第三军医大学学报杂志
Journal of third military medical university 제삼군의대학학보
- 主管单位： 第三军医大学
- 主办单位： 第三军医大学
- 影响因子： 1.01
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-5404
- 国内刊号： 50-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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下调STYK1基因表达可抑制结直肠癌细胞生长与侵袭
目的 探讨STYK1基因下调对结直肠癌细胞HCT-15增殖、凋亡和迁移以及MEK/ERK和PI3 K/AKT信号通路的影响.方法 采用基因干扰技术抑制结直肠癌细胞HCT-15中STYK1的表达,Western blot检测抑制效果,CCK-8检测STYK1表达下调对HC-T15细胞增殖的影响,流式细胞仪检测STYK1表达下调对HC-T15细胞凋亡的影响,Transwell小室实验检测STYK1表达下调对HCT-15细胞侵袭的影响,通过Western blot检测STYK1表达下调对HCT-15细胞MEK/ERK和PI3 K/AKT信号通路活性的影响.结果 与干扰对照组相比,STYK1表达下调明显抑制HCT-15细胞增殖活性(P＜0.01)和侵袭能力(P＜0.01),并诱导细胞凋亡(P＜0.01);同时,STYK1表达下调明显抑制HCT-15细胞ERK1/2和AKT蛋白的磷酸水平.结论 STYK1基因干扰可以抑制结直肠癌细胞的增殖和侵袭,并诱导凋亡,其机制可能与抑制MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路活性有关.
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miRNA-146a对乙型肝炎病毒生活周期的影响及机制研究
目的 研究微小RNA-146a(microRNA-146a,miR-146a)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)生活周期的影响及其可能机制.方法 利用miRNA芯片比较HepG2.2.15细胞与HepG2细胞miRNAs表达谱差异,选择miR-146a为研究对象,RT-PCR验证芯片结果.在HepG2.2.15细胞中分别转染miR-146a mimic和inhibitor,RT-PCR检测HBV复制水平,ELISA和Western blot检测蛋白水平.双荧光素酶报告系统进一步验证miR-146a与潜在靶点HS3ST3B1相互作用.HepG2.2.15细胞中转染miR-146a mimic,RT-PCR和Western blot分别检测HS3ST3B1 mRNA和蛋白水平.结果 miRNA芯片发现72条miRNAs在HepG2.2.15中表达发生变化,其中27条上调,45条下调,RT-PCR证实,miR-146a在HepG2.2.15细胞(1.55±0.13)中表达水平明显高于HepG2细胞(1.00±0.01)(P＜0.05).HepG2.2.15细胞转染miR-146a mimic后,HBV复制和蛋白水平较对照组明显升高(P＜0.05);转染miR-146a inhibitor后,HBV复制和蛋白表达水平较对照组明显降低(P＜0.05).生物信息学预测发现HBV抑制因子HS3ST3B1是miR-146a的潜在靶点,双荧光素酶报告系统显示,HS3ST3B1野生型载体的报告荧光较对照组明显下调(P＜0.05),突变预测靶位点后,HS3 ST3B1突变型载体的报告荧光与对照组差异无统计学意义(P＞0.05).HepG2.2.15细胞中转染miR-146a mimic后,HS3ST3B1 mRNA水平较对照组差异无统计学意义(P＞0.05),HS3ST3B1蛋白水平较对照组明显下调.结论 miR-146a能影响HBV生活周期,miR-146a可能通过作用于HBV抑制因子HS3 ST3B1 3'UTR抑制其翻译从而影响HBV生活周期.
