生理学报杂志
Acta Physiologica Sinica 생리학보
- 主管单位: 中国科学院
- 主办单位: 中国科学院上海生命科学研究院,中国生理学会
- 影响因子: 0.86
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 0371-0874
- 国内刊号: 31-1352/Q
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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匹罗卡品颞叶癫痫大鼠模型中尖波对theta节律的抑制作用
癫痫会降低患者的认知能力是常见的临床现象,但这是否与癫痫发生过程等因素有关尚不清楚.尖波是颞叶癫痫的主要特征,本文应用脑深部记录研究了癫痫发生过程中的散发性尖波(sporadic spikes,SSs)对认知节律theta的影响.实验记录4只注射匹罗卡品导致癫痫发生的大鼠在嗅行(exploration)时的CA1脑区的局部场电位(local field potentials,LFPs),计算癫痫发生过程的早期和晚期有尖波和无尖波期间theta节律的相位稳定规模和能量,并与注射前对照进行对比.应用混合动力学模型,改变CA1网络的平均兴奋性和抑制性(分别包括慢树突抑制回路和快胞体抑制回路)突触增益,仿真有尖波和无尖波的发作间期CA1区场电位,并据此计算theta节律的相位稳定规模.结果显示,癫痫尖波对theta节律的抑制作用既是短暂的也是持续的,但随癫痫发生过程而变化,早期作用强烈,晚期则平缓,但即便在早期也有很强的theta节律.仿真结果部分地证明了伴随癫痫尖波而出现的突触不平衡可能与theta相位稳定规模动态变化的规律有关.以上结果提示,癫痫尖波对theta节律的抑制影响是永久性的,与癫痫发生过程有关.
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表没食子儿茶素没食子酸酯抑制脂多糖诱导人视网膜内皮细胞中调节活化正常T细胞表达与分泌趋化因子的表达
本研究旨在探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人视网膜内皮细胞(human retinal endothelial cells,HRECs)炎症反应通路中调节活化正常T细胞表达与分泌趋化因子(regulated upon activation normal T cell expressed and secreted,RANTES)表达的影响及可能机制.将HRECs作为研究对象,分别用实时细胞计数法和非同位素细胞增殖法检测LPS (50~250 ng/mL)和EGCG (0~200 μmol/L)对HRECs的毒性作用,确定合适的实验药物浓度.再将细胞随机分为正常对照组、LPS组和LPS+不同浓度EGCG (100、50、25、12.5、6.25 μmol/L)共7组,用不同浓度EGCG预处理2h,再加入LPS刺激24 h后,酶联免疫吸附法测定各组培养上清液中RANTES的表达水平,Western免疫印迹法检测蛋白激酶Akt及其磷酸化水平.结果显示,LPS可显著刺激诱导HRECs产生RANTES,EGCG抑制LPS诱导的RANTES表达,作用呈剂量依赖性.免疫印迹结果也显示,LPS对HRECs炎症过程中的Akt通路起重要作用,EGCG可显著抑制LPS诱-HRECs中Akt信号分子的蛋白磷酸化水平.以上结果提示,EGCG能有效抑制LPS诱导HRECs中RANTES的表达,其机制可能与抑制Akt信号通路有关.
