生理学报杂志
Acta Physiologica Sinica 생리학보
- 主管单位： 中国科学院
- 主办单位： 中国科学院上海生命科学研究院,中国生理学会
- 影响因子： 0.86
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0371-0874
- 国内刊号： 31-1352/Q
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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一氧化氮对家兔房室结细胞自发活动的电生理效应
应用经典玻璃微电极技术,观察一氧化氮(NO)对家兔房室结细胞自发活动的电生理效应及其作用机制.结果显示:(1)NO供体硝普钠(SNP,1～1000 μmol/L)及SIN-1(100,1000μmol/L)剂量依赖性地抑制房室结细胞的动作电位幅值(APA)、零相大上升速度(Vmax)、4期自动除极速度(VDD)及自发放电频率(RSF);(2)应用L型钙通道开放剂Bay K8644(0.25 μmol/L),可拮抗SNP对房室结细胞的电生理效应;(3)提高灌流液中钙离子浓度(5 mmol/L)也可逆转SNP对起搏细胞的抑制效应;(4)用无钙K-H液灌流房室结,可完全阻断SNP对房室结细胞的抑制效应.(5)应用鸟苷酸环化酶阻断剂甲基美蓝(50μmol/L)对SNP的上述电生理效应无影响.以上结果提示,NO可能是通过cGMP非依赖性途径减弱钙离子内流,进而抑制了家兔房室结细胞的自发电活动.
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脊髓背角Ⅱ板层长时程增强诱导及维持过程中的突触形态计量学研究
本研究用体视学方法探讨了在C纤维诱发电位长时程增强(1ong-term potentiation,LTP)的诱导及维持过程中的脊髓背角Ⅱ板层的突触形态变化.结果显示:(1)在LTP形成后30 min,Ⅱ板层内的突触后致密物质(postsynaptic density,PSD)增厚,突触间隙增宽;(2)在LTP形成后3 h,PSD厚度、突触间隙宽度及突触界面曲率都有明显增加;(3)在LTP诱导和维持全过程中,总突触的数密度比对照组有明显增高.(4)在LTP形成后3 h和5 h,穿孔性突触的数密度与对照组比较有明显增高.上述结果显示:PSD增厚是LTP诱导阶段的主要形态学变化.突触界面曲率增大及穿孔突触数目增多是LTP维持阶段的主要形态学基础.
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FRIL蛋白体外维持脐血造血干/祖细胞的作用及细胞周期调控基因的表达
为探讨新的豆类凝集素(Flt3 receptor-interactinglectin,FRIL)体外维持脐血CD34+细胞的作用以及维持过程中细胞周期调控基因HTm4及HTm4S mRNA的表达及意义,我们利用FRIL维持培养脐血CD34+细胞,对其增殖曲线、细胞周期及集落形成能力进行常规分析,并用半定量RT-PCR法分别测定FRIL体外维持不同时间后脐血CD34+细胞中周期调控基因HTm4及HTm4S mRNA的表达变化.结果显示,FRIL培养的CD34+造血干/祖细胞的增殖趋势平缓,整个培养期间细胞增殖倍数不超过起始的3倍;14 d之前,FRIL培养细胞的高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)形成集落数与FL组无差别,其后则维持高于FL的情况.细胞周期分析则显示,在28 d的培养过程内,利用FRIL培养的细胞始终有80%以上维持在G0期;而周期调控基因HTm4及HTm4S在刚分离的脐血CD34+细胞中的表达水平较高;但培养1 d后,几乎检测不到HTm4基因的表达;培养3～14 d,该基因的表达回升并持续维持在高水平.而HTm4S基因的表达在第7 d达高水平,其余时间基本呈稳定表达.转染HTm4和HTm4S,亚细胞定位结果显示HTm4主要定位于核周围,而HTm4S则定位于整个胞浆,由此可能导致它们功能的区别.以上结果提示,长期培养体现出FRIL在维持造血干/祖细胞多能性上的优势;细胞周期调控基因HTm4及其新剪接子参与了FRIL体外长期维持脐血造血干/祖细胞处于静息状态的过程.
