首页 > 文献资料
-
灵芝类保健食品中三萜类化合物测定方法研究
灵芝[Ganoderma lucidum(Leyss.ex.Fr.)Karst.]是担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌,常用其子实体.灵芝三萜类化合物是灵芝孢子油中的主要功效成分,由于缺乏标准品,无法用液相进行全量分析,而分光光度法也缺乏统一方法[1].本文提出了一种灵芝类保健食品中三萜类化合物含量测定的可靠方法,该方法能准确测定总三萜含量,且准确度高,重复性良好,实验结果显示其R.S.D.为2.40%～3.44%,平均回收率为90.1%,方法简便,现报告如下.
-
灵芝孢子油指纹图谱研究及其混淆品鉴别
目的 建立灵芝孢子油HPLC指纹图谱并鉴别其油类混淆品.方法 采用HPLC,色谱柱为ACCHROM Unitary-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-异丙醇(51∶49),流速为1.0 mL·min-1,柱温为30℃,以蒸发光散射检测.结果 建立了灵芝孢子油脂肪酸酯类成分HPLC指纹图谱,确定了8个共有峰,分别为三亚油酸甘油酯、1,2-二亚油酸-3-油酸甘油酯、1,2-二亚油酸-3-棕榈酸甘油酯、1,2-二油酸-3-亚油酸甘油酯、1-棕榈酸-2-油酸-3-亚油酸甘油酯、三油酸甘油酯、1,2-二油酸-3-棕榈酸甘油酯、1,2-二油酸-3-硬脂酸甘油酯.灵芝孢子油混淆品的图谱与灵芝孢子油指纹图谱有明显区别.结论 建立的灵芝孢子油脂肪酸酯类成分指纹图谱能很好地区别灵芝孢子油和其混淆品.
-
HPLC-ELSD测定灵芝孢子油中甘油三酯的含量
目的 采用HPLC-ELSD法研究灵芝孢子油中甘油酯组成.方法 采用ACCHROM Unitary-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5am),流动相为乙腈-异丙醇(51∶49),流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,检测器为蒸发光散射检测器.结果 甘油三亚油酸酯、1,2-二亚油酸-3-油酸甘油酯、1,2-二亚油酸-3-棕榈酸甘油酯、1,2-二油酸-3-亚油酸甘油酯、1-棕榈酸-2-油酸-3-亚油酸甘油酯、甘油三油酸酯、1,2-二油酸-3-棕榈酸甘油酯、1,2-二-油酸-3-硬脂酸甘油酯的线性范围分别为0.028 70～0.861 0 ag、0.146 8～4.404 μg、0.0507 5～1.523 μg、0.279 6～8.388 μg、0.242 1～7.263 μg、0.613 2～18.40 μg、0.341 6～10.25 μg、0.0691 5～2.075 μg(r2=0.999 3,0.998 8,0.999 4,0.999 3,0.998 9,0.998 9,0.999 0,0.999 5),加样回收率分别为103.3％,99.0％,103.3％,97.9％,100.1％,104.4％,96.4％和105.0％,RSD分别为4.9％,4.7％,3.8％,5.0％,5.0％,3.4％,4.6％和3.2％.灵芝孢子油中8个甘油酯中相对含量较高的依次是1,2-二油酸-3-棕榈酸甘油酯、甘油三油酸酯、1,2-二油酸-3-亚油酸甘油酯、1-棕榈酸-2-油酸-3-亚油酸甘油酯、1,2-二亚油酸-3-油酸甘油酯,约占8个成分总量的90％.结论 该方法简便、专属性、重复性良好,可为灵芝孢子油的品质鉴定及油脂掺伪鉴别提供理论依据.
-
HPLC测定灵芝孢子油中灵芝酸C1的含量
目的 建立灵芝孢子油中灵芝酸C1的含量测定方法.方法 采用Agilent Zorbax-SB C8色谱柱(150 mm×4.6 mm,3.5 μm),以乙腈-0.1％醋酸(25∶75)为流动相,流速为1.0 mL.min-1,检测波长256 nm,柱温22℃.结果 灵芝酸C1在1.002～25.04 μg·mL-1内呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为97.47％.不同来源的灵芝孢子油中灵芝酸C1含量有一定差别且含量均较低,部分样品中不合有灵芝酸C1.结论 该方法简便准确,重复性好,可为灵芝孢子油的质量控制提供参考.
