基于“肝藏魂”理论观察疏肝活血方对慢性乙型肝炎患者失眠及肝功能的影响
摘要： 目的:观察疏肝活血方联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎(CHB)伴失眠患者的临床疗效.方法:纳入100例具有失眠症状的CHB患者,随机分为治疗组和对照组,每组50例.两组患者均给予恩替卡韦抗病毒治疗,治疗组加用疏肝活血方治疗,疗程为3个月.评价两组患者的中医证候积分及匹兹堡睡眠质量指数量表(PSQI)评分,检测并比较两组患者治疗前后的谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)及乙肝病毒核酸(HBV DNA)水平.结果:治疗后,两组患者的中医证候积分均显著下降(P＜0.01,P＜0.05),且治疗组患者的积分低于对照组(P＜0.01).治疗后,治疗组患者的PSQI睡眠质量、入睡时间和睡眠时间评分均显著下降(P＜0.01),且治疗组患者的各项评分均低于对照组(P＜0.0l).治疗后,两组患者的ALT、TBIL、HBV DNA水平均明显降低(P＜0.01,P＜0.05),但两组患者的ALT、TBIL、HBV DNA水平组间比较,其差异无统计学意义(P＞0.05).结论:基于“肝藏魂”理论的疏肝活血方可改善CHB伴失眠患者的失眠状态和中医证候,提高患者的睡眠质量.
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益气小复方抑制三阴性乳腺癌外泌体传递耐药信息的作用机制研究
目的:探讨三阴性乳腺癌细胞(MDA-MB-231)顺铂(DDP)耐药细胞株释放的外泌体(Exosomes,EXOs)在细胞间可能存在的耐药信息传递作用及益气小复方对外泌体传递耐药信息的阻滞作用.方法:以三阴性乳腺癌亲本细胞MDA-MB-231及其DDP耐药细胞(MDA-MB-231/DDP)为模型,采用过滤离心法提取MDA-MB-231/DDP外泌体(DDP-EXO);透射电子显微镜观察鉴定细胞DDP-EXO形态;Western blot检测其CD63、TSG101、CD9的表达;用激光共聚焦显微镜追踪DDP-EXO与敏感细胞MDA-MB-231的相互作用;MTr法检测M DA-MB-231与DDP-EXO共培养后对DDP的IC50的影响及益气小复方干预DDP-EXO与MDA-MB-231细胞共培养后对DDP IC50的影响.结果:透射电子显微镜下观察DDP-EXO呈现典型的圆形或椭圆形杯口状结构,直径40～ 100 nm;DDP-EXO表达外泌体标志蛋白CD63、TSG101、CD9;用PKH67标记DDP-EXO显示,DDP-EXO可以被敏感细胞MDA-MB-231摄取;敏感细胞株MDA-MB-231与DDP-EXO共培养48 h后,DDP的IC50升高2.24倍,差异有统计学意义(P＜0.01);MDA-MB-231细胞与DDP-EXO共培养,再予益气小复方干预后DDP IC50明显降低(P＜0.01).结论:三阴性乳腺癌外泌体可能具有传递耐药信息的作用,耐药细胞外泌体能够使敏感细胞获得一定耐药性,益气小复方可一定程度上阻滞外泌体传递耐药性.
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蔡氏育肾培元方对卵巢低反应患者卵巢颗粒细胞基因表达及分泌功能的影响
目的:探讨蔡氏育肾培元方对卵巢低反应(POR)患者卵巢颗粒细胞基因表达及分泌功能的影响.方法:选取检测合格的6例样本,随机分为治疗组与对照组,每组各3例.治疗组服用育肾培元方,对照组不用任何药物.于干预前及干预3个月后拮抗剂方案超促排卵,取两次取卵的卵巢颗粒细胞进行RNA-seq测序,并对相关差异基因进行qPCR和免疫印迹验证;同时对颗粒细胞进行分离培养,检测两组颗粒细胞的生长及分泌功能.结果:①RNA-seq测序显示,治疗组患者的颗粒细胞在药物治疗后表达上调的相关基因主要富集于免疫应答、细胞活化和细胞黏附等功能,且治疗组第二次取卵时上调的免疫应激基因的数量显著降低;通过进一步的基因富集分析表明,治疗组治疗3个月后卵巢颗粒细胞的卵泡发育相关基因及卵巢相关基因均较对照组上调.②通过对部分上调基因(PTPN6、CYBA、FOS、ITGB7等)以及一些下调基因(IL1B,TNFAIP3)的qPCR验证显示,这些基因的表达模式与RNA测序结果较为一致;另外,在表达上调基因中发现,部分基因与卵巢功能密切相关,如FOS和PTPN6基因.③免疫印迹结果显示,育肾培元方可改善PTPN6、CYBA、ITGB7及IL1B基因在颗粒细胞中的表达模式.④细胞实验证实,对照组颗粒细胞在体外培养过程中细胞贴壁能力较差,细胞活力较低,细胞突触不发达;而治疗组颗粒细胞在体外培养过程中细胞贴壁能力较强,细胞突触发达且细胞增殖速度较快.⑤对颗粒细胞体外分泌功能测定显示,治疗组的颗粒细胞分泌的雌二醇(E2)和孕酮(P)都显著高于对照组(P＜0.05).结论:育肾培元方可以降低POR患者的免疫应激反应,改善卵巢颗粒细胞卵巢及卵泡发育相关基因的表达模式,增强卵巢细胞的生长活性及分泌功能,从而改善了POR患者超促排治疗的卵巢反应性.
