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孕期及哺乳期母鼠邻苯二甲酸酯类暴露对仔鼠呼吸道过敏的影响
目的 通过使孕期及哺乳期Wistar大鼠暴露于邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP),探讨DEHP母代暴露对子代呼吸道过敏影响.方法 将36只健康2月龄雌性Wistar大鼠分成3个不同剂量组,从妊娠0天(GDO)起,各组孕鼠分别给予0、30和300 mg/(kg·d) DEHP至仔鼠出生后21天(PND21)断乳,建立母体DEHP暴露模型.仔鼠出生后,不同剂量组各笼选取1只仔鼠在PND21、PND28进行卵清白蛋白(OVA)腹腔注射致敏并在PND32、PND33和PND34连续滴鼻致敏激发,PND35与未致敏仔鼠共同取材,包括肺泡灌洗液以及肺组织.ELISA检测肺泡灌洗液中Th2型细胞因子白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-13的分泌情况,肺组织进行HE及PAS染色观察肺组织过敏性炎症病理变化;免疫组化检测上皮衍生因子IL-33的表达变化.结果 肺泡灌洗液中,与对照组比较,DEHP0+OVA组总炎症细胞以及嗜酸性粒细胞数目上升为(131.500±25.548)×104、(32.000±10.079)×104(P＜O.05);DEHP30+OVA组总炎症细胞以及嗜酸性粒细胞数目上升为(156.167±17.994)×104、(16.331±6.667)×104(P＜0.05);DEHP300+OVA组总炎症细胞以及嗜酸性粒细胞数目上升为(172.167±19.994) ×104、(55.000±17.018)×104(P＜0.05).加入不同剂量DEHP与OVA致敏后,与对照组比较,DEHP0+OVA组IL-4、IL-5、IL-13表达量分别增加为(38.401±6.594)pg/mL (P＞0.05)、(30.026±2.756) pg/mL(P＜O.05)、(13.806±4.355)pg/mL(P＜0.05);DEHP30+OVA组IL-4、IL-5、IL-13表达量分别增加为(57.733 ±7.293) pg/mL(P＜O.05)、(31.544±1.043) pg/mL(P＞0.05)、(18.068±1.497) pg/mL(P＜0.05);DEHP300+OVA组IL-4、IL-5、IL-13表达量分别增加为(54.943±6.049) pg/mL(P＞0.05)、(32.377±3.739) pg/mL(P＞O.05)、(20.168±0.939)pg/mL(P＜0.05).肺组织病理观察显示,单纯DEHP暴露组仔鼠肺组织没有明显的过敏性炎症反应,而各DEHP+OVA组仔鼠肺组织有较明显的过敏反应且随着DEHP剂量加重而加剧.免疫组化显示DEHP单纯暴露组IL-33表达无明显增加,而DEHP+OVA各组IL-33表达量增加且有一定的剂量-反应关系.结论 孕期及哺乳期DEHP暴露会导致子代呼吸道过敏反应加重,其可能机制是通过增加IL-33表达量启动以Th2型细胞为主的肺部致敏反应所致.
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当归对阴虚哮喘小鼠模型的影响
目的:探讨当归对阴虚哮喘BALB/c小鼠的治疗作用.方法:84只BALB/c小鼠随机分为7组,正常组,模型组,地塞米松组(地塞米松,0.5 mg·kg-1),当归高、中、低剂量组(8,4,2 g·kg-1)及联合组(当归4 g·kg-1与地塞米松0.5 mg·kg-1联合用药),除正常组外,其余各组通过注射卵清白蛋白(OVA)致敏、雾化吸入OVA激发的方法复制哮喘BALB/c小鼠模型,实验后期ig甲状腺素来复制阴虚哮喘小鼠模型;在当归的干预下观测当归对小鼠体重、肺液清除功能、自主活动、哮喘行为学、肺功能、血清环磷酸腺苷(cAMP)与环磷酸鸟苷(cGMP)及肺脏病理学的影响.结果:与正常组比较,模型组动物肺脏含水量与体重显著下降,小鼠自主活动、进食量与饮水量明显升高,cAMP水平明显升高,cGMP水平明显降低,cAMP/cGMP水平明显升高,小鼠潮气量明显降低,呼吸频率与哮喘行为学综合评分明显升高,肺组织病理学变化较为明显(P ＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,当归高、中、低剂量组及联合组在维持阴虚哮喘模型肺组织含水量与体重的同时可减少小鼠自主活动、进食量与饮水量,降低cAMP水平、提高cGMP含量而缓解cAMP/cGMP失衡状态(P ＜0.05,P＜0.01),改善阴虚哮喘模型的阴虚症状;当归可增加阴虚哮喘小鼠潮气量,降低呼吸频率与哮喘行为学综合评分,缓解肺组织病理学变化(P ＜0.05,P＜0.01),改善阴虚哮喘模型的哮喘症状.结论:当归对阴虚哮喘的阴虚证与哮喘有一定的治疗作用.
