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尼克酰胺对芥子气诱导的细胞毒保护作用评价
目的评价尼克酰胺(nicotinamide,NAM)对芥子气诱导的细胞毒的保护作用.芥子气(HD)是一种典型的双功能烷化剂,目前仍是外军列装的重要化学战剂之一.HD皮肤染毒后,可迅速与细胞内DNA、RNA和蛋白质等起反应形成稳定的烷化产物,至今尚无有效的治疗措施.皮肤组织是芥子气中毒的主要途径和损伤的重要部位,因此皮肤的起疱机理和防治研究一直是芥子气研究的重点.过去芥子气毒理学研究大部分都集中在DNA烷化后多聚合酶(PADPRP)的活化上.
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一氧化氮增强记忆及其与ADP-核糖基化的关系
目的:观察ADP核糖基化在一氧化氮增强记忆中的作用.方法:成年Wistar大鼠侧脑室注射硝普钠(0.24μg , 0.36μg)和尼克酰胺(1.1mg, 1.5mg)2小时后进行行为实验;并用高效液相色谱测定了学习训练和侧脑室注射硝普钠后大脑皮层和海马单-ADP-核糖基转移酶的活性.结果:侧脑室注射硝普钠后大鼠被动回避反应下台潜伏期明显延长 ,主动回避反应学习能力增强;ADP-核糖转移酶抑制剂-尼克酰胺对硝普钠增强学习记忆能力有抑制作用;学习训练和侧脑室注射硝普钠后大脑皮层和海马ADP-核糖基转移酶活性升高.结论: NO具有增强学习记忆的作用,并用整体行为实验证明了NO促进学习记忆与ADP-核糖基化有关.
关键词： 一氧化氮 硝普钠 尼克酰胺 ADP-核糖基转移酶 学习记忆 -
大鼠肌源性干细胞体外转分化为胰岛素分泌细胞
目的 探讨体外自体肌源性干细胞(MDSCs)定向诱导分化为胰岛素分泌细胞团的可行性.方法 用差速贴壁的方法 对SD大鼠MDSCs进行分离和培养,加入联合诱导剂培养7～12 d.通过形态学观察、双硫腙(DTZ)染色、免疫细胞化学染色、葡萄糖刺激实验和RT-PCR,对诱导细胞进行体外结构和功能鉴定.结果 联合诱导后12 d有典型的胰岛样结构出现;诱导后第12天细胞用表达胰岛素,而未诱导组细胞不表达;诱导后第7天检测到胰岛素(INS)、胰高血糖素(GLU)和生长抑素(SS)基因的表达.结论 体外诱导大鼠肌源性干细胞可定向分化为胰岛素分泌细胞存在可行性,本实验将可能为临床糖尿病干细胞治疗提供新的途径.
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尼克酰胺-N-甲基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定
尼克酰胺N-甲基化酶(nicotinamide N-methytransferase,NNMT)是S-腺苷-L-蛋氨酸依赖的胞质酶.其主要的生物学作用是参与生物转化,催化一些吡啶衍生物,如吡啶、喹林、β-咔林等的甲基化.
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大鼠骨髓基质干细胞分化为胰岛样细胞
目的:探讨体外自体骨髓基质干细胞(MSC)定向诱导分化为胰岛样细胞的可能性,为进一步诱导分化胰岛细胞治疗糖尿病奠定实验和理论基础.方法:对Wistar大鼠骨髓基质干细胞(MSC)进行体外培养,通过不同的条件诱导MSC向胰岛样细胞分化:LN组,10 mmoL/L尼克酰胺+1 mmoL/L β-巯基乙醇的L-DMEM(含20 mL/L FBS)预先诱导24 h,10 mmoL/L尼克酰胺+1mmol/L β-巯基乙醇的无血清H-DMEM诱导10 h.HN组,含20 mmoL/L尼克酰胺的L-DMEM(20 mL/L FBS)预先诱导24 h,20 mmoL/L尼克酰胺的无血清H-DMEM诱导10 h.诱导细胞形态通过倒置显微镜观察,并通过免疫细胞化学检测分化细胞表达Insulin和Nestin.向3只Streptozotocin(STZ)诱导糖尿病大鼠皮下种植MSC分化胰岛细胞1×107,1 wk后观察大鼠血糖水平变化.结果:LN、HN组细胞均可见部分骨髓基质干细胞分化、增生,形成胰岛样细胞团,部分细胞向神经元样细胞分化,对照组细胞未见明显分化.免疫细胞化学显示Insulin在诱导细胞呈显著表达,Nestin在分化前细胞显著表达.皮下种植MSC分化胰岛细胞可有效降低STZ糖尿病大鼠的血糖水平.结论:体外诱导骨髓基质干细胞定向分化为胰岛样细胞存在可行性,本实验将可能为临床糖尿病干细胞治疗提供新的途径.
