
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别嘌呤醇对慢性心衰大鼠心功能的改善作用
目的 探讨别嘌呤醇(allopurinol,ALLO)对慢性心衰大鼠心功能的保护作用及其抗氧化作用机制在其中的作用.方法 6周龄的雄性SD大鼠35只,体质量(200 ±20)g,将35只大鼠随机分为ALLO处理组(AMI+ ALLO,n=12)、对照组(AMI+ NS,n=13)和假手术组(sham-operated+NS,n=10),ALLO处理组和对照组大鼠结扎冠状动脉前降支建立急性心肌梗死(acute myocardium infarction,AMI)模型,假手术组大鼠只穿线不结扎.术后第2天,ALLO处理组给予ALLO [50 mg/(kg·d)]灌胃,对照组和假手术组大鼠给予生理盐水(normal saline,NS)灌胃.8周后,检测并比较分析各组大鼠的心功能、血清脑钠尿肽(brain natriuretic peptide,BNP)含量、黄嘌呤氧化酶(xanthine Oxidase,XO)蛋白表达、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、线粒体呼吸链酶Ⅰ～Ⅳ的活性、心肌组织形态以及心肌诱导型氧化亚氮合酶(induce-nitri-coxide synthase,iNOS)的表达量.结果 对照组与假手术组大鼠相比,大鼠心功能、线粒体呼吸链酶Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ活性明显降低(P＜0.05),血清BNP含量、XO蛋白表达、MDA水平明显升高(P＜0.05),HE染色显示心肌组织明显水肿(P＜0.05),iNOS表达升高(P＜0.05),证明CHF建模成功;ALLO处理组(EF:87.10％)与对照组(EF:68.18％)相比,ALLO处理组大鼠的心功能明显改善(P＜0.05),BNP含量、XO蛋白表达、MDA水平均下降(P＜0.05),大鼠线粒体呼吸链酶Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ活性增加(P＜0.05),HE染色显示心肌组织水肿减轻(P＜0.05),iNOS表达受抑制(P＜0.05).结论 CHF建模成功;ALLO可以改善CHF大鼠的心功能,其机制可能与其抗氧化作用有关.
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大气细颗粒物对G蛋白偶联受体激酶4的异常调节在尿钠排泄中的作用
目的 探讨大气细颗粒物(fine particle,fine particulate matter,PM2.5)对G蛋白偶联受体激酶4(G proteincoupled receptor kinase 4,GRK4)的异常调节及其影响尿钠排泄在高血压病发生、发展中的作用.方法 以Wistar-Kyoto (WKY)大鼠来源肾脏近曲小管上皮细胞(renal proximal tubule,RPT)株为研究对象,观察在PM2.5刺激对细胞活力、Na+-K+-ATP酶活性以及GRK4、D1R表达的变化;以小干扰RNA(siRNA)技术沉默GRK4,观察PM2.5对Na+-K+-ATP酶活性的影响.结果 不同浓度PM2.5(10、50、100 μg/mL)处理WKY大鼠RPT细胞株24h后,细胞活力无明显差异(P＞0.05).PM2.5干预组(100 μg/mL) Na+-K+-ATP酶活性明显高于对照组(P＜0.05),且对10-6mol/L非诺多泮(fenoldopam)的作用较对照组减低(P＜0.05).不同浓度PM2.5(10、100 μg/mL)干预后RPT细胞的GRK4表达明显高于对照组(P＜0.05),多巴胺D1受体的蛋白表达明显低于对照组(P＜0.05).以siRNA技术沉默GRK4后,PM2.5对Na+-K+-ATP酶活性的作用较对照组无明显差异(P＞0.05).结论 PM2.5通过调节GRK4表达,进而调控D1受体的表达和Na+-K+-ATP酶活性,参与了对尿钠排泄的调节.
