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溴氰菊酯对大鼠神经细胞内游离钙的影响
目的研究溴氰菊酯对大鼠神经细胞内游离钙([Ca2+]j)的影响,并探讨其可能机制.方法用溴氰菊酯处理分离的大鼠脑细胞,用Fura-2/AM为细胞内钙离子荧光指示剂,测定神经细胞内游离钙浓度;并利用NMDA受体竞争性拮抗剂AP5、非竞争性拮抗剂MK-801、Na+离子通道阻断剂TTX、电压依赖性钙通道阻断剂尼莫地平,探讨了溴氰菊酯影响胞内钙的可能机制;另外还观察了去除胞外钙时溴氰菊酯对胞内钙的影响情况.结果溴氰菊酯浓度在0～200 nmol/L范围内,可以显著提高大鼠皮层和海马细胞内游离钙的浓度(P＜0.01),并有良好的剂量-反应关系(相关系数分别为r=0.964,r=0.981);AP5、MK-801和TTX可以有效阻断溴氰菊酯的升钙作用;而尼莫地平则无影响;去除胞外钙时,溴氰菊酯的升钙作用也消失.结论溴氰菊酯导致的胞内钙升高,主要是由谷氨酸激活NMDA受体门控钙通道引起的胞外钙内流,和电压依赖性钙通道及胞内钙库释放无关.
关键词： 溴氰菊酯 胞内游离钙 钙离子荧光指示剂(Fura-2/AM) 神经细胞 -
脑源性神经营养因子对丙烯酰胺致NB-1细胞损伤的保护作用
目的 在体外实验条件下探讨脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)对丙烯酰胺(acrylamide,ACR)所致神经损伤的干预效应.方法 MTT法检测不同剂量ACR(0、10、20、40、60、80和100 μg/ml)作用时NB-1细胞的相对存活率并计算半数抑制浓度(IC50);根据ACR细胞毒性测试结果设对照组、ACR染毒组(60 μg/mlACR)、BDNF干预组:BDNF1(50 ng/ml BDNF+ 60 μg/ml ACR)、BDNF2(75 ng/ml BDNF+ 60 μg/ml ACR)、BDNF3(100 ng/ml BDNF+ 60 μg/ml ACR);光学显微镜观察神经细胞形态变化,MTT法检测细胞相对存活率,流式细胞术检测胞内游离钙离子浓度;Western-blot检测突触素Ⅰ(synapsin Ⅰ)蛋白表达.结果 ACR对NB-1细胞的IC50为69.8 μg/ml(48 h).50和75 ng/ml BDNF对ACR所致神经损伤具有一定的干预作用,与60 μg/ml ACR单独染毒组比较,神经细胞形态异常减轻,细胞相对存活率增加,胞内钙离子浓度降低,synapsin Ⅰ蛋白含量增加(P ＜0.05);BDNF剂量增加到一定水平(100 ng/ml),干预效果减弱,细胞相对存活率、胞内钙离子浓度及synapsin Ⅰ蛋白表达与60 μg/ml ACR单独染毒组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 适当剂量的BDNF在体外条件下对ACR所致神经损伤具有一定的保护作用,可能是通过对抗胞内钙超载,上调synapsin Ⅰ蛋白表达,维持突触结构完整来实现的.
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麝香糖蛋白成分对中性白细胞趋化反应的抑制作用
目的: 观察麝香糖蛋白成分(麝香-1)对中性白细胞趋化反应的影响.方法: 体内采用羧甲基纤维素诱导大鼠腹腔内中性白细胞趋化反应模型.体外采用Boyden隔室法测定兔中性白细胞趋化反应.以Fura-2标记荧光法测定细胞内游离钙水平.结果:皮下注射麝香水提物5,20,80 mg*kg-1,显著抑制羧甲基纤维素诱导的大鼠腹腔中性白细胞趋化反应,抑制率分别为58.6%,65.1%和73.0%;终浓度为1,10,100 μg*mL-1麝香-1,显著抑制fMLPP 诱导的兔中性白细胞的趋化反应,抑制率分别为57.9%,64.7%和77.8%;终浓度为1,10,100 μg*mL-1的麝香-1,明显抑制刺激剂引起的中性白细胞胞内游离钙水平的升高,抑制率分别为16.3%,24.7%和37.8%.结论:麝香糖蛋白成分对中性白细胞趋化反应有显著抑制作用,是其抗炎作用机制之一.