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尼克酰胺联合Exendin-4促进大鼠骨髓间充质干细胞体外转分化为胰岛素分泌细胞团的研究
尼克酰胺联合Exendin-4能明显促进大鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)转分化为胰岛素分泌细胞团,表达胰岛素、C肽和相应基因.
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人骨髓间充质干细胞体外诱导分化为胰岛素分泌细胞的实验研究
目的 探讨联合应用高糖和胰升血糖素样肽-1(GLP-1)、活化素A、尼克酰胺和β细胞调节素(BTC)刺激体外能否诱导人骨髓间充质干细胞向胰岛样细胞分化.方法 分别用放射免疫法、RT-PCR和免疫细胞化学方法 检测胰岛素浓度、胰岛素mRNA表达以及相关蛋白的表达. 结果 (1)刺激后各组可分泌胰岛素量增加.(2)RT-PCR发现GLP-1组、活化素 A组、尼克酰胺组、共同刺激组和BTC组等均可产生约300bp的目的 片段,即胰岛素原基因的mRNA表达.(3)免疫细胞化学证实除了对照组外,各刺激组均有胰岛素表达;各刺激组均未表达胰升血糖素;除协同作用组有生长抑素的弱阳性表达外,其他各刺激组均未表达生长抑素;尼克酰胺组和协同作用组可见到巢蛋白的弱阳性表达.(4)高糖刺激胰岛素释放实验结果 显示,经联合高糖和GLP-1、活化素A、BTC、尼克酰胺和共同刺激诱导分化后,骨髓间充质干细胞(BMSCs)对高葡萄糖刺激有反应,能相应增加胰岛素的分泌量. 结论 联合高糖、GLP-1、活化素A、尼克酰胺和BTC等因子可以在体外诱导人BMSCs分化为胰岛素分泌细胞,但胰岛素分泌水平较低.
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NADPH,炎症与心血管疾病
进入21世纪,炎症在心血管疾病发生发展中所起的重要作用受到了越来越多学者的关注.本文介绍以尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NADPH oxidase,NOX)和活性氧自由基(reactive oxidative species,ROS)为轴心的炎性反应引起心血管疾病的机制及防治对策.
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芳香酶及其抑制剂在妇科领域中的应用
芳香酶是细胞色素P450与还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸-细胞色素P450还原酶构成的复合物,是雄激素转化为雌激素过程中的关键酶.芳香酶能作用于不同组织中特异性的雄激素底物,产生不同活性的雌激素,如在脂肪组织中,芳香酶作用的底物为肾上腺皮质产生的雄烯二酮,产物为雌酮;在卵巢组织中主要底物为睾酮,其产物为雌二醇,少部分为由雄烯二酮转化生成的雌酮[1].芳香酶抑制剂(aromatase inhibition, AI)就是通过抑制该酶的活性来阻断雌激素合成的.根据作用机制的不同分两大类:(1)非甾体类AI:通过与亚铁血红素中的铁原子以离子键形式可逆结合,与雄激素竞争酶的活性位点,可逆性地抑制酶活性,即"竞争性抑制剂".(2)甾体类AI:其结构与酶作用的雄激素底物相似,但结合力更强,并以共价键与酶不可逆地结合,使酶永久性失活,即"自杀性抑制",这类抑制剂称为"致死性抑制剂".近年来,有关AI的研究及应用日益广泛,治疗领域不断扩展.现将芳香酶及其抑制剂在妇科领域中的研究进展和应用前景综述如下.