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高压氧治疗对2型糖尿病大鼠肾脏的保护作用
本研究通过观察高压氧治疗对2型糖尿病Goto-Kakizaki (GK)大鼠肾脏组织结构、细胞凋亡和基质金属蛋白酶表达的影响,探讨高压氧对糖尿病肾脏的保护作用及机制.选用Wistar大鼠8只作为正常对照组(n=8),2型糖尿病GK大鼠24只,随机分为模型组(n=8)、二甲双胍对照组(MH组,n=8)、高压氧组(HBO组,n=8),正常对照组和模型组每天按5 mL/kg灌服纯净水;MH组每天按250 mg/kg二甲双胍混悬液灌胃;HBO组每天5 mL/kg灌服纯净水,并给予0.15 MPa压力纯氧,稳压30 min.大鼠分别处理三周后测体重,尾部采血测空腹血糖,取肾脏并测肾质量.将肾脏制成石蜡切片并进行HE、PAS和Masson染色,用光学显微镜观察各组大鼠肾脏组织病理变化;用TUNEL法检测肾脏细胞凋亡并计算各组肾脏细胞凋亡指数;用免疫组化法对肾脏进行Caspase-3、MMP-2、TIMP-2标记,并测量阳性细胞积分光密度;ELISA方法检测各组大鼠血浆TGF-β1浓度.结果显示模型组大鼠肾小球体积增大,细胞外基质增生(系膜基质增宽、基底膜增厚),肾小管上皮细胞水肿,HBO组较模型组病变较轻;经高压氧治疗过的HBO组大鼠的肾脏细胞凋亡指数和Caspase-3表达均与正常对照组和MH组无显著性差异(P>0.05),而较模型组有显著降低(P<0.01).MMP-2、TIMP-2在正常对照组表达强,MH、模型组表达弱,HBO组介于中间,差异具有显著性(P<0.05).HBO、MH、模型组血浆TGF-β1浓度较正常对照组都有升高趋势,但各组大鼠血浆TGF-β1浓度差异无统计学上的显著性(P>0.05).实验结果表明高压氧治疗可抑制糖尿病大鼠肾脏细胞的凋亡增加,调节MMP-2及其抑制剂的活性,减少细胞外基质的积聚,从而保护肾脏,有利于防治糖尿病肾病的发生和发展.
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抗β1肾上腺素受体自身抗体可导致大鼠肾脏损伤
自从在原发性扩张型心肌病患者血清中发现抗β1肾上腺素受体自身抗体(autoantibodies against the second extracellularloop ofβ1-adrenoceptor,β1-AABs)以来,自身免疫机制在心血管疾病发病中的作用日渐受到重视.本研究组前期研究显示血清β1-AABs阳性的成年大鼠部分出现尿潜血及尿蛋白阳性,但机制不清.因此,本实验选择直接静脉给入抗体来观察β1-AABs长期存在对大鼠肾脏结构和功能的影响及可能的机制.用人工合成的β1-肾上腺素受体细胞外第二环(β1-AR-ECⅡ)抗原肽段免疫正常成年大鼠以获取β1-AABs.通过观察β1-AABs对乳鼠心肌细胞跳动频率的影响来反映其是否具有生物学活性.目的抗体经纯化后,通过静脉定期注入成年及老年大鼠体内以观察该抗体对大鼠肾脏结构和功能的影响;生化分析仪定期检测大鼠血清中尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、肌酐(creatinine,CR)和尿酸(uric acid,UA)水平,同时尿分析仪检测尿比重、尿潜血、尿蛋白及尿糖的变化情况,以反映肾脏功能的波动;HE和Masson三色染色观察肾脏结构的变化.同时将β1-AR-EGFP质粒转染至HEK293细胞中,观察β1-AABs通过作用于β1-AR对细胞坏死及凋亡的影响.结果显示:成年及老年大鼠血清中BUN、CR、UA的水平随着β1-AABs的不断给入而渐进性升高,BUN/CR比值随免疫的进行呈现下降趋势;成年大鼠在β1-AABs免疫后出现不同程度的蛋白尿、尿潜血及尿糖水平的升高;同时,HE及Masson三色染色显示:β1-AABs免疫24周后,成年及老年大鼠肾脏集合管周围均可见到大量炎细胞浸润,胶原纤维沉积增加.HEK293细胞的研究结果提示,β1-AABs可通过增加细胞caspase-3水平而促进细胞凋亡的发生,而对LDH活性影响不大.由此提示,β1-AABs长期存在可导致成年及老年大鼠肾脏结构和功能的损害.
