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大黄活性成分对实验性自身免疫性脑脊髓炎相关基因蛋白表达以及炎性因子的影响
目的:探究大黄酸对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠模型中炎症因子以及Foxp3转录因子(Foxp3)表达量的影响.方法:通过髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)抗原乳剂免疫C57BL/6小鼠制备EAE模型,实验小鼠随机分为对照组、模型组、给药组1、给药组2、给药组3;免疫当天腹腔注射大黄酸5、10、20 mg/kg,对照组和模型组给予等量的生理盐水,连续给药30 d;观察小鼠的发病率、死亡率,并进行临床评分.分别在免疫后第14、20、30天取各组小鼠脑和脊髓组织,酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素2(IL-2)的水平,蛋白质印迹法(Western blot)测定Foxp3蛋白的含量.结果:给予EAE模型小鼠不同剂量的大黄酸给药组较模型组发病率显著降低(P<0.05);模型组小鼠在第20天、第30天脑和脊髓组织中分泌的IL-2较对照组显著增加(P<0.05),脑组织中Foxp3表达量显著降低(P<0.05);给予不同剂量的大黄酸给药组较模型组可显著降低EAE小鼠脑、脊髓组织中的IL-2水平(P<0.05),上调Foxp3表达量(P<0.05),其中5 mg/kg剂量的作用效果相对显著(P<0.05).结论:小剂量大黄酸可能通过抑制IL-2水平和促进Foxp3表达量,调控炎症反应和免疫功能,从而在EAE中发挥治疗作用.
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大黄酸对便秘小鼠肠道传输功能和结肠肌电及结肠黏膜水通道蛋白3表达的影响
目的 探讨大黄酸对便秘小鼠肠道传输功能、结肠肌电及结肠黏膜水通道蛋白(AQP)3表达的影响.方法 90只小鼠随机分为对照组、便秘组和大黄酸组.用复方地芬诺脂片复制小鼠便秘模型后,大黄酸组用大黄酸灌胃治疗.测量3组首便时间,6 h排便数量,大便性状,小肠推进率,结肠肌电信号和结肠黏膜AQP3的表达.结果 便秘组首粒排便时间较对照组显著延长(P<0.01),6 h内排便粒数显著减少(P<0.01),小肠推进率显著降低(P<0.01);大黄酸组首次排便时间较便秘组显著缩短(P<0.01),6 h内排便粒数显著增加(P<0.01),小鼠小肠推进率显著提高(P<0.01).3组结肠慢波近似于正弦波样曲线,便秘组结肠慢波较不规则.与对照组相比,便秘组结肠慢波频率显著减慢(P<0.05).与便秘组相比,大黄酸组结肠慢波频率显著增快(P<0.05).与对照组相比,便秘组结肠慢波频率变异系数显著增大(P<0.05);与便秘组相比,大黄酸组结肠慢波频率变异系数显著降低(P<0.05);与对照组相比,便秘组结肠慢波振幅显著降低(P<0.05);与便秘组相比,大黄酸组结肠慢波振幅显著升高(P<0.05).与对照组相比,便秘组结肠慢波振幅变异系数显著增大(P<0.05);与便秘组相比,大黄酸组结肠慢波振幅变异系数显著减小(P<0.05).便秘组结肠AQP3平均光密度值及阳性面积表达率明显高于对照组,大黄酸组结肠AQP3平均光密度值及阳性面积表达率明显低于便秘组(均P<0.05).结论 大黄酸能够有效地提高便秘小鼠的肠道传输功能,减少便秘小鼠结肠黏膜AQP3的表达,对缓解便秘具有显著疗效.