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番茄红素对心肌细胞缺氧损伤的作用机制
目的 探讨番茄红素对心肌细胞沉默信息调节因子1 (Sirt1)-自噬通路的作用.方法 原代培养乳鼠心肌细胞予以无血清、无糖培养及缺氧干预,模拟心肌缺血,用番茄红素和Sirt1的抑制剂尼克酰胺干预.采用Western blot法检测Sirt1、自噬相关基因6(Atg6)Beclin1及自噬相关基因8LC3蛋白的表达;RT-PCR技术检测心肌细胞Sirt1的mRNA表达.结果 ①在心肌缺氧中,番茄红素提高了细胞Sirt1蛋白和mRNA的表达水平;②番茄红素增加了心肌缺氧时自噬相关基因Beclin1和LC3蛋白的表达;③Sirt1的抑制剂尼克酰胺阻断了番茄红素对自噬蛋白的作用.结论 番茄红素可能通过Sirt1激活自噬,从而减少心肌缺氧损伤.
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尼克酰胺对妊娠期糖尿病大鼠线粒体超氧水平和抗氧化酶的影响
目的 通过研究尼克酰胺(nicotinamide)对妊娠期糖尿病大鼠线粒体超氧水平和抗氧化酶的影响,探讨该药物对妊娠期糖尿病的潜在治疗效果和作用机理.方法 妊娠期糖尿病(GDM)大鼠,从妊娠第6～20天分别给予不同剂量(50、100、200 mg/kg)尼克酰胺灌胃.在妊娠第21天检测大鼠空腹血糖.取胎鼠脑组织和大鼠骨骼肌组织,检测线粒体超氧水平和抗氧化酶活性.分别应用荧光实时定量PCR和Western印迹方法检测抗氧化酶的表达量.结果 尼克酰胺治疗组的妊娠期糖尿病大鼠血糖显著降低,其神经元线粒体超氧水平显著低于未给药组.尼克酰胺给药组的GDM大鼠骨骼肌组织中超氧化物歧化酶2(SOD2)的mRNA/蛋白水平和活性均显著高于未给药GDM大鼠(P＜0.05),而组织中过氧化氢酶(catalase)的表达量和活性差异无统计学意义.同未给药组比较,尼克酰胺治疗组的线粒体去乙酰化酶SIRT3的表达显著增加(P＜0.05),线粒体SOD2蛋白乙酰化水平降低.结论 尼克酰胺(nicotinamide)通过促进SIRT3蛋白功能降低线粒体SOD2蛋白乙酰化水平,增强SOD2活性从而降低妊娠期糖尿病大鼠的线粒体超氧水平,并可作为潜在的妊娠期糖尿病临床治疗药物.
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一氧化氮与疾病的发生
1 NO的结构一氧化氮(Nitric oxide，NO)是近年来发现的机体内的一种具有生物活性的信使和效应分子，其分子量小，半衰期短。80年代初，Robert等发现血管内皮细胞可释放一种被他命名为内皮细胞舒张因子(Endothelum-derived relaxing factor，EDRF)的物质，这种物质具有维持血管张力和抑制血小板聚集的作用。Furchgott和Ignarro于1986年分别提出了EDRF就是一氧化氮的观点，并被Palmer等于1987年证实，内皮细胞确实可以释放一氧化氮。近研究表明，EDRF并非单一分子，而是氮氧化合物的统称，NO是其中具有代表性的分子之一。它在呼吸、消化、神经、心血管及免疫系统等有着重要的病理生理作用。体内的一氧化氮是在一氧化氮合酶(NO Synthase，NOS)的催化下，利用L-精氨酸(L-arginine，L-Arg)和分子氧，并在还原型尼克酰胺腺苷磷酸(NADPH)参与下生成的。目前已发现的NOS有三种类型：内皮型NOS(eNOS)，神经元型NOS(nNOS)和诱导型NOS(iNOS)。前两者合称为结构型NOS(cNOS)。它不被糖皮质激素抑制[1]，当受生理刺激活化后可释放少量NO，具有调节血管张力，维持神经传导等生理功能[2]，iNOS分布范围广泛，当被激活后可合成大量NO，且持续时间较长，引起血管的持续扩张及血管对缩血管物质的反应性下降，并与NO的细胞毒作用有关[2，3],但糖皮质激素、转移因子-B等可抑制其作用，测定外周血NO2-，NO3-可作为反映机体NO合成水平的良好指标[4]。
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尼克酰胺对NOD鼠糖尿病的影响及机制探讨
1型糖尿病(T1DM)的发病机制是由于T淋巴细胞介导的胰岛β细胞自身免疫性破坏,研究认为,NOD鼠β细胞死亡的主要方式是凋亡[1],尼克酰胺(NA)能防止细胞毒因子和淋巴细胞对β细胞的攻击,减少β细胞凋亡[2].本研究从细胞因子和凋亡途径的角度,探讨NA预防NOD小鼠胰岛炎与糖尿病的作用机制.
