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Notch信号通路与肿瘤发生发展研究进展
Notch信号转导通路广泛存在,早期发现此通路的调节和激活通过与邻近细胞间的相互作用来调节调控机体各系统细胞和组织器官的分化.Notch信号转导在细胞分化过程中起到了至关重要的作用,干细胞的储备数量的多少以及干细胞的分化均受到Notch信号转导通路的精确调控.而且,在肿瘤干细胞中发现了Notch通路蛋白的异常表达和扩增,表明Notch信号通路在肿瘤发生发展中不可小视,为人们以后开发针对Notch为靶点的新的抗癌药物提供了理论基础,有望研发具有不耐药和不易复发的抗肿瘤药物[1].
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γ-分泌酶抑制剂DAPT对哮喘小鼠气道炎症的调控作用分析
目的 探究γ-分泌酶抑制剂(DAPT)对哮喘小鼠气道炎症的调控作用.方法 选择健康C57BL/6雌性小鼠120只,随机分成4组,每组30只,分别为健康对照组、哮喘模型组、二甲基亚砜(DMOS)溶剂对照组、DAPT组.除健康对照组,剩余3组小鼠创建哮喘模型.DAPT组在末次激发前0.5 h经气道使用DAPT,DMSO溶剂对照组给予相同体积的DMSO,健康对照组给予相同体积的生理盐水,哮喘模型组不给予任何处理.末次激发1 d后,脱颈法处死所有小鼠,收集气道内灌洗液(BALF),测定BALF内Th1/2细胞因子变化情况,对BALF中各种炎性细胞进行计数.结果 健康对照组、哮喘模型组、DMOS溶剂对照组和DAPT组小鼠BALF内的IL-4和IFN-γ水平,白细胞总数、淋巴细胞计数、嗜酸性粒细胞计数比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 DAPT可一定程度纠正哮喘小鼠的免疫偏倚现象,减少肺组织炎性细胞浸润比例,是治疗哮喘的新药物,值得进一步深入研究.
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Notch信号通路相关基因多态性与肺癌易感性的关联研究
目的 分析Notch信号通路相关基因单核苷酸多态性(SNP)与肺癌易感性的关系.方法 采用以医院为基础的病例-对照设计,选择2006年1月至2012年12月收集在福建、南京三所医院中,经组织病理学诊断的新发原发性肺癌患者1121例;选取同期在医院其他科室的健康探视人群(排除肿瘤患者及其直系亲属和慢性病住院患者)和社区健康人群1121名,采用统一的调查表收集研究对象基本信息.应用基质辅助激光解析电离时间飞行质谱技术(MALDI-TOF-MS)检测9个SNP位点(Notch3 rs3815188、Notch4 rs915894、Notch4 rs520692、DLL1 rs1033583、JAG1 rs8708、JAG2 rs9972231、HEY1 rs1046472、HEY2 rs3734637、HES2 rs11364)的基因分型.采用χ2检验、非条件logistic回归模型分析各SNP位点多态性与肺癌的关联.结果 病例组和对照组的年龄分别为(58.70±10.73)、(58.98±10.85)岁.与HEY1 rs1046472 CC型基因型者相比,AC基因型携带者患肺癌OR=0.80,95% CI:0.66~0.97;与CC型相比,AC+AA基因型携带者患肺癌风险OR=0.81,95% CI:0.67~0.98.与携带HEY2 rs3734637 AA相比,AC基因型发生肺癌的OR=0.82,95% CI:0.67~0.99.分层分析中,Notch3 rs3815188、DLL1 rs1033583、JAG1 rs8708、JAG2 rs9972231、HEY1 rs1046472、HEY2 rs3734637、HES2 rs11364与肺癌发病风险存在关联(P值分别为0.041、0.030、0.043、0.003、0.004、0.026、0.038).logistic回归模型相乘交互作用发现,JAG1 rs8708与肿瘤家族史、JAG2 rs9972231与BMI存在交互作用,OR值分别为2.07(95% CI:1.21~3.52)、1.73(95% CI:1.21~2.47).结论 Notch3 rs3815188、DLL1 rs1033583、JAG1 rs8708、JAG2 rs9972231、HEY1 rs1046472、HEY2 rs3734637及HES2 rs11364均与肺癌的易感性相关.
