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DMSO对大鼠吸入贫铀气溶胶后体内铀的促排作用
目的本实验通过建立贫铀(DU)气溶胶吸入动物模型,观察气溶胶吸入后DU在重要组织器官的蓄积及DMSO的促排作用.
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DMSO对贫铀损伤的防治作用
目的观察难溶性贫铀(DU)颗粒染毒对细胞的生物学效应及DMSO的保护作用.以期对其可能机制进行探索,为DU的危害及其防治提供有益的线索.
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DMSO对大鼠吸入贫铀气溶胶损伤的防治作用
目的观察贫铀(DU)气溶胶吸入对大鼠的毒性作用以及DMSO的防治作用,为DU损伤的防护提供理论及实验依据.
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DMSO对人牙周膜成纤维细胞表达RANKL的研究
目的 研究二甲基亚砜(DMSO)浓度对人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)中细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响.方法 采用组织块法,在体外培养人牙周膜成纤维细胞系.以不同浓度(0、0.05%、0.1%、0.2%)的DMSO作用牙周膜成纤维细胞1h.采用RT-PCR法检测RANKL的mRNA相对表达量.结果 人牙周膜成纤维细胞中RANKL的mRNA相对表达量与DMSO浓度呈正相关性.结论 DMSO能够促进人牙周膜成纤维细胞表达RANKL.
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不同直径神经干细胞球慢速低温冻存的研究
为提高神经干细胞冻存复苏后的效果及存活率,对不同尺寸与状态的神经干细胞球进行了在不同浓度DMSO(二甲基亚砜)下的慢速冻存比较.首先用CCK-8试剂盒测定神经干细胞的生长曲线,然后对处于对数生长期的3类神经干细胞(单细胞悬液,直径30～50 μm球,直径80～100 μm球)分别进行了7个不同浓度(3%,5%,7%,8%,10%,15%,20%)DMSO的冻存实验比较,并对冻后复苏的细胞进行活性检测和诱导分化.结果表明, 直径80～100 μm的神经干细胞球,DMSO浓度8%,复苏后细胞活率82.9%,且仍具有多项分化潜能.神经干细胞间的亲密联系和刻痕信号与直径尺寸共同作用,影响着神经干细胞的冻存复苏效果.
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冷冻干燥保存血小板的实验研究
本研究探讨冷冻干燥保存血小板的方法,以获得可长期冻干保存的血小板制品,使之能在常温条件下保存、占用空间小、重量轻、便于长距离运输,能够满足突发事件和战伤救治的需要.在冷冻干燥保存过程中添加血小板可逆性激活抑制剂、DMSO和海藻糖等低温保护剂,进行预处理、冷冻、一级干燥、二级干燥,再水化,并同时测定血小板回收率,凝血酶聚集反应,促凝血功能,CD62p表达率和PAC-1表达率等.结果表明:血小板回收率为56.29%,其对凝血酶的聚集反应与对照组无明显差异,对ADP和丙基没食子酸诱导的聚集反应较对照组分别降低49.34%和26.25%.促凝血功能与对照组比较也无统计学差异;冻干血小板CD62p表达率为42.36%,PAC-1表达率为2.12%,凝血酶激活后CD62p再表达率为50.88%,PAC-1再表达率为54.55%.结论:添加血小板可逆性激活抑制剂,海藻糖和DMSO后的冻干血小板,其聚集活性和促凝血功能与新鲜血小板无明显差异,血小板可逆性激活抑制剂降低了冻干血小板的CD62p表达,增强了冻干血小板的生存能力,因而延长了其生存时间,因此可以该冻干方法为基础进一步提高冻干保存血小板的效率.
