生理学报杂志
Acta Physiologica Sinica 생리학보
- 主管单位： 中国科学院
- 主办单位： 中国科学院上海生命科学研究院,中国生理学会
- 影响因子： 0.86
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0371-0874
- 国内刊号： 31-1352/Q
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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NDRG2在人胚胎组织中的表达分布特点
本文旨在研究NDRG2在不同胎龄人胚胎组织中的表达水平及细胞定位.利用RT-PCR和Western blot研究NDRG2mRNA和蛋白在胎心、肺、肝和肾中的表达水平,免疫组织化学分析NDRG2蛋白在多种胚胎组织中的分布特点.结果表明,NDRG2在胚胎组织中的表达随胚龄的延长而增加.NDRG2 mRNA和蛋白在胎心和肺中的变化一致;在胎肝中mRNA表达低而蛋白表达高,在胎肾中则相反.NDRG2蛋白阳性反应产物存在于细胞胞浆,见于小肠绒毛上皮细胞、结肠上皮细胞、皮肤表层细胞及毛囊、肺内小气道内衬上皮细胞、肝细胞、心肌细胞、胸腺小体、肾小管上皮细胞.结果提示,NDRG2蛋白可能不是一个组织特异性蛋白,并在组织和器官的形成中起作用.
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人骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中差异表达基因的筛选
为了探讨人骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)向成骨细胞分化过程中差异表达的基因,本实验采用体外培养人BMSCs,诱导向成骨细胞分化.分别选取培养12和21 d的细胞作为驱动方(driver)和实验方(tester),进行抑制消减杂交,构建cDNA消减文库,将挑选出的阳性克隆与GenBank人基因库中已公布的核酸序列进行同源性比较分析.结果表明,从培养21 d的BMSCs中,筛查出5个差异基因,与人基因库中已知基因的同源性分别达到90%以上.有兴趣的是,核心蛋白聚糖和Bax inhibitor 1在培养21 d的BMSCs中差异表达.RT-PCR检测显示,核心蛋白聚糖基因在培养21d的细胞中高表达,而在12 d的细胞中未检测到表达;Bax inhibitor 1基因在培养21 d细胞中的表达明显高于12 d的细胞.
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核受体相关因子1表达下调对多巴胺能细胞酪氨酸羟化酶和神经突起生长的影响
将合成的核受体相关因子1(nuclear receptor-relatedfactor 1,Nurr1)特异性短发夹寡核苷酸(small-hairpin RNA,shRNA)序列插入真核表达载体pSilenCircle(pSC),构建Nurr1基因特异性shRNA真核表达载体,转染体外培养多巴胺能神经前体细胞系MN9D,分别采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测其对MN9D细胞内源Nurr1的干扰作用及其对酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)表达的影响,并在倒置显微镜下观察MN9D细胞神经突起生长的情况,探讨Nurr1 shRNA表达载体对多巴胺能细胞表型标记物TH和以神经突起延长为特征的细胞成熟的影响.结果表明,脂质体组细胞和转染阴性对照质粒的MN9D细胞内Nurr1、TH的表达正常,而转染Nurr1 shRNA真核表达载体(pSC-N1和pSC-N2)的MN9D细胞内Nurr1和TH的mRNA水平明显降低,Nurr1 mRNA的下降率分别为62.3%和45.6%,TH mRNA的下降率分别为76.3%和62.6%.同时Nurr1和TH蛋白的表达亦明显下调,Nurr1蛋白的下降率分别为57.4%和72.0%,TH蛋白的下降率分别为79.1%和70.1%.另外,转染Nurr1 shRNA真核表达质粒的MN9D细胞神经突起延长有所减少,但是与正常细胞无明显差异.结果提示:Nurr1 shRNA真核表达载体能显著下调MN9D细胞内源Nurr1和TH mRNA和蛋白的表达,同时可能对MN9D细胞的神经突起延长有一定的抑制作用.Nurr1 shRNA表达载体的成功构建为多巴胺能神经元发育以及帕金森病相关基因的功能研究奠定了基础.