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甲基蓝对阿片类物质产生耐受和依赖的阻断作用
目的:探讨鸟苷酸环化酶(sGC)抑制剂甲基蓝(MB)对阿片耐受和依赖的阻断作用.方法:体外培养iNOS稳定表达的神经细胞做为模型,竞争性蛋白结合法、放免法和3H-Arg转化3H-Cit法检测胞内cAMP,cGMP水平和NOS活性, 激光共聚焦扫描技术测定胞内Ca2+浓度.观察MB对δ-阿片激动剂DPDPE和吗啡预处理细胞48 h及纳洛酮戒断,对胞内cGMP,cAMP含量、[Ca2+]i 和NOS活性的影响.结果:MB可明显抑制阿片激动剂长时程所致cGMP含量增加(P<0.01),对cAMP含量、[Ca2+]i和NOS活性的变化无影响.结论:MB通过抑制sGC活性,使NO-cGMP通路下调,减缓阿片耐受和依赖的发生.
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吸烟对沙丁胺醇和布地奈德抑制气道平滑肌细胞收缩作用的影响
目的：研究长期吸烟对于哮喘治疗常用药物沙丁胺醇和布地奈德药效的影响。方法原代培养吸烟与非吸烟豚鼠气道平滑肌细胞，分别检测其在静息态、组胺激发态及以药物(沙丁胺醇和布地奈德)抑制平滑肌收缩后再以组胺激发细胞内游离钙离子的水平，取峰值并比较两组间抑制率的差异。结果吸烟组气道平滑肌细胞静息态、激动态及药物(沙丁胺醇和布地奈德)作用后胞内游离钙离子的水平均显著高于不吸烟组(P <0.05或 P <0.01)；吸烟豚鼠气道平滑肌细胞内2种药物抑制胞内钙水平升高的作用均削弱(P <0.05)。结论吸烟可使豚鼠呼吸道平滑肌内游离钙离子升高，加强其收缩强度，同时吸烟会影响沙丁胺醇和布地奈德对胞内钙升高的抑制作用，降低药物疗效。
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心肌缺血-再灌注中钙超载损伤机制与药物保护作用研究概况
胞内游离钙([Ca2+]i)稳态的改变及钙转运机制是多种受体激动后信号传递过程的中心环节.其中,心肌组织的[Ca2+]i参与调节细胞的离子转运,生物电活动和机械收缩功能,对维持心脏正常功能具有特殊意义.
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兴奋毒作用下皮层神经细胞Ca2+变化机制
目的检测谷氨酸兴奋毒损伤时,在胞外有Ca2+或无Ca2+,或有尼莫地平和Ca2+条件下,神经细胞内[Ca2+]i的变化.方法用Fura-2/AM体外检测新生大鼠皮层神经细胞胞内游离钙离子浓度的方法.结果发现谷氨酸兴奋毒可使皮层神经细胞[Ca2+]i上升并有剂量依赖性,胞外无Ca2+或加入尼莫地平时神经细胞[Ca2+]i虽也上升,但幅度降低;三种条件下神经细胞在兴奋毒作用下[Ca2+]i变化各不相同.结论表明谷氨酸活化神经细胞膜上受体,使胞内钙库动员和细胞膜Ca2+通道开放,导致[Ca2+]i在短时间内总体表现为持续上升.存在兴奋毒损伤过程中有磷脂酶A2活化过度参与的信使基础.
