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不同代谢活化系统增强苯并(a)芘诱导人支气管上皮细胞转化效应
目的 探讨不同的代谢活化系统在苯并(a)芘[B(a)P]诱导人细胞转化模型中的应用.方法 选择人支气管上皮细胞HBETR,采用3种不同的代谢活化方式:分别为加入大鼠S9组分(S9-Mix)、高表达代谢关键酶P450 CYP1A1(HBETR-1A1细胞)和染毒前48小时用低剂量B(a)P诱导(HBETR-IN细胞).通过软琼脂克隆形成试验和裸鼠皮下成瘤试验来比较在不同的代谢活化系统下,间接致癌物B(a)P诱导细胞转化的效能.结果 通过蛋白印迹和酶活性检测结果验证HBETR-1A1细胞构建成功.细胞的生物学特性没有明显的改变.20μmol/L B(a)P染毒作用下HBETR-1A1、HBETR-IN细胞出现转化时间均为11周,而未加入活化系统时,HBETR细胞需14周才能获得恶性转化.HBETR细胞在加入和不加入S9-Mix的条件下,转化时间分别是14周、20周.上述转化的效果与CYP1A1酶活性以及蛋白表达水平相一致.结论 三种代谢系统都能够促进间接致癌物B(a)P的代谢活化,缩短细胞的转化间期,提高细胞转化效率.从试验操作难度、试验的重复性及结果的可靠性等几个方面比较三种代谢系统应用的可行性,低剂量诱导作为新的代谢活化的方法在细胞转化试验中有着潜在的应用前景.
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持续性细胞皱缩在人上皮细胞凋亡过程中的必要性
持续性细胞皱缩是凋亡发生的一个主要标志.近期研究发现细胞皱缩在细胞凋亡过程中并不是一个被动的次要事件.在各种细胞中,包括人上皮细胞,凋亡因子(apoptogen)刺激后马上发生全细胞皱缩,又称为凋亡性容积减小(apoptotic volume decrease,AVD),继而发生caspase激活、DNA片段化、细胞破裂死亡.K+和Cl-通道的激活导致KCl外流,诱导AVD发生.抑制AVD发生可以抑制细胞凋亡.AVD与调节性容积增加(regulatory volume increase,RVI)异常相伴发生时,人上皮性HeLa细胞发生持续性细胞皱缩.RVI功能受损时,高渗本身就能诱导HeLa细胞持续性细胞皱缩,继而凋亡.即使在正常渗透压、无凋亡因子刺激的情况下,将HeLa细胞置于缺乏Na+或Cl-的溶液也会导致细胞持续性皱缩,继而凋亡.因此,AVD诱导和RVI异常所导致的持续性细胞皱缩是人上皮细胞发生凋亡的首要条件.