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启心饮对高血压左室肥厚模型大鼠左室重构的干预作用
目的:观察启心饮对高血压左室肥厚大鼠模型血压、心肌舒缩功能及左室重构的影响.方法:将60只SD雄鼠随机分为假手术组、模型组、西药(雅施达)组、丹参组、启心饮高剂量组、启心饮低剂量组,每组10只.除假手术组外,均进行高血压左室肥厚动物模型制备.各组从造模前一日开始,每日灌胃相应药物或蒸馏水,连续8周.分别于造模前、造模后4周、造模后8周测量血压.干预8周后,心超测定室间隔厚度(LAD)、左室后壁厚度(LVST)、射血分数(EF)等,计算相对室壁厚度(RWT);取心脏计算左室质量指数(LVMI);取心肌组织进行HE染色及病理形态学观察.结果:干预8周后,启心饮高、低剂量组收缩压较模型组明显降低(P＜0.01);其中高剂量组作用较低剂量组作用明显(P＜0.01).干预8周后,模型组RWT较假手术组明显增高(P＜0.01);与模型组比较,启心饮高、低剂量组RWT均显著降低(P＜0.01);各组EF差异无统计学意义(P＞0.05).反映心肌肥厚程度的LVMI,模型组较假手术组显著升高(P＜0.01);启心饮高剂量组LVMI较模型组显著降低(P＜0.01).心肌组织的病理学观察显示西药组及启心饮高剂量组的心肌形态均得到明显改善.结论:启心饮能明显降低高血压左室肥厚大鼠的收缩压、改善心肌舒缩功能,具有逆转左室重构的作用.
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大分子灵芝多糖对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用
目的:探讨超滤管截留得到的大分子量灵芝多糖(ultrafiltered macromolecular Ganoderma lucidum polysaccharide,UM-GLP)对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用.方法:以非小细胞肺癌细胞A549和NCI-H1299作为研究对象,并以空白培养基和紫杉醇(PTX)处理分别作为空白对照和阳性对照.采用MTr法检测UM-GLP对A549和NCI-H1299细胞增殖的抑制作用,划痕实验检测UM-GLP对A549和NCI-H1299细胞迁移能力的抑制作用,Transwell实验检测UM-GLP对A549和NCI-H1299细胞侵袭能力的抑制作用.结果:MTT实验结果显示,随着UM-GLP和PTX药物浓度的增加,细胞增殖抑制率明显增加,UM-GLP浓度在0.5～2.0 mg/ml时,与PTX浓度在25～ 100 nmol/L的抑制效果相仿.A549和NCI-H1299细胞划痕实验结果显示,与空白对照组比较,UM-GLP组和PTrx组的迁移距离均明显缩短(P＜0.05).Transwell实验结果显示,UM-GLP(2 mg/ml)处理后,非小细胞肺癌细胞侵袭数量显著低于空白对照组(P＜0.05);并且UM-GLP对A549细胞侵袭能力的抑制作用与紫杉醇组(0.1μmol/L)相当,对NCI-H 1299细胞侵袭能力的抑制作用小于紫杉醇组(0.1 μmol/L) (P＜0.05).结论:大分子量灵芝多糖可有效抑制非小细胞肺癌细胞A549和NCI-H1299的增殖、迁移和侵袭能力.
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柴胡皂苷d对大鼠肝星状细胞收缩性的影响
目的:观察植物性雌激素柴胡皂苷d(ssd)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)收缩性的影响,并探讨其作用机制.方法:培养大鼠肝星状细胞,分为对照组、内皮素(ET)组、ET+ SSd组、ET+SSd+MPP组和ET+SSd+PHTPP组.用胶原收缩法检测雌激素α受体拮抗剂(MPP)和雌激素β受体拮抗剂(PHTPP)对细胞收缩的影响,用Western blot方法在蛋白水平检测雌激素受体表达及Rho激酶通路蛋白的变化.结果:SSd处理后,可明显抑制ET-1引起的胶原凝胶收缩(P＜0.05),PHTPP可以部分抵消SSd的抑制作用(P＜0.05),MPP作用不明显.Western blot结果显示,各组HSC-T6细胞均表达ERβ,而不表达ERα;ET组RhoA蛋白表达及p-moesin/moesin比值较对照组明显升高(P＜0.05),SSd+ET组RhoA蛋白表达及p-moesin/moesin比值较ET组明显降低(P＜0.05),SSd+ET+PHTPP组RhoA蛋白表达及p-moesin/moesin比值较SSd+ET组明显升高(P＜0.05).结论:SSd可显著抑制大鼠肝星状细胞收缩;SSd通过ERβ受体抑制大鼠肝星状细胞的收缩,其机制可能与Rho激酶通路的moesin蛋白磷酸化有关.