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两种建立兔动脉粥样硬化模型方法的比较
目的 通过单纯高脂饲养法与高脂饲养联合免疫反应损伤法建立兔动脉粥样硬化模型,比较两种方法在制模时间、模型稳定性方面的差异.方法 18只雄性新西兰兔随机分为3组,对照组(C组,n=6)饲喂普通饲料,模型组1(M1,n=6)饲喂高脂饲料,模型组2(M2,n=6)饲喂高脂饲料结合免疫反应损伤(注射卵清白蛋白和胎牛血清白蛋白)建立兔动脉粥样硬化动物模型.饲喂10周后测定TG、TC、HDL-C、LDL-C和C反应蛋白(CRP)的水平,油红O和HE染色观察各组动脉和肝脏的病理变化,测量并比较各组动脉斑块面积占内膜的百分比(PA/IA).结果 M1和M2组血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C和CRP水平显著升高(P<0.01);M1和M2组肉眼及光镜下均可见动脉粥样斑块,PA/IA分别为(51.6±10.58)％和(70.9±15.75)％,且M2组更为严重(P<0.05).结论 两种方法均可建立兔动脉粥样硬化模型,高脂饲料喂养联合免疫反应损伤法能在短时间内快速建立兔动脉粥样硬化模型.
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卵清白蛋白特异性T细胞克隆的建立及T细胞受体使用情况分析
目的体外建立可长期培养的抗原特异性T细胞系及克隆,并分析其T细胞受体的使用情况.方法用卵清白蛋白(OVA)免疫BALB/c小鼠,取淋巴结细胞在体外用抗原反复刺激建立抗原特异性T细胞系,通过有限稀释法进行克隆,应用锚定PCR方法分析其特异的T细胞受体的应用. 结果建立了H-2d限制的OVA特异性T细胞系,获得了3株特异性较高的T细胞克隆,T细胞系中TCR AV11S4和BV4S1应用频率高,3株T细胞克隆的TCR均为AV5S2和BV2S1,这些T细胞所使用的TCR α链和β链在CDR3区有明显的共性.结论获得了卵清白蛋白特异的T细胞系和克隆,且其T细胞受体的应用有一定的限制性.
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香烟提取物经级联反应促进支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖
吸烟是影响支气管哮喘(简称哮喘)发生、发展的重要危险因素[1].香烟烟雾能增加卵清白蛋白(OVA)致敏豚鼠气道急性变应性炎症[2].我们既往的研究结果证实蛋白激酶C(PKC)信号通路在香烟提取物(CSE)促哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)的增殖过程中起重要作用[3].
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吸入烟曲霉孢子对支气管哮喘大鼠气道黏蛋白MUC2表达的影响
气道黏液过度分泌是支气管哮喘(简称哮喘)加重和死亡的危险因素[1-2].MUC2是由杯状细胞分泌的不溶性黏蛋白,哮喘患者MUC2表达上调,呼吸道黏液黏稠度和黏滞性增加,更易导致气道阻塞[3].流行病学资料显示烟曲霉(Aspergillus fumigatus)暴露与哮喘病情加重密切相关[4].我们用卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)致敏和激发的方法建立大鼠慢性哮喘模型,然后给予长期的烟曲霉孢子吸入,观察对黏蛋白MUC2表达的影响,探讨烟曲霉暴露加重哮喘的机制.