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血管外膜肌成纤维细胞分化的基因表达谱
我们以往的研究表明,TGF-β1可以诱导血管外膜成纤维细胞(adventitial fibroblasts,AFs)向肌成纤维细胞(myofibroblasts,MFs)分化.为寻找可能涉及MF分化的基因,本实验采用寡核苷酸芯片技术动态检测细胞表型转化过程中基因表达的变化,实时定量RT-PCR验证芯片结果.在芯片上的15 866条总探针组中,2 121个探针组在TGF-β1刺激后至少一个时间点的表达发生2倍以上变化,其中1 318个基因表达上调,761个基因表达下调,还有少数基因(42个)在不同的时间点既有上调又有下调表达.在1 231个已知功能基因中,分泌磷蛋白1(secreted phosphoprotein 1,APP1)、Rho-associated coiled-coil forming kinase 2(ROCK2)的表达趋势与标志基因α-平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)的表达趋势相同,TGF-β1诱导MF分化过程中上调了电压门控性钾通道Shal家族成员2(potassiumvoltage-gated channel,Shal-related family and member 2,KCND2)的表达,这些基因参与了MF的分化;此外,还发现内皮素1(endothelin 1,EDN1)、补体成分、NADPH氧化酶4(NADPH oxidase 4,NOX4)和NAD(P)H dehydrogenase,quinone 1(NQO1)可能参与了MF分化.本实验用寡核苷酸芯片技术验证了通过其它技术证实的同MF分化相关的基因,并发现了新的涉及该过程的基因,基因表达谱研究有利于鉴定参与细胞分化的基因和通路.
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急性髓性白血病HB-1细胞系细胞具有侵入CBA/N小鼠脑部的能力
急性髓性白血病HB-1细胞系是由辐射处理的CBA/N小鼠脾脏细胞克隆并建立起来的.静脉注射HB-1细胞到正常CBA/N小鼠体内会诱发急性髓性白血病综合症,并使小鼠2周左右死亡.一般情况下,白血病细胞被接种到小鼠后会侵入造血器官、肺、肾和肝脏.我们在研究中发现了一令人感兴趣的现象,不仅在小鼠的肺、肾和肝脏中,而且在大脑和小脑中也观察到了HB-1细胞.白血病细胞能穿过血脑屏障在正常情况下是难以理解的,因为血脑屏障可阻止血细胞进入脑内,并且严格有选择地让小分子通过.因此,HB-1细胞将是阐明形成血脑屏障的内皮细胞上的附贴分子和选择性地让特殊细胞侵入脑的一个很好的模型.
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跑台运动促进幼龄大鼠学习能力
为了探讨跑台运动对幼龄大鼠学习能力的影响,实验采用5周龄Sprague-Dawley大鼠,随机分为安静对照组和跑台运动组,其中跑台运动组大鼠以低强度进行为期一周的跑台运动;然后使用Morris水迷宫,对两组大鼠的定位航行和空间探索能力进行分析.在定位航行实验中,运动组大鼠寻找到平台的潜伏期明显短于对照组(P＜0.05);并且随着训练次数的增加,运动组大鼠的游泳速度明显高于对照组(P＜0.01);另外,运动轨迹的弯曲度表明运动组大鼠还表现出了较强的寻找平台的动机以及对平台位置较为准确的空间定位能力.在空间探索实验中,两组大鼠的游泳速度并没有明显差异,从大鼠在各象限内穿越平台相应位置的次数来看,运动组大鼠在D象限穿越的次数高于对照组,但无统计学差异(P＞0.05).上述结果提示,低强度的跑台运动在短时间内便可以明显提高幼龄大鼠的学习能力.