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中医药对缺血性脑卒中神经修复中Notch信号通路的调控机制研究进展
缺血性脑卒中是严重危害人民健康的疾病之一,具有高发病率、高病死率和高致残率的特点.中医药在缺血性脑卒中的防治中发挥了重要作用,但对其作用机制的认识及其相关基础研究尚有明显不足.成年哺乳动物脑内存在神经干细胞(NSCs),其增殖分化的潜能使卒中后损伤区神经修复成为可能,Notch信号通路参与神经干细胞增殖分化过程,通过对中医药防治缺血性脑卒中的基础研究进行总结、归纳,从Notch信号通路对神经重塑调节作用的角度,探讨中医药治疗缺血性脑卒中的可能机制,为临床中医药防治缺血性脑卒中提供依据.
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愈创汤对SD大鼠创面Wnt和Notch信号通路相关基因的调控作用研究
目的 观察愈创汤对SD大鼠创面愈合模型中Wnt和Notch信号通路的调控作用.方法 取50只SD大鼠幼鼠,早期用溴脱氧尿苷(BrdU)标记表皮干细胞,注射BrdU 60 d后建立全层皮肤缺损创面模型.随机分为愈创汤组和模型组,于大鼠致伤后0d、7d、14d、21d、30d五个时间点分别各断颈处死5只取标本,利用免疫印迹观察创面愈合过程中Wnt1、β-catenin、c-Myc、Jagged1、Notch1、Hes1的表达情况.结果 免疫印迹结果显示愈创汤组的Wnt和Notch信号通路成员在伤后表达上调,于伤后7 d达高峰,持续表达至伤后30 d.而模型组的相关基因表达差异不明显.结论 在大鼠创面愈合过程中,愈创汤可能是通过调控Wnt和Notch双信号通路干预细胞的增殖分化.
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基于Notch信号通路探讨针刺曲池、足三里对MCAO大鼠的神经保护机制
目的:观察针刺曲池穴及足三里穴对MCAO大鼠的行为学干预效应,同时评价其对Notch信号通路标志性蛋白的影响.方法:将36只SD大鼠随机分成空白组、模型组及针刺组,各12只.模型组及针刺组大鼠均接受改良线栓法建立左侧大脑中动脉局灶性缺血(MCAO)再灌注模型,空白组大鼠仅进行血管分离术,术后空白组及模型组大鼠每日接受模拟捉拿1次,针刺组大鼠予针刺曲池穴及足三里穴,连续干预14 d,用神经行为学评分评估大鼠行动能力,TTC染色法观察脑梗死体积变化,HE染色法观察大鼠脑组织细胞形态和结构,Western blotting法检测各组大鼠脑组织Notch1、Hes1蛋白表达变化.结果:1)与模型组比较,针刺组大鼠神经行为学评分明显提高,并缩小了脑梗死体积;2)针刺可明显改善MCAO术大鼠脑组织细胞形态和结构;3)Western blot结果显示针刺可明显上调大鼠脑组织Notch1、Hes1的蛋白水平.结论:电针曲池穴及足三里穴可改善MCAO大鼠行为能力,其作用机制可能与介导Notch通路有关.
