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  • p53非依赖性细胞信号通路在依托泊苷诱导的细胞凋亡中的作用机制

    作者:张丽;张丽丽

    目的 探讨p53非依赖性细胞信号通路在依托泊苷诱导的细胞凋亡中的相关作用机制.方法 常规培养HL-60细胞(p53基因缺失),采用0(溶剂对照组)、25、50、100和200 μmol/L的依托泊苷处理处于对数生长期的HL-60细胞.通过MTT比色法检测HL-60胞的增殖率变化,流式细胞术分析HL-60细胞凋亡率变化情况,Elisa方法检测Caspase 3和Caspase 9活力,胞浆Cytochrome c水平,western blotting方法检测HL-60细胞中TAp73、DNp73、p-JNK、p-P38、Bax和Bcl-2的蛋白水平变化.结果 在依托泊苷处理中,HL-60细胞增殖率显著下降(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.01);Caspase 3和Caspase 9活力明显增强,胞浆Cytochrome c水平显著升高(P<0.01);同时,尽管TAp73和DNp73无明显表达,但p-JNK、p-P38和Bax表达量则显著增多(P<0.05),Bcl-2表达量则无变化.结论 JNK和P38通过p53非依赖性的细胞信号通路参与调控了依托泊苷诱导的线粒体依赖性的细胞凋亡过程.

  • 急性心肌缺血损伤中P13K/Akt信号通路表达的研究

    作者:宋瑞霞;熊咏民;陈群;邹秀珍;藏伟进

    目的 通过检测pAkt、Akt、Caspase3和p38在急性心肌缺血大鼠心肌与骨骼肌组织中的表达,探讨P13K/Akt介导的信号通路对急性心肌缺血的影响.方法 采用异丙肾上腺素(ISO)腹腔注射制备急性心肌缺血大鼠模型,检测心电图及血流动力学指标;采用免疫斑点试验与Wesmm blot检测急性心肌缺血与正常大鼠的心肌与骨骼肌pAkt、Akt、Caspase3和p38的蛋白表达水平.结果 与正常大鼠比较,模型组大鼠心电图S-T段下移≥0.1mv.pAkt(P<0.05)、Caspase3(P<0.05)和p38(P<0.05)蛋白表达水平升高.Akt表达水平与对照组比较变化不明显(P=0.477).结论 急性心肌缺血大鼠pAkt、Akt及相关凋亡分子Caapase3和p38的表达水平升高.Akt表达水平变化不明显.

  • 黑米皮提取物对PC-3细胞增殖的抑制作用

    作者:姜伟伟;遇旭东;任国峰

    目的 观察黑米皮提取物对人前列腺癌PC-3细胞增殖的抑制作用并探讨其机制.方法 用不同浓度的黑米皮提取物(20,150和300 μg/ml)处理PC-3细胞,通过MTT法、流式细胞仪、western blot法研究提取物对细胞的影响.结果 处理组的细胞增殖率随着提取物作用浓度和时间的增加而降低(P<0.05);与对照组相比,处理组细胞凋亡率增加,差异有统计学意义(P<0.05);细胞周期中,G1期细胞百分比显著增多,S、G2-M期细胞显著减少,细胞被阻滞在G1-S期.与对照组相比,处理组细胞的p-p38、p-JNK的蛋白表达则随着提取物浓度的增加而增强.结论 黑米皮提取物能够抑制人前列腺癌PC-3细胞的增殖,改变细胞周期的分布,激活JNK、p38通路,诱导细胞凋亡.

  • 雌马酚抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖及机制研究

    作者:王萌;任国峰

    目的 研究雌马酚对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的抑制作用并初步探讨其分子机制.方法 利用MTT法测定不同浓度(0.1、0.5、1、5和10μmol/L)雌马酚对MCF-7细胞增殖率的影响,流式细胞仪测定雌马酚对细胞凋亡率和细胞周期的影响,Western blot测定bag-1、bcl-2、VEGF、ERK1/2、p-ERK1/2、p38以及p-p38蛋白表达.结果 随着雌马酚浓度升高,人乳腺癌细胞MCF-7的增殖率下降(P<0.05),细胞凋亡率升高,细胞周期被阻滞于G0/G1期,雌马酚可以下调bag-1、bcl-2、VEGF、p-ERK1/2以及p-p38蛋白表达,并具有一定剂量-效应关系.结论 雌马酚可以通过促进细胞凋亡并阻滞细胞周期于G0/G1期,以及下调bag-1、bcl-2、VEGF蛋白、抑制ERK1/2和p38蛋白磷酸化的方式实现对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的抑制.