-
灵芝孢子油对大鼠肝纤维化的干预作用
目的 探讨灵芝孢子油对大鼠肝纤维化的影响.方法 选择40％ CCl4皮下注射诱导SD大鼠肝纤维化形成,造模同时用低、中、高剂量(0.33,0.67,2.00 g·kg-1)灵芝孢子油灌胃干预(每组10只),观察血浆谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、丙二醛(MDA)、透明质酸(HA)和肝组织MDA、羟脯氨酸(HyP)等的变化,肝组织HE和Masson染色观察病理变化.结果 灵芝孢子油能显著降低CCl4所致的肝纤维化大鼠血浆AST、ALT、MDA、HA水平(P＜0.05),降低肝组织HyP、MDA含量(P＜0.05),肝脏病理显示纤维化程度明显减轻(P＜0.05).结论 灵芝孢子油对CCl4诱导的大鼠肝纤维化具有保护作用.
-
灵芝孢子油对血管生成作用的研究
目的 观察灵芝孢子油(GSO)对血管生成的作用.方法 应用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养三维血管生成模型和鸡胚尿囊膜(CAM)模型,观察灵芝孢子油含药血清对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖和迁移的影响;及对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响.结果 灵芝孢子油含药血清,使CAM血管生成减少、变细,其中较大剂量组中、小血管生成数量明显减少.对血管内皮细胞的出芽和管腔形成有抑制作用,较大剂量组抑制作用明显.结论 灵芝孢子油具有抑制血管内皮细胞的增殖,抑制新生血管的形成的作用.
-
灵芝孢子油对N-甲基-N-亚硝酸脲诱导的大鼠视网膜损伤中Caspase-3表达的影响
目的 观察灵芝孢子油(ganoderma spore oil,GSO)对N-甲基-N亚硝酸脲(N-methyl-N-nitrosourea,MNU)诱导的视网膜外核层细胞损伤的作用及对Caspase-3时空表达的影响.方法 50 d ♀SD大鼠随机分为正常对照(NC)组、MNU造模(MNU)组、二十二碳六烯酸处理(DHA)组和灵芝孢子油处理(GSO)组.各组分别于MNU造模前0 h及造模后1d、3 d、7 d、10 d处死大鼠取材,采用RT-PCR、免疫荧光技术检测视网膜中Caspase-3表达和分布的变化,TUNEL法检测视网膜细胞凋亡情况.结果 [1]RT-PCR检测:与NC组比较,MNU组1 d、3 d、7 d视网膜Caspase-3表达增强(P＜0.01);GSO组和DHA组1 d、3 d低于MNU组(P＜0.01),1d GSO组表达较DHA组低(P＜0.01).[2]免疫荧光检测:在3 d,GSO组和DHA组Caspase-3表达水平低于MNU组,GSO组较DHA组稍弱.[4]TUNEL法检测:NC组在视网膜各层均未发现凋亡细胞,MNU造模后可见外核层细胞凋亡.GSO组和DHA组在1 d、3 d外核层细胞凋亡百分率少于对应的MNU组(P＜0.01),3 d GSO组低于DHA组(P＜0.01).结论 灵芝孢子油可能通过下调视网膜Caspase-3的表达,阻抑MNU诱导的视网膜外核层光感受器细胞凋亡的作用.
关键词： N-甲基-N-亚硝酸脲 光感受器细胞 凋亡 灵芝孢子油 二十二碳六烯酸 -
灵芝孢子油自微乳的制备及其质量评价
目的 制备不同粒径灵芝孢子油自微乳给药系统并对其质量进行评价.方法 通过优化处方工艺制备不同粒径的灵芝孢子油自微乳,并对其外观、粒径、电位、自乳化时间、载药量以及稳定性等进行考察;采用高效液相色谱法建立灵芝孢子油自微乳的质量评价方法.结果 4种不同处方的灵芝孢子油自微乳粒径分别为(27.3±1.2)、(91.1±2.5)、(142.8±2.1)、(202.6±3.4)nm,相应的电位分别为(-12.1±0.5)、(10.8±0.7)、(-12.3±0.6)、(-11.2±1.0)mV;高温和高强光实验显示,4组不同粒径的灵芝孢子油自微乳体系质量稳定.结论 自制的不同粒径灵芝孢子油自微乳质量稳定可控.