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c-myb对人绒毛膜促性腺激素诱导的大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的影响
采用离体细胞体外孵育法,观察反义c-myb寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucletides,ODN)对人绒毛膜促性腺激素(human chori-onic-gonadotropin hormone,hCG)诱导的大鼠间质细胞睾酮分泌的影响,并进一步探讨了外源性二丁酰cAMP(dbcAMP)、Ca2+以及蛋白质抑制剂放线菌酮(cycloheximide,CYX)对间质细胞中c-Myb蛋白表达和睾酮分泌的作用.结果表明,反义c-myb ODN呈剂量依赖性地抑制hCG诱导的离体间质细胞的睾酮分泌,同时使间质细胞中c-Myb蛋白免疫组化染色下降;而无义tat ODN没有相应的作用.100 μmol/L的dbcAMP可进一步促使hCG诱导的间质细胞分泌睾酮,并且使间质细胞中c-Myb蛋白免疫组化染色IOD值升高,与hCG组相比,具有统计学意义.钙离子通道阻断剂维拉帕米(10 μmol/L)和蛋白质抑制剂放线菌酮(50 μg/ml)可使hCG诱导的大鼠间质细胞的睾酮分泌下降,并使间质细胞的c-Myb蛋白免疫组化染色降低.该结果说明c-myb参与hCG诱导的大鼠间质细胞睾酮分泌作用.
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组胺对肺动脉内皮细胞一氧化氮合酶基因表达的影响
本实验研究了组胺对原代培养的肺动脉内皮细胞一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)基因表达的影响及分子机制.采用RT-PCR和免疫印迹技术分别检测mRNA和蛋白质的表达水平,用荧光素酶报告基因实验检测eNOS基因转录起始点上游长1.6-kb的启动子活性,用硝酸还原酶法检测NO的产量.结果发现,组胺增强eNOS表达,呈浓度和时间依赖性,10μmol/L组胺处理肺动脉内皮细胞24 h可使eNOSmRNA和蛋白质的表达达到高峰,eNOSmRNA水平为正常对照组的160.8±12.2%(P＜0.05),蛋白质水平为正常对照组的136.2±11.2%(P＜0.05).特异性CaMK Ⅱ抑制剂KN-93可抑制组胺的这一效应,表明组胺可通过激活CaMK Ⅱ增强肺动脉内皮细胞eNOS基因的表达.报告基因实验表明,10μmol/L组胺处理24 h后肺动脉内皮细胞eNOS基因启动子的活性增强,为正常对照组的148.2±33.7%(P＜0.05).组胺可使肺动脉内皮细胞产生NO增加.这些结果表明组胺在转录水平增强肺动脉内皮细胞eNOS基因的表达,并使细胞产生NO增加,这可能是组胺调节肺血管张力的机制之一.CaMK Ⅱ可能是组胺增强肺动脉内皮细胞eNOS基因表达的途径之一.
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依托咪酯对成年大鼠脊髓胶状质局部突触传递的作用
应用盲插全细胞膜片钳技术,在成年大鼠脊髓薄片上观察依托咪酯(etomidate,ET)对脊髓胶状质局部突触传递的影响.实验结果显示,在钳制电压为-70 mV时,500μmol/L的ET对微小兴奋性突触后电流(mEPSC)的持续时间、频率和幅度都无明显的作用.在钳制电压为0 mV时,50μmol/L的ET使GABA能微小抑制性突触后电流(mIPSC)的持续时间延长45.57±12.46%(P＜0.05),但对其频率和幅度无影响.同样在钳制电压为0 mV的情况下,50 μmol/L的ET对甘氨酸能mIPSC的持续时间、频率及幅度均无作用.以上结果表明,在成年大鼠的脊髓胶状质,ET主要通过延长GABA能mIPSC的持续时间,即延长受体通道的开放时间发挥作用,ET对于兴奋性的突触传递没有直接的作用.
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侧脑室注射肾上腺髓质素增加大鼠心血管相关核团中c-fos的表达并激活脑内一氧化氮神经元
本研究利用Fos蛋白和一氧化氮合酶(nNOS)双重免疫组化方法,观察侧脑室注射肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)对大鼠心血管相关核团中c-fos表达及一氧化氮神经元的影响,以探讨ADM在中枢的作用部位并研究其在中枢的作用是否有NO神经元参与.侧脑室注射ADM(1 nmol/kg,3 nmol/kg)诱发脑干的孤束核、后区、蓝斑核、臂旁核和外侧巨细胞旁核,下丘脑的室旁核、视上核和腹内侧核以及前脑的中央杏仁核和外侧缰核等多个部位的心血管中枢出现大量Fos样免疫反应神经元.侧脑室注射ADM(3 nmol/kg)引起脑干的孤束核、外侧巨细胞旁核,下丘脑的室旁核、视上核内的Fos-nNOS双标神经元增加;ADM(1 nmol/kg)亦可引起室旁核、视上核内的Fos-nNOS双标神经元增加,而对孤束核、外侧巨细胞旁核内的Fos-nNOS双标神经元无影响.降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)受体拮抗剂CGRP8-37(30 nmol/kg)可明显减弱此效应.以上结果表明,ADM可兴奋脑内多个心血管相关核团的神经元并激活室旁核、视上核、孤束核及外侧巨细胞旁核内的一氧化氮神经元,此效应可能部分由CGRP受体介导.