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低氧与缺血诱导培养海马和皮质神经元钙应答反应的比较
目的:钙作为重要信使参与多种生理和病理代谢过程,而且在缺血性神经元损伤机制中起着重要的作用.本实验模拟脑缺血的病理生化改变,用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)和Fluo-3荧光探针标记技术,观察低氧缺血状态下体外培养的海马、皮质神经元内钙浓度的变化.方法:用100μmol/L氰化钠造成细胞低氧;100μmol/L氰化钠和3.5 mmol/L碘醋酸盐模拟在体完全性脑缺血;1 mmol/L L-谷氨酸模拟在体脑缺血时兴奋性氨基酸大量释放;无葡萄糖介质剥夺细胞能量代谢的底物.结果:低氧使海马神经元[Ca2+]i显著升高,但有两种不同的钙振荡现象.谷氨酸引起海马神经元[Ca2+]i持续升高,但峰值低于低氧组.缺血组未见[Ca2+]i大幅升高.葡萄糖缺如不引起[Ca2+]i升高.结论:低氧和谷氨酸引起的神经元损害是能量依赖性的.轻度酸中毒可阻止胞内Ca2+升高.糖对神经元具有保护作用,但单纯无糖引起的神经元损害与Ca2+超载机制无关.
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体外培养小鼠小肠Cajal间质细胞的电生理学特性
目的 采用膜片钳技术观察体外培养的小鼠Cajal间质细胞(ICC)的电生理学特性,为进一步研究不同种类ICC的功能奠定实验基础.方法 用C-Kit染色法对ICC进行形态学鉴定后,分别在全细胞模式、膜内向外和细胞吸附的钳制模式下,观察胞内低钙和钙调蛋白抑制剂对ICC起搏电流的影响.结果 免疫学鉴定结果表明,培养的大部分细胞均为ICC.在全细胞模式下,高浓度钙鳌合剂使细胞内游离钙浓度降低后,可以激活持续性内向电流;在膜内向外的膜片钳模式下,当灌流液中钙浓度由1 μmol/L降低到0.1 μmol/L时,激活幅度大和频率快的自发性内向电流;在全细胞模式下,钙调蛋白抑制剂(W-7)可以激活持续性内向电流的同时增加自发性内向电流的幅度;在细胞吸附模式下,W-7 激活幅度大和频率快的自发性内向电流.另一种细胞电生理学特性却不受细胞内低钙环境和W-7的影响.结论 在培养的ICC中对细胞内低钙和W-7敏感的细胞可能就是具有起搏功能的肌层间ICC,而对细胞内低钙和W-7不敏感细胞可能就是不具有起搏功能的肌间ICC.
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氯胺酮对卵蛋白激发的致敏大鼠离体肺泡巨噬细胞胞内钙和自由基的影响
目的 研究氯胺酮对卵蛋白(OVA)刺激的致敏大鼠肺泡巨噬细胞胞内游离钙离子([Ca2+]i)及自由基的作用,探讨氯胺酮在哮喘治疗中的作用及其机制.方法 体外培养的致敏肺泡巨噬细胞经氯胺酮(10、100和1 000 μM)处理、OVA刺激后,测定细胞[Ca2+]i并检测细胞培养上清液中一氧化氮(NO)和羟自由基(·OH)水平.结果 OVA激发可引起致敏肺泡巨噬细胞[Ca2+]i增高及NO和·OH的生成增多,氯胺酮对此具有浓度依赖性抑制作用.结论 氯胺酮可抑制OVA所致的氧化应激,其分子机制可能与[Ca2+]i相关.
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β-葡聚糖对巨噬细胞增殖胞内游离钙及cAMP浓度的影响
目的: 探讨β-葡聚糖对RAW264.7细胞增生、胞内游离钙及cAMP浓度的影响.方法: 中性红比色法检测细胞生长, 酚试剂法检测细胞蛋白质合成, 动态检测β-葡聚糖对胞内游离钙和cAMP浓度的影响.结果: 微量β-葡聚糖可促进细胞生长及蛋白质合成;β-葡聚糖作用后3～5 min使胞内游离钙浓度升高,作用1 min 后使cAMP浓度升高, 并保持较高水平.结论: 胞内游离钙及cAMP是β-葡聚糖对RAW264.7细胞作用过程中重要的信使分子.