-
灵芝孢子油对H22荷瘤小鼠肿瘤生长及瘤细胞VEGF表达的影响
目的 观察灵芝孢子油对荷H22瘤小鼠肿瘤生长及瘤细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响,探讨该药抑制肿瘤的作用是否与抑制肿瘤血管生成有关.方法 小鼠右腋皮下接种H22瘤细胞(浓度1×107/ml),0.2 ml/只,给药12天后,处死动物,剥离瘤块称重,计算肿瘤生长抑制率,用免疫组织化学法检测各组小鼠肿瘤组织中VEGF的表达程度.结果 与模型组比较,灵芝孢子油对H22荷瘤小鼠肿瘤生长有明显抑制作用(P〈0.05,P〈0.01).造模后各组小鼠VEGF均为阳性表达,灵芝孢子油各组可降低小鼠H22瘤组织中VEGF的阳性表达(P〈0.05,P〈0.01).结论 灵芝孢子油对H22移植性癌细胞生长有抑制作用,可降低瘤细胞中血管生成调控基因VEGF的表达.
-
灵芝孢子油抗移植性肝癌实验研究
灵芝孢子油是破壁灵芝孢子中的脂质活性物质经浓缩后的集合,现将其抗移植性肝癌的实验研究报道如下.
-
复方灵芝孢子霜的制备及质量控制
灵芝是我国一种名贵的药材,早就有"仙草"之称,长期被视为吉祥草,<神农本草经>列为上品,誉之有长生不老的功效.灵芝提取物含有三萜类、脂肪酸、维生素B、甘露糖醇、多糖类、微量元素等多种活性成分,还有大量的酶.灵芝能增强心脏功能,促进血液循环,为延长寿命的有效补药.近代研究表明,灵芝提取液具有清除体内自由基的生理活性,对皮肤具有保湿、美白、防皱、抗衰老等作用.灵芝孢子是灵芝的遗传"种子",富含萌发新生命所需的一切新物质,其主要成分和灵芝相似,除含有三萜类、多糖等灵芝本身固有成分外,并富含蛋白质、氨基酸及维生素类成分,其中维生素E的含量高达60 mg/100 g.将灵芝提取液及灵芝孢子油,添加到膏霜类产品中,是化妆品的极好营养滋补添加剂,尚未见文献报道.
-
灵芝孢子油的研究进展
灵芝孢子油是通过超临界二氧化碳流体萃取技术从破壁的灵芝孢子中提取的油状脂质物,具有抗肿瘤、增强免疫及保肝护肝等多种生物活性.本文综述近年来灵芝孢子油在提取工艺、化学成分及药理活性方面的研究状况,以期为下一步灵芝孢子油的研究工作提供线索.
-
干扰素-α2b联合灵芝孢子油胶囊对39例乙型肝炎病毒DNA的影响
目的:观察干扰素-α2b联合灵芝孢子油胶囊对乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)的影响.方法:选择病例81例,随机分为治疗组、对照组两组.治疗组39例,用干扰素-α2b联合灵芝孢子油胶囊治疗;对照组42例,仅用干扰素-α2b治疗.观察其治疗乙肝6个月、12个月后的HBV-DNA变化情况.结果:治疗乙肝6个月、12个月后,治疗组HBV-DNA的转阴率均高于对照组.结论:干扰素-α2b联合灵芝孢子油胶囊可提高HBV-DNA的转阴率.
-
口服灵芝孢子油对小鼠的扶正及减毒作用研究
目的 观察灵芝孢子油的扶正减毒作用.方法 以正常和 H22荷瘤小鼠为对象,通过检测外周血 WBC数、骨髓有核细胞数、脾脏指数、胸腺指数来观察口服灵芝孢子油(2.5,1.25,0.625 g/kg)对于环磷酰胺(Cy)化疗及60Co放疗的减毒作用;通过小鼠碳廓清实验、血清溶血素测定实验检测药物对 H22荷瘤小鼠免疫功能的影响.结果 灵芝孢子油中高剂量组均可明显对抗由大剂量Cy、60Co照射造成的正常及荷瘤小鼠外周血WBC,骨髓有核细胞数,脾脏指数和胸腺指数下降 (P＜0.01, P＜0.05).灵芝孢子油各剂量均可显著提高荷瘤小鼠吞噬系数α,中高剂量组可明显提高荷瘤小鼠的血清半数溶血值(P＜0.01,P＜0.05).结论 灵芝孢子油可减低 Cy和 60Co所致的骨髓抑制毒性,并可显著提高小鼠细胞和体液免疫功能.