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脊髓运动神经元突触传递长时程增强的受体动力学分析
本文旨在观察下行通路激活在脊髓运动神经元(motoneuron,MN)诱发兴奋性突触后电位(excitatory postsynaptic potential,EPSP)的长时程增强现象(long-term potentiation,LTP)之受体动力学性质.应用8~14日龄新生大鼠离体脊髓MN细胞内记录技术,观察同侧腹外侧索(ipsilateral ventrolateral funiculus,iVLF)电刺激诱发的iVLF-EPSP的变化,进行EPSP受体动力学分析.结果显示,EPSP的幅度、曲线下面积和大上升斜率与刺激强度呈正相关(P< 0.05或P< 0.01);而EPSP表观受体动力学分析的参数中表观解离速率常数K2和表观平衡解离常数KT与刺激强度呈负相关(P< 0.01或P<0.05).给予iVLF强直刺激(100 Hz,50脉冲/串,波宽0.4~1.0 ms,共6串,串间隔10s,10~100 V),在11个记录的MNs中有5个MNs的EPSP幅度增大到基础值的120%以上,且至少维持30 min,可以被判为iVLF-LTP,同时EPSP的曲线下面积和大上升斜率也增大到基础值的120%以上.选择iVLF-LTP过程中的EPSP进行表观受体动力学分析,结果显示有3个MNs的K2和KT在强直刺激后10 min内减小到基础值的80%以下,后逐渐有所恢复.以上受体动力学分析结果提示,部分MNs的iVLF-LTP早期可能涉及突触后受体亲和力增强的机制.
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前体脑源性神经营养因子抑制大鼠螺旋神经节神经元的存活和神经突再生
本文旨在研究前体脑源性神经营养因子(precursor brain-derived neurotrophic factor,proBDNF)对螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons,SGNs)生长的影响.取新生5天Sprague Dawley (SD)大鼠处死,分离出含有螺旋神经节的蜗轴,将其消化、吹打后用培养液重悬,接种于多聚-D-赖氨酸/层粘连蛋白包被过的8孔腔式载玻片,37℃C培养4h获得贴壁牢固的原代SGNs.将SGNs随机分为对照组、BDNF组(10 ng/mL BDNF处理)、C10组(10 ng/mL proBDNF处理)、C50组(50 ng/mL proBDNF处理)、C100组(100 ng/mL proBDNF处理),无血清培养48 h后行βⅢ tubulin荧光抗体标记染色,荧光显微镜下观察SGNs的存活数目和神经突再生情况.结果显示,C50组和C100组的SGNs存活数目低于对照组(P< 0.001),且Cl0组、C50组和C100组的SGNs存活数目均低于BDNF组(P< 0.001).根据SGNs的形态,可将其分为无突起和有突起两类.C10组、C50组、C100组的无突起SGNs比例均高于对照组,差异有统计意义(P<0.001).另外在添加20 μmol/L的特异性c-Jun氨基末端激酶(c-Jun Nterminal kinase,JNK)抑制剂SP600125后,C50组的SGNs存活数目提升至(91.5±8.2)/孔,高于没有使用SP600125的C50组(P<0.00l).以上结果说明,proBDNF减少体外培养SGNs的存活数目,并抑制SGNs神经突的出芽生长;使用特异性JNK抑制剂可以部分减轻proBDNF对SGNs存活的抑制作用.