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艾灸对血管性痴呆大鼠海马神经营养因子及Notch信号通路表达的影响
目的:观察艾灸对血管性痴呆(VD)大鼠海马神经营养因子及Notch通路表达的影响,探讨艾灸治疗VD的作用机制.方法:SD大鼠随机分成假手术组、模型组、西药组、艾灸组,每组15只.采用双侧颈总动脉缺血再灌注法复制大鼠VD模型.艾灸组给予悬灸“命门”“大椎”“关元”,每次15 min,每日1次,每周治疗6d,治疗4周.西药组给予尼莫地平灌胃,每日1次,治疗4周.Morris水迷宫实验测定大鼠学习与记忆能力,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测大鼠大脑的梗死面积,HE染色法检测大鼠脑组织病理形态,实时荧光定量PCR和Western blot法检测各组大鼠海马胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、Notch 1、碱性螺旋-环-螺旋转录因子3(Hes 3) mRNA和蛋白表达情况.结果:模型组水迷宫实验逃避潜伏期较假手术组延长(P＜0.05);治疗后,艾灸组和西药组逃避潜伏期较模型组明显缩短(P＜0.05).TTC染色结果显示,模型组颜色较假手术组变浅,白色区域多;西药组、艾灸组白色区域较模型组减少.HE染色结果显示,模型组大鼠海马区神经元数量较假手术组明显减少,深染细胞排列紊乱,可见坏死的神经元;西药组、艾灸组细胞水肿较轻,细胞形态接近正常,细胞数量增加.模型组海马组织中BDNF、NGF、GFAP、Hes 3、Notch 1 mRNA及蛋白表达均较假手术组明显升高(P＜0.05,P＜0.01);与模型组相比,艾灸组BDNF、NGF、GFAP、Hes 3、Notch 1 mRNA及蛋白表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01),西药组NGF、GFAP mRNA及蛋白表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01).与西药组比较,艾灸组海马组织中GFAP、Hes 3、Notch 1 mRNA表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01).结论:艾灸可以改善痴呆大鼠记忆和认知能力,调节神经营养因子表达,可能与调节Notch信号通路有关.
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复方扶芳藤合剂含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞Notch信号通路的影响
目的:观察复方扶芳藤合剂含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs) Notch信号通路的影响.方法:采用全骨髓贴壁法分离纯化培养大鼠骨髓间充质干细胞；制备复方扶芳藤合剂含药血清,将30只SD大鼠随机分为2组,每组随机15只,分别为ig复方扶芳藤合剂2 g·kg-1 ·d-1 ig的药物干预组和生理盐水2 mL·kg-1·d-1ig的阴性对照组.取10％的含药血清及阴性对照组血清分别干预大鼠BMSCs,采用RT-PCR方法检测Notch1,Jagged1,Hes1 mRNA表达变化；采用免疫细胞化学法检测Notch1,Jagged1表达变化.结果:RT-PCR显示药物干预组Notch1,Jagged1,Hes1的mRNA表达水平均高于阴性对照组(P＜0.05),免疫细胞化学显示药物干预组Notch1,Jagged1蛋白表达均高于阴性对照组(P＜0.05),差异有统计学意义.结论:复方扶芳藤合剂含药血清可以引起大鼠BMSCs Notch信号通路上的关键基因和蛋白表达上调,激活Notch信号通路.
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健脾益智胶囊对大脑中动脉栓塞大鼠海马神经干细胞增殖及Notch1、Jagged1表达的影响
目的:探讨健脾益智胶囊对大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠海马神经干细胞(NSCs)增殖及Notch1、Jagged1基因与蛋白表达的影响.方法:建立MCAO大鼠模型,随机分为正常组、假手术组、模型组、西药组、中药组.采用免疫组化、Western Blotting、Real-Time RT-PCR法于术后7d、14d、28d观察海马NSCs增殖,Notch1、Jagged1蛋白及mRNA表达情况.结果:术后7d中药组NSCs、Notch1、Jagged1蛋白及mRNA表达显著高于模型组、西药组(P＜0.05).术后28d中药组NSCs表达显著高于模型组、西药组(P＜0.05)；Notch1蛋白及mRNA低于正常、假手术组,但高于模型组、西药组(P＜0.05).结论:健脾益智胶囊可促进BrdU阳性细胞数量增加,提高Notch1、Jagged1蛋白及基因的表达,提示健脾益智胶囊能可能通过激活Notch通路以促进缺血后神经干细胞增殖分化.