    关键词: 雌马酚 凋亡 乳腺癌 P38
  • 阿尔茨海默病模型大鼠血浆内毒素激活小胶质细胞中P38和JNK及NF-κB作用的研究

    作者:王锋;韩柏;韩德五

    目的 研究阿尔茨海默病(alzheimer disease,AD)模型大鼠脑组织P38、JNK、NF-κB在血浆内毒素(lipopolysaccharide,LPS)激活小胶质细胞(microglia,MG)中的作用.方法 选用雄性Wistar大鼠,腹腔注射D-半乳糖和AlCl3,连续90 d,制备AD大鼠模型.采用鲎试剂法检测模型大鼠血浆中LPS含量,免疫印迹法(western-blot)检测大鼠脑组织P38、JNK、NF-κB表达水平,免疫荧光法检测大鼠脑组织OX-42表达.采用SPSS 16.0软件分析,计量资料实验数据以均数±标准差(x±s)表示,用多因素重复测量方差分析及t检验进行两组间比较,P<0.05为差异有统计学意义.结果 大鼠脑组织OX-42表达对照组与模型组均可见阳性荧光颗粒,荧光强度(767.2±35.4)vs(1054.2±128.4),两组相比,t=2.534,P<0.01,差异有统计学意义.模型组与对照组大鼠脑组织P38、JNK蛋白各组均存在表达[(65.3±4.4)vs (684.9±6.1),(169.4±15.3) vs (183.2±17.5)],组间差异无统计学意义;而模型组大鼠脑组织pP38、p-JNK表达水平明显高于对照组[64.3±5.8)vs(109.7±12.9),t=4.259,P<0.01; (21.9±2.8)vs(171.9±20.8),t=4.657,P<0.01].模型组大鼠脑组织NF-κB表达水平(51.9±7.6)%明显高于对照组(34.7±4.6)%,两组相比差异有统计学意义(t=4.631,P<0.01).结论 P38、JNK、NF-κB信号转导通路在AD模型大鼠血浆LPS激活MG进一步诱发AD过程中发挥了重要作用.

  • 陈皮、半夏对衰老脐静脉内皮细胞中PI3K-Akt和磷酸化p38表达的影响

    作者:黄小波;王宁群;陈玉静;赵荣博;陈文强

    目的 研究陈皮、半夏对衰老脐静脉内皮细胞(HUVEC)中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路和磷酸化p38表达的影响.方法 0.25%胰岛素-柠檬酸盐诱导建立HUVEC衰老模型.采用Western blot方法检测陈皮、半夏干预后衰老HUVEC中PI3K、磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化p38(p-p38)的表达水平.结果 与空白对照组和陈皮半夏对照组比较,诱导衰老组PI3K、p-Akt和p-p38表达显著升高(P<0.01);陈皮半夏干预组、PI3K阻滞组PI3K、p-Akt 和p-p38表达均较诱导衰老组显著降低(P<0.05,P<0.01).结论 陈皮、半夏对衰老HUVEC中PI3K-Akt通路和磷酸化p38的表达有抑制作用.

  • 白英生物碱对人肝癌Huh-7细胞p38和Caspase-3表达的影响

    作者:霍焰;王梅;王晓波;韩兆丰;董秀

    目的 探讨白英生物碱对人肝癌Huh-7细胞增殖和凋亡的影响.方法 MTT法检测白英生物碱对Huh-7细胞增殖的影响,流式细胞术检测白英生物碱对人肝癌Huh-7细胞凋亡率的影响,蛋白印迹方法检测白英生物碱作用后细胞内凋亡相关蛋白的表达.结果 白英生物碱能够抑制Huh-7细胞增殖,诱导Huh-7细胞凋亡,激活p38和Caspase-3蛋白.结论 白英生物碱能诱导Huh-7细胞凋亡,其机制与调控p38和Caspase-3蛋白有关.