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逍遥解郁方抗大鼠卒中后抑郁的相关作用机制研究
目的:基于单胺能神经信号通路探讨逍遥解郁方抗大鼠卒中后抑郁(PSD)的作用机制.方法:选取SD大鼠50只,随机分为空白组、模型组、氟西汀组及中药低、高剂量组,每组10只.首先采用大脑中动脉线栓阻塞法(MCAO)建立卒中大鼠模型,在此基础上采用慢性不可预见性温和刺激法(CUMS)结合孤养法建立抑郁模型.造模成功后,各药物组大鼠分别给予相应药物连续灌胃28 d.采用强迫游泳实验和糖水偏好实验对大鼠进行行为学评定;采用ELISA法检测血浆5-羟色胺(5-HT)和去甲肾上腺素(NE)浓度;RT-PCR法检测大鼠海马组织5-HT1AR、5-HT2AR mRNA表达.结果:与空白组比较,模型组大鼠在强迫游泳实验中不动时间明显延长、挣扎时间明显缩短,糖水偏好度明显降低(P＜0.01);与模型组比较,氟西汀组大鼠不动时间无明显变化(P＞0.05),中药干预各组大鼠不动时间明显缩短(P＜0.01),各组大鼠挣扎时间均明显延长(P＜0.01),且糖水偏好度明显增加(P＜0.05).与空白组比较,模型组大鼠血浆5-HT及NE含量均明显降低(P＜0.01);与模型组比较,各药物组大鼠血浆5-HT及NE含量明显升高(P＜0.05).与空白组比较,模型组大鼠海马组织5-HT1ARmRNA表达明显降低,5-HT2AR mRNA表达明显增加(P＜0.01);与模型组比较,各药物干预组大鼠海马组织5-HT1AR mRNA表达明显增加(P＜0.05,P＜0.01),氟西汀组和中药高剂量组大鼠海马组织5-HT1A R mRNA表达均明显降低(P＜0.05,P＜0,01).结论:逍遥解郁方可显著提高PSD大鼠血浆5-HT及NE含量;其升高5-HT含量的机制可能与其上调大鼠海马组织5-HT1AR mRNA表达、下调5-HT2AR mRNA表达有关.
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平目汤含药血清对人Graves眼病眼眶脂肪细胞增殖及凋亡的影响
目的:研究平目汤含药血清对前脂肪细胞及成熟脂肪细胞的作用,探讨其治疗Graves眼病的机制.方法:采用组织块法将人Graves眼病眼眶前脂肪细胞原代培养并传代,选用间接免疫荧光技术鉴定;用平目汤药液灌胃SD大鼠制备平目汤含药血清,并配成低(5％)、中(10％)、高(20％)三个剂量组;油红O染色观察前脂肪细胞的诱导分化作用;MTr法检测平目汤对前脂肪细胞增殖的影响;流式细胞术检测平目汤对成熟脂肪细胞凋亡率的影响.结果:①通过组织块法成功培养出梭形细胞,间接免疫荧光检测为前脂肪细胞.②成功诱导前脂肪细胞分化,油红O染色证实为成熟脂肪细胞.③平目汤各组均可显著抑制前脂肪细胞的分化,与空白对照组及地塞米松组比较差异明显.④平目汤各组均可下调前脂肪细胞增殖活性,以平目汤中剂量组、干预96 h效果佳,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).⑤平目汤各组成熟脂肪细胞凋亡率明显高于空白对照组(P＜0.05),以平目汤中剂量组效果佳.结论:平目汤含药血清可抑制人Graves眼病眼眶前脂肪细胞增殖、促进眼眶成熟脂肪细胞凋亡、减少眼眶脂肪细胞的数量,从而减少眼眶脂肪容积、改善Graves突眼症状.