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依他尼酸联合顺铂化疗促肺癌A549细胞凋亡的作用及机制研究
目的 探讨依他尼酸(ethacrynic acid,EA)杀伤肺癌A549细胞球的作用及机制研究.方法 无血清培养基中培养A549细胞球,应用Western blot检测CD133、SOX2、EpCAM和ABCG2的蛋白表达水平.应用l、2、5、10、20 mg/mL的浓度顺铂(cisplatin,DDP)分别处理A549及细胞球48 h,用MTT检测48 h内细胞的存活率.应用比色法检测10、50、100、200 μmol/L EA对A549细胞球中谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)活性的抑制作用.应用流式细胞术、Western blot、Real-time-PCR、相差显微镜观察检测200 μmol/L EA处理A549细胞球前后ROS水平、细胞成球能力、β-catenin、Sox2和ABCG2 mRNA和蛋白以及β-catenin启动子活性的变化情况.应用β-catenin腺病毒感染A549细胞球后,再用200 μmol/L EA的处理A549细胞球,利用Real-time PCR和Western blot检测β-catenin S、Sox2和ABCG2 mRNA和蛋白的变化,并用MTT检测A549细胞球增殖的抑制作用.结果 成功培养出悬浮的A549细胞球,其高表达肿瘤干细胞标志物CD133、SOX2、EpCAM以及耐药相关蛋白ABCG2,并可耐受不同浓度DDP的杀伤作用.200 μmol/L EA处理A549细胞球后ROS水平明显升高,而GST活性、β-catenin、Sox2和ABCG2 mRNA和蛋白的表达、β-catenin的启动子活性、A549细胞球的成球能力显著下降,并且200 μmol/L EA联合5 mg/mL DDP可增强对抑制A549细胞球增殖的作用和增加细胞凋亡的水平(P＜0.05).过表达β-catenin后,200 μmol/L EA对β-catenin、Sox2和ABCG2 mRNA和蛋白的抑制作用较空载体组显著减弱.此外,过表达β-catenin可显著缓解200 μmol/L EA联合5 mg/mLDDP对A549细胞球的增殖抑制作用.结论 EA通过抑制GST活性和β-catenin水平,发挥抑制A549细胞球增殖和干性,促进其凋亡的作用.EA可望成为治疗肺癌及肺癌干细胞的药物.
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孕期酒精暴露致子代小鼠心肌致密化不全样改变
目的 探讨孕期酒精暴露致子代小鼠心肌致密化不全样改变的关系.方法 对孕期3.5～18.5 d的母鼠用56％酒精以5 mL/kg的剂量灌胃,收集孕期第19.5天子代小鼠心脏标本,电子透射显微镜观察肌丝、线粒体及肌浆网等心肌细胞超微结构,HE染色观察心室肌层结构,小鼠心脏超声心动图观察成年鼠心脏舒缩功能及心室肌层改变.结果 实验组子代心脏电镜下发现肌丝排列紊乱、溶解的现象;31.25％子代小鼠(5/16)的左心室肌呈非致密化样改变[病变组N/C值为(2.49±0.68),对照组N/C值为(0.62±0.23);t=10.397,P=0.000],且心脏体积变小,病变室腔明显扩大;成年后心脏超声提示实验组小鼠心功能减退、室间隔/左室后壁增厚.结论 孕期大量酒精暴露可致子代小鼠心室肌出现高度肌小梁化及心肌压实缺乏等改变,孕期酗酒可能是子代心肌致密化不全的病因之一.
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CRISPR/Cas9技术敲除faf1基因对斑马鱼软骨及肌节发育的影响
目的 利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼faf1基因,并研究faF1基因对斑马鱼发育的影响.方法 针对斑马鱼faf1基因设计并制备gRNA,通过显微注射技术将gRNA与Cas9 mRNA混合注入斑马鱼单细胞胚胎中,通过酶切和基因测序技术筛选出发生突变的F0代斑马鱼,将其与野生型斑马鱼外交得到F1代杂合体斑马鱼,检测其可遗传突变类型,并用显微镜观察、记录每一代斑马鱼表型.结果 成功制备了faf1 gRNA和Cas9 mRNA.位于faf1 6号外显子的gRNA(gRNA6)能使faf1基因发生移码突变.筛选出可遗传突变类型(mutant 1,MU1)并观察到该杂合突变型斑马鱼有体细胞色素沉积延迟,受精后第4天开始尾部肌节出现“结节样”表型以及头颅缩小、舌骨小角角度增大等颅面软骨畸形的变化,并于受精后8～9d死亡.结论 利用CRISPR/Cas9敲除该基因产生了新的表型,即色素沉积延迟及尾部肌节部位出现“结节样”变化.