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乙型肝炎病毒X蛋白诱导肝卵圆细胞恶性转化
目的 研究乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X,HBx)对肝卵圆细胞的转化作用.方法 构建表达HBx和嘌呤霉素抗性的慢病毒LV-HBx-PM及对照慢病毒LV-PM分别感染WB-F344肝卵圆细胞.以感染HBx慢病毒载体的WB-F344细胞作为实验组(WB-F344-HBx),以感染对照慢病毒载体的WB-F344细胞作为阴性对照组(WB-F344-PM),以未转染慢病毒载体的培养相同代数的WB-F344细胞作为空白对照组(WB-F344-Mock).通过Real-time RT-PCR和Western blot验证各组细胞中HBx的表达;运用MTT法、流式细胞术、细胞迁移实验、裸鼠移植瘤实验观察各组细胞的增殖能力、细胞周期、迁移能力和成瘤能力.结果 WB-F344-HBx细胞在基因水平和蛋白水平稳定高效表达HBx;WB-F344-PM和WB-F344-Mock不表达HBx.与阴性对照组WB-F344-PM相比,实验组WB-F344-HBx G0/G1期细胞比例降低[(55.98 ±0.39)％ vs (61.65 ±1.37)％,P＜0.01],G2/M期细胞比例升高[(15.05±1.67)％vs(7.83±0.46)％,P＜0.01],细胞周期进程加快,细胞增殖能力增强(P＜0.01),具有更强的细胞迁移能力和成瘤能力;而阴性对照组WB-F344-PM与空白对照组WB-F344-Mock相比,细胞周期、细胞增殖能力、细胞迁移能力和成瘤能力无显著变化.结论 乙型肝炎病毒X蛋白可诱导肝卵圆细胞恶性转化.
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3D腹腔镜肾盂切开取石术治疗复杂性感染性肾结石1例
1 临床资料患者,男性,32岁.因左侧腰部间断性胀痛2个月于2013年12月15日入院,无尿频、尿急、尿痛,无腹胀、腹泻、发热.查体无明显阳性体征.超声检查:左肾可见一强回声斑,约2.2cm×1.1 cm大小.IVU检查:左肾结石伴左肾积水,考虑左肾盂、输尿管结合部狭窄,建议逆行造影检查.逆行IVU检查:拔出导管,左肾内造影剂缓慢流入膀胱,肾盂输尿管连接部引流不畅,肾盂输尿管交接部狭窄不除外(图1).
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不同氧气湿化液对患者手术后吸氧下呼吸道感染的影响
氧气疗法作为危重患者救治中不可缺少的手段和措施广泛应用于临床,可以用于各种原因引起的缺氧,改善人体的生理、生化内环境、促进代谢过程的良性循环,以达到治疗疾病、缓解症状、促进康复和预防病变、增进健康的目的.但由于医用氧气干燥不含水分,会刺激人的上呼吸道,影响氧疗效果,临床采用湿化液给氧气加湿解决这一问题.
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24例颅内微小动脉瘤的显微外科手术临床效果分析
颅内微小动脉瘤是指动脉瘤瘤体直径≤3 mm的动脉瘤,因其体积小,大多为宽颈动脉瘤,介入治疗时动脉瘤体积较小,易导致微导管难以到位,多需要辅助技术,给手术增加很大难度.我们用显微手术夹闭的方法治疗直径≤3 mm的动脉瘤取得了较好的效果,现将2008年12月至2013年6月本院行显微手术夹闭的24例颅内微小动脉瘤回顾分析如下.
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ω-3鱼油脂肪乳对严重腹腔感染患者免疫功能的影响
目的 探讨ω-3鱼油脂肪乳对严重腹腔感染患者免疫功能的影响.方法 选择2012年1月至2013年8月入住我院急诊ICU的严重腹腔感染患者47例,随机分为常规全胃肠外营养(TPN)组(A组)23例和添加鱼油TPN组(B组)24例,两组患者均接受等氮、等热量的TPN,B组每人每天加用ω-3鱼油脂肪乳100 mL,共5d,分别于应用TPN前和应用TPN第6天检测血清前白蛋白、免疫球蛋白IgA、IgG、IgM浓度和T淋巴细胞亚群,同时进行APACHEⅡ评分.结果 与治疗前相比,B组TPN治疗第6天,患者血清前白蛋白、IgA、IgM显著升高,差异具有统计学意义(P＜0.05);B组CD4+、CD4 +/CD8+明显升高(P＜0.05),CD8+、CD4+ CD25+ Treg细胞显著降低(P＜0.05);A组在治疗后除血清前白蛋白明显升高外(P＜0.05),其他指标无明显变化(P＞0.05);两组患者治疗后APACHEⅡ评分均明显降低(P＜0.05),但两组间无明显差异.结论 ω-3鱼油脂肪乳可以改善严重腹腔感染患者的体液免疫和细胞免疫功能.