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环孢霉素A通过ROS-Cyclophilin A-ERK1/2信号途径抑制人脐静脉内皮细胞与中性粒细胞粘附
为研究环孢霉素A(cyclosporin A,CsA)对缺氧/复氧诱导人脐静脉内皮细胞(ECV-304)与中性粒细胞粘附的影响,本工作以缺氧/复氧诱导粘附为模型,采用β-N-乙酰氨基己糖苷酶比色法检测粘附率,流式细胞术检测ECV-304细胞表面粘附分子E-选择素(E-selectin)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的表达,Fenton反应测定活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量,West-em-blot法检测ECV-304细胞亲环素A(cyclophilinA,CyPA)、磷酸化及总细胞外信号调节激酶(ERK1/2)蛋白的表达.结果发现,ECV-304细胞经缺氧/复氧处理后,ROS释放增多,E-selectin、ICAM-1的表达上调,其表面中性粒细胞的粘附增加,CsA能显著抑制缺氧/复氧的上述作用.缺氧/复氧后,CyPA蛋白表达明显上调,ERK1/2显著活化,细胞总ERK1/2蛋白表达无明显改变.CyPA抑制剂CsA以及CyPA反义寡核苷酸均明显减轻缺氧/复氧诱导的ERK1/2激活,显著减少ECV-304细胞与中性粒细胞粘附.ERK1/2信号通路特异性阻断剂PD98059亦显著抑制ECV-304细胞与中性粒细胞的粘附.上述结果提示,CsA抑制缺氧/复氧诱导的ECV-304细胞与中性粒细胞粘附,并可能通过抑制ROS-Cyclophilin A-ERK1/2的信号转导途径实现.
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活性氧介导内皮素-1诱导的培养新生大鼠心肌细胞肥大
实验在原代培养的新生大鼠心肌细胞中进行,检测内皮素-1(endothelin-l,ET-1)及其他药物对心肌细胞活性氧(reactiveoxygen species,ROS)产生和心肌细胞肥大的作用,以探讨ROS在ET-1诱导的心肌细胞肥大信号通路中的作用及ROS与蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)活化的关系.细胞内ROS水平用ROS敏感的荧光探针2,7-dichlorofluorescin dictate(DCF-DA)反映,心肌细胞肥大通过细胞内RNA含量、细胞内蛋白质含量、细胞表面积大小来确定.实验结果如下:单独使用ET-1后,心肌细胞内反应ROS含量的DCF-DA荧光值比对照组增加77%,反应心肌肥大的PI荧光值、细胞内蛋白质含量、细胞表面积也分别比对照组增加128%、87%和151%.ET-1合用内皮素受体A亚型(ETA)受体拮抗剂ABT-627、PKC抑制剂CC或过氧化氢酶后,DCF-DA的增加分别减弱62%、60%和51%,同时心肌细胞肥大也被抑制,单独使用PKC激动剂佛波醇脂(PMA)也能使DCF-DA的产生比对照组增加74%.因此,在ET-1诱导心肌细胞肥大的过程中,ET-1能够使心肌细胞产生ROS和诱导ROS依赖的心肌细胞肥大,这一作用依赖于ETA受体的激活和PKC的活化,·ROS在ET-1诱导心肌细胞肥大中起信号传递的作用.
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整合素介导小鼠卵内钙离子增加
为了研究整合素是否作为跨膜信号传递受体介导小鼠卵[Ca2+]i的变化并探讨其机制.本实验采用甘-精-甘-天冬-丝-脯(GLY-ARG-GLY-ASP-SER-PRO,RGD肽)、纤连蛋白(fibronectin,Fn)及抗整合素α6、β1的单克隆抗体作用于负载了钙探针Fluo-3/AM的去透明带小鼠卵,用激光共聚焦显微镜检测小鼠卵的荧光强度以反映卵[Ca2+]i;用无钙液替代有钙液、或用酪氨酸激酶抑制剂或蛋白激酶C的抑制剂预先作用于卵,然后再观察RGD肽所致卵[Ca2+]i的变化.结果显示整合素配体RGD肽或Fn作用于去透明带小鼠卵可引起卵[Ca2+]i增加,增加的程度与精子作用相似;去除培养液中的Ca2+后,再用RGD肽、Fn作用仍可引起卵[Ca2+]i增加;用功能性的抗小鼠整合素α6、β1的单克隆抗体也可引起不同程度的卵[Ca2+]1增加,尤其以抗小鼠整合素α6单克隆抗体的作用明显;用酪氨酸激酶抑制剂预先作用于鼠卵,RGD肽或精子作用都不再引起卵[Ca2+]i增加;蛋白激酶C抑制剂预先作用鼠卵,RGD肽及Fn也不再引起卵[Ca2+]i增加.实验证明,小鼠卵膜整合素与其配体结合可使卵内贮存钙离子释放,引起卵[Ca2+]i增加这一卵激活的早期事件;整合素介导小鼠卵激活需要酪氨酸激酶信号转导途径的参与;蛋白激酶C也参与了整合素介导的卵激活.