  • 积雪草苷对足细胞骨架及 p38通路的影响

    作者:王竹;孙万森;刘俊田

    目的:探讨积雪草苷对阿霉素诱导的足细胞中的细胞骨架及 p38通路的影响。方法用1μmol/ L 阿霉素制造足细胞损伤模型,检测荧光显微镜观察足细胞骨架蛋白,Western blotting 检测足细胞 p38信号通路的磷酸化水平。结果与模型对照组相比,积雪草苷预孵育后足细胞骨架的结构得以很好的保存。p38抑制剂 SB203580拮抗阿霉素对足细胞的损伤,足细胞骨架结构较好。阿霉素(1μmol/ L)显著升高 p38的磷酸化水平,与空白对照组比较差异有统计学意义(P <0.05),提示阿霉素可诱导 p38通路的活化。积雪草苷预处理细胞后,能够有效地遏制阿霉素诱导的 p38通路活化,使 p38的磷酸化水平显著降低,与模型对照组比较差异有统计学意义( P <0.05)。p38抑制剂SB203580能拮抗阿霉素诱导的足细胞 p38磷酸化,与模型对照组比较差异有统计学意义(P <0.05)。结论积雪草苷可以通过抑制 p38磷酸化减少阿霉素对足细胞骨架的损伤作用。

    关键词: 积雪草苷 足细胞 P38
  • 针刺对四氯化碳致肝纤维化大鼠血小板衍生生长因子信号通路的影响

    作者:孔德松;马进;陆茵;倪光夏;倪春艳;张雪娇;王爱云;陈文星;郑仕中

    目的:观察针刺对肝纤维化模型大鼠血小板衍生生长因子(PDGF)信号通路蛋白和mRNA表达的影响,探讨针刺抗肝纤维化的可能机制.方法:将46只SD大鼠分为空白组10只,模型组、非穴组、针刺组,每组12只.采用50%四氯化碳(CCl4)和橄榄油腹腔注射复制肝纤维化模型.针刺“太冲”“期门“肝俞”,电针“足三里”.采用Western blot和Real-time PCR方法检测各组大鼠PDGF信号通路蛋白及其mRNA表达.结果:与空白组相比较,模型组大鼠血清PDGF含量及肝脏PDGF信号通路相关蛋白、mRNA表达明显升高(P<0.01,P<0.05);与模型组相比,针刺组则能够抑制PDGF-β R及其下游细胞外调节蛋白激酶(ERK)蛋白与mRNA的表达(P<0.01,P<0.05);而针刺对Jun细胞核激酶(JNK)、P 38蛋白的表达无明显调节作用(P>0.05).非穴组与模型组相比,各指标蛋白与mRNA的表达差异均无统计学意义(P>0.05).结论:针刺通过抑制CCl4致肝纤维化大鼠的PDGF信号通路,减少胶原沉积,促进细胞外基质的降解,从而起到治疗肝纤维化的作用.

  • 表没食子儿茶素没食子酸酯对人胃腺癌细胞株MGC-803增殖和凋亡的影响

    作者:孙秀梅;隋晓梅

    目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人胃腺癌细胞株MGC-803的作用及其机制.方法:对数生长期的MGC-803细胞分别用不同剂量的EGCG处理(25,50,100μmol·L-),另设空白组,细胞培养48 h后,利用噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况;流式检测细胞凋亡情况,免疫印迹法检测p38,p-p38,B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),Cleavage-Caspase-3蛋白表达的变化.结果:与空白组比较,EGCG可以成浓度依赖性的诱导MGC-803细胞的增值抑制和凋亡,明显上调Bax和Cleavage-Caspase-3蛋白表达,明显下调p-p38和Bcl-2蛋白,均具有明显的统计学差异(P <0.05,P<0.01),对p38表达无明显影响.结论:EGCG可通过抑制p38信号通路激活而诱导MGC-803细胞增值抑制和凋亡.