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补阳还五汤含药血清对体外缺氧损伤神经干细胞增殖及Notch信号通路相关因子mRNA表达的影响
目的:探讨补阳还五汤含药血清对体外缺氧损伤神经干细胞(NSCs)增殖及Notch信号通路相关因子mRNA表达的影响.方法:体外分离培养小鼠胚胎NSCs,取第3代悬浮生长的NSCs随机分组,空白组予以无血清条件培养基常氧培养,其余3组分别给予缺氧4h、缺氧4h加10％正常血清和缺氧4h加10％补阳还五汤含药血清干预;培养第5天观察细胞增殖情况,同时提取细胞总RNA,Real-time PCR检测Notch通路4个关键节点因子Notch-1、Hes-1、Neurogenin-1(Ngn-1)和Delta-like-1(Dll-1) mRNA相对表达水平.结果:正常生长的NSCs Notch-1、Hes-1 mRNA高表达,Ngn-1、Dll-1 mRNA低表达;缺氧4h后NSCs克隆球数减少(P＜0.05),Notch-1、Hes-1 mRNA下调(P.＜0.05),Ngn-1、Dll-1 mRNA上调(P＜0.05);l0％补阳还五汤含药血清能显著上调缺氧NSCs Notch-1,Hes-1、Ngn-1 mRNA以及下调Dll-1 mRNA的表达水平,增加缺氧NSCs克隆球数,与10％正常血清相比差异显著(P＜0.05).结论:调节NSCs Notch信号通路相关因子Notch-1、Hes-1、Ngn-1、Dll-1 mRNA的表达水平可能是补阳还五汤促进缺氧损伤后NSCs增殖的机制.
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补肾中药对绝经后骨质疏松症模型大鼠骨及肌肉组织Notch信号通路蛋白表达的影响
目的:观察去卵巢骨质疏松症(OP)大鼠模型骨及肌肉组织N ot ch信号蛋白活性变化,探究补肾中药防治OP的分子生物学机制.方法:75只大鼠随机分为5组:正常组、假手术组、模型组、补肾中药组、福善美组,以去卵巢法建立绝经后OP大鼠模型,补肾中药组运用补肾中药干预8周后以双能X线骨密度分析仪检测骨密度,ELISA法检测血清OPG、RANKL,骨及肌组织HES1、JAG1以及N otch1蛋白表达.结果:与正常组比较,模型组骨密度及血清OPG明显减少(P＜0.01),血清RANKL明显升高(P＜0.01),骨及肌肉组织Notch信号蛋白表达明显减少(P＜0.01);与模型组相比较,各治疗组骨密度、血清OPG及骨组织Noth信息蛋白均有不同程度的升高(P＜0.05,P＜0.01).结论:OP的发生机制与Notch信号通路有关;补肾中药通过激活Notch信号传导通路,促成骨分化,抑制破骨活性,起到防治OP的作用.
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益气养阴清热化瘀方对免疫性血小板减少症小鼠Notch信号通路的影响
目的:明确益气养阴清热化瘀方对ITP的治疗作用并观察该方对Notch信号分子的影响,探讨其发挥效应的潜在机制.方法:60只小鼠按随机数字表法分为正常组10只、ITP模型组50只,于模型组小鼠腹腔每日注射含2μg大鼠抗小鼠CD41单克隆抗体(MWReg30单抗)的磷酸盐缓冲液200μL,造成持续的血小板减少症,建立ITP小鼠模型.第8天进行模型评估后,将模型组随机分为不同的治疗组进行药物干预2周,治疗结束后测量各组血小板计数;采用RT-PCR、Western blot法分别测量各组骨髓单个核细胞(BMMNC) Notch受体Notch1-4和Notch配体Jagged1,Jagged2基因和蛋白的表达.结果:与模型组比较,中药各剂量组均能显著升高血小板水平,明显降低Notch(1-4)、Jagged1、2基因和蛋白的表达.结论:益气养阴清热化瘀方能够通过下调Notch信号的表达水平对ITP的病理环节产生影响,从而发挥升板作用,达到治疗ITP的目的.
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中药促进脑缺血血管生成研究进展
单味药及其有效成分、中药复方及中成药对血管的促进、抑制作用为目前研究热点,但中药对脑缺血后促进血管生成的作用及机制相关研究尚未深入.本文对中药促进脑血管生成的中医理论、体外研究、在体研究进行综述,并对通过Notch和Wnt信号通路调控血管生成的机制研究进行重点阐述,为药理作用机制研究及新药研发提供参考.