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二甲亚砜对血小板冻存中功能保护作用的实验研究
本研究探讨二甲亚砜(DMSO)对血小板冻干保存中激活的抑制作用.以CD62p和PAC-1表达作为血小板的激活标志,CD62p和PAC-1再表达和血小板大聚集率作为评价血小板功能的指标.对血小板经离心、洗涤及海藻糖负载等预处理过程中加与不加DMSO的实验组,分别进行血小板膜表面糖蛋白CD62p和PAC-1表达及再表达的流式细胞术(FCMs)分析,血小板大聚集率和血小板平均体积(MPV)的测定,研究DMSO对血小板激活抑制作用的可逆性.结果显示,血小板经预处理后,不含DMSO组的CD62p和PAC-1表达率显著增高,分别达30.37%和15.01%;含DMSO的组,CD62p表达率为10.72%,PAC-1几乎不表达(0.11%),显著低于不含DMSO组(p＜0.01).DMSO稀释后,血小板CD62p再表达为54.39%,显著低于对照组(71.69%)和高于不含DMSO组(35.98%)(p均＜0.01);PAC-1再表达率为49.28%,与对照组(54.48%)无显著差异,显著高于不含DMSO组(p＜0.01).在含DMSO组,血小板用原血浆稀释后,血小板聚集功能恢复,对restocetin,thrombin和propyl gallate诱导的血小板聚集率分别为92.76%,91.24%和89.66%,与对照组和无DMSO组比无显著性差异,对ADP诱导的聚集率有34.33%,显著高于无DMSO组(p＜0.01),但仍显著低于对照组(p＜0.01).结论:DMSO对体外处理所致的血小板膜表面CD62p和PAC-1表达具有抑制作用,且该抑制作用是可逆的,DMSO稀释后血小板仍具有CD62p和PAC-1表达能力和聚集反应功能,提示DMSO具有抑制激活损伤和低温保护的双重功能,这一生物学特性使DMSO在血小板的冻干保存中发挥重要作用.
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DMSO促进人胚胎干细胞体外造血分化
目的:探讨DMSO在人胚胎干细胞造血分化中的作用.方法:利用已建立的人胚胎干细胞逐级诱导分化体系,通过流式细胞术分析并结合免疫荧光测定研究DMSO在造血分化中的作用,同时通过在不同时间点添加DMSO,确定其发挥作用的窗口期.结果:免疫荧光及流式细胞术分析发现,在人胚胎干细胞造血分化过程中添加DMSO显著促进CD43+造血祖细胞的产生;流式细胞术分析发现,DMSO显著促进APLNR+侧板中胚层细胞和CD31+ CD34+生血内皮细胞的产生;在侧板中胚层细胞产生的窗口添加DMSO显著促进CD31+ CD34+生血内皮细胞和CD43+造血祖细胞的产生.结论:DMSO通过促进侧板中胚层的产生促进人胚胎干细胞造血分化能力,在侧板中胚层发生窗口添加DMSO能够显著促进造血祖细胞的产生.
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DMSO促进HepG2细胞感染乙型肝炎病毒后核心蛋白入核
目的:探讨DMSO诱导处理的HepG2细胞被HBV感染的作用机制.方法:将HepG2分为DMSO处理组和对照组,分别用添加或不添加2%DMSO的DMEM培养基培养4d.将HBV病毒颗粒(1000拷贝/细胞)加入培养基中于37℃感染12h.以蛋白免疫印迹,免疫荧光染色及共聚焦显微镜观察HBcAg在细胞内的定位.选择性PCR检测HBV cccDNA,流式细胞分析仪检测细胞周期.结果:对照组HepG2细胞在感染HBV阳性血清后,HBcAg在细胞质内分布,核内呈阴性,至感染后2d细胞内核心蛋白消失,未检出明显的cccDNA信号.2%DMSO处理后的HepG2细胞感染后12h细胞质内HBcAg水平明显高于对照组,感染后24h HBcAg在核周浓集.在感染后24h和48h核内HBcAg明显增高,且cccDNA结果阳性.流式分析结果显示DMSO处理后处于G1/G0和G2/M期的HepG2比例升高,处于有丝分裂期的HepG2细胞内HBcAg弥散分布于全细胞.结论:HepG2细胞感染HBV后核心颗粒不能穿过核孔携带HBV DNA进入细胞核可能是其抵制HBV感染的重要原因.DMSO可促进HBV核心颗粒进入细胞核而有助于感染.