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食蟹猴脑缺血过程中皮层谷氨酸水平动态变化的研究
目的 探讨食蟹猴脑缺血过程中皮层细胞外谷氨酸水平动态变化.方法 取3只(7.3±1.5)岁的食蟹猴,将大脑中动脉(middle cerebral artery,MCA) M1段近端夹闭1h后放开,建立食蟹猴脑缺血性模型,并通过磁共振成像检查(MRI)、神经功能缺损评分评价临床表现.在MCA M1夹闭前、夹闭过程中、夹闭放开后和术后第1、2周于手术同侧大脑皮层运动区同一部位,运用电化学微电极传感器技术检测该部位谷氨酸水平.结果 短期夹闭MCA M1段的食蟹猴大脑皮层运动区谷氨酸水平在MCA M1夹闭过程中较夹闭前上升(P =0.003);夹闭放开后较夹闭过程中的变化差异无统计学意义(P =0.877);术后第1周较夹闭放开后下降(P =0.004);术后第2周较术后第1周的变化差异无统计学意义(P =0.085).结论 脑缺血时可能加速皮层细胞外谷氨酸的释放,再灌注后谷氨酸的释放可能有所减弱或处于动态平衡.
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COMMD7调控肝癌干细胞间充质-上皮转化过程抑制其侵袭转移能力
目的 探讨抑制COMMD7基因后对肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)侵袭转移能力的影响及其机制.方法 使用shRNA慢病毒转染抑制COMMD7在LCSCs中的表达,粘附、Transwell实验检测细胞侵袭迁移能力,鬼笔环肽染色检测细胞形态学特征,Western blot检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达.结果 抑制COMMD7基因表达可以显著降低LCSCs的侵袭迁移能力,对照组与转染组粘附相对细胞量为(1.00±0.12),(2.35±0.20),转染组粘附细胞数量显著增加(P＜0.05).对照组与转染组每视野迁移相对细胞量为(1.00 ±0.04),(0.24±0.03),每视野侵袭相对细胞量为(1.00 ±0.05),(0.24±0.04),转染组迁移侵袭细胞数明显降低(P＜0.05),同时导致细胞表现出低侵袭迁移能力的形态学变化,上述改变伴随了间充质-上皮转化(mesenchymal-epithelial transition,MET)相关分子E-cadherin表达上升(P＜0.05),N-cadherin、Vimentin表达下调(P＜0.05).结论 COMMD7可能通过调控MET过程抑制LCSCs的侵袭转移能力.
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17β-雌二醇促进甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及三叶草因子1分泌
目的 研究17β-雌二醇(estradiol,E2)刺激甲状腺乳头状癌K-1细胞增殖、迁移及生长因子类似物人三叶草因子1(trefoil factor family 1,TFF1)分泌及分子机制.方法 ELISA检测E2、ERβ激动剂(propylpyrazoletriol,PPT)、ERβ激动剂(diarylpropionitrile,DPN)对K-1细胞TFF1分泌的影响,Western blot检测细胞中雌激素受体ERα、ERβ的表达量;设计合成ERα siRNA、ERβ siRNA后,转染K-1细胞,采用ELISA观察其对E2诱导的TFF1分泌的影响.染色体免疫共沉淀检测ERα、ERβ与TFF1基因启动子的相互作用;MTT检测E2对K-1细胞增殖的影响;Transwell检测E2对K-1细胞迁移的作用.结果 E2处理后K-1细胞上清TFF1含量逐渐升高,24 h达到峰值,随后降低;PPT处理K-1细胞后TFF1含量增多,而DPN处理降低TFF1含量;转染ERα siRNA后细胞TFF1分泌量减少;而转染ERβsiRNA后分泌量升高.Western blot检测结果显示,K-1细胞中雌激素受体ERα表达高于ERβ.染色体免疫共沉淀结果显示,ERα能与TFF1基因启动子区域结合;MTT结果显示,E2处理促进K-1细胞增殖;Transwell检测结果显示,E2处理增强K-1细胞迁移.结论 E2可以通过ERα促进K-1细胞中TFF1的表达及分泌,促进细胞增殖和迁移.
