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细粒棘球绦虫磷酸丙糖异构酶抗原表位预测与分析
目的 利用生物信息学的方法对细粒棘球绦虫EgTPI B、T细胞表位进行预测,为细粒棘球绦虫诊断抗原的筛选提供分子生物学依据.方法 采用Expasy中的protparam数据库推测EgTPI的理化性质;利用IEDB、ABCpred软件分析B细胞抗原表位.AMPHI法预测Th细胞的抗原表位;使用Jpred4软件和SWISS-MODEL构建TPI的二、三级结构;应用MEGA 4.0软件比对细粒棘球绦虫TPI和人类TPI、日本血吸虫TPI、肝片吸虫TPI等7种生物的序列.结果 通过分析得出EgTPI二级结构中直链结构占15.6％、α螺旋占38.9％、转角结构占12.0％、其他结构占42.2％;经多序列比对,人类TPI与细粒棘球绦虫TPI一致度仅为40.08％,较大的差异更有利于形成抗原表位.预测可能的T细胞表位有16-30、71-85、98-119、142-154、178-200;可能的B细胞表位有28-39、50-60、70-80、131-139、150-159、213-231.结论 EgTPI可能形成T细胞表位区域有5个,B细胞表位的区域有6个,EgTPI抗原表位预测分析为疾病诊断的候选分子筛选奠定分子生物学理论依据.
关键词： 细粒棘球绦虫 磷酸丙糖异构酶(TPI) 抗原表位 生物信息学 -
重组日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶蛋白质表达、纯化及特性分析
磷酸丙糖异构酶(TPI)是已被公认的血吸虫病疫苗候选分子之一,本研究将日本血吸虫中国大陆株TPI分子基因DNA片段定向克隆到表达载体pGEX-4T-3(编码26kDa的GST蛋白)中,构建重组表达质粒,然后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,阳性克隆用IPTG诱导,阳性菌株可表达分子量约55kDa的融合蛋白(GST-TPI),此融合蛋白可与Glutathione Sepharose 4B结合成复合物,用凝血酶切割融合蛋白复合物,获得分子量约28kDa的重组表达TPI分子.重组TPI分子具有磷酸丙糖异构酶活性,并能被日本血吸虫重感染兔血清,血吸虫病人血清所识别.重组TPI免疫家兔产生抗体的效价高可达1∶25600,该血清抗体能识别日本血吸虫中国大陆株成虫抗原中分子量约28kDa的蛋白条带.
关键词： 日本血吸虫中国大陆株 磷酸丙糖异构酶(TPI) 蛋白表达 特性分析