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MDM2在啮齿动物脑神经元轴突起始段的分布和表达模式
本文旨在研究鼠双微体基因2 (murine double minute 2,MDM2)在啮齿动物脑内的分布及表达模式.应用免疫组化、免疫荧光双标及免疫印迹等技术检测MDM2蛋白在出生后不同阶段昆明小鼠大脑皮层和海马内的表达,及其在成年SD大鼠脑内和原代培养神经元中的分布,观察MDM2与神经元轴突起始段(axon initial segment,AIS)标志蛋白在分布上的相关性.进而采用MDM2抑制剂Nutlin-3在SD大鼠海马内注射,检测MDM2的分布及Nav1.6分布变化.结果显示,昆明小鼠出生后不同时程MDM2在皮层和海马的表达呈现不同的变化模式,但都显示随发育的进展,MDM2逐渐向AIS富集,这一现象在出生7天后逐渐显著.在成年SD大鼠不同脑区的神经元和原代培养神经元中也观察到MDM2富集于AIS的现象,并且其与AIS标志蛋白AnkG、Nav 1.6共定位.脑内注射Nutlin-3不仅抑制MDM2在海马神经元AIS的分布,还导致Nav1.6在AIS的分布减少,并且树突标志物MAP2在神经元中的极性分布也发生改变.结果提示MDM2蛋白可在正常成年啮齿类动物脑神经元AIS富集表达,对维持AIS特性和神经元极性起调节作用.
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18β-甘草次酸对KCl和苯肾上腺素诱导的大鼠离体肾脏叶间动脉收缩的抑制作用
本文旨在观察18β-甘草次酸(18β-glycyrrhetintic acid,18β-GA)对KCl和苯肾上腺素(phenylephrine,PE)诱导的离体大鼠肾脏叶间动脉(renal interlobar artery,RIA)收缩的影响.急性分离大鼠RIA,应用压力肌动图技术,观察18β-GA预处理后大鼠RIA对内皮非依赖血管收缩剂KC1和PE的反应情况.用微动脉段标本的全细胞膜片钳技术,观察100μmol/L 18β-GA对血管段上平滑肌细胞的膜电容(Cinput)、膜电导(Ginput)和膜电阻(Rinput)的影响.结果显示,KCl (30~100 mmol/L)和PE (0.1~30 μmol/L)均可以引起大鼠RIA浓度依赖的收缩;100 μmol/L的18β-GA预处理后,KCl和PE对大鼠RIA的缩血管作用明显降低(P<0.01).给予100 μmol/L 18β-GA后,RIA血管段上平滑肌细胞的Rinput、Ginput和Cinput与单个平滑肌细胞数值十分接近.以上结果提示,18β-GA可抑制KC1和PE对大鼠RIA的收缩作用,其机制可能涉及18β-GA对缝隙连接的抑制.
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高原鼢鼠的学习记忆能力与其脑组织中foxP2基因的高表达有关
高原鼢鼠(Myospalax baileyi)终生营地下洞道生活,具有较强的学习记忆能力和定位洞道中障碍物的能力.叉头框蛋白P2 (forkhead box p2,FOXP2)是一种与口面部协调、运动协调功能有关,并且与学习记忆、以及定位功能有密切联系的转录因子.为了研究和探讨foxP2基因与高原鼢鼠发达的学习记忆能力之间的关系,我们克隆了高原鼢鼠oxP2基因的编码区序列;以地面动物高原鼠兔为对照,应用real-time PCR和Western blot分别测定高原鼢鼠脑组织中foxP2 mRNA和FOXP2蛋白的表达水平;应用免疫组织化学法检测FOXP2蛋白在高原鼢鼠脑组织不同区域中的表达.结果显示:(1)与其它哺乳类动物相比,高原鼢鼠oxP2编码区序列相对保守,但其编码的氨基酸序列显示存在两个特殊的氨基酸残基突变;(2)高原鼢鼠oxP2mRNA的表达量极显著高于高原鼠兔(P<0.01);(3)高原鼢鼠FOXP2蛋白的表达量极显著高于高原鼠兔(P< 0.01); (4) FOXP2蛋白在高原鼢鼠脑组织不同区域均有表达,其中以大脑皮层、丘脑和纹状体区域表达量较高.本研究结果提示,高原鼢鼠发达的学习记忆能力与oxp2基因在脑组织中的高表达有着密切的联系.