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鞘内注射孤啡肽对大鼠足底注入蜜蜂毒诱致长时程自发痛、痛敏和炎症的不同效果
为进一步了解孤啡肽在脊髓水平是否具有抗伤害及抗炎作用,本实验在具有多种痛行为表现的蜜蜂毒模型上观察了鞘内注射孤啡肽对大鼠一侧后足底注入蜜蜂毒所诱致的同侧自发缩足反射、原发热和机械性痛敏以及注射部位炎症反应的影响,同时观察了新的高选择性孤啡肽受体拮抗剂CompB的作用.结果表明:与生理盐水对照组比较,鞘内注射孤啡肽(3、10、30 nmol/10μl)对蜜蜂毒诱发的自发缩足反射次数的抑制作用随剂量提高而增大,抑制率分别为37±7,43±6and57±11%(三个剂量vs对照,P＜0.05);而对蜜蜂毒诱发的注射部位炎症反应(爪体积、爪背腹厚度和蛋白渗出的增加)无显著影响.CompB(30 nmo1)可完全翻转10 nmol孤啡肽对自发缩足反射的抑制作用.鞘内单次或重复注射孤啡肽(10 nmol/10μl)对蜜蜂毒诱致的原发性热和机械性痛敏的发生和维持均无作用.本实验结果提示,外源性孤啡肽在脊髓通过孤啡肽受体的介导产生一定的镇痛作用,但是它可能仅对持续性自发痛有抑制作用,而对热和机械性痛敏及炎症反应均无影响.
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心力衰竭状态下的动脉压力感受器反射
心力衰竭是以心脏泵血功能降低(心输出量减少)为始动因素的临床综合征.心输出量降低首先引起动脉压力感受性反射失负荷,进而通过迷走-交感机制加快心率;同时,支配血管床的交感传出活动增强,进而增加总外周阻力.本文主要论述在心力衰竭状态下压力感受性反射在循环功能异常调控中的作用机制.本综述及我们近年的研究表明:(1)在心力衰竭状态下压力感受性反射功能明显减弱;(2)中枢血管紧张素Ⅱ和活性氧在压力感受性反射功能失调中发挥关键作用;(3)心交感传入刺激和化学感受性反射能抑制压力感受性反射;(4)适当的运动可以部分纠正异常的心血管反射活动.
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血管钠肽抑制异丙肾上腺素增强的大鼠心肌细胞钙瞬变
采用光谱荧光法研究血管钠肽(vasonatrin peptide,VNP)对心肌细胞内钙瞬变的作用及其机制,观察钠尿肽鸟苷酸环化酶(guanylate cyclase,GC)受体的特异性阻断剂(HS-142-1)、8-溴-环磷酸鸟苷(8-Br-cGMP)和镁蓝(methylene blue,MB)对心肌细胞内钙瞬变的影响.结果显示,异丙肾上腺素(isoproterenol,Iso)(10-10～10+-6mol/L)可剂量依赖性地引起心肌细胞内钙瞬变增强,相对于对照组分别增强(13±8)%(P＞0.05)、(26±13)%(P＜0.05)、(66±10)%(P＜0.01)、(150±10)%(P＜0.01)和(300±25)%(P＜0.01).此效应可被β肾上腺素受体阻断剂普萘洛尔(10-6mol/L)所阻断.VNP(10-10～10-6mol/L)可剂量依赖性地抑制Iso(10-8mol/L)引起的心肌细胞内钙瞬变幅值的升高,相对于Iso(10-8mol/L)分别减弱(99±3)%(P＞0.05)、(96±2)%(P＜0.05)、(84±6)%(P＜0.01)、(66±3)%(P＜0.01)和(62±3)%(P＜0.01).8-Br-cGMP(10-7～10-3mol/L)也可剂量依赖性地抑制Iso(10-8mol/L)引起心肌细胞内钙瞬变的增强.HS-142-1(2×10-5 mol/L)使VNP的作用几乎完全消失.MB是GC的抑制剂,10-5 mol/L MB不但使VNP的作用完全消失,而且增强Iso对心肌细胞内钙瞬变的效应.VNP和HS-142-1本身对心肌细胞内钙瞬变无显著影响.而MB使心肌细胞内钙瞬变值升高.结果表明,·VNP是作用于心肌细胞的钠尿肽GC受体,通过升高细胞内cGMP水平而起到降低细胞内钙瞬变的作用的.