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E1A激活基因阻遏子过表达抑制体外人血管平滑肌细胞凋亡
为探讨E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)对人血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)凋亡的影响及调控机制,应用正、反义重组逆转录病毒表达载体pLNCX2(+)/CREG及pLXSN(-)/CREG制备稳定感染人胸廓内动脉平滑肌细胞克隆株(humaninternalthoracic artery-Shenyang,HITASY)细胞模型,观察CREG蛋白过表达及表达抑制对平滑肌细胞凋亡的影响.荧光显微镜下观察DAPI染色后凋亡细胞核形态,Annexin V/PI流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR技术分析凋亡相关基因caspase-9 mRNA的表达,蛋白质印迹法分析p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)、磷酸化p38 MAPK(phosphorylated p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38 MAPK)的表达变化.研究结果显示,CREG蛋白过表达明显抑制血清饥饿诱导的HITASY细胞凋亡的发生;同时细胞中p38 MAPK、p-p38 MAPK的表达增加.相反,抑制CREG蛋白表达则引起正常血清培养状态下VSMCs的自发凋亡明显增加,同时细胞内p38 MAPK、p-p38 MAPK表达显著下降.进一步研究发现,预先应用特异性抑制剂SB203580阻断p38 MAPK信号转导通路后,CREG蛋白过表达引起的细胞凋亡抑制作用被明显减弱,血清饥饿后CREG蛋白过表达引起的HITASY细胞凋亡现象明显增加.上述结果提示,CREG蛋白过表达可以抑制体外培养的VSMCs凋亡,p38 MAPK信号转导通路可能介导CREG蛋白对VSMCs凋亡的抑制作用.
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自发性高血压大鼠多组织炎症状态
高血压是一种慢性血管性疾病,易累及肾、肝、心、脑等组织,引起脑卒中和心、肾损害等并发症.本研究对高血压时肾、肝、心、脑等组织的炎症状态进行了观察.实验采用自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)和正常血压的Wistar-Kyoto(WKY)大鼠,用RT-PCR和Western blot法观察肾、肝、心、脑等组织炎症相关因子IL-1p、TNFα、ICAM-1、iNOS、C/EBPδ和PPARγ的基因表达;紫外分光光度法观察蛋白质羰基化水平和FRAP法检测组织总抗氧化能力.结果显示:(1)SHR组织炎症相关因子表达较对照WKY增强,除IL-1βmRNA在肝和脑的增加不明显外,其余均有显著性差异(P＜0.05);(2)SHR和WKY大鼠肾、心、脑蛋白质羰基化水平(nmol/mg蛋白)分别为8.93±1.08和2.27±0.43、2.23±0.23和0.17±0.02、13.42±1.10和5.72±1.01,SHR明显增加(P＜0.05);而肝脏蛋白质羰基化水平无明显变化;(3)SHR肾、肝、心、脑总抗氧化能力水平显著低于WKY大鼠(P＜0.05).以上结果表明,SHR多个组织(肾、肝、心和脑)均存在炎症因子被诱导和氧化应激反应等明显的炎症状态,提示炎症可能在高血压及其并发症的病理改变中起重要作用.
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大鼠视交叉上核与松果体中Clock基因转录的昼夜节律性及不同光反应性
本研究旨在观察和比较视交叉上核(suprachiasmatic nucleus,SCN)与松果体(pineal gland,PG)中Clock基因内源性昼夜转录变化规律以及光照对其的影响.Sprague-Dawley大鼠在持续黑暗(constantdarkness,DD)和12 h光照:12h黑暗交替(12hour-light:12 hour-dark cycle,LD)光制下分别被饲养8周(n=36)和4周(n=36)后,在一昼夜内每隔4 h采集一组SCN和PG组织(n=6),提取总RNA,用竞争性定量RT-PcR测定不同昼夜时点(circadian times,CT or zeitgebertimes,ZT)各样品中Clock基因的mRNA相对表达量,通过余弦法和Clock Lab软件获取节律参数,并经振幅检验是否存在昼夜节律性转录变化.结果如下:(1)SCN中Clock基因mRNA的转录在DD光制下呈现昼低夜高节律性振荡变化(P＜0.05),PG中Clock基因的转录也显示相似的内源性节律外观,即峰值出现于主观夜晚(SCN为CT15,PG为CT18),谷值位于主观白天(SCN为CT3,PG为CT6)(P＞0.05).(2)LD光制下SCN中Clock基因的转录也具有昼夜节律性振荡(P＜0.05),但与其DD光制下节律外观相比,呈现反时相节律变化(P＜0.05),且其表达的振幅及峰值的mRNA水平均增加(P＜0.05),而PG中Clock基因在LD光制下转录的相应节律参数变化却恰恰相反(P＜0.05).(3)在LD光制下,光照使PG中Clock基因转录的节律外观反时相于SCN(P＜0.05),即在SCN和PG的峰值分别出现于光照期ZT10和黑暗期ZT17,谷值分别位于黑暗期ZT22和光照期ZT5.结果表明,Clock基因的昼夜转录在SCN和PG中存在同步的内源性节律本质,而光导引在这两个中枢核团调节Clock基因昼夜节律性转录方面有着不同的作用.