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二甲基亚砜对在体耳蜗毛细胞的毒性作用
目的 研究二甲基亚砜(DMSO)对在体耳蜗毛细胞的毒性作用. 方法 取清洁级健康、ABR阈值正常SD大鼠32只,雌雄不限,体重100-120g.随机分成4组,人工外淋巴液对照组(即0％组)8只；0.1％DMSO溶液组8只；1％DMSO溶液组8只；5％DMSO溶液组8只.所有动物均取右耳作为实验耳.通过耳蜗鼓阶打孔显微注射向每个实验耳注入不同浓度DMSO溶液4ul.术前1天和术后7天分别进行ABR(click和tone burst)检测.激光共聚焦显微镜观察DMSO溶液导入7天后的毛细胞变化.结果 人工外淋巴液对照组click、4kHz、8kHz、16kHz处阈移平均值均＜5dBSPL,仅于32kHz处有约13dBSPL的阈移,形态方面未见明显损伤；0.1％浓度组在click、4kHz、8kHz处阈移平均值均＜5dBSPL,而32kHz处阈移约25dBSPL,与人工外淋巴液对照组比较提示有统计学意义,激光共聚焦显微镜观察底回时偶见少数内毛细胞胀大；1％浓度即可引起OHC大量丢失,造成相应纤毛表皮板缺如,且以底回重,各频率ABR阈移均＞15dBSPL,32kHz处阈移＞30dBSPL;当浓度增加到5％时,不仅损伤耳蜗底回的外毛细胞,也导致内毛细胞的丢失,所造成的听力损失在32kHz处较1％组严重. 结论 DMSO对毛细胞的损伤存在剂量依赖性,损伤程度自耳蜗底回向顶回逐渐减轻.
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二甲亚砜对运动诱导的大鼠海马神经发生的影响
目的:探讨DMSO对运动诱导的大鼠海马神经发生的影响.方法:将30只雄性5周龄SD大鼠随机分为对照组、运动组、DMSO+运动组,通过预先埋管方式,向DMSO+运动组动物侧脑室内注射DMSO,注射1小时后,运动组和DMSO+运动组动物进行跑台运动30min,运动方案为:5m/min,5min;8m/min,5min;11m/min,20min.1周后所有动物取材,采用免疫荧光染色技术和荧光显微镜,检测各组大鼠海马齿状回内新生细胞的数量.结果:各组动物每个脑切片海马齿状回内BrdU免疫阳性细胞数平均为:对照组89.92±12.77个,运动组119.19±19.94个,DMSO+运动组73.94±17.36个.DMSO+运动组的BrdU+细胞数量较运动组减少了37.96%,BrdU++NeuN+细胞数量减少了40.56%.结论:DMSO对运动诱导的大鼠海马神经发生有显著的抑制作用.
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应用改良PCR法构建高GC含量启动子多位点定点突变载体
目的 利用StrataGene公司的QuickChangeTM定点突变试剂盒对高GC含量的人肝刺激因子启动子进行多位点定点突变.方法 采用含有多位点突变的引物扩增启动子片段,通过加入不同浓度的DMSO, 降低高GC含量模板及引物的解链温度,利用乙醇沉淀提高酶切产物的浓度.结果 经测序鉴定成功构建5个含有不同突变位点的hHSS启动子突变载体.结论 这种改良的PCR方法提高了对高GC含量启动子进行扩增的效率,具有快速、简便、经济、成功率高的特点,是值得推广的多位点定点突变载体构建方法.
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BAY及DMSO在体外对小鼠精子顶体反应的影响
目的 探究BAY(激素敏感脂酶抑制剂)及DMSO(二甲基亚砜)对小鼠精子顶体反应(AR)的直接影响.方法 分别通过5个和6个不同的浓度梯度的BAY及DMSO在体外探究其对小鼠精子AR的影响,在不同孵育时间段采用FITC-PSA和考马斯亮蓝染色法对小鼠精子的顶体反应进行鉴定.结果 在所选浓度范围内BAY未能直接影响精子的顶体反应及存活率(P＞0.05),而DMSO在一定浓度和时间内可直接影响精子顶体反应及精子存活率.结论 DMSO和BAY对小鼠精子发生的作用是通过不同途径来实现的,前者可直接影响精子顶体反应和精子的存活率,而后者则与顶体反应及存活率无关.提示在AR的研究中使用DMSO时需控制好作用浓度及作用时间.