  • 苦参碱类生物碱联合恩替卡韦抗耐药HBV的作用效果及机制分析

    作者:陈佳欣;沈宏辉;刘晓琼;王伽伯;邹文俊;王世宇;肖小河

    目的:研究苦参碱类生物碱联合恩替卡韦抗耐药乙型肝炎病毒(HBV)的作用效果以及对p38 MAPK,钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(NTCP)表达的影响.方法:以解放军第302医院自行构建的恩替卡韦耐药乙型肝炎病毒复制细胞株HepG2.A64为模型,采用CPE,CCK-8分别考察苦参碱类生物碱氧化苦参碱、苦参碱、槐果碱、槐定碱和核苷类药物恩替卡韦单独用药及两者联合用药的细胞毒性;采用酶联免疫法(ELISA),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-timePCR),蛋白质免疫印迹法(Western blot)分别观察联合用药对HepG2.A64细胞HBsAg分泌,HBV DNA复制,p38和NTPC mRNA表达,细胞中p38和p-p38蛋白表达水平的影响.结果:与单独用药比较,氧化苦参碱和恩替卡韦联合用药72 h后能显著抑制HBsAg分泌,HBV DNA复制(P<0.05),同时能显著降低NTCP基因和蛋白的表达水平以及磷酸化p38蛋白水平.结论:氧化苦参碱联合恩替卡韦可能通过下调NTCP的表达同时抑制p38蛋白磷酸化达到抗病毒的效果.氧化苦参碱联合恩替卡韦能显著增强抗耐药HBV病毒的效果.

  • 羟基红花黄色素A不同给药方式对激素性股骨头缺血坏死模兔ERK1/2、JNK和p38蛋白表达的影响

    作者:齐振熙;万甜;吴敏瑞;张占勇;仲卫红;于涛

    目的:比较羟基红花黄色素A(HSYA)灌胃、耳缘静脉注射和股骨头髓腔内注射3种不同给药方式对激素性股骨头缺血坏死模兔股骨头细胞ERK1/2、JNK、p38蛋白表达的影响.方法:50只成年新西兰大白兔随机分为正常对照组、模型对照组、灌胃组、耳缘静脉注射组、髓腔内注射组,每组10只.除正常对照组外,其余各组每周2次臀肌注射7.5mg/kg醋酸泼尼松龙,连续6周,建立激素性股骨头缺血坏死模型.造模成功后,正常对照组和模型对照组不作治疗,其余3组分别给予HSYA灌胃、耳缘静脉注射和股骨头髓腔内注射治疗,4周、8周后各组分别处死5只,取出患侧股骨头,电镜观察股骨头细胞的超微结构,Western B lo t检测股骨头细胞内ERK1/2、JNK、p38蛋白的表达.结果:4周后,髓腔内注射组ERK1/2蛋白表达较模型对照组明显升高(P<0.05),JNK、p38蛋白表达较模型对照组明显降低(P<0.05);8周后,耳缘静脉注射组、髓腔内注射组ERK 1/2蛋白表达较模型对照组明显升高(P<0.05),JNK、p38蛋白表达较模型对照组明显降低(P<0.05).结论:HSYA3种不同给药途径中,股骨头髓腔内注射的方式优于其余两种,可较好发挥药物疗效.

  • 干扰ELK-3抑制人肝癌细胞的上皮-间质转换

    作者:李天柱;史铁伟;周静;金光虎;张俊毅;郝丹丹;白春英

    目的:研究转录因子ELK-3与人肝癌细胞系HepG2和HuH7上皮-间质转换( EMT)的关系及其作用机制。方法将HepG2和HuH7细胞分为小干扰RNA转染组和Ras-ELK-3信号通路抑制剂( XRP44X)处理组。用West-ern blot检测ELK-3、ELK-3靶基因EGR-1以及EMT相关分子钙黏附素E(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的表达和MAPK信号通路蛋白p38的表达。结果 ELK-3干扰或Ras-ELK-3信号通路抑制剂( XRP44X)处理肝癌细胞后其ELK-3和ELK-3的靶基因EGR-1的蛋白表达均显著降低(P<0.01),E-cadherin表达水平升高(P<0.01),vim-entin的表达及p38磷酸化水平均降低( P<0.01)。结论通过干扰ELK-3下调p38抑制EMT。

  • 抑制BCAR1降低肺癌细胞系A549 p-P38表达

    作者:黄伟;阮姝琴;王如文;范小青

    目的 探讨抑制乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白(BCAR1)表达对肺癌细胞系A549 P38和p-P38表达的影响.方法 培养正常A549细胞(对照组)、慢病毒BCAR1基因干扰A549细胞(干扰组)和慢病毒阴性对照A549细胞(阴性对照组),用Western blot检测细胞P38和p-P38表达水平,用克隆形成实验、流式细胞计量术、Transwell实验和划痕实验检测细胞的细胞克隆、细胞周期、细胞侵袭和迁移能力.结果 干扰组p-P38表达显著低于其他两组(P<0.05);干扰组细胞G1期比例显著高于其他两组(P<0.05);干扰组细胞增殖、侵袭和迁移能力低于其他两组(P<0.05).结论 抑制BCAR1表达可下调p-P38表达,减弱肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力.