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二氮嗪预处理上调Bcl-2/Bax蛋白比值减少缺氧复氧所致体外培养的海马神经元凋亡
线粒体内膜ATP敏感钾通道(mitochondrial ATP-sensitive potassium channel, mitoKATP通道)的激活在药物预处理增强神经元对各种损伤的耐受力过程中发挥着重要作用.神经元内含有丰富的mitoKATP通道,二氮嗪(diazoxide,DZ)为选择性的mitoKATP通道开放剂,本实验探讨了DZ预处理能否减少缺氧复氧所致的海马神经元凋亡,以及DZ如何调控Bcl-2蛋白和Bax蛋白的表达.原代培养9～10 d的Sprague-Dawley大鼠海马神经元随机分为5组:对照组、DZ 0 μmol/L、DZ 30 μmol/L、DZ 100μmol/L和DZ 100μmol/L+5-羟癸酸(5-hydroxydecanoate,5-HD)100μmol/L.除对照组外,其他四组神经元自缺氧前3 d开始,每天DZ预处理1 h,连续3 d.体外缺氧4 h,于复氧后24 h,四唑蓝比色法测定海马神经元存活率,annexin V-FITC流式细胞术测定凋亡率,Western blot法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达量.结果显示:与对照组比较,缺氧复氧损伤显著降低海马神经元的存活率,升高凋亡率.与其他浓度比较,100 μmol/L DZ预处理使神经元存活率升高约15%,而凋亡率降低约12%;Bcl-2蛋白表达增强约60%,Bax蛋白表达下降近30%.5-HD消除DZ对神经元的保护作用.因此,100μmol/L DZ可通过上调Bcl-2蛋白表达,降低Bax蛋白表达,减少缺氧复氧后海马神经元的凋亡.
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Ryanodine受体间相互作用及其与钙释放功能的关系
在真核生物和原核生物的生物膜上都存在由同种受体蛋白相互连接在一起形成的紧密二维排列.近的模型计算表明这种排列方式可能是一种新型信号转导机制的结构基础,相邻受体可通过功能上的耦联优化信号处理性能.Ryanodine受体(ryanodine receptor,RyR)/钙释放通道通常在肌肉的肌浆网膜上形成二维晶格排列,该蛋白成为研究受体二维排列及其生理功能的一个很好的模型.本文综述了近几年在RyR相互作用及其二维排列工作模式和生理功能研究方面的进展,着重介绍了我们实验室利用新方法对RyR相互作用及其调控进行的研究工作.我们研究中发现了RyR功能状态对其相互作用的调控,本文对据此提出的RyR二维排列的"动态耦联模型"及其可能的生理功能进行了详细讨论.
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前庭功能的中枢组胺能神经调制
组胺能药物已经长期用于治疗人类的平衡紊乱,但对于它们在前庭系统中作用的机制还缺乏了解.在本文中,我们综述了关于脑内(特别是脑干前庭核中)的组胺能神经传递,以及组胺在脑可塑性--"前庭代偿"(一种单侧外周前庭损伤之后发生的行为学恢复)中作用的新近文献.我们在综述组胺能类药物促进前庭代偿证据的同时,也讨论了这类药物临床应用的可能性.