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用DMSO和TritonX-100做加速剂测定血清胆红素的研究
目的配制一种总胆红素和直接胆红素测定的双试剂法试剂盒.方法用二甲亚砜(DMSO)和Triton X-100做加速剂配制成双试剂法胆红素试剂,对其工作方法学进行评价,并与钒酸氧化法和咖啡因法胆红素试剂盒实验对照.结果该法批内精密度:总胆红素(T.Bil)1.5%～1.82%,直接胆红素(D.Bil) 1.15%～1.42%;批间精密度:T.Bil 1.5%～1.82%,D.Bil 1.15%～1.42%.平均回收率:T.Bil 100.8%,D.Bil 97.7%.与钒酸氧化法和咖啡因法的相关系数:T.Bil分别为0.998 2和0.991 7,D.Bil分别为0.993 l和0.990 2,差异均无显著性.结论该法试剂配制简便,精密度、回收率和线性范围均可满足测定要求,与钒酸氧化法和咖啡因法相关良好,适于普及推广.
关键词： DMSO TritonX-100 胆红素 -
二甲基亚砜诱导HL-60细胞分化的比较蛋白质组学研究
不同的诱导分化剂可诱导急性髓系白血病细胞系HL-60细胞向不同谱系的细胞分化[1].二甲基亚砜( DMSO)由于其溶解极性和非极性化合物能力极强而被广泛用作溶剂.目前,DMSO作为细胞低温保鲜剂(浓度一般在10％)可直接给患者注射[2].据新报道,DMS0可通过活化转录因子促进成骨细胞分化[3].我们采用比较蛋白质组学方法,研究DMSO诱导HL-60细胞分化过程中蛋白质的差异表达,并探讨其可能的分子机制.
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低浓度DMSO对RANKL诱导的RAW264.7细胞破骨分化的影响
① 目的 探讨低浓度二甲基亚枫(DMSO)对RANKL诱导的破骨细胞前体RAW264.7细胞破骨分化的影响.② 方法 将细胞接种在24孔板上,采用0、0.001％ 、0.005％ 、0.01％ 、0.05％ 、0.1％ 、0.15％ 、0.2％ 等八种低浓度的DMSO作用于RANKL诱导的RAW264.7,细胞4天后,各培养孔随机采集照片20张,用显微镜每孔随机收集20张照片,使用Image-Pro Plus6.0软件对每张图进行测量,记录每张照片中RAW264.7细胞的细胞总数及总面积.③ 结果 较RANKL组相比,DMSO浓度为0.005％ 和0.01％ 时,RAW264.7细胞形成破骨细胞的表面积均显著增大,差异有统计学意义(P<0.01),且0.005％ 和0.01％ 两组间差异无统计学意义(P>0.05);而DMSO浓度进一步提高为0.1％,0.15％,0.2％ 时,破骨细胞表面积随浓度升高而减小;DMSO浓度为0.001％,0.05％,0.1％ 时,破骨细胞表面积与未加DMSO组差异无统计学意义(P>0.05).④ 结论 DMSO浓度为0.005％ 和0.01％ 时促进RAW264.7细胞的破骨分化,而随着DMSO浓度的进一步提高,DMSO对RAW264.7破骨分化的促进作用消失,甚至表现为抑制破骨分化.
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ECA109细胞对二甲基亚枫耐受剂量的分析
目的:通过观察不同剂量二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO) 作用下ECA109细胞形态和生长状态的变化,确定ECA109细胞对DMSO的耐受剂量.方法:按照一定浓度梯度(V/V)将DMSO加入培养液,干预后的24h、48 h和72h于倒置相差显微镜下观察AO/EB染色前后细胞的形态特征,同时用四甲基偶氮唑蓝(MTT) 显色法检测细胞的生存率和计算半数抑制浓度(50% inhibiting concentration,IC50).结果:DMSO浓度为8 ml/L时,24h内ECA109细胞生长正常,形态完活力与对照组无差别,浓度提高到10 ml/L时,24h时细胞生存率可下降10%,随着作用时间延长,细胞生存率进一步降低;24 h的IC50值约为17.34/L,48h和72 h对应的IC50值分别为13.7ml/L和11.24 ml/L.结论:对ECA109细胞而言,24 h内的应用终浓度应低于10 ml/L,干预时间如需延长,DMSO的应用剂量应相应降低.