  • P38/caspase-3介导的MEF2C信号通路参与大鼠脑缺血再灌注损伤

    作者:王瑞敏;张全光;武鹏;杨方;马文东

    目的 观察大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区肌细胞促进因子(MEF) 2C磷酸化(激活)和蛋白水平的变化规律,并探讨其可能的分子机制.方法 采用SD大鼠四动脉结扎模型,用免疫印迹法检测蛋白表达,给药组大鼠在缺血前20 min脑室给药.结果 脑缺血再灌注可诱导MEF2C激活,6 h达高峰;其蛋白表达在再灌后期(3~5 d)明显下降.Caspase-3蛋白和激活的caspase-3 (17 ku) 水平在再灌后期均显著增加;Caspase-3特异性抑制剂Ac-DEVD-CHO可明显阻止再灌3 d 的MEF2C蛋白表达降低.P38激酶抑制剂SB202190不但抑制再灌注6 h 的MEF2C激活,而且也降低了再灌注3 d 的caspase-3激活;但胞外信号调节激酶 (ERK) 5的反义寡核苷酸未显著影响MEF2C的磷酸化水平.结论 P38/caspase-3依赖的MEF2C信号通路可能参与了大鼠脑缺血再灌注诱发的神经元凋亡过程.

  • P38及上游激酶MKK6对热损伤诱导Raw264.7细胞凋亡的调控作用

    作者:张璐;姜勇;刘怒云;赵克森;张琳

    目的 探讨P38及其上游激酶MKK6对热损伤诱导单核细胞系Raw264.7细胞凋亡的调控作用.方法 应用脂质体介导的基因转染将P38的显性负效突变体P38(AF)及具有持续活性的组成性活性突变体MKK6b(E)导入Raw264.7细胞,观察P38对细胞凋亡的调控作用.结果 荧光染色及Western blot检测显示,外源基因转染进细胞,并在细胞中得到表达;蛋白激酶活性检测显示,MKK6b(E)转染细胞系P38激酶活性明显升高,而P38(AF)转染细胞系P38激酶未被激活;流式细胞术检测显示,MKK6b(E)转染可明显诱导Raw264.7细胞凋亡,并且MKK6b(E)基因转染促进热损伤诱导的Raw264.7细胞凋亡,而P38(AF)基因转染抑制热损伤诱导的Raw264.7细胞凋亡.结论 MKK6-P38信号通路参与介导热损伤诱导的Raw264.7细胞凋亡.

  • P38抑制剂SB203580对大鼠脑缺血再灌注后AQP4表达及脑水肿的影响

    作者:王耀辉;李国辉;袁微

    目的 探讨P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580对大鼠脑缺血再灌注后脑组织水通道蛋白4(AQP4)表达及脑水肿的影响.方法 SPF级雄性SD大鼠54只,随机分为假手术组(sham组)、模型组(/R组)和P38抑制剂组(SB203580组).用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.模型组与P38抑制剂组分别于造模前15 min舌下静脉注射10%二甲基亚砜(DMSO,400 μg/kg)和P38抑制剂(SB203580,400 μg/kg).缺血2h再灌注24h后对大鼠进行神经功能缺损评分,采用HE染色观察大鼠脑组织病理改变,干湿比重法测定缺血半球的脑含水量,Western blot检测磷酸化P38 (p-P38)和AQP4蛋白的表达、RT-PCR法检测AQP4 mRNA的表达.结果 与I/R组相比,SB203580组大鼠神经功能缺损症状明显改善,缺血侧半球脑含水量明显降低(P<0.05).I/R组大鼠缺血周边区脑组织p-P38、AQP4蛋白及mRNA的表达分别为2.463±0.138、2.660±0.130及1.065±0.125,高于SB203580组的1.653±0.105、1.771±0.092及0.552±0.069 (P <0.05).结论 P38抑制剂SB203580减轻大鼠脑缺血再灌注后AQP4表达及脑水肿,其机制可能与SB203580抑制P38信号通路的激活降低了下游AQP4的表达有关.