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祛风止动方对抽动障碍小鼠神经行为学与Notchl、D2R mRNA表达的影响
目的 观察祛风止动方对头部抽动行为与Notch1和D2R mRNA表达的影响.方法 利用5-羟色胺2A/C受体激动剂(±)-1-盐酸2,5-二甲氧基4-碘苯基丙烷-2-胺盐酸盐(DOI)连续腹腔注射14 d后,诱导小鼠湿狗样头部抽动模型,随机分为中药组、西药组、模型组,分别灌胃祛风止动方煎剂(10 g/kg)、氟哌啶醇(1 mg/kg)和蒸馏水,正常组灌胃蒸馏水,干预2周后,评价头部抽动和爬行距离,荧光实时定量PCR检测前额叶皮层和纹状体Notch1 mRNA和D2R mRNA表达.结果 中药能明显改善小鼠头部抽动行为,减少爬行距离,与西药组比较差异无统计学意义(P＞0.05).纹状体D2R mRNA相对表达量明显高于额叶皮层,差异有统计学意义(P＜0.01);在前额叶皮层部位,中药组、西药组D2R mRNA表达量分别为(151±30)、(180±41),明显高于模型组(P＜0.05).在纹状体部位,中药组D2R mRNA表达量分别为(710±64)、西药组(850±80),均明显高于模型组(P＜0.05).各组前额叶皮层Notchl mRNA表达量均低于纹状体部位,差异有统计学意义(P＜0.05);给药14天,中药组和西药组前额叶皮层表达下调,表达量分别(55±20)、(48±23),明显低于模型组(P＜0.05).结论 DOI诱导湿狗样头部抽动能较好模拟TD临床特征,祛风止动方能明显改善小鼠抽动行为和爬行距离,复方能上调D2R mRNA表达,可能与Notch1表达下调有关联,值得进一步研究.
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任督二脉针刺法与神经干细胞-Notch信号通路在脑病治疗中相关性的理论探讨
利用现代医学的Notch信号通路来探讨任督二脉针刺法,有利于揭示任督二脉针刺法结合神经干细胞移植治疗脑病的实质,丰富中医治疗脑病的现代理论依据,为临床提供一种新的治疗脑病的有效手段.
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调节Notch信号通路在醒神开窍针刺法治疗缺血性中风中的作用探讨
缺血性中风是当今危害人们健康的重要疾病之一.促进中枢神经系统内源性神经干细胞(NSCs)的增殖、分化,从而修复受损的神经元是提高缺血性中风临床疗效的关键点.NSCs的增殖、分化可受多种因素影响,其中Notch信号通路在机体发生缺血性中风时激发内源性NSCs的增殖、分化是必不可少的.从中医学角度看,醒神开窍针刺法可使缺血性中风患者髓海充而复神明,改善中风后“形神失调”的症状,认为其机制与调节Notch信号通路,促进内源性NSCs的增殖、分化有关.
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颐脑解郁复方对卒中后抑郁大鼠海马神经发生及Notch信号通路的影响
目的 探讨颐脑解郁复方治疗卒中后抑郁的可能作用机制. 方法 将216只SD大鼠随机分为空白组、假手术组、卒中组、卒中后抑郁组、西药组和中药组各36只(每组2、4、8周各12只).空白组不干预,假手术组不插入线栓,卒中组仅行大脑中动脉阻塞术,卒中后抑郁组、西药组、中药组在卒中后1周应用慢性束缚应激复合单笼饲养的方法制备卒中后抑郁大鼠模型.自脑卒中造模开始,西药组给予盐酸氟西汀胶囊2.33 mg/(kg·d)灌胃,中药组给予颐脑解郁复方9.92g/(kg·d)灌胃,其余各组大鼠灌胃3 ml蒸馏水,均每日1次.分别于卒中后2、4、8周,采用实时定量PCR技术检测大鼠左侧海马Notch通路上受体Notch1、转录因子Hes1基因表达水平;采用免疫组织化学法检测海马齿状回神经元核抗原(NeuN)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达水平. 结果 在2、4、8周时,卒中后抑郁组较空白组大鼠海马齿状回NeuN蛋白降低,GFAP蛋白升高(P＜0.05或P＜0.01);2、4周时中药组和西药组NeuN蛋白较卒中后抑郁组升高,2、4、8周时GFAP蛋白降低(P＜0.05或P＜0.01).在2周时,各组大鼠海马齿状回区Notch1、Hes1基因表达差异无统计学意义(P＞0.05);4周时中药组大鼠海马齿状回区Notch1、Hes1基因表达较卒中后抑郁组升高(P＜0.01);8周时卒中后抑郁组大鼠Notch1、Hes1基因表达与中药组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 颐脑解郁复方可能通过上调Notch信号通路上Notch1、Hes1基因表达,增加海马齿状回神经元数量,降低星形胶质细胞数量,从而治疗脑卒中后抑郁.