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王氏保赤丸中大黄5种成分的HPLC测定
目的:建立同时测定王氏保赤丸中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚5种活性成分含量的方法.方法:应用高效液相色谱法进行测定,流动相为乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱;流速1.0 mL/min;检测波长为254 nm;柱温30℃.结果:5种成分分剐在0.042～0.840 μg(r=0.999 6)、0.168～3.352 μg(r=0.9998)、0.084～1.680,μg(r=0.999 7)、0.093～1.852 μg(r=0.999 9)和0.174～3.488/μg(r=0.999 4)内呈良好线性关系,平均回收率分别为99.8%(RSO=1.34%)、99.8%(RSD=1.72%)、100.0%(RSD=0.89%)、99.5%(RSD=0.97%)和100.2%(RSD=1.04%).结论:本法操作简便,结果准确,可靠,重复性好,可用于本品的质量控制.
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反相高效液相色谱法测定朝鲜大黄中大黄酸的含量
[目的]测定朝鲜大黄中大黄酸的含量.[方法]采用反相高效液相色谱法,色谱柱为VP-ODS色谱柱(4.6mm×150mm,5μm),以1mL/L甲醇-磷酸(85∶15)为流动相,流动速度为1.0mL/min,检测波长为254nm.[结果]大黄酸进样量在0.08～0.80μg范围内,其峰面积积分值与质量浓度之间呈良好的线性关系(r =0 .9998),平均回收率为99.58% (n=6),RSD为 2.85%.药用大黄及朝鲜大黄中大黄酸含量分别为2.5628, 12.0888mg/g.[结论]反相高效液相色谱法测定朝鲜大黄中大黄酸含量的方法简便、准确,可用于朝鲜大黄中大黄酸含量的测定;朝鲜大黄中大黄酸含量高于药用大黄.
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HPLC法鉴别大黄及部分含大黄中成药的真伪
目的:建立一种简便易行的鉴别大黄及部分含大黄中成药真伪的测定方法.方法:采用Lichrospher C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸(76:24),流速1.0ml/min,检测波长254nm,对正品大黄、伪品大黄及以正品大黄投产的黄连上清片中大黄酸含量进行测定.结果:大黄酸进样量在31.6-136.9ug范围内与峰面积呈良好的线形关系(r=0.999),平均回收率99.36%;伪大黄即河套大黄中未检测出大黄酸,而正品大黄及其中成药制剂黄连上清片中均检出大黄酸.结论:该方法简便、快速、准确可靠,具有良好的可重复性,能够作为鉴别大黄及部分含大黄中成药真伪的有效方法,值得广泛应用.
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大黄酸对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化及相关基因表达的影响
目的:研究大黄酸(1,8-dihydroxy-3-carboxyanthraquinone,Rhein,Rh)对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化及相关基因表达的影响,从分子生物学角度探讨大黄酸降脂的作用机理.方法:体外培养3T3-L1前脂肪细胞,采用噻唑蓝法(MTT)研究大黄酸(5、10、20、40、80、160 μM)对3T3-L1前脂肪细胞增殖活性的影响;大黄酸(20、40、80μM)干预3T3-L1脂肪细胞诱导分化,油红O染色分析大黄酸对3T3-L1脂肪细胞分化过程中胞浆脂滴积累的影响;生化法检测大黄酸对3T3-L1脂肪细胞中甘油三酯(Triglyceride,TG)的影响;实时荧光PCR法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome Proliferator Activated Receptor Gamma,PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT/enhancer binding protein α,C/EBPα)、脂肪酸合成酶(Fatty acid synthetase,FAS) mRNA的表达水平.结果:大黄酸160 μM对3T3-L1前脂肪的增殖有显著的抑制作用,大黄酸20、40、80μM剂量依赖地降低3T3-L1脂肪细胞中脂滴的积累,同时显著降低3T3-L1脂肪细胞中rG含量,并且下调3T3细胞中脂肪分化相关基因PPARγ、C/EBPα、FAS mRNA的表达.结论:大黄酸能够抑制3T3-L1脂肪细胞的诱导分化,降低细胞内TG含量,其作用机制可能与下调脂肪分化相关基因PPARγ、C/EBPα、FAS mRNA的表达有关.