  • 一氧化氮激活应激活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶及p38MAP激酶诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡

    作者:郑关毅;陈晓春;刘昌云;方芳;张静;黄天文;曾育琦

    目的 研究脑缺血区周边组织一氧化氮合酶(NOS)的表达与应激活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶(SAPK/JNK)及p38MAP激酶(p38MAPK)激活的关系;探讨一氧化氮(NO)诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡的可能机制.方法 采用TUNEL染色法观察脑缺血再灌注不同时段模型鼠缺血区周边组织凋亡的阳性神经元数量;免疫组织化学、蛋白免疫印迹方法检测活化型Caspase-3、神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和SAPK/JnK,p38MAPK及其磷酸化组分的表达.结果 再灌注后1h、2h缺血区周边组织nNOS表达明显增强;自1h起iNOS开始表达,12 h达到高峰.1h p-SAPK/JNK表达较强,以后逐渐减弱;p38MAPK各时段表达均明显增强,以6h为著,p-p38MAPK表达高峰亦在6h.6h活化型Caspase-3开始表达,12 h达到高峰;12 h开始出现TUNEL阳性神经元,24 h达到高峰.结论 缺血区周边组织NOS表达的增强可能通过激活SAPK/JNK及p38MAPK诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡.

  • 微小隐孢子虫糖蛋白GP900对HCT-8细胞Akt和MAPK通路的影响

    作者:张梦鸽;宫鹏涛;张西臣;李建华

    目的 探讨微小隐孢子虫糖蛋白GP900对HCT-8细胞Akt和MAPK信号通路的影响,为进一步研究微小隐孢子虫与宿主细胞的相互作用提供理论依据. 方法 以微小隐孢子虫卵囊cDNA为模板,PCR扩增GP900基因片段,同收后连接到pMD-18T载体,构建重组克隆质粒pMD-18T-GP900.双酶切pMD-18T-GP900和pET-32a载体并进行连接,构建pET 32a-GP900重组质粒,双酶切及测序鉴定正确后转化人大肠埃希菌BL21(DE3),重组菌用IPTG诱导,通过SDS-PAGE分析GP900的表达.采用Ni-NTA亲和层析富集和超滤纯化GP900重组蛋白用Triton-114去除内毒素,直至重组蛋白内毒素含量在0.01~0.1 Eu/mg为止,然后用Hydrophobic beads吸附残留的Triton 114,收集重组蛋白.用GP900重组蛋白刺激HCT 8细胞,收集不同刺激时间的细胞,提取全蛋白,采用Western blot检测Akt、p38和ERK的磷酸化;用不同浓度GP900刺激后检测细胞中上述通路蛋白的磷酸化与GP900剂量的关系. 结果 pET-32a-GP900重组质粒经双酶切及测序鉴定构建正确,表达的重组GP900蛋白分子质量与理论值相符.纯化的重组蛋白刺激HCT-8细胞后,Akt在60 min发生磷酸化且随着GP900浓度增加磷酸化程度呈剂量依赖,p38在60 min发生磷酸化但不呈剂量依赖,ERK在90 min发生磷酸化但不呈剂量依赖. 结论 成功构建了GP900重组质粒,表达的GP900重组蛋白可诱导HCT-8细胞Akt、p38和ERK信号通路活化.

  • 抑制钠氢交换蛋白下调IL-8表达和促进p38磷酸化

    作者:高伟;张玉娟;张海瑞;金薇娜;常国强;张洪菊;马丽;蔺亚妮;李庆华

    我们前期的研究证明,抑制钠氢交换蛋白1(NHE1)可以减少VEGF表达从而抑制K562细胞诱导的血管生成.本研究探讨抑制NHE1后其他可能的血管生成因子变化及相关机制.用NHE1特异性抑制荆卡立泊来德10 μmol/L处理K562细胞;蛋白芯片筛选NHE1抑制后血管生成因子的表达变化,实时定量PCR验证卡立泊来德处理后白介素-8(IL-8)的表达水平;构建K562稳定干扰NHE1细胞株,实时定量PCR验证干扰NHE1后IL-8的表达变化,Western blot检测卡立泊来德处理后细胞内p38磷酸化水平;p38抑制剂SB203580处理K562细胞,实时定量检测IL-8表达变化.蛋白芯片筛选结果显示,卡立泊来德处理后K562细胞中IL-8表达显著下调;实时定量结果进一步验证了这种抑制效应;卡立泊来德处理后p38磷酸化水平显著上调;卡立泊来德处理后加入SB203580抑制p38,IL-8表达可以部分恢复.结论:抑制NHE1可能通过促进p38磷酸化,下调促血管生成因子IL-8的表达.

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