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免疫细胞内源性儿茶酚胺的免疫调节作用
机体内儿茶酚胺(catecholamines,CAs)包括去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)、肾上腺素(epinephrine,E)和多巴胺(dopamine,DA).CAs由神经元和内分泌细胞合成和分泌,其主要功能是调节心血管、呼吸和消化等内脏活动.近三十年来的研究说明,CAs也参与调控机体的免疫功能,但CAs的这种免疫调节作用一般视为神经和内分泌系统调节的介导作用.然而,近年来的研究发现,免疫细胞也能合成CAs,这是对传统观念的一种补充和提高.免疫细胞内存在经典的CAs代谢途径,既有合成CAs的酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)又有降解CAs的单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)和儿茶酚氧位甲基移位酶(catechol-O-methyl transferase,COMT).免疫细胞合成的内源性CAs可以调控细胞的增殖、分化、凋亡和细胞因子生成等多种免疫功能.CAs的这些作用可能主要通过自分泌或旁分泌途径作用于免疫细胞上相应受体和细胞内环磷酸腺苷(cyclic AMP,cAMP)实现.细胞内氧化应激机制可能也参与免疫细胞内源性CAs的免疫调节作用.此外,一些自身免疫性疾病如多发性硬化、风湿性关节炎可能也与免疫细胞内CAs的代谢异常有关.上述发现不仅为免疫系统有可能成为除神经和内分泌系统以外的第三个CA能系统提供了证据,而且为免疫系统内源性CAs的功能意义拓展了认识.
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人胎儿脊髓神经干细胞的分离培养
本文旨在探讨是否能够从低温保存的流产儿分离培养出脊髓神经干细胞.将14周流产儿在4℃下保存,2、6和12 h后取脊髓,将颈段、胸段、腰骶段分别进行无血清培养,并用胎牛血清诱导分化.用克隆培养的方法验证培养细胞的干细胞特性;用免疫荧光细胞化学的方法检测神经干细胞标志nestin及干细胞诱导分化后神经元标志MAP2、星形胶质细胞标志GFAP、胆碱能标志ChAT,并比较不同时间点以及不同部位分离的神经干细胞的差异.在各个时间点,从颈段、胸段、腰骶段脊髓均分离培养出具有连续增殖能力的神经球,其中腰骶段分离出的神经球数量多,12 h组各段分离出的神经球较2、6 h组显著减少.各段培养中的神经球均为nestin阳性,诱导分化后均能够产生GFAP阳性星形胶质细胞、MAP2阳性神经元以及ChAT阳性胆碱能神经元.各段培养中的神经干细胞的克隆形成能力相似.以上结果表明,从低温保存的人胎儿能够分离培养出脊髓神经干细胞,这为基础研究以及未来治疗应用提供了新的细胞来源.
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抗人血栓调节蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
为了制备特异性抗人血栓调节蛋白(human thrombomodulin,bTM)的单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),利用脂质体Lipofectamine 2000将包含bTM全长cDNA序列的重组表达质粒pThr402转染CHO细胞,经G418筛选及相关鉴定后获得高效稳定表达hTM的CHO-TM5细胞株.将CHO-TM5细胞直接免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术,通过细胞ELISA(cellular enzyme-linked immunoabsorbent assay,CELISA)筛选出阳性克隆后,将杂交瘤细胞株腹腔注射Balb/c小鼠诱生腹水.用CELISA、流式细胞术、免疫组织化学染色法及免疫印迹法对所获McAb的特异性进行鉴定.我们获得了1株可稳定分泌抗hTM的McAb的杂交瘤细胞株NH-1,其亚型为IgG1,McAb腹水效价为1×10-6,腹水抗体含量为20 mg/ml.NH-1对相应抗原具有较高的组织特异性,在体内与正常组织的交叉反应少,对人脐静脉内皮细胞、CHO-TM5有特异性结合反应,说明NH-1可特异性识别天然的bTM分子,为进一步应用此McAb进行hTM生物学功能及临床意义研究提供了基础.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 02 03 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1997 | 01 02 03 04 05 06 |