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血小板活化因子对豚鼠心室肌细胞动作电位和钾通道的影响
应用全细胞膜片钳技术研究了血小板活化因子(platelet activatingfactor,PAF)对豚鼠心室肌细胞动作电位和钾电流的影响.结果发现,当电极内液ATP浓度为5 mmol/L(模拟正常条件)时,1 μmol/L PAF使APD90由对照的225.8±23.3 ms延长至352.8±29.8ms(n=5,P＜0.05);使IK尾电流在指令电压+30 mV由对照的173.5±16.7 pA降至152.1±11.5 pA(P＜0.05,n=4);使Ikl在指令电压为-120 mV时由对照组的-6.1±1.3 nA降至-5.6±1.1 nA(P＜0.05,n=5);但PAF在生理膜电位范围(-90mV～+20mV)对IK1没有影响.当电极内液ATP浓度为0mmol/L时,IK·ATP开放(模拟缺血条件),1 μmol/LPAF却显著缩短APD90,由对照的153±24.6 ms缩短至88.2±19.4 ms(n=5,P＜0.01).而用1 μmol/L格列本脲(IK·ATP的特异阻断剂)预处理后,恢复了PAF可显著延长动作电位时程的作用.结果提示,PAF可能扩大缺血心肌和正常心肌细胞动作电位时程的不均一性,是缺血/再灌注性心律失常发生的重要原因.
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羟基马桑毒素所致的大鼠海马锥体细胞痫样放电活动
本研究采用离体海马脑片电生理研究技术,细胞外记录海马锥体细胞群体锋电位(population spike,PS),观察羟基马桑毒素(tutin)对大鼠海马脑片CA1区锥体细胞电活动的影响,探讨tutin是否具有致痫作用及其致痫机制.结果如下:(1)用40、30和20μg/ml浓度的turin灌流海马脑片,可显著增高由顺向刺激Schaffer侧支所诱发的PS的幅度,灌流tutin 30min时,PS第一个波的幅度分别为对照的(388.7±20.1)%、(317.2±19.1)%和(180.9±11.6)%(各组n=5,P＜0.05).(2)伴随PS波幅的增高,可出现成串痫样放电波,波数4～11个不等.(3)灌流tutin后的部分脑片(n=9/34),在未刺激Schaffer侧支时也出现自发的成串、高幅痫样放电.(4)灌流CNQX阻断非NMDA受体后,再灌流tutin,PS幅度和放电波数均无显著性变化,即CNQX可完全抑制turin所致的痫样放电;灌流AP-5阻断NMDA受体后,tutin仍可使PS幅度增高但放电波数无显著性增加,即AP-5可部分抑制turin所致的痫样放电.上述结果表明,turin可使海马脑片锥体细胞兴奋活动增强,具有致痫作用;兴奋性谷氨酸受体尤其是非NMDA受体可能介导tutin的致痫作用.
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肢体缺血预处理减少大鼠全脑缺血再灌注诱导的海马CA1区锥体神经元凋亡
探讨肢体缺血预处理(limb ischemic preconditioning,LIP)对大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区锥体细胞凋亡的影响.46只大鼠椎动脉凝闭后分为假手术组、肢体缺血组、脑缺血组、LIP组.重复夹闭大鼠双侧股动脉3次(每次10 min,间隔10 min)作为LIP,之后立即夹闭双侧颈总动脉进行全脑缺血8 min后再灌注.DNA凝胶电泳、TUNEL和吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)双染技术从生化和形态学方面观察海马神经元凋亡的情况.凝胶电泳显示,脑缺血组出现了凋亡特征性DNA梯状条带,而LIP组无上述条带出现.与脑缺血组比较,LIP可明显减少海马CA1区TUNEL阳性神经元数(17.8±5.8 vs 69.8±12,P＜0.01).AO/EB染色也显示LIP可明显减少脑缺血再灌注引起的神经元凋亡.以上结果提示,LIP可抑制脑缺血再灌注后海马神经元的凋亡,进而减轻脑缺血再灌注损伤,提供脑保护作用.