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尼克酰胺对小鼠前脂肪细胞增殖及分化影响
目的 探讨尼克酰胺(NAM)对小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化的影响及其机制.方法 培养3T3-L1前脂肪细胞,添加NAM,观察其对细胞增殖及分化的影响,以添加白藜芦醇(Res)作阳性对照,以不添加任何药物为空白对照;用水溶性四氮唑(WST-1)法检测细胞的增殖,用染色比色法检测细胞的分化,采用蛋白免疫印记(west-ern blot)技术检测沉默信息调节因子1(Sirtl)、过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)、CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)位点的蛋白质表达.结果 干预48 h后,NAM组细胞相对数量是对照组的1.152倍,NAM+Res组是Res组的1.272倍;NAM组细胞相对脂肪是对照组的1.519倍,NAM + Res组是Res的1.321倍;添加NAM后Sirtl、PPARγ、42和24KDa的C/EBPα蛋白表达水平分别是对照组的0.381、2.107、1.005和1.233倍,NAM+Res组Sirtl、PPARγ、42 KDa和24KDa的C/EBPα表达水平分别是Res组的0.421、2.226、2.031和1.544倍.结论 NAM可增加3T3-L1前脂肪细胞的增殖和分化,机制可能是通过抑制Sirtl表达而增加脂肪细胞分化相关蛋白PPARy,C/EBPα的表达.
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兔脂肪干细胞体外诱导分化为胰岛β样细胞的可行性
背景:胚胎干细胞、胰腺干细胞、肝卵圆细胞、小肠上皮干细胞和骨髓间充质干细胞均可以在体外诱导分化为胰岛β样细胞,那么脂肪干细胞是否也可以呢?目的:探讨兔脂肪干细胞向胰岛β样细胞分化的可行性.方法:以常规方法从兔脂肪抽吸物中分离、培养脂肪干细胞;传2代后,用高浓度葡萄糖(25 mmol/L)培养液DMEM以及碱性成纤维生长因子和尼克酰胺诱导兔脂肪干细胞向胰岛β样细胞分化.结果与结论:第2代兔脂肪干细胞经过高糖诱导后,细胞形成细胞团;并且形成了双硫腙染色阳性的细胞团;免疫细胞化学表明诱导后细胞内的细胞胰岛素染色阳性.说明兔脂肪干细胞在体外可以定向诱导分化为胰岛β样细胞,这种胰岛β样细胞具有表达、储存胰岛素的功能.
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3D培养体系下人来源诱导性多能干细胞向肝细胞的转化
背景:生物型人工肝的构建有望成为治疗急性肝衰竭的有效方法,但构建人工肝的种子细胞来源、培养模式、营养获取等方面仍存在较多难题,制约血液净化-人工肝的发展与临床应用.目的:探讨在不添加外源血清等异种来源物质的条件下将人诱导性多能干细胞诱导分化为肝细胞样细胞的可行性.方法:应用含Transwell小室的6孔板构建3D培养体系,外源添加丙戊酸和尼克酰胺对人诱导性多能干细胞进行诱导分化,并将分化的肝细胞样细胞与生物补片共培养.实验分为5组:人诱导性多能干细胞为A组、正常肝细胞为B组、不添加尼克酰胺诱导分化的肝细胞样细胞为C组、添加尼克酰胺诱导分化的肝细胞样细胞为D组、在生物外科补片上培养的肝细胞样细胞为E组.倒置相差显微镜下观察D组肝细胞样细胞的形态;免疫荧光检测D组细胞中肝细胞核因子4α和甲胎蛋白的表达;荧光实时定量PCR和Western blot检测A、B、C、D组细胞中甲胎蛋白与白蛋白的mRNA和蛋白表达;流式细胞术检测A、C、D组细胞的分化效率;免疫细胞化学检测B组和E组细胞中胆盐输出泵蛋白的表达;ELISA检测D组和E组上清液中乳酸脱氢酶活性、白蛋白和尿素氮含量.结果与结论:①D组细胞由梭形逐渐转变成多边形;②D组细胞中肝细胞核因子4α和甲胎蛋白呈阳性表达;③D组细胞中甲胎蛋白、白蛋白的基因和蛋白表达明显高于A组和C组(P < 0.01);④B组和E组细胞中胆盐输出泵蛋白呈明显阳性表达;⑤E组细胞乳酸脱氢酶活性、白蛋白和尿素氮的含量明显高于D组(P < 0.01);⑥结果表明,外源添加小分子化合物的三维培养体系和生物外科补片联合应用有助于促进诱导性多能干细胞在体外诱导分化为功能性肝细胞样细胞.