关键词： 大黄酸 3T3-L1前脂肪细胞 增殖分化 基因表达 -
大黄酸对白细胞介素-6诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响
目的:研究大黄酸对白细胞介素-6(IL-6)刺激的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖效应的影响.方法:(1)采用原代细胞培养方法建立大鼠VSMCs细胞模型,形态学倒置相差显微镜和透射电镜观察的方法进行细胞鉴定;(2)以四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法观察不同浓度和不同时间的IL-6对VSMCs增殖能力的影响,以及不同浓度的大黄酸作用12小时对IL-6效应的干预作用.结果:IL-6能显著促进VSMCs增殖,促增殖效应在48 h末达峰值且IL-6浓度在0～50.0ng/ml之间呈剂量依赖关系,差异具有统计学意义(P<0.05);而大黄酸可抑制IL-6诱导的VSMCs的增殖效应(P<0.01).结论:IL-6可刺激VSMCs增殖,而大黄酸能够抑制IL-6的促增殖作用,有望用于干预动脉粥样硬化的发生发展,其机制可能与线粒体依赖的凋亡机制有关.
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大黄酸和迷迭香酸单用及配伍对慢性肾脏疾病的保护作用研究
目的:探讨大黄酸和迷迭香酸单用及配伍通过抗凋亡对5/6肾切除(5/6Nx)大鼠的保护作用.方法:采用5/6肾切除手术制作慢性肾损伤模型,将30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、大黄酸(150 mg/kg/day)治疗组、大黄酸(75mg/kg/day)+迷迭香酸(75 mg/kg/day)治疗组和迷迭香酸(150 mg/kg/day)治疗组.给药1个月后处死大鼠,测量各组大鼠血清肌酐(ScO和尿素氮(BUN)水平,通过HE染色观察肾组织形态学变化,通过TUNEL染色和测量肾组织中Bax、Bcl-2和cleaved caspase 3的表达检测细胞凋亡.结果:与模型组相比,大黄酸和迷迭香酸单用及配伍都可显著降低血清肌酐和尿素氮(P＜0.05)水平,改变组织形态学的变化和抑制肾脏细胞凋亡,且配伍的效果优于单用.结论:大黄酸和迷迭香酸配伍发挥肾保护作用明显优于单用,其作用机制与抗凋亡作用相关.
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大黄酸与山楂总黄酮的药效学研究
目的研究大黄酸与山楂总黄酮对大鼠尿液生成量的影响. 方法实验分4组,分别为正常对照(生理盐水)组、大黄酸组、山楂总黄酮组和阳性对照(呋塞米)组,采用大鼠膀胱插管法收集尿液,观察给药前后各组尿量的变化情况. 结果给药4h后,大黄酸组和山楂总黄酮组总尿量分别为(4.9±1. 08)ml和(4.45±0.60)ml,与正常对照组4h后总尿量(6.4±1.25)ml比较差异显著(P<0 .01). 结论大黄酸与山楂总黄酮对尿液的生成有抑制作用.
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HPLC法测定十三味解郁胶囊中大黄素和大黄酚的含量
目的:采用HPLC法测定十三味解郁胶囊中大黄素、大黄酚的含量.方法:色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶柱;流动相:甲醇:0.1%磷酸水溶液(80:20);流速:1.0ml/mln;检测波长:256nm.结果:该方法操作简单,专属性和重现性强,可有效测定十三味解郁胶囊中大黄素的含量.