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妊娠期支气管哮喘诱导子代大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞表型转变
目前研究结果表明,支气管哮喘(简称哮喘)患者可能存在肾上腺素释放功能障碍,导致体内肾上腺素水平过低,造成难以有效缓解哮喘所致的支气管痉挛.这一病理生理现象的出现可能与下列机制存在密切关联:哮喘患者体内神经生长因子(nerve growth factor,NGF)表达过高,诱导肾上腺髓质嗜铬细胞发生神经元转变倾向,进而损伤嗜铬细胞的内分泌功能,使肾上腺素分泌减少.本研究中采用卵清白蛋白(OVA)致敏和激发的方法建立妊娠期哮喘大鼠模型,并用NGF及其抗体对模型进行干预,观察子代大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞表型的转变情况.
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吗啡与蛋白质结合物的合成
目的:利用蛋白质连接法合成吗啡人工全抗原.方法:混合酸酐法和碳二亚胺连接法,用BSA及OVA蛋白做载体蛋白,利用紫外光谱扫描及蛋白质电泳两种方法判断连接是否成功.结果:连接成功,连接产物分子量增加,且每分子牛血清白蛋白连接的吗啡分子数为40-48个,每分子卵清白蛋白(OVA)连接的吗啡分子数为13-16个.结论:此两种方法能成功合成吗啡人工抗原,且该抗原可作为吗啡免疫用抗原以及吗啡免疫检测方法建立所用包被抗原.
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卵清白蛋白诱导小鼠建立哮喘模型的研究现状
哮喘动物模型是研究哮喘发病机制及防治方法的主要工具之一,在哮喘动物模型的建立过程中,卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)诱导小鼠建立哮喘模型的方法为常见。本文回顾了近十年来的国、内外文献,对用该方法建立的哮喘模型的分类,建模过程中小鼠种属、性别及饲养环境的选择,模型制备过程中致敏、激发等主要环节的处理方式,以及哮喘模型的评价方法等问题作一综述。
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腹腔注射卵清白蛋白致大鼠内脏高敏感的研究
目的:建立鸡卵清白蛋白致内脏高敏感大鼠模型,研究该模型内脏高敏感与肥大细胞的关联.方法:腹腔注射鸡卵清白蛋白使大鼠内脏致敏,分别在给药3 d及2周后用特殊染色法观察结肠肥大细胞的形态学改变.用腹部撤离反射(abdominal withdrawal reflex, AWR)评估致敏大鼠对直肠扩张刺激的内脏感觉改变.结果:甲苯胺蓝染色法显示,致敏大鼠肠黏膜及肠系膜肥大细胞数量明显增加(P<0.01).阿尔辛蓝-藏红染色法显示,对照组及致敏给药后3 d的肠系膜肥大细胞内主要为未成熟颗粒,而致敏后2周肥大细胞内主要为成熟颗粒.直肠扩张显示内脏致敏大鼠3 ml及5 ml气囊组AWR评分显著高于对照组(P<0.01). 结论:腹腔注射鸡卵清白蛋白致内脏高敏感的作用确切,内脏致敏作用很可能和肥大细胞的增生和脱颗粒状态相关.
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被动免疫治疗豚鼠过敏性支气管哮喘的疗效
目的 探讨低剂量的抗白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)免疫球蛋白Y(IgY)雾化吸入治疗豚鼠过敏性支气管哮喘的疗效.方法 将118只豚鼠随机分为正常对照组(15只,给予0.9％氯化钠注射液雾化吸入)、A组[模型组,19只,给予1.o％卵清白蛋白(OVA)氯化钠注射液、1.5％OVA氯化钠注射液及0.9％氯化钠注射液雾化吸入]、B组(IgY治疗组,18只,给予1.0％OVA氯化钠注射液、1.5％OVA氯化钠注射液及0.1％抗IL-1β和TNF-d IgY雾化吸入)和C组(阳性治疗组,18只,给予1.o％OVA氯化钠注射液、1.5％OVA氯化钠注射液及布地奈德混悬液雾化吸入).治疗后的2、4、8、24 h采用ELISA法检测炎症细胞因子(IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16、TNF-α、TGF-β1、IgE)的水平,亚甲蓝及伊红染色计数嗜酸性粒细胞,采用HE染色观察肺组织的病理变化.结果 B、C2组在不同时间点血中嗜酸性粒细胞和血浆中IL-1β、IL-16、TGF-β1、IgE水平均显著低于A组 (均P＜0.05),而BALF的上清液中IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、ID16、TNF-α、TGF-β1、IgE水平均显著低于A组(均P＜0.05).B、C2组炎症病理反应明显减轻.A组血浆中IL-1β水平与IL-4、IL-8、IL-16、TNF-α水平均呈正相关(均P＜0.05),血浆中TNF-α水平与IL-6、IL-16、TGF-β1、IgE水平均呈正相关(均P＜0.05);BALF中IL-1β水平与IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16、TNF-α、TGF-β1、IgE水平均呈正相关(均P＜0.05),BALF中TNF-α水平与IL-1β、IL-4、IL-8、IL-13、IL-16、IgE水平均呈正相关(均P＜0.05).结论 低剂量的抗IL-1β和TNF-α IgY雾化吸入治疗豚鼠过敏性支气管哮喘具有显著的疗效,并能够显著地减轻豚鼠过敏性支气管哮喘炎症病理反应.