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钙激活性氯离子通道在低氧性肺血管双相收缩反应中的作用
本文旨在探讨钙激活性氯离子通道(ClCa)在二级肺动脉血管低氧性肺血管收缩(hypoxic pulmonary vasoconstriction,HPV)中的作用.分离Sprague-Dawley (SD)雄性大鼠二级肺动脉血管,采用离体血管灌流法记录血管环张力变化.结果显示,常氧条件下,ClCa抑制剂尼氟灭酸(10和50 μmol/L)和IAA-94 (10 μmol/L)使去甲肾上腺素收缩的二级肺动脉环血管产生明显的舒张反应(P<0.01),但对KC1收缩的二级肺动脉环血管并无影响.低氧条件下lh内,去甲肾上腺素预收缩的二级肺动脉血管环出现双相性HPV反应,KC1预收缩的血管环无双相性收缩反应.尼氟灭酸和IAA-9明显减弱Ⅱ期收缩反应(均P<0.01),对Ⅰ期舒张反应也有显著减弱作用(均P< 0.01),但对Ⅰ期收缩几乎无影响.以上结果提示,ClCa是二级肺动脉血管双相性收缩反应Ⅱ期收缩形成的一个重要因素,而在Ⅰ期收缩中无明显作用.
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脉络丛上皮细胞β-淀粉样蛋白转运体表达的年龄变化:氧化应激损伤的作用
老龄化可引起β-淀粉样蛋白(amyloid β-peptide,Aβ)在脑内的蓄积.Aβ的清除是通过中枢神经系统与外周血液循环的屏障的主动转运过程来实现.本文旨在研究血-脑脊液屏障脉络丛上皮细胞中与Aβ清除转运相关蛋白随年龄增长的表达变化.取不同月龄大鼠,用透射电镜观察脉络丛上皮细胞的形态改变,用实时定量RT-PCR方法检测脉络丛上皮细胞Aβ42、Aβ转运相关蛋白[低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)-1、LRP-2、P-糖蛋白(P-gp)和糖基化终产物受体蛋白(RAGE)]和氧化应激损伤相关蛋白[血红蛋白氧化酶-1 (HO-1)和caspase-3]的mRNA表达水平.结果显示:(1)随着年龄的增加,脉络丛上皮细胞形态出现了明显的退化和萎缩;(2)Aβ42的mRNA表达随着年龄的增加而增加,差异具有显著性;(3) Aβ转运相关蛋白LRP-1和P-gp的mRNA表达随着年龄的增加而下降,差异具有显著性;LRP-2的mRNA表达随着年龄的增加而增加,差异具有显著性;RAGE的mRNA表达没有明显变化;(4)氧化应激损伤相关蛋白HO-1和caspase-3的mRNA表达随着年龄的增加而增加,差异具有显著性.以上结果表明,随着年龄的增加,脉络丛上皮组织中的Aβ清除相关蛋白表达下降,清除能力下降,引起Aβ蓄积,继而导致氧化应激损伤,引起脉络丛上皮退化和萎缩,加重Aβ在脑内的毒性,加快炎症反应和神经退行性变化的进程.
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淀粉样β蛋白抑制大鼠海马theta节律并致行为脱抑制和空间记忆损伤
海马神经元网络振荡与哺乳动物学习记忆、焦虑及行为抑制密切相关.阿尔茨海默病患者早期表现出的认知功能减退及行为脱抑制,极可能与海马内沉积的淀粉样β蛋白(amyloid β protein,Aβ)损伤了海马神经元网络电活动有关,但海马注射Aβ能否在伤害学习记忆功能的同时也引起行为脱抑制和改变神经元同步化活动,仍缺乏足够的动物实验证据.本研究利用Morris水迷宫、高架十字迷宫和在体局部场电位记录技术,观察了海马注射Aβ1-42寡聚体对大鼠空间学习记忆和行为抑制活动的影响,并分析了海马theta节律的改变.结果表明,与对照组相比,海马注射Aβ1-42寡聚体两周后:(1)大鼠在高架十字迷宫中焦虑性减低,出现明显的行为脱抑制现象,去开臂次数和在开臂停留时间均明显增加;(2)大鼠空间学习、记忆严重受损,水迷宫定位航行实验中寻找水下平台的潜伏期明显延长,空间探索实验中在原平台象限的游泳时间百分比明显减小;(3)大鼠海马CA1区theta节律压抑,由夹尾刺激诱导的theta节律的功率峰值明显减低,而theta节律功率峰值对应的频率值未发生改变.以上结果表明,海马注射Aβ1-42寡聚体可同时引起大鼠行为脱抑制、空间记忆损伤和海马theta节律压抑.这提示,AD患者出现的学习记忆能力障碍和精神行为异常很可能与Aβ对海马神经元网络theta节律活动的压抑以及由此引起的突触可塑性下调有关.