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中药对大鼠肝纤维化MMP－13及α－SMA的影响
目的：探讨中药红景天、大黄酸（ Rhein 1，8－二羟基－3－羧基蒽醌）对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型肝组织中MMP－13及α－SMA的表达的影响。方法：本实验用四氯化碳诱导建立大鼠肝纤维化模型。健康♂SD大鼠70只，随机分组：（1）对照组（10只）；（2）模型组（20只）；（3）干预组1（大黄酸组，20只）；（4）干预组2（红景天组，20只）。于实验8周后处死大鼠取肝组织检测MMP－13mRNA、α－SMAmRNA及蛋白的表达情况。结果：红景天、大黄酸干预组肝组织中MMP－13mRNA及蛋白阳性表达均高于模型组（P ＜0．05）；红景天、大黄酸干预组肝组织中α－SMAmRNA及蛋白阳性表达均低于模型组（ P ＜0．05）；肝组织MMP－13mRNA表达与α－SMAmRNA表达水平变化呈负相关。结论：中药红景天与大黄酸均能有效促进肝纤维化大鼠肝脏中MMP－13、抑制α－SMA表达；中药大黄酸和红景天都能保护肝细胞活性，促进肝细胞修复再生，具有抗肝纤维化作用。
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多指标优选健胃清肠口服液提取工艺研究
目的 优选健胃清肠口服液佳提取工艺.方法 采用多指标控制,以干膏率、大黄酸、大黄素、大黄酚的提取率为综合评价指标,选取提取时间、料液比和提取次数为考察因素,通过正交试验优选口服液的佳提取工艺.结果 健胃清肠口服液的佳提取工艺为加10倍量的水煎煮3次,第1次2h,第2次、第3次分别为2h.结论 该工艺稳定可行,可作为健胃清肠口服液工业化提取工艺.
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桃核承气缓释片的制备研究
目的 优选桃核承气缓释片的制备工艺并探讨其释药机理.方法 采用正交实验设计,以大黄酸、大黄素的累积释放度综合评分L值为指标,优选HPMC、乳糖和MCC用量,并对释药曲线进行数学模型拟合.结果 桃核承气缓释片优化制备工艺为HPMC的用量为15％,乳糖用量为1％,MCC的用量为5％；其释药模型为Higuchi方程.结论 制备工艺合理、可行、稳定；释放度数据较稳定,符合中国药典要求.
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超声强化超临界提取大黄中5种蒽醌衍生物的研究
目的 考察超声强化超临界流体萃取(USFE)大黄5种蒽醌衍生物成分的提取效果.方法 采用自行设计的超声强化超临界流体萃取装置,比较超声提取(U)、超临界流体萃取(SFE)和超声强化超临界流体萃取(USFE)提取大黄5种蒽醌衍生物成分的提取率.结果 USFE的合适萃取温度、萃取时间和夹带剂用量分别低于SFE的10℃、30 min、0.5BV,在相同的萃取压力下,USFE对5种蒽醌衍生物成分的提取率较SFE分别提高了2.113%～6.095%.结论 超声对超临界流体萃取具有明显的强化效应,USFE具有提取效率高,能耗和生产成本低等优点,能为工业化生产提供参考.
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HPLC测定大黄(庶虫)虫丸中大黄酸、大黄素及大黄酚的含量
大黄(庶虫)虫丸系熟大黄,土鳖虫,桃仁等12味中药组成,具有活血破瘀,通经消痞,用于瘀血内停,腹部肿块,肌肤甲错,目眶黯黑,潮热赢瘦,经闭不行等症.由于本处方药味多,且有动物药,影响质量分析.经参考有关HPLC法测定复方制剂中大黄含量测定的资料[1～3],本文采用超声波振荡提取样品,大孔吸附树脂洗脱净化,制备成样品液,用HPLC法测定大黄(庶虫)虫丸中大黄酸、大黄素及大黄酚的含量.方法简便,快速,重现性好.
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HPLC法同时测定乌金止痛丸中5种成分
目的 建立HPLC法同时测定乌金止痛丸(大黄、当归、香附等)中5种成分的含有量.方法 该药物50％乙醇提取液的分析采用Amethyst C18-H色谱柱(4.6 mm ×250 mm,5μm);流动相甲醇-0.05％三氟乙酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长254 nm.结果 芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别在0.805 4 ～ 80.540 1、0.815 3～81.525 3、0.822 2 ～ 82.217 1、0.859 5～85.954 8、0.382 5 ～38.253 6 μg/mL范围内线性关系良好(r =0.999 9),平均加样回收率分别为94.31％、96.77％、101.14％、91.64％、97.27％,RSD分别为3.66％、3.91％、1.84％、3.99％、1.69％.结论 该方法准确,重复性好,可用于乌金止痛丸的质量控制.