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姬松茸多糖与OVA共同免疫改善E.G7-OVA荷瘤小鼠免疫功能的研究
目的 通过小鼠体内免疫的方法,观察姬松茸多糖与模型肿瘤抗原卵清白蛋白(OVA)共同免疫对E.G7-OVA荷瘤小鼠免疫功能的影响.方法 姬松茸多糖(高、中、低剂量)与OVA共同免疫E.G7-OVA荷瘤小鼠,观察其对EG7荷瘤小鼠脾指数、胸腺指数以及小鼠外周血中T淋巴细胞亚群CD4+和CD8+比例的影响.结果 姬松茸多糖(高、中剂量)与OVA共同免疫组小鼠的脾指数、胸腺指数明显大于单独使用OVA组,外周血中CD4+/CD8+T细胞比值也有明显升高.结论 姬松茸多糖能够辅助OVA改善EG7-OVA荷瘤小鼠的免疫功能状态,姬松茸多糖可能作为免疫佐剂用于肿瘤的预防与治疗.
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姬松茸多糖对T淋巴细胞表面分子表达及γ干扰素分泌的影响
目的:研究姬松茸中分离纯化的低分子量多糖(ABP-AW1)促进卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)抗原诱导小鼠脾淋巴细胞亚群效应细胞的应答格局的影响.方法:ABP-AW1和OVA皮下两点免疫ICR小鼠,于0,15d各免疫一次,第28天分离培养脾淋巴细胞,MTT法测定脾淋巴细胞增殖,FCM(flow cytometry)分析免疫鼠脾中T淋巴细胞亚群CD4+T和CD8+T的百分含量;免疫鼠脾淋巴细胞体外给予同种抗原再刺激24 h,分析ABP-AW1对脾CD69+ CD4+ T淋巴细胞的表达及胞内因子IFN-γ+ CD4+T的调节作用.结果:ABP-AW1能增强OVA诱导的Th淋巴细胞亚群CD4+T细胞,CTL淋巴细胞亚群CD8+T细胞增殖;ABP-AW1也能增进CD4+T细胞早期活化标志CD69+百分比增加,诱导CD4+T胞内Th1型细胞因子IFN-γ分泌水平增多.结论:ABP-AW1佐剂上调脾脏中淋巴细胞亚群的增殖,特别是Th1细胞的募集和活化,研究结果为设计理想的免疫佐剂提供了基础研究数据资料.
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异补骨脂查尔酮抗哮喘作用的实验研究
目的:探讨异补骨脂查尔酮在实验动物体内抗哮喘的作用.方法:将27只野生型雌性BALB/c小鼠随机分为正常组(7只)、哮喘对照组(10只)、给药组(10只),采用卵清白蛋白(OVA)致敏诱导哮喘模型,给药组灌胃具有抑制IL-4分泌的化合物异补骨脂查尔酮,连续1周.检测给药后模型动物体内脾脏CD+细胞及血清中IL-4、IFN-g水平的变化.结果:与哮喘对照组相比,给药组体内脾脏CD4+细胞中IL-4的产生减少(P＜0.05),IFN-g表达无明显差异,血清中IL-4的表达降低(P＜0.05),血清中IFN-g的表达增高(P＜0.01).结论:异补骨脂查尔酮能够抑制哮喘小鼠体内IL-4的表达,初步证实有一定的抗哮喘活性,其具有开发成为治疗哮喘药物的潜力.