-
灵芝孢子油对人胃腺癌细胞BGC823的抑制作用
目的 观察灵芝孢子油(GSSO)对BGC823细胞增殖、凋亡、迁移的影响,探讨其对胃腺癌细胞的影响.方法 GSSO干预BGC823后,CCK-8检测细胞增殖的变化,流式检测细胞凋亡的变化,Transwell实验检测细胞迁移的变化.结果 与对照组(溶剂DMSO)相比,GSSO剂量依赖性地抑制BGC823细胞的增殖(P＜0.05)；体积分数＞0.005%时,即可促进细胞凋亡(P＜0.001).与对照组相比较,灵芝孢子油体积分数达到0.005%,即可显著性抑制BGC823细胞迁移(P＜0.001).结论 孢子油能显著抑制BGC823细胞增殖和迁移,促进BGC823细胞凋亡.
-
灵芝孢子油对人肺腺癌LTEP-a2细胞凋亡的影响
目的 观察灵芝孢子油对人肺腺癌细胞LTEP-a2增殖、凋亡与miR-16及其靶基因表达的影响,从miRNA角度揭示灵芝孢子油的抗肿瘤机制.方法 灵芝孢子油处理人肺腺癌细胞LTEP-a2 24和48 h后,采用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况,real-time PCR 检测miR-16及其靶基因bcl2和血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果 灵芝孢子油呈剂量、时间性地抑制人肺腺癌LTEP-a2细胞的增殖;当灵芝孢子油浓度达到2 μL·mL-1,细胞形态发生明显变化;Annexin-V/PI双染检测提示,灵芝孢子油在低浓度下就可促进细胞凋亡;灵芝孢子油可显著上调LTEP-a2细胞中miR-16的表达并相应下调bcl2和VEGF基因的表达.结论 灵芝孢子油能显著抑制人肺腺癌细胞LTEP-a2细胞增殖,引起细胞形态学改变.其作用机制之一是上调miR-16的表达、下调Bcl2和VEGF的表达,从而促进肺癌细胞凋亡,达到抗肿瘤的效果.
-
MPTP所致帕金森病模型黑质区TNF-α、IL-1 β的表达及灵芝孢子油的调控作用
目的 研究1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病模型中脑黑质区的免疫应答情况,探讨灵芝孢子油对MPTP引起的神经炎症反应的调节作用.方法 C57BL 小鼠分为MPTP组(组1)、灵芝孢子油+MPTP组(组2)、正常对照组(组3).组1皮下注射MPTP 30 mg/kg,连续6 d.组2在注射MPTP前两天开始鼻饲灵芝孢子油每日1.5g/kg,连续8 d.于末次注射MPTP后第8天用Western免疫印迹法检测中脑腹侧部肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白含量;用荧光半定量RT-PCR法检测中脑腹侧部TNF-α、白细胞介素-1 β(IL-1β) mRNA表达量.结果 ①TNF-α蛋白的相对含量:组1比组3明显增多,组2比组3略高,三组组间比较有明显差异(P＜0.01).②TNF-α mRNA、IL-1 β mRNA的表达量:组1比组3明显增高,组2比组3减少,组1与组2比较有显著性差异.结论 MPTP所致帕金森病模型黑质区炎症因子表达明显增高,灵芝孢子油能有效下调MPTP引起的神经炎症反应.
-
灵芝孢子油急性毒性及致突变性研究
目的 了解灵芝孢子油的毒理学安全性.方法 小鼠急性毒性试验和遗传毒性试验(Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验).结果 灵芝孢子油的小鼠经口LD50＞20 g·kg-1BW,为实际无毒级物质;在Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验中均呈阴性反应,未显示致突变作用.结论 灵芝孢子油基本无毒性和无致突变性.
-
灵芝孢子油注射液对免疫功能及生物调节因子的影响
目的:观察灵芝孢子油注射液的免疫增强作用,为进一步研发提供药效学依据.方法:以正常和H22荷瘤小鼠为研究对象,观察灵芝孢子油注射液对动物体液免疫功能、网状内皮系统吞噬功能、特异性细胞免疫功能,在荷瘤动物中观察药物对与肿瘤生长有关的生物调节因子(干扰素IFN-γ,肿瘤坏死因子TNF-α)的影响.结果:灵芝孢子油注射液(0.25、0.5、1.0 g/kg)可显著提高正常小鼠和H22荷瘤小鼠的廓清指数K、吞噬系数α和脾脏系数；灵芝孢子油注射液高、中剂量可显著提高正常小鼠和H22荷瘤小鼠由2,4-二硝基氟苯(DNFB)引起的迟发性过敏反应；灵芝孢子油注射液对正常小鼠和