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Notch信号通过MAPK途径参与BMP9诱导的间充质干细胞C2C12成骨分化
目的 探讨Notch信号是否通过MAPK通路影响BMP9诱导C2C12细胞成骨分化.方法 利用BMP9腺病毒处理C2C12细胞5d后,用PCR和Western blot检测MAPK通路中P38、Erk1/2和JNK总蛋白以及磷酸化水平.用Notch信号特异性抑制剂DAPT阻断Notch信号后,细胞化学染色分析ALP和钙盐沉积,以及早晚期成骨指标Runx2和OCN在RNA以及蛋白水平上的变化.同时检测BMPs靶基因Id1 、Id2和Id3 RNA水平的表达和MAPK信号中P38、Erk1/2和JNK总蛋白以及磷酸化水平变化.结果BMP9能上调Hey1和Notch信号的配、受体表达;BMP9不影响P38、Erk1/2和JNK总蛋白的表达,但能上调其磷酸化水平;DAPT能抑制BMP9诱导C2C12细胞的ALP活性以及钙盐沉积;影响Runx2和OCN成骨标志物的表达;阻断Notch信号后Id1、Id2和Id3表达受到抑制,P38、Erk1/2磷酸化水平下调,而JNK磷酸化水平无明显变化.结论 Notch信号通过MAPK途径参与了BMP9诱导的C2C12细胞的成骨分化.
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Notch信号通路调控上皮-间质转化影响膀胱癌侵袭性和耐药性
目的：体外探讨Notch信号通路对膀胱癌细胞侵袭性与耐药性的影响及分子机制。方法采用Notch信号通路受体完全阻断剂（γ分泌酶抑制剂）处理膀胱癌T24、5637和J82细胞48 h后，倒置显微镜观察膀胱癌细胞增生及形态；用RT-PCR和Western blot在mRNA和蛋白水平检测上皮-间质转化（ EMT）分子标志物E-cadherin、N-cad-herin、vimentin和Alpha-smooth muscle actin的表达；MTT、Transwell检测膀胱癌细胞耐药性及侵袭能力。结果完全阻断Notch信号通路后，镜下显示膀胱癌细胞形态变小，细胞分散；EMT分子标志物E-cadherin mRNA和蛋白水平表达上调（ P＜0.05），N-cadherin、vimentin、Alpha-smooth muscle actin mRNA 和蛋白水平表达下调（ P＜0.05）；膀胱癌细胞T24、5637和J82增殖明显被抑制（ P＜0.05）；膀胱癌细胞T24、5637和J82穿过微孔膜的细胞数明显减少（ P＜0.05）。结论 Notch信号通路可通过调控EMT的变化而改变膀胱癌的侵袭性与耐药性。
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Notch信号通路在肠黏膜屏障中的研究进展
Notch信号通路是一种介导细胞与细胞之间信号级联反应的高度保守的通路.其对于多种细胞的分化、增值和凋亡具有调节作用.该信号通路的激活或失活在肠黏膜屏障中发挥着非常重要的作用.对指导各种疾病中所引起的肠黏膜屏障损伤的治疗提供新的视野和思路.