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丝瓜藤提取物治疗鼻炎的机理研究
[目的]探讨丝瓜藤提取物治疗鼻炎的作用机理.[方法]采用卵清白蛋白和Al(OH)3建立小鼠过敏性鼻炎模型,按剂量灌服相应药物10d,观察小鼠的症状和鼻黏膜组织形态学的病理变化,并检测血清中的组胺含量及鼻黏膜嗜酸性粒细胞计数.[结果]丝瓜藤氯仿部位提取物能有效改变鼻炎小鼠鼻黏膜病理改变,减少血清中组胺含量及鼻黏膜嗜酸性粒细胞计数,从而达到治疗鼻炎的作用.[结论]丝瓜藤治疗鼻炎的作用机制可能是通过降低组胺水平和嗜酸性粒细胞数量来实现的.
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卵清白蛋白宫内致敏胎鼠的实验研究
Th1或Th2型免疫反应在由环境过敏原引发的多数过敏性疾病中起重要作用.了解对抗原物质产生特定的Th细胞免疫记忆反应初如何形成是研究过敏性疾病病因的关键问题,因此寻找"致敏的窗口期"就显得非常重要[1].临床表明,纯母乳喂养的婴儿生后从未接触其它食物抗原如牛奶、鸡蛋等,但很早出现皮肤或消化道症状,并被证实为牛奶或鸡蛋过敏,提示母孕期食物抗原暴露可能是早期致敏原因之一.本研究通过对不同妊娠期BALB/c鼠腹腔注射食物抗原一卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)的方法,寻找宫内致敏的窗口期.
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吸入脂多糖对哮喘小鼠气道炎症和气道黏液分泌的影响
目的 观察哮喘小鼠吸入脂多糖(LPS,作为刺激原)其气道炎症和气道黏液分泌的变化.方法 30只清洁级BALB/c小鼠随机分为哮喘组(AST组)、LPS哮喘组(LAS组)和正常组(NS组),每组10只.哮喘组用卵清白蛋白(OVA)致敏和激发制作哮喘模型,LPS哮喘组在哮喘模型的基础上加用LPS(50 μg/mL)雾化吸入30 min,正常组用生理盐水代替OVA.检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞总数和细胞分类计数,采用ELISA检测BALF中的白细胞介素4(IL-4)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,HE染色观察肺部病理学改变,用阿尔辛蓝-过碘酸雪夫(AB-PAS)染色气道杯状细胞,免疫组织化学法检测肺组织中黏蛋白5ac (Muc5ac)的表达,荧光定量RT-PCR检测Muc5acmRNA在肺内的表达.并分析Muc5ac蛋白表达与各指标的相关性.结果 AST及LAS组小鼠较NS组在BALF中的细胞总数、嗜酸性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞百分比,IL-4和TNF-α水平、肺组织AB-PAS阳染面积,Muc5ac蛋白和mRNA表达明显升高,其差异均有统计学意义(P均＜0.05).LAS组较AST组上述气道炎症(除单核细胞数外)和气道黏液高分泌指标明显增高,差异均有统计学意义(P＜0.05).气道Muc5ac蛋白表达与BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞数、IL-4、TNF-α水平、气道AB-PAS染色阳性着色面积均呈正相关(P均＜0.05).结论 OVA致敏和激发的哮喘小鼠出现以嗜酸性粒细胞、淋巴细胞浸润为主的气道炎症及杯状细胞增生的气道黏液高分泌,且气道炎症和气道黏液高分泌关系密切.LPS可使气道炎症和气道黏液高分泌加重,可能与LPS激发了体内炎症介质的生成、活化有关.
关键词： 哮喘 小鼠 黏蛋白5ac (Muc5ac) 卵清白蛋白 -
卵清白蛋白复制哮喘动物模型的方法及评价研究进展
对近年来采用卵清白蛋白(OVA)复制哮喘模型过程中动物的选择、复制过程及评价指标进行了综述,以期为开展相关实验研究提供参考.