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DiI在神经系统示踪研究方面的应用
1, 1'-双十八烷-3, 3, 3', 3'-四甲基吲哚羰花青-高氯酸盐(1, 1'-dioctadecyl-3, 3, 3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate, DiI),分子式为C59H97ClN2O4,分子量为933.88,是一种羰花青族荧光染料,为紫红色晶体,无毒,具有高度的亲脂性,在水中的溶解度极低,可溶于乙醇、甲醇,二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)和N,N-二甲基甲酰胺(N, N-dimethylformamide, DMF).
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经二甲基亚砜冷冻保存的血小板粘附率观察
目的 研究采用二甲基亚砜(DMSO)冷冻保存血小板的制备技术以及制备效果.方法 按常规进行DMSO富含血小板血浆悬液制备、冷冻保存与复温;抽样进行质控检测;作血小板粘附功能测定.结果 质控检测结果:血小板计数≥2.5×1011个/袋,红细胞混入量≤8.0×109个/袋,白细胞混入量≤5.0×108个/袋.无细菌生长.抗丙型肝炎病毒(HCV)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、抗人类免疫缺陷病毒(HIV)、梅毒特异性抗体检测均为阴性.血小板粘附试验结果:加入DMSO血小板的粘附率低于未加DMSO的血小板(P＜0.05);洗涤后的血小板粘附率与未加DMSO的血小板相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 血小板的DMSO冷冻保存技术值得推广应用.
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促肝细胞生长素联合不同 DMSO 浓度冻存小鼠肝细胞的质量研究
目的：使用自行配制组方含有促肝细胞生长素联合不同浓度 DMSO 的冻存液冻存小鼠肝细胞，以探索一种效果较好的冻存液从而改善冻存肝细胞质量。方法以体重20～30 g 的昆明小鼠为肝细胞供体，用改良的胶原酶灌注法分离肝细胞，将分离好的肝细胞分别以10％、20％、30％浓度的 DMSO 联合促肝细胞生长素的冻存液（试验组1、2、3组）和标准冻存液（对照组）进行逐级降温缓慢冻存，置液氮中。2个月后快速复苏肝细胞，观察并测定肝细胞活率、功能和形态学。结果冻存小鼠肝细胞2个月复苏检测，试验1组、2组、3组的肝细胞活率台盼蓝（TB）染色结果为80．18±2．44％、86．20±2．33％、78．50±3．43％，而对照组肝细胞活率 TB 染色49．71±3．51％，试验组和对照组差异具有统计学意义（P ＜0．05），试验2组与其他试验组比较差异具有统计学意义（P ＜0．05）；血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）和乳酸脱氢酶（LDH）漏出率的值，试验1组、2组、3组分别为14．03±2．21 U／L、8．05±1．25 U／L、18．40±3．25 U／L；15．14±3．03 U／L、9．12±1．56 U／L、20．51±3．56 U／L；15．11±2．10 U／L、8．26±1．23 U／L、20．31±3．21 U／L，而对照组分别为24．28±1．96 U／L、25．44±2．06 U／L、26．22±3．23 U／L，两组差异具有统计学意义（P ＜0．05），试验2组与其他试验组比较差异具有统计学意义（P ＜0．05）；合成血清白蛋白的值，试验1组、2组、3组为3．24±0．18 g／L、4．12±0．23 g／L、3．01±0．45 g／L，对照组为2．56±0．32 g／L，两组差异具有统计学意义（P ＜0．05），试验2组与其他组比较差异具有统计学意义（P ＜0．05）。结论在本研究中，冻存小鼠肝细胞2个月，促肝细胞生长素联合20％DMSO 冻存液较常规冻存液能有效减轻小鼠肝细胞的损伤，发挥良好保护作用。