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儿童结核病结核分枝杆菌临床分离株中esxA、fbpB、Rv2660c基因多态性研究
目的 对抗原编码基因esxA、fbpB、Rv2660c进行测序,了解esxA、fbpB、Rv2660c的基因多态性.方法 选取135株结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)临床分离株,运用PCR方法扩增目的基因esxA、fbpB、Rv2660c并进行测序,与结核标准株H37 Rv基因序列以及从免疫表位数据库(immune epitope database,IEDB)中查询到的表位序列进行对比,分析esxA、fbpB、Rv2660c基因序列中的变异特征.结果 在135株菌株中,esxA、Rv2660c序列暂未发现基因变异.fbpB共66株(48.89％)发现了基因变异,5个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点共造成8个(14.81％)T细胞抗原表位以及9个(24.32％)B细胞抗原表位序列的多态性.fbpB基因的dN值为0.000 120,dS为0.002 126,其中T细胞表位区与非T细胞表位区的dN值分别为0.000 067和0.000 408,dS分别为0.002 382和0.000 470,B细胞表位区dN和dS值分别为0.000 063和0.002 380,非B细胞表位区dN和dS均为0.结论 esxA、Rv2660c基因序列较保守,fbpB存在基因多态性,预测会对蛋白Ag85B的免疫功能造成影响,从而影响H56的免疫有效性.
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5种评分系统对不同时间窗急性脑梗死静脉溶栓后出血转化风险预测差异的比较研究
目的 比较5种评分系统对不同时间窗的急性脑梗死静脉溶栓后出血转化(hemorrhagic transformation,HT)风险的预测价值.方法 对2014年1月至2016年12月对不同时间窗内仅接受重组组织型纤溶酶原激活物(recombinant tissue-type plasminogen activator,rt-PA)静脉溶栓的243例急性脑梗死患者进行单中心、回顾性研究.应用HAT评分、GRASPS评分、SEDAN评分、MSS评分及SITS评分量表进行测评,观察5种评分系统与不同时间窗内的急性脑梗死接受静脉溶栓后出现HT的关系;应用ROC曲线下面积大小比较5种评分系统在不同时间窗静脉溶栓后出HT的预测能力.结果 针对不同时间窗,比较5种评分系统ROC曲线下面积,结果显示:≤3h时GRASPS及HAT评分系统的ROC曲线下面积(分别为0.698、0.619)高于其他评分系统;＞3～4.5 h时,SEDAN评分、HAT评分(ROC面积分别为0.744,0.719)优于其他评分系统(P＜0.05);＞4.5～6h时,HAT评分系统(ROC曲线下面积为0.676)优于其他评分系统.结论 5种评分系统对所有时间窗静脉溶栓后HT的发生有较好的预测能力.在不同时间窗,特别是在4.5h内,HAT评分系统对HT风险预测可能拥有相对较好的预测价值.
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前正中切口联合微创内固定系统双钢板固定C3型股骨远端骨折的疗效分析
目的 探讨前正中切口联合微创内固定系统(less invasive stabilization systems,LISS)双钢板固定AO-C3型股骨远端骨折的临床疗效.方法 筛选2014年6月至2017年3月我科采用膝关节置换术中常用的前正中切口联合LISS双钢板固定治疗AO-C3型股骨远端骨折的患者18例,其中男性12例,女性6例,年龄19 ～ 62岁.包括交通伤11例,高坠伤7例;6例为开放性骨折,12例为闭合性骨折.后1次随访中采用Kolment和Wulff(1982)治疗评价标准评定内固定术后膝关节功能.结果 18例患者手术时间平均145(110 ～ 200) min,术后均获得17.5(12 ～25)个月随访,术后骨折平均愈合时间22(20 ～26)周,骨折全部愈合,未出现骨折不愈合、感染、骨髓炎及神经血管损伤等并发症.对末次随访患者按照Kolment和Wulff(1982)治疗评价标准进行评估:优6例,良9例,可2例,差1例,优良率达83.33％.结论 采用的膝关节前正中切口可充分暴露股骨远端关节面,术中显露清晰,便于关节面骨折的解剖复位,可一期处理关节内结构损伤,同时联合LISS双钢板牢固固定骨折,避免对骨折断段软组织的过多剥离,允许术后即刻进行有效的早期功能锻炼,可以取得良好的疗效.