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半夏泻心汤通过介导MAPK信号通路抑制巨噬细胞炎症因子的分泌
目的:观察半夏泻心汤体外抑制巨噬细胞分泌炎症因子的作用及对MAPK炎症信号通路的影响,以探讨其治疗胃炎的可能机制.方法:取小鼠8只,提取小鼠腹腔巨噬细胞,原代培养;用家兔制备半夏泻心汤含药血清和对照血清.小鼠腹腔巨噬细胞分为空白对照组、脂多糖(LPS)组、地塞米松组及半夏泻心汤5％含药血清组、10％含药血清组和20％含药血清组,各组分别给予对照血清、LPS、地塞米松和各浓度含药血清.作用6h后收集细胞,用qRT-PCR方法检测细胞内IL-1β、IL-8和TNF-α的mRNA相对表达量;作用24h后,用ELISA方法检测细胞培养上清中炎症因子IL-1β、IL-8和TNF-α的蛋白含量.收集20％含药血清作用30 min、“60 min和2h后的细胞,用Western blot方法检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)和P38的磷酸化水平.结果:qRT-PCR结果显示,与不含药血清对照组比较,LPS能明显促进小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β、IL-8和TNF-α的mRNA表达(P＜0.01);与LPS组比较,地塞米松能明显抑制小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β、IL-8和TNF-α的mRNA表达(P＜0.01);5％含药血清能明显抑制巨噬细胞TNF-α的mRNA表达(P＜0.01),10％和20％含药血清均能明显抑制IL-1β、IL-8和TNF-α的mRNA表达(P＜0.01).ELISA结果显示,5％含药血清能明显抑制小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β的分泌(P＜0.01),10％、20％含药血清能明显抑制小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β、IL-8和TNF-α的分泌(P＜0.05,P＜0.01).Western blot结果显示,半夏泻心汤含药血清作用30 min、60 min均能抑制小鼠腹腔巨噬细胞MAPK信号通路中P38磷酸化水平(P＜0.05、P＜0.01);含药血清作用2h能抑制巨噬细胞的ERK和P38的磷酸化水平(P＜0.01).结论:半夏泻心汤可能通过调节巨噬细胞内MAPK炎症信号通路中ERK、P38的磷酸化水平,抑制巨噬细胞分泌炎症因子IL-1β、IL-8和TNF-α而起到治疗胃炎的作用.
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白及多糖对酪氨酸酶活性及黑色素生成的影响
目的:观察白及多糖对酪氨酸酶(TYR)活性及黑色素形成相关蛋白TYR、小眼畸形相关转录因子(MITF)表达的影响.方法:超声提取白及多糖粗品.用不同浓度的白及多糖(0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 g/L)和曲酸(阳性对照,0.1、0.2、0.4 g/L)作用于小鼠B16黑色素瘤细胞,用于检测细胞活性、TYR活性;各组细胞分别加入α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)及不同浓度药物共培养后检测黑色素含量;将细胞分为空白组、模型组(α-MSH)、曲酸组及白及多糖低、中、高剂量组,予相应干预48 h后,应用Western blot检测B16细胞TYR和小眼畸形相关转录因子(MITF)的蛋白表达情况.结果:不同浓度曲酸组、白及多糖(0.05～0.8 g/L)组、空白组间的细胞活性差异无统计学意义(P＞0.05).与空白组比较,白及多糖在浓度0.1～0.8 g/L对TYR的活性有显著抑制作用(P＜0.05,P＜0.01),其作用与阳性对照曲酸相当;白及多糖在浓度0.1～0.8 g/L有较高的抑制黑色素生成作用(P＜0.05,P＜0.01);白及多糖浓度0.2～0.4 g/L对TYR、MITF蛋白表达水平有明显抑制作用(P＜0.05).结论:白及多糖可能通过抑制TYR的活性和蛋白表达及MITF的蛋白表达,起到抑制黑色素生成的作用.
关键词： 白及多糖 黑色素 小鼠B16黑色素瘤细胞 酪氨酸酶 小眼畸形相关转录因子 -
实体瘤中心变性粉碎引流术在兔VX2移植瘤模型实施的可行性评价
目的:探讨兔VX2移植瘤实施实体瘤中心变性粉碎及引流的可行性.方法:采用兔VX2背部移植瘤模型,一侧作为对照侧,一侧作为试验侧.试验侧实施热变性4 min,经7mm直径木工钻肿瘤热变性区域中心粉碎,并内置引流管以排出渗出液,先后共治疗2次(简隔3 d).于第2次治疗后第3日切除双侧肿瘤,观察肿瘤增长情况及是否有脏器的转移.结果:试验侧较对照侧肿瘤质量降低50 g,提示该操作对试验侧肿瘤增长具有抑制作用;心、肝、脾外观无明显改变,试验侧肾脏因一度肿瘤体积过大受到压迫,肺脏出现肿瘤结节.结论:实体瘤中心变性粉碎引流术可以在兔VX2肿瘸模型上实施,且热变性后引流以排出渗出液是必要的,提示该方法可用于大体积肿瘤的治疗.