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他汀类药物对外周血内皮祖细胞的影响
本文旨在探讨他汀类药物氟伐他汀对外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)数量和功能的影响.用密度梯度离心从外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白(human fibronectin)包被的培养板中,培养7 d后,收集贴壁细胞,加入不同浓度氟伐他汀(分别为0.01、0.1、1、10μmol/L)和辛伐他汀(1 μmol/L),培养一定的时间(6、12、24、48 h).用激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-I和DiI-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs,用流式细胞仪检测其表面标志进一步鉴定EPCs,在倒置荧光显微镜下计数.采用MTT比色法、改良的Boyden小室、粘附能力测定实验和体外血管生成试剂盒观察EPCs的增殖能力、迁移能力、粘附能力和体外血管生成能力.结果显示,氟伐他汀可显著增加外周血EPCs的数量,并且EPCs数量随氟伐他汀浓度增加及作用时间延长而增加,1 μmol/L浓度氟伐他汀作用24h对EPCs的数量影响为显著(较对照组增加15倍,P＜0.05).在动物实验中,喂养氟伐他汀3周后,大鼠的EPCs也较对照组增加2倍(P＜0.05),进一步支持了体外实验的结果.氟伐他汀和辛伐他汀也显著改善外周血EPCs的粘附能力、迁移能力、增殖能力和体外血管生成的能力,相同浓度的氟伐他汀和辛伐他汀(1 μmol/L)对EPCs数量和功能的影响并无显著差异.上述观察结果提示他汀类药物可增加EPCs的数量,改善EPCs功能.
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缺血预处理合并低温及晶体停搏液对兔未成熟心肌的保护作用
本文拟探讨缺血预处理(ischemic preconditioning,IP)合并低温及晶体停搏液对幼兔的离体心脏是否具有心肌保护作用.采用Langendorff离体心脏灌注模型,灌注液为Krebs-Henseleit液(K-H液).取3～4周龄幼兔心脏,在第一部分实验中分为Con、IP1、IP2、IP3组(n=6),分别给予0、1、2、3次IP,其后各组心脏均在20℃低温下停灌2 h,37℃常温下再灌注30 min.在第二部分实验中分为SConI、SCon2、SCon3、SIPl、SIP2、SIP3组(n=8),其中SIPl、SIP2、SIP3组给予2次IP后灌注St.Tho-mas Ⅱ晶体停搏液(CCS)使心脏停搏,然后分别使心脏在32℃、25℃、20℃下停灌30、90和120min,其后各组均在37℃再灌注30 min.SConl,SCon2,SCon3三组则不给予IP,继续灌注20min后灌注CCS使心脏停搏,然后分别在32℃、25℃、20℃下停灌30、90和120 min,其后各组均在37℃再灌注30 min.以Maclab/4 s生理实验系统记录平衡末、缺血前、再灌注后1、3、5、10、20、30 min时心率(HR)、左心室发展压(LVDP)以及左心室内压上升及下降大速率(±dp/dtmax),测定再灌注末心肌组织中ATP和丙二醛(MDA)的含量,以及超氧化物歧化酶(SOD)的活性.在20℃低温停灌且停灌期间不给予CCS时,再灌注末IP2组LVDP×HR、+dp/dtmax和-dp/dtmax的恢复率分别为96%±21%、101%±19%和84%±15%,显著高于Con组和IP3组(P＜0.01,P＜0.05);心肌组织的ATP含量亦高于Con组(P＜0.01).在不同低温停灌且停灌期间给予CCS时,再灌注末SIP1、SIP2组的LVDP×HR、+dp/dtmax分别恢复到87%±14%、99%±26%(P＜0.05,vs SConl group)和87%±16%、102%±20%(P＜0.05,vs SCon2 group);心肌组织的ATP含量均分别显著高于SCon1组和SCon2组(P＜0.05),心肌组织MDA含量亦分别低于SCon1组和SCon2组(P＜0.05).上述结果提示,IP对在20℃低温停灌的兔未成熟心脏具有一定的心肌保护作用,2次IP的保护效应优于1次或3次IP.在停灌期间应用CCS,IP的心肌保护作用随停灌期间低温程度的升高而减弱.