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自锁矫治器与传统结扎式矫治器用于拔牙矫治效率对比研究
目的 比较自锁矫治器与传统结扎式矫治器用于拔牙矫治病例的矫治效率.方法 选取2009年2月至2012年12月到河南省人民医院口腔医学中心正畸科就诊并完成治疗的安氏Ⅰ、Ⅱ类拥挤并拔除4颗第一前磨牙病例30例,分为2组.其中,15例采用Damon 3MX自锁托槽矫治器的为试验组,男性6例,女性9例,平均年龄14.3(11 ～19)岁,安氏Ⅰ类错(牙合)畸形8例,安氏Ⅱ类错(牙合)畸形7例.15例采用传统结扎式直丝托槽矫治器的为对照组,男性8例,女性7例,平均年龄15.2(11 ～21)岁,安氏Ⅰ类错(牙合)畸形7例,安氏Ⅱ类错(牙合)畸形8例.对比分析2组有效复诊次数、上下牙弓整平排齐所用时间、关闭拔牙间隙时间、总体治疗疗程.结果 试验组与对照组比较,有效复诊次数[(19.0±2.8)次vs(18.4±2.2)次]、整平排齐时间[(5.6±0.6)个月vs(5.2±0.5)个月]、关闭拔牙间隙时间[(8.5±1.2)个月vs (7.6±0.9)个月]、整体疗程[(19.8±2.6)vs(18.6±2.1)个月]均较多,但两组间无显著性差异(P＞0.05).结论 在拔牙矫治中,Damon 3MX自锁矫治器在矫治效率上与传统结扎式矫治器相当.
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呼气末二氧化碳分压监测在老年患者困难气道经鼻盲探插管中的应用价值的临床研究
目的 研究呼气末二氧化碳分压(PETCO2)监测对老年困难气道患者盲探插管时血流动力学及其应激反应的变化,明确PETCO2监测在其中的应用价值,并为基层医院寻找一种既能简便确切安全又能够明显减少盲探应激反应且适宜于推广的困难气道插管方法.方法 选择在择期手术的老年患者60例,随机分为纤支镜组(B组)和PETCO2监测组(P组),每组30例.另随机选择30例老年非困难气道患者作为对照组(C组).3组均行常规术前准备,继而B组实施经鼻气管纤支镜气管插管,P组行PETCO2监测下经鼻盲探插管,C组行常规经鼻盲探插管,观察气管插管前、插管后1、5、10、30 min时3组的心率(heart rate,HR)、平均动脉压(mean arterial pressure,MAP)和SpO2改变,检测插管前、插管后5、10、30 min时的外周血肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)、肾素、血管紧张素Ⅰ(ATⅠ)和血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)的浓度.结果 与T0时点相比,各组患者HR和MAP在T1、T2时点均显著升高(P＜0.05),患者血中E在T2 T3、T4各时点均显著增加(P＜0.05),SpO2并无显著变化;NE和肾素在T1、T2、T3时点显著增加;ATⅡ在T2时点显著升高(P＜0.05).各组同时点比较,MAP、HR和血中E、NE、肾素、ATⅡ在T1、T2、T3、T4各时点差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 对于老年困难气道患者,在经鼻盲探气管插管基础上,结合PETCO2监测的方法安全可靠,插管相关应激反应与纤支镜气管插管、非困难困难气道经鼻盲探插管相当,值得在基层医院推广.