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鞘氨醇-1-磷酸受体在心肌缺血和缺血再灌注后的差异表达
鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,SlP)是心肌病的重要调节分了和生物标记.我们假设S1P受体表达参与了S1P对心肌的保护作用并可作为缺血性心肌病的标记.通过在体结扎大鼠左冠状动脉前降支,建立大鼠手术心肌缺血和心肌缺血再灌注模型,在心肌缺血早期不同时间段(15 min,30 min,1 h)和缺血40 min再灌注2h后用实时定量PCR方法检测S1PR1、S1PR2、S1PR3在心肌中的表达.结果显示,缺血再灌注组心肌中S1PR3的mRNA表达较假手术组明显升高,而S1PR1和S1PR2表达无变化;各缺血组心肌中S1P的三种受体mRNA表达与假手术组相比无统计学差异.结果提示:S1P受体不适合作为早期心肌缺血的标记物;S1P受体在心肌缺血和缺血再灌注时有不同的表达模式,S1P浓度变化和S1P受体表达改变的联合作用共同构成了在心肌缺血和缺血再灌注后的调控网络.
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核受体FXR代谢调控作用及肿瘤细胞增殖机制研究进展
类法尼酯衍生物X受体(farnesoid X receptor,FXR)是配体激活的转录因子,为核受体超家族的主要成员.FXR在胆汁酸代谢、胆固醇代谢、脂代谢以及糖代谢中发挥重要作用.近期研究显示,FXR在代谢性疾病,如高糖血症和高脂血症,以及肠道炎症性疾病、肝再生,甚至肿瘤细胞的增殖和凋亡中发挥重要的调控作用.然而现阶段对于FXR的代谢调控作用在肿瘤发生、发展中的意义尚不明了,甚至存在争议.本文综述了FXR对代谢的调控作用,以及FXR对肿瘤细胞增殖的不同作用和相关机制研究的新进展.
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钠钙交换体的生理和病理生理功能研究进展
钠钙交换体(sodium calcium exchanger,NCX)是一种广泛分布于膜性结构(细胞质膜、线粒体膜、内质网、分泌小泡膜等)上的阳离子转运蛋白,具有两种转运Ca2+和Na+的模式:介导Na+内流、Ca2+外排的前向模式(forward mode)和作用相反的反向模式(reverse mode).通过这种双向模式,NCX可以对胞质内Ca2+浓度进行快速精确的调节,继而影响细胞内信号转导、细胞生长发育、可兴奋细胞的兴奋及兴奋耦联的相关功能等一系列生理活动,如心肌和骨骼肌细胞的收缩、神经递质的释放、神经胶质细胞的迁移分化、免疫细胞的活化以及细胞因子与激素的分泌等.此外,在病理情况下,NCX反向模式的异常激活,被认为是NCX参与心血管系统、中枢神经系统、内分泌系统等多个系统病理生理过程的关键.在此,本文对NCX分子及其参与的生理、病理生理过程的研究进展作一综述,以提供关于NCX较为全面的认识.
