您当前的位置：

采用CRISPR knockin技术实现VEGF165定点敲入HEK293T细胞系的构建

郭再玉；张合亮；陈谦；侯延伟；水涛；武莉莉；刘艺洁；费乔曼；黄欢；雷蕾；孙琰；孔雨；赵秀娟；韩雅婷；杨冰；张玲

关键词：血管内皮生长因子165 CRISPR/Cas9 HEK293T细胞

摘要： 目的构建定点敲入血管内皮生长因子165(VEGF165)基因的人肾上皮细胞系HEK293T,避免由慢病毒感染等方法实现过表达时所带来的脱靶效应.方法根据EZH2基因的DNA序列设计、构建两端带有同源臂的VEGF165表达载体(pUCm-T-VEGF165质粒)和能定点切割基因组DNA的小向导RNA(sgRNA)表达载体[pSpCas9(BB)-2A-Puro-sgRNA质粒],再将这两个质粒共转染HEK293T细胞,通过实时荧光定量PCR检测VEGF165和EZH2的mRNA表达情况,蛋白质印迹法(Western Blot)检测VEGF165和EZH2的蛋白表达情况.结果实时荧光定量PCR和Western Blot结果显示,与对照组、单独转染pUCm-T-VEGF165质粒和pSpCas9(BB)-2A-Puro-sgRNA质粒组比较,共转染pUCm-T-VEGF165和pSpCas9(BB)-2A-Puro-sgRNA质粒组VEGF165的mRNA和蛋白相对表达量均升高(VEGF165 mRNA:3.42±0.30比1.02±0.21、1.13±0.16、0.98±0.18,均P<0.01;VEGF165蛋白:3.12±0.10比1.02±0.06、0.88±0.03、0.80±0.05,均P<0.01),EZH2的mRNA和蛋白相对表达量均降低(EZH2 mRNA:0.14±0.06比1.08±0.11、1.02±0.12、1.13±0.16,均P<0.01;EZH2蛋白:0.23±0.03比1.05±0.13、0.91±0.04、0.81±0.06,均P<0.01).该结果表明VEGF165基因被定点插入EZH2基因的基因组DNA序列中,并干扰了EZH2的表达.结论采用CRISPR/Cas9系统成功构建了定点敲入VEGF165基因的HEK293T细胞系.

同期刊相关文献推荐

基于双平面正交投影X线成像系统的血管图像重建技术

作者：邝宇；夏灵；汪元美期刊：国际生物医学工程杂志2004年04期

基于双平面正交投影X线成像系统的血管图像的重建技术是一个典型而又有重要应用价值的极少数投影重建图像问题.本文在介绍了由双平面正交投影重建出血管图像的基本原理的基础上,重点分析了通过在两个相互正交方向上的投影重建出血管的三维骨架(中轴线)和截面形状的研究方法与进展,并对有待解决的主要问题和今后的发展方向进行了讨论.

关键词：双平面正交投影血管骨架重建截面重建由投影重建图像少数投影
功能性磁共振检查在急性脑梗死诊断与溶栓治疗中的应用

作者：胡培东；周永刚期刊：国际生物医学工程杂志2007年04期

弥散加权成像和灌注加权成像技术是近年发展很快的核磁共振脑功能成像技术,它们对急性脑梗死的诊断和是否需要及时进行溶栓治疗有重要的指导作用,对这方面的技术进展进行了介绍.

关键词： MR脑功能成像弥散加权成像灌注加权成像急性脑梗死
多肽在前体药物与药物载体方面的应用

作者：王士斌；刘源岗；翁连进期刊：国际生物医学工程杂志2002年03期

多肽是一种生物活性物质,无毒,具有良好的生物降解性,已经受到许多研究者的关注.多肽主要应用于前体药物,利用肿瘤细胞的选择性激活机制,用于癌症治疗或将其引入缓释系统,制成各种载体材料,控制药物释放.本文将介绍国外近几年关于多肽在前体药物以及药物载体方面的应用研究.

关键词：多肽前体药物药物载体
肝细胞移植的研究进展

作者：张金卷；宋继昌期刊：国际生物医学工程杂志2007年06期

肝细胞移植作为治疗暴发性肝功能衰竭及各种终末期肝病一种安全有效的方法在各种动物模型及临床应用中得到广泛证实,具有创伤小、安全简单、可一肝多用、重复移植、抗原性低等优点.就其细胞来源、移植途径、理论基础及应用等方面的研究进展综述如下.