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大败毒胶囊质量标准的研究
目的 建立大败毒胶囊(大黄、蒲公英、陈皮等)的质量标准.方法 TLC法定性鉴别大黄、黄柏、赤芍、白芷、陈皮、乳香.HPLC法测定芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含有量.结果 TLC斑点清晰,分离度好,阴性无干扰.芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别在0.19 ～5.93、0.64～20.36、0.16 ～5.25、0.15 ～4.91、0.19～6.06 μg/mL范围内线性关系良好(r≥0.999 6),平均加样回收率分别为97.12％(RSD=2.33％)、100.41％ (RSD=2.81％)、102.42％ (RSD=2.02％)、99.24％ (RSD=1.60％)、97.08％ (RSD=2.98％).结论 该方法简便、可靠、准确,可用于大败毒胶囊的质量控制.
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散瘀软膏质量标准的研究
目的 建立散瘀软膏(大黄、黄芩、黄柏等)的质量标准.方法 TLC法鉴别大黄、黄芩、黄柏.HPLC法对黄芩苷、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含有量进行测定.结果 TLC斑点清晰,阴性对照无干扰.5个成分分别在224.0～4 480 ng(r =0.999 3)、70.40～1 407 ng(r =0.999 6)、76.80～1 536 ng(r =0.999 7)、158.2 ～3 165 ng(r =0.999 2)、66.00～1 320 ng(r=0.999 7)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为97.4％(RSD=1.0％)、99.2％ (RSD=2.1％)、98.5％(RSD=1.19％)、97.7％(RSD=1.8％)、98.3％ (RSD=1.5％).结论 该方法去除了基质干扰,保证实验结果的准确性.
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HPLC法测定疱疹康喷雾剂中6种成分
目的 建立HPLC法测定疱疹康喷雾剂(大黄、黄连、白芷等)中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、盐酸小檗碱的含有量.方法 盐酸小檗碱的分析采用Venusil XBP C18(L)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-水-冰乙酸-三乙胺(28∶70∶1∶1);检测波长265 nm;柱温25℃;体积流量1 mL/min.其他5种成分的分析采用Venusil XBP C18(L)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为甲醇-0.1％磷酸溶液(75∶25);检测波长254 nm;柱温25℃;体积流量1 mL/min.结果 芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、盐酸小檗碱分别在0.0179～0.358 μg (r=0.9999)、0.018 2 ～0.364μg(r =0.999 8)、0.018 9 ～0.338 μg(r =0.999 9)、0.008 0 ～0.160 μg (r=1)、0.008 9 ～0.177 μg(r=0.999 9)、0.147 ～1.4701μg (r=0.9997)范围内线性关系良好,平均回收率分别为101.3％(RSD=1.0％)、102.8％ (RSD=1.5％)、101.2％ (RSD=1.9％)、102.7％ (RSD=1.3％)、100.2％ (RSD=1.9％)、101.3％ (RSD=2.0％).结论 该方法灵敏、简便、准确、重复性好,可用于疱疹康喷雾剂的质量控制.
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栀黄止痛贴质量标准的研究
目的 建立栀黄止痛贴(栀子、大黄、黄柏等)的质量标准.方法 TLC法对栀子、大黄、黄柏、赤芍进行鉴别,HPLC法同时测定栀子苷、芍药苷、盐酸小檗碱、大黄酸的含有量,再对栀子苷释放度进行测定.结果 TLC斑点清晰,分离度良好,阴性无干扰.栀子苷、芍药苷、盐酸小檗碱、大黄酸分别在1.2 ～7.2 μg(r=0.999 9)、4.32～ 25.92 μg(r=0.999 8)、1.344～8.064 μg (r=0.999 9)、1.664 ～9.984 μg(r=0.997 0)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为99.40％(RSD=2.57％)、98.20％ (RSD=2.25％)、97.45％ (RSD=1.25％)、97.38％(RSD=1.51％).栀子苷平均释放度为96.49％.结论 该方法简便、准确、可靠,可用于栀黄止痛贴的质量控制.