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PI3K/Akt信号通路调控胚胎干细胞的自我更新和多向分化潜能的研究进展
磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)及其下游靶点蛋白激酶B(protein kinase B,Akt/PKB)可被细胞内外一系列信号所激活,在增殖、分化、凋亡等多种细胞生物学功能的调节过程中,起着非常重要的关键信号分子的作用.近年来研究显示,Ⅰ型PI3K和其下游分子Akt/PKB所组成的信号通路与胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)自我更新和多向分化潜能的维持密切相关.深入研究ES细胞自我更新和多向分化潜能的维持及其分子机制,是其应用于细胞替代治疗、再生医学和组织工程的基础.本文着重对PI3K/Akt信号通路调控ES细胞自我更新和多向分化潜能的研究进展进行综述.
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运动改善胰岛素抵抗与腺苷酸活化蛋白激酶关系的研究进展
腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)广泛存在于骨骼肌、肝脏、胰腺、脂肪组织及中枢神经系统中.作为“细胞能量调节器”,AMPK激活后可通过多种机制改善胰岛素抵抗.本文综述了近年来AMPK(骨骼肌、肝脏和脂肪组织)的运动激活以及AMPK介导运动改善心血管胰岛素敏感性的研究进展,展望了AMPK运动激活的研究前景,旨在为全面了解和明确AMPK在运动干预效应中的重要地位提供理论依据.
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高内涵筛选与流式细胞分析技术在心肌成纤维细胞增殖研究中的应用
心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖参与了心脏疾病的病理生理过程并发挥重要作用.本文旨在应用高内涵筛选(high-content screening,HCS)和流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析评价CFs增殖,以期建立精确定量评价细胞增殖和细胞周期的方法.采用酶消化法分离C57BL/6J新生乳小鼠(出生24~48 h)CFs,盘状结构域受体(discoidin domain receptor 2,DDR2)染色显示分离后培养的CFs纯度>95%.CFs经血清饥饿12h后给予10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)处理24 h,进行溴脱氧尿苷(5-bromodeoxyuridine,BrdU)和二脒基苯基吲哚(diamidino-phenylindole,DAPI)原位染色或BrdU和7-氨基放线菌素D (7-Aminoactinomycin D,7-AAD)单细胞悬液染色,分别利用HCS或FCM检测CFs增殖和细胞周期.结果表明:(1) HCS分析显示,10% FBS诱导组BrdU阳性细胞比例与无血清对照组比较有显著性差异[(12.96±0.67)% vs (2.77±0.33)%;P<0.05];细胞周期分析显示,细胞处于G0/G1期DNA为二倍体(2N),进入S期DNA复制,G2期DNA倍增(4N),到M期DNA平分到两个子细胞核中(2N).(2) FCM分析显示,10% FBS诱导组BrdU阳性细胞比例比无血清对照组明显增大,差异显著[(11.10±0.42)% vs (2.22±0.31)%; P< 0.05]; DNA含量直方图细胞周期分析显示,10% FBS诱导组S期平台比对照组明显抬高.(3)对比分析HCS和FCM检测结果,BrdU阳性比例以及G0/G1、S、G2/M期细胞百分比等各项指标均无统计学差异.证实HCS和FCM两种技术能够应用于定量分析CFs增殖和细胞周期,方法实用可靠,结果一致.
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小鼠主要脑区组织的优化急性分离法
实验小鼠具有体型小,基因特性明确,转基因或突变体品系多,饲养方便,繁殖迅速等优点,已被广泛应用于现代生物学、医学、药理学和心理学研究.在大量采用小鼠为受试对象的同时,国内外研究者也越来越重视实验动物的保护.大限度地利用实验动物,并尽可能地减少动物使用量,这也是国内外实验室一直追求并建立的理念.本文总结了本实验室快速分离获取小鼠不同脑区新鲜组织用于蛋白免疫印迹和神经细胞培养的经验,旨在为实验初学者提供指导的同时,也为提高实验动物的利用率和降低动物使用数量提供思路和方法.