关键词： β-葡聚糖 胞内游离钙 环磷酸腺苷 RAW264.7细胞系 增殖 -
慢性VNS对点燃大鼠大脑皮质及海马神经元兴奋性的影响
目的：探讨迷走神经刺激（VNS）抗癫作用的细胞机制。方法：用戊四氮（PTZ）行大鼠腹腔注射点燃制作癫模型，行迷走神经刺激抗癫，应用荧光分光光度法测定不同浓度谷氨酸（Glu）对正常、PTZ点燃及VNS治疗动物大脑皮质及海马神经元胞内游离钙升高的影响，同时观察VNS对动物癫行为的影响。结果：VNS组动物胞内游离钙浓度较PTZ点燃组明显降低，并对外源性Glu的升高胞内游离钙有明显抑制作用，行为观察显示VNS能明显抑制癫发作的严重程度，延长癫发作的潜伏期。结论：VNS能明显抑制大鼠PTZ的点燃效应，降低Glu对神经元胞内游离钙的升高作用。VNS可能通过调节神经元兴奋性/抑制性受体的活性来发挥抗癫作用。
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细菌脂多糖对NIH3T3细胞增生、胞内游离钙及cAMP浓度的影响
目的:探讨细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对NIH3T3细胞增生、胞内游离钙及cAMP浓度的影响. 方法:以中性红比色法检测细胞生长,酚试剂法检测细胞蛋白质合成,并动态检测LPS对胞内游离钙和cAMP浓度的影响. 结果:①微量LPS可促进细胞生长及蛋白质合成;②LPS作用后3～5 min可使胞内游离钙浓度升高,作用1 min后使cAMP浓度升高,并保持较高水平. 结论:胞内游离钙([Ca2+]i)及cAMP是LPS对NIH3T3细胞作用过程中重要的信使分子.
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ET-1 对人视网膜色素上皮细胞内游离钙浓度的影响
目的 观察内皮素(endothelin-1,ET-1)对体外培养视网膜色素上皮(retinal pigmental epithelium,RPE)细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响.方法 用共聚焦显微镜观察 1×10-12～0.1×10-6mol·L-1ET-1 作用后 fluo-3/AM 负载的 RPE 细胞[Ca2+]i 的变化和地塞米松(dexamethasone,DEX)与染料木黄酮对其作用的影响.结果 含钙溶剂DMEM 液溶解的 ET-1,RPE 细胞[Ca2+]i随着 ET-1 浓度的增加,反应敏感(F=8.228.P＜0.01).无钙溶剂 D-Hank 液溶解的 ET-1,RPE 细胞[Ca2+]i 随着 ET-1 浓度的增加,反应较差(F=1.843,P＞0.05),而 DEX 和染料木黄酮抑制了 1×10-9mol·L-1 ET-1 诱导的[Ca2+]i 的升高(F=9.945,P＜0.01;F=17.864,P＜0.01).结论 ET-1 刺激使[Ca2+]i 升高,ET-1 使[Ca2+]i 升高可能主要来自细胞外 Ca2+ 的内流;DEX 和染料木黄酮抑制ET-1 的作用.