关键词：肝细胞细胞移植生物人工肝
基于荧光分子断层成像的多模成像系统研究进展

作者：周源；刘飞；阮秋琦；白净期刊：国际生物医学工程杂志2014年01期

基于荧光分子断层成像(FMT)的多模成像系统已广泛应用于动物实验研究,它将现有的其他成像模态与FMT系统相融合,实现同时对被测生物解剖学结构、生理学功能和分子或细胞水平生物学活动的在体成像.首先介绍了单模FMT系统的发展历史和现状,并介绍了国内外基于FMT的多模系统的研究进展,着重介绍了文献报道的典型的FMT/CT、FMT/MRI和FMT/放射性核素成像系统的系统组成、工作原理、性能特点及实验应用.对基于FMT的多模成像系统的发展进行了展望.

关键词：荧光分子断层成像多模成像系统荧光分子断层成像/CT 荧光分子断层成像/MRI 荧光分子断层成像/放射性核素成像
虚拟现实技术在医学中的应用

作者：徐升；唐庆玉期刊：国际生物医学工程杂志2001年02期

虚拟现实是一门新兴的学科，它在医学上已经得到了广泛的应用。本文从虚拟人、虚拟人同真实人体数据的融合以及虚拟的远程医疗系统三个方面介绍了虚拟现实在医学上的应用，并从对计算能力的要求、软硬件等方面介绍了医学虚拟现实背后的图形学支持。后，对现有的分布式VR系统做了一个简要的介绍。

关键词：虚拟现实虚拟人数据融合远程医疗
蛋白转导在基因治疗中的应用

作者：熊符；张成；于美娟期刊：国际生物医学工程杂志2006年04期

蛋白转导是近几年生命科学领域发现的一种独特现象,具有蛋白转导功能的蛋白通过几个短的碱性小肽组成的蛋白转导域(proteintransduction domain,PTD)的介导,能将与其共价连接的DNA、多肽或蛋白质以及其他大分子物质通过非经典途径穿过细胞膜甚至血脑屏障,并在细胞间自由传递.PTD这种能携带融合蛋白自由进入细胞的独特功能为人类一些疾病的基因治疗提供了一种新的运载工具,在基因治疗中有着美妙的应用前景.

关键词：蛋白转导蛋白转导域基因治疗
Rho GTP酶介导剪切力引起的血管内皮细胞通透性变化

作者：高亭；薛隆娟；刘肖珩期刊：国际生物医学工程杂志2009年03期

血管内皮细胞通透性的变化与人类的许多疾病有关,如动脉粥样硬化、高血压、中风、炎症反应、肿瘤、糖尿病引起的视网膜病变和黄斑水肿等.剪切力是作用于血管内皮细胞的主要力学因素并对血管内皮细胞通透性起重要作用.Rho GTP酶家族是细胞信号转导通路中的一类重要蛋白,参与血管内皮细胞通透性的调控.研究表明,Rho GTP酶在介导剪切力引起血管内皮细胞通透性变化的过程中起重要的信号传导作用.就剪切力对血管内皮细胞通透性的影响以及Rho GTP酶在其分子机制上的作用进行综述.

关键词：剪切力 RhoGTP酶血管内皮细胞通透性
静电纺聚合物纳米纤维在骨组织工程研究中的进展

作者：罗伟；金旻；罗凤涛；陈林期刊：国际生物医学工程杂志2010年01期

组织工程骨在骨缺损、骨不连及骨折延期愈合等骨骼疾病的治疗中有重要应用前景.组织工程支架是组织工程研究的核心内容之一,静电纺丝制备的纳米纤维以其优异的性能,近年来已开始成为骨组织支架材料的重要研究对象.综述了静电纺聚合物纳米材料包括天然高分子聚合物、人工合成聚合物及复合聚合物纺丝纤维在骨组织工程研究中的进展.提出复合聚合物电纺纤维及其改性是今后骨组织工程支架材料研究的重要方向之一;并探讨了其研究中存在的问题与应用前景.

关键词：静电纺丝纳米纤维骨组织工程支架聚合物
肿瘤热疗的热剂量学应用研究

作者：王伟；李迎新期刊：国际生物医学工程杂志2002年01期

肿瘤热疗是一门利用热的生物效应治疗肿瘤的科学,近20年来由于多学科协同攻关对这一技术有了较深入的认识.热剂量学的研究及应用就是使肿瘤热疗逐步向着科学化、规范化和量化的方向发展.本文讲述了热剂量学的原理及热物理参数的发展历程,并对近年来国内外热疗临床的热剂量学应用研究的进展情况进行了综述.

关键词：肿瘤热疗热剂量热物理参数