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太赫兹光谱技术用于肺癌检测的初步探索研究
目的 利用太赫兹光谱技术,对人肺癌组织进行检测,比较肺癌组织、癌旁组织及正常肺组织之间的差异,筛选出具有特异性诊断价值的太赫兹频段,初步探索太赫兹光谱技术用于肺癌的早期检测.方法 收集2015年6月至2015年12月经我院胸外科手术切除、病理明确诊断为Ⅰ～ⅢA期非小细胞肺癌患者30例,其肺癌组织病理类型为:腺癌17例、鳞癌10例、大细胞肺癌2例、肉瘤样癌1例.每组包括同一患者肺癌组织、癌旁组织及正常肺组织.运用频段为0.2 ～ 2.0 THz的太赫兹光谱进行检测,对比3类组织标本对太赫兹光谱的吸收率.结果 ①肺癌组织对太赫兹光谱吸收率显著高于正常肺组织;②太赫兹光谱频段1.4 ～ 2.0 THz可能为具有肺癌特异性诊断价值的太赫兹频段.结论 鉴于肺癌组织对太赫兹光谱吸收率高于正常肺组织,太赫兹光谱技术可能成为一种新型非侵入诊断肺癌的检测技术,其具有特异性诊断价值的太赫兹频段可能为1.4 ～2.0 THz.
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事件相关电位外源性反应电位的发育规律
目的 遵循2009年国际事件相关电位(event-related potentials,ERPs)指南,获取不同年龄组儿童听觉ERPs外源性反应电位主要波形潜伏期及波幅正常值,总结儿童听觉ERPs外源性反应电位发育规律和临床应用前景.方法 收集2008-2010年156名儿童与成人(儿童来源于重庆医科大学附属儿童医院儿童保健科门诊,骨科、普外科、呼吸及消化科呼吸道感染及消化道感染恢复期的住院患儿,成人为重庆医科大学健康在读大学生),分为3～5、＞5 ～7、＞7 ～9岁和＞9 ～17岁组,以及22～29岁青年成人组.采用经典的“Oddball”模式进行听觉ERPs检测,每名受试者均进行2次以上测试,以判断波形的重复性.电位仪分别显示靶刺激和非靶刺激下ERPs叠加后图形,对ERPs各外源性成分P1、N1、P2和N2波形测量,包括波潜伏期及波幅.结果 靶刺激或非靶刺激诱发的外源性电位潜伏期均随年龄增长非匀速地成熟性缩短.无论靶刺激或非靶刺激,各年龄组的所有外源性电位波潜伏期均值中,95％以上都在2SD范围内.除N1波外,靶刺激下P1、P2、N2波幅随年龄增加呈先增高后降低趋势,成人和青少年期波幅反较儿童期低(P＜0.05).非靶刺激下,95％的健康成人甚至不能引出N2波形.所有外源性电位波幅均值皆伴有较大标准差,提示存在明显个体差异性.结论 ERPs外源性电位各波潜伏期同样随年龄规律性缩短,靶刺激较非靶刺激有更恒定的检测结果,可直接反映颞叶初级听觉皮层功能,且不受患者合作程度影响.