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神经肽Y对大鼠心肌细胞胞浆钙及钙瞬变的影响
目的 观察神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)对静息状态下心肌细胞胞浆钙含量及兴奋-收缩耦联过程中心肌细胞钙瞬变的影响.方法 用NPY(100nmol/L)刺激Sprague-Dawley乳鼠心肌细胞24h,用荧光染料Fluo 4-AM负载胞浆钙,记录静息状态下心肌细胞胞浆钙浓度,并用场刺激诱发胞浆钙瞬变.所有钙影像均由Leica SP2激光共聚焦显微镜记录.结果 NPY组心肌细胞胞浆钙含量明显高于对照组(P＜0.05);场刺激诱导下NPY组心肌细胞胞浆钙瞬变幅度明显高于对照组(P＜0.01),NPY组钙瞬变恢复时间明显缩短(P＜0.01),钙瞬变上升时间则无显著差别.结论 长时间的NPY刺激可显著影响兴奋-收缩耦联过程中钙的动态活动,并导致胞浆内钙含量增加.
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神经肽Y对大鼠心肌细胞胞浆及核内游离钙浓度的影响
目的:观察不同时限内神经肽Y(NPY)对心肌细胞胞浆及核内游离钙浓度的作用.方法:用Fluo3-AM荧光标记细胞内游离钙离子,用NPY(100nmol/L)刺激WISTAR乳鼠心肌细胞,检测0 min、5 min、10 min及24 h内心肌细胞胞浆及核内钙离子浓度变化.结果:加入100nmol/L NPY即刻至10 min内,心肌细胞胞浆及核内钙含量差异均无显著性.经100nmol/L NPY刺激24h后,心肌细胞胞浆钙含量(16.81±2.1)明显高于对照组(7.45±1.96)(P＜0.01),核内钙含量(30.65±4.06)也显著高于对照组(15.64±2.16)(P＜0.01).结论:较长时间的NPY刺激可导致心肌细胞胞浆及核内钙浓度增加.
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粉防己碱对β-葡聚糖诱导的巨噬细胞生长、胞内游离钙及cAMP表达的影响
目的 观察粉防己碱(Tet)对β-葡聚糖(β-glucan)诱导的巨噬细胞增殖、胞内游离钙及环磷酸腺苷(cAMP)表达的影响.方法 以终浓度为100 μg/ml的β-glucan刺激RAW264.7细胞,建立细胞模型.MTT法检测不同浓度Tet(0,0.01,0.1,1,10,100 μmol/L)对RAW264.7细胞增殖的影响;动态检测Tet(0.01,0.1,1μmol/L)剂量组对胞内游离钙和cAMP表达的影响.结果 与对照组比较,Tet(0.01,0.1,1μmol/L)剂量组A值升高(P＜0.01);胞内游离钙在Tet作用5 min时表达增加(t=4.18,4.17,3.40,P均＜0.01);cAMP浓度在1 min时明显升高(t=3.33,3.84,3.18,P均＜0.01).Tet＞10 μmol/L时,A值下降(P＜0.01).结论 适当浓度的Tet可以促进β-glucan诱导的RAW264.7细胞生长,协同βglucan调节细胞内游离钙及cAMP的表达.
关键词： 粉防己碱 RAW264.7细胞 胞内游离钙 环磷酸腺苷 -
氢氧化钙激动人牙髓细胞内钙释放及其通道的研究
目的：检测Ca(OH)2激动体外培养的人牙髓细胞内Ca2+的释放和钙释放通道。方法：在RPMI1640培养液中分别加入Ca(OH)2、Ca(OH)2和肝素、Ca(OH)2和普鲁卡因，培养第6代人牙髓细胞，用Fluo-3荧光探针负载后，再次用Ca(OH)2作用于牙髓细胞，用激光共聚焦显微镜检测胞内Ca2+。结果：含Ca(OH)2、Ca(OH)2和普鲁卡因的培养液培养的细胞内Ca2+浓度升高；含Ca(OH)2和肝素的培养液培养的细胞内Ca2+浓度无变化。结论：Ca(OH)2可激动人牙髓细胞内三磷酸肌醇受体(IP3R)，钙释放通道开放，使细胞内Ca2+浓度升高。
关键词： 牙髓细胞 Ca(OH)2 胞内游离钙 三磷酸肌醇受体 Ryanodine受体