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土茯苓化学成分的分离与鉴定
目的研究中药土茯苓的化学成分.方法用硅胶、大孔树脂、ODS柱色谱及HPLC方法进行分离纯化,根据理化性质和光谱数据进行结构鉴定.结果 得到5个化合物,分别鉴定为正丁基-β-D-吡喃果糖苷(Ⅰ)、正丁基-α-D-呋喃果糖苷(Ⅱ)、正丁基-β-D-呋喃果糖苷(Ⅲ)、5-羟甲基糠醛(Ⅳ)和尼克酰胺(Ⅴ).结论 化合物Ⅰ～Ⅴ均为首次从该属植物中分离得到.
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用NDP组化方法显示猴脊髓中间外侧核一氧化氮合酶阳性神经元的实验技术探讨
一氧化氮(Nitric Oxice,NO)作为一种内源性的活性物质,是二十世纪九十年代初新发现的一类神经递质,以其广泛的存在和独特的作用,成为近年来科学研究的热点.一氧化氮合酶(Nitric Oxide Synthase,NOS)是NO生成的关键因素.NO是气体,结构简单又不稳定,易扩散、且生物半衰期仅5秒,为了反映NO在中枢神经系各部内的存在和分布,一般采用显示NOS的方法来间接反映NO的水平.Hope[1]等人证明,NOS与还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸-黄递酶(NADPHd)为同一种物质,因此,常常采用NADPH-d组织化学染色法(简称NDP法)来显示NOS,从而间接分析NO含量的改变[2,3,4,5].本文用NDP法研究恒河猴(Macaca Mulatta)脊髓中间外侧核含NOS的阳性细胞,取得满意结果.该法具有简便、快捷等特点,尤其适合做中枢神经核团的定位,细胞计数等形态学计量研究.
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尼克酰胺对SD大鼠芥子气全身中毒疗效的初步评价
目的:评价尼克酰胺对SD大鼠芥子气全身中毒的治疗效果.方法:以SD大鼠为动物模型,在大鼠皮下注射4 mg/kg体重硫芥30 min后,治疗组动物均腹腔注射尼克酰胺50 mg/kg体重,连续应用5 d.通过观察1周内动物腹泻率、死亡率、体重变化、血常规指标变化、骨髓细胞学检查看细胞增生程度和细胞学分类等来评价药物疗效.结果:与中毒对照组相比,药物治疗组的腹泻率、死亡率、动物体重、血常规指标以及骨髓细胞学分类等在统计学上均无显著差异.结论:单用尼克酰胺并不能提高对SD大鼠芥子气全身中毒的防治效果.
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促肝细胞生长素与胰岛素合用对糖尿病大鼠胰岛分泌功能的影响
目的研究促肝细胞生长素(PHGF)与胰岛素(INS)合用对实验性糖尿病大鼠胰岛分泌功能的影响.方法链脲霉素性大鼠糖尿病模型75只,分成5组,每组15只:INS(2 U·kg-1,im);尼克酰胺(1 g·kg-1,ig);PHGF(20 mg·kg-1,iv);INS(2 U·kg-1,im)合并PHGF(20 mg·kg-1,iv);NS(同容量每只1 mL,iv).3 mo后放免法测定血INS和C肽.免疫组化染色法制作病理切片,胰岛β细胞记数并观察切片.结果与NS组比较,PHGF与INS合用组能显著提高外周血INS和C肽浓度(P<0.01),胰岛β细胞数目显著增多,镜检有大小不等的β细胞.结论PHGF与INS合用能够明显改善实验性糖尿病大鼠的胰岛β细胞功能,并有胰岛β细胞再生作用.