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GABA介导杏仁外侧核对皮层A Ⅰ区神经元声反应的抑制:在体微电泳研究
在SD大鼠上应用多管微电极方法,观察微电泳GABA及其受体的拮抗剂或激动剂对杏仁外侧核(LA)抑制皮层A Ⅰ神经元声反应效应的影响.结果显示,电泳GABA能抑制皮层A Ⅰ区神经元的电活动,电泳GABAA受体拮抗剂bicuculline(BIC)则能易化其反应;电刺激LA能抑制皮层A I区听神经元声反应,电泳GABA产生类似于刺激LA的抑制效应;LA对皮层A Ⅰ区神经元的抑制效应能被BIC所翻转,而不能被甘氨酸受体拮抗剂strychnine所翻转,电泳GABAB型受体激动剂bac1ofen对神经元声反应无影响.上述结果表明,GABA可能是介导LA抑制皮层A Ⅰ区神经元声反应的终递质,并且是通过GABAA受体起作用的.
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纤维连接蛋白上调兔支气管上皮细胞过氧化氢酶表达
为从基因转录水平阐明纤维连接蛋白(fibronectin,Fn)与整合素(integrins)结合反应对支气管上皮细胞(bronchial epithelialcells,BECs)的抗氧化保护机制,本文在先前的工作基础上用臭氧(ozone,O3)攻击原代培养的兔BEC,RT-PCR扩增过氧化氢酶(catalase,CAT)的cDNA,PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后用凝胶成像系统进行灰度分析,反映CATmRNA的原始表达丰度,观察Fn处理的影响及蛋白酪氨酸激酶抑制剂genistein和钙调素抑制剂W7的作用.同时,将电泳展开的PCR产物电转移至尼龙膜上,用CAT特异性寡核苷酸探针杂交,证实PCR扩增产物为特异性目的基因的转录产物.结果证实:Fn(10μg/ml)处理可提高CAT表达(P＜0.01),蛋白酪氨酸激酶抑制剂genistein可阻断Fn对CAT mRNA表达的增强效应(P＜O.01);钙调素抑制剂W7对Fn处理后CAT mRNA表达增强也有抑制作用.提示:Fn可提高BEC细胞内CAT编码基因的转录水平,其上游信号途径与整合素介导的酪氨酸磷酸化或Ca2+-钙调素通路有关.
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Caveolin-1蛋白在17β-雌二醇抑制内皮素-1诱导血管平滑肌细胞增殖中的作用
本工作旨在研究Caveolin-1在17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)抑制内皮素-1(endothelin-1,ET-1)诱导血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖中的作用.在培养的VSMCs上,使用[3H]Thymidine([3H]TdR)掺入法、荧光免疫组化方法和Western blot观察E2处理VSMCs前后ET-1对DNA合成和caveolin-1蛋白表达的影响.结果显示,ET-1可以刺激VSMCs增殖.E2作用24 h后,可明显抑制ET-1的上述作用.免疫荧光证实,在VSMCs上有caveolin-1分布,ET-1刺激VSMCs增殖的过程中,VSMCs上caveolin-1蛋白荧光强度下降,而事先给予E2可逆转这种下降.Western blot证实,ET-1可抑制caveolin-1蛋白的表达而E2则可增加caveolin-1蛋白的表达.以上结果表明E2抑制ET-l诱导的VSMCs增殖可能与其增加caveolin-1蛋白表达有关.
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美普他酚及其同分异构体对角叉菜胶引起的炎症大鼠具有抗热痛敏作用
实验以清醒大鼠的缩腿潜伏期为指标,观察了腹腔注射美普他酚及其同分异构体112824和112825对角叉菜胶引起的热痛敏的影响.外周炎症由单侧足底注射角叉菜胶(2 mg/100 μl)引起.注射角叉菜胶3 h后,注射侧后肢局部红肿及热痛过敏反应达到高峰,持续数小时.腹腔注射0.1 mg/kg美普他酚对炎症和非炎症侧后肢的缩腿潜伏期无明显影响(P＞0.05,n=8).腹腔注射1mg/kg和10 mg/kg美普他酚对炎症和非炎症侧后肢产生明显的抗痛敏和抗伤害效应,且对炎症侧缩腿反应的抑制(抗痛敏)作用明显强于非炎症侧(抗伤害)(P＜0.05,n=8～11).预先腹腔注射1.5 mg/kg纳洛酮明显阻断美普他酚引起的抗伤害和抗痛敏效应.腹腔注射美普他酚的同分异构体112824(1 mg/kg)和112825(1.5 ms/kg)可产生与美普他酚类似的抗痛敏作用,该效应可被预先腹腔注射1.5 mg/kg纳洛酮完全阻断.提示美普他酚及其同分异构体具有明显抗伤害和抗痛敏作用,且以后者为强.该作用主要通过mu阿片受体介导.本研究为扩展美普他酚及其同分异构体在临床上的应用提供了依据.