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超声引导下经支气管镜检查在周围性肺部病变诊断中的应用
目的 探讨气道内径向超声(radial endobronchial ultrasound,R-EBUS)引导下经支气管镜检查在诊断周围性肺部病变(peripheral pulmonary lesions,PPLs)中的应用价值,评估其诊断成功率、安全性及影响因素.方法 回顾性分析2015年1月至2017年3月在我院呼吸内镜室行径向超声引导下经支气管镜活检(R-EBUS transbronchial biopsy,R-EBUS TBB)和刷检的140例患者的临床资料,筛选出83例PPLs患者,观察EBUS对病变的定位能力,分析其诊断成功率及影响因素,观察有无并发症,进行安全性评估.结果 83例患者中男性55例,女性28例,年龄(59.81 ±11.85)岁.R-EBUS引导下经支气管镜检查总诊断成功率59.04％(49/83),其中肺恶性病变诊断率50.94％(27/53),非恶性病变诊断率73.33％ (22/30);R-EBUS TBB诊断率(56.92％,37/65)高于经支气管镜刷检诊断率(30.12％,25/83)(x2=10.76,P=0.001);支气管镜下超声引导联合测量技术(EBUS-D)诊断率为60.00％(45/75),经导向鞘引导的超声支气管镜(EBUS-GS)诊断率为50.00％ (4/8),二者相比差异无统计学意义(x2=0.03,P=0.87).病灶直径10.0～52.4 mm,其中直径≤20 mm者诊断率(36.84％,7/19)低于直径＞ 20 mm者(65.62％,42/64)(x2=5.02,P=0.03);各叶段病灶诊断率分别为右上叶46.15％(12/26),右中叶100.00％(8/8),右下叶53.85％ (7/13),左上叶固有段37.50％(3/8),左上叶舌段63.64％ (7/11),左下叶70.59％(12/17),差异无统计学意义(x2=10.05,P=0.07);而上叶(22/45,48.89％)诊断率低于中/下叶(27/38,71.05％)(x2=4.18,P=0.04).R-EBUS明确病变位置者74例(89.16％,74/83),9例超声下未发现目标病变,超声探头位于病变区域内者诊断率(81.58％,31/38)明显高于病变偏离探头者(50.00％,18/36)(x2=8.24,P=0.004).并发症仅为经气管镜取材部位少量出血,无气胸等的发生.结论 R-EBUS可准确定位肺部周围性病变,提高PPLs的诊断率,安全可行;EBUS-D对PPLs诊断具有较高阳性率,且节约成本;病灶大小、径向超声探头与靶病变的位置关系是影响其诊断率的主要因素.
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不同年龄段健康儿童左心室收缩期心肌纵向应变及应变率正常参考值的初步分析
目的 应用二维斑点追踪成像技术定量分析健康儿童左心室收缩期心肌纵向应变及应变率,并进行其不同年龄段正常参考值的初步分析.方法 回顾性分析2015年9月至2016年11月来本院超声科体检的330例健康儿童的超声临床资料.按年龄分成7组,分为新生儿组(0～28 d)、婴儿组(＞28 d至＜1岁)、幼儿组(1～＜3岁)、学龄前期组(3～＜6岁)、学龄期组(6～＜9岁)、青春前期组(9～ ＜13岁)、青春期组(13 ～＜18岁).采用斑点追踪软件分析左心室心尖3个长轴切面的动态图像,获取左心室收缩期心肌纵向应变及应变率值.结果 ①6室壁节段间收缩期纵向应变及应变率的差异均有统计学意义(P＜0.05),且纵向应变及应变率绝对值自基底段向心尖段呈逐渐增加趋势;②18节段应变及应变率及整体应变在不同性别间差异均无统计学意义(P＞0.05);③除后壁、下壁、后间隔基底段外,余各室壁节段纵向应变(longitudinal strain,LS)情况为l LS新生儿组｜＜｜ LS婴儿组|＜l LS幼儿、学龄前期、学龄期组｜＜｜ LS青春前期、青春期组｜,且整体心肌纵向应变在年龄组间的趋势与其一致;④18节段应变与年龄呈正相关,以侧壁心尖段相关性强(r=0.551,P＜0.01);与心率均呈负相关,以侧壁中间段相关性强(r=-0.517,P＜0.01);整体心肌纵向应变与年龄呈正相关(r=0.665,P＜0.01),与心率呈负相关(r=-0.625,P＜0.01).⑤18节段应变率与年龄、心率的相关性,以及在各年龄组间的差异存在不均一性.结论 建立了不同年龄段健康儿童左心室收缩期心肌纵向应变及应变率的正常参考值,并发现其具有自身特征.
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阴腹联合超声诊断体外受精-胚胎移植术后卵巢妊娠
卵巢妊娠是异位妊娠的一种少见类型,近年随着辅助生殖技术的发展和普及,增加了卵巢妊娠的发病率,本研究旨在探讨体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)术后卵巢妊娠较妊娠黄体与输卵管妊娠声像图表现的特殊性,对经腹壁与经阴道超声相结合的优势进行分析.