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悼念恩师陈孟勤教授
我敬爱的导师陈孟勤教授突然离我们而去,这不禁令我感到十分悲痛和怅然若失,因为我从此失去了导师的教导和指引,同时我国生理学界也失去了一位有战略眼光的领导者和长辈.春节前我带学生去看望他,当时尽管他身体己很赢弱,但仍能和我们谈笑,并关心和询问我的研究和系里的工作.我们当时还和他的家人商量在今年五一节他生日时给他庆祝90大寿,没有想到他很快就驾鹤西去,节前一晤竟是永别!今日回想起春节前和他的交谈,仍言犹在耳.他的音容笑貌不时回荡在我的脑海中.他的传奇一生,堪胜一部优秀的电视剧.
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深切怀念陈孟勤老师
2014年2月13日晚,北京时间8点48分(布里斯班时间10点48分),突然接到陈孟勤老师的幼子陈骏先生发来的微信“家父今天下午6点30分病故”.闻此噩耗,身心俱焚.瞬间把我带回仅数月前和陈老师相见的后一面.2013年10月,北京的金秋时光,我因昆士兰大学和中国的合作事务,去北京访问,特地抽空去陈老师家中拜访恩师.当时他和夫人住在长子家中,恰逢陈老师女儿从美国回家探望父母.陈老师的弟弟又特地从湖南长沙到京探兄.我和陈骏先生一起到陈老师家中,当时全家团聚,师生相见,其乐融融.闲谈之中,他还不断问起我目前的研究进展,并特意提到他很多年所提倡的“整合生理学”.我告诉他,我们正在昆士兰大学组建整合生理学(Integrative Physiology)研究中心,他非常高兴.无论如何没想到,仅数月之隔,我已和陈老师阴阳两界,内心非常悲痛.
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忆与陈孟勤教授在中国生理学会工作的一些感触
从1981年到1984年末,陈孟勤教授任学会的秘书长,我担任副秘书长.他比我大几岁,而且他对学会的工作有丰富的经验.在工作中,我从他的身上学到了许多办学会有益的知识.我称他是我的学长.孟勤学长作为一位生理学家,一方面要埋头在实验室内静静地与动物打交道,抱着新的思路和目标日以继夜地工作、探索未来、勇于创新;另一方面还要作为一位社会活动家参加生理学界的大家庭活动,为学会做一些具体的工作,交流学术心得,增进友谊,促进生理科学的发展.孟勤学长的一生堪称在学术和学会工作这两方面都取得了突出的成就.这里我仅回忆和他在学会工作期间给我的一些感触.
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书香孔孟勤勉一生:怀念陈孟勤先生
寒冬雪夜,惊悉恩师远去,深感悲痛.遥祝先生在天堂静心安息,让学生的思念、感激和祝福陪伴着先生,在另一个世界度过又一轮灿烂辉煌的人生.深夜,正在办公室里伏案修改一份学生的论文,看到首都医科大学的王军教授发来的电子邮件,附件是王晓民理事长代表中国生理学会发布的有关陈孟勤教授去世的唁函.读后,静默独坐,远望星斗,悄然泪下,悲痛之情许久不能退去.晓民理事长在唁函中对陈老师一生的总结非常准确精辟、简明深刻,道出了我们所有学生和晚辈的心声:“陈先生热爱祖国、钟情事业、治学严谨、兢兢业业、执着追求、为人谦和、待人宽厚、正气斐然,深得学界同仁、单位同事和学生的尊敬和爱戴,是我国生理学者的楷模.”
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深切悼念陈孟勤先生
那是1985年锦城(成都)一个金秋的下午,一位面带微笑的长者向我走来,他握着我的手,祝贺我当选为生理学会的常务理事,亲切地跟我说:冯(德培)、王(志均)两位先生竭力推荐您进常理会工作,相信您将不负众望.那是我和陈孟勤先生的第一次见面.作为秘书长,他刚成功地组织了第17届全国大会,并当选为学会副理事长,襄助王志均理事长主持学会的工作.
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