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MCI-154对大鼠心肌细胞的变力作用
钙增敏剂具有正性肌力作用,同时不增加细胞内钙浓度,因此可避免导致心律失常和终心肌细胞死亡的钙超载.然而大部分钙增敏剂对心肌舒张功能有损害作用.MCI-154是一种钙增敏剂,但不损害舒张功能.为阐明其变力作用机制,我们应用离子成像技术研究了MCI-154对分离的单个大鼠心室肌细胞钙瞬变和收缩的影响,利用膜片钳技术观察了MCI-154对大鼠心室肌细胞L-型钙电流和Na+/Ca2+交换电流的影响.结果表明:(1)MCI-154在lμmol/L至100μmol/L的浓度范围内对L-型钙电流(ICa-L)无直接影响;(2)MCI-154在轻微增加钙瞬变幅度和缩短心肌钙瞬变TR50和TR90的情况下,呈剂量依赖性地增加大鼠心室肌细胞的缩短;(3)MCI-154剂量依赖性地增加正常大鼠心室肌细胞的Na+/Ca2+交换电流.这些结果提示:MCI-154不仅剂量依赖性地发挥了正性变力作用,对舒张功能也没有损害作用,明显不同于其它钙增敏剂,而且还轻微改善了大鼠心室肌细胞的舒张.其对内向Na+/Ca2+交换电流的激动作用会加快钙内流,导致TR50和TR90的缩短,提示MCI-154是通过正向Na+/Ca2+交换改善舒张功能的.
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咖啡因对大鼠背根神经节急性分离神经元GABA-激活电流的抑制作用
应用全细胞膜片钳记录技术,在大鼠新鲜分离背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元上,观察预加咖啡因对GABA-激活电流(IGABA)的调制作用.实验中,大部分受检细胞(97.4%,113/116)对外加GABA敏感.1～1000μmol/L GABA引起一剂量依赖性、有明显去敏感作用的内向电流.在受检的108个DRG细胞中,约有半数(53.7%,58/108)对胞外加咖啡因(0.1～100μmol/L)敏感,产生一幅值很小的内向电流.预加咖啡因(0.1～100μmol/L)30 s后再加GABA能明显抑制GABA(100μmol/L)激活电流的幅值.预加咖啡因后GABA量效曲线明显下移;GABA-激活电流的大值较之对照下降约57%;而Kd值(30 μmol/L)几乎不变,表示此种抑制为非竞争性的.预加安定(diazepam,1 μmol/L)对GABA(100μmol/L)激活电流有增强作用,而预加咖啡因(10 μmol/L)有拮抗安定增强IGABA的作用.胞内透析H-8后,几乎可以完全消除咖啡因对IGABA的抑制作用.已知GABA作用于初级感觉神经元能引起初级传入去极化,因而实验结果提示,咖啡因有可能在初级传入末梢产生对抗突触前抑制的效应.
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一种新的体外细胞牵张刺激装置
体外细胞机械刺激装置是研究细胞对机械牵张反应的一种研究设备.目前此类装置有多种,但是这些装置都存在一些不便之处.本文以商品化的Flexercell Strain Unit刺激装置为参照,设计一套离心力牵张装置.通过使贴壁细胞生长的培养板以一定的速度旋转,从而使心肌细胞受到固定大小的离心力的牵张作用.酶解分离3～5 d SD大鼠心肌细胞,并分别给予12和24 h机械刺激:传统的20%牵张刺激和180 r/min的离心力刺激.以3H-亮氨酸掺入量反映细胞的肥大指标,并测定牵张引起的血管紧张素Ⅱ的自分泌.同对照组相比,3H-亮氨酸掺入在离心力牵张组显著升高[(1295.17±51.19)vs(1122.67±51.63)in 12 b;(1447.5±35.96)vs(1210.67±90.92)in 24h,P＜0.05].AngⅡ在离心力牵张组均比同期未牵张组均明显升高,12 h为128%(P＜0.05)和24 h为139%(P＜0.01).经24 h的牵张,培养液中乳酸脱氢酶活性在膜牵张组显著高于离心力牵张组[(14.5±8.7)U/Lvs(7.8±4.3)U/L,P＜0.05].新型改进的机械牵张装置能够有效刺激心肌细胞蛋白合成增加和AngⅡ的分泌增加,与FlexercellStrain Unit相比,离心力牵张装置对细胞的损害较轻微.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 02 03 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1997 | 01 02 03 04 05 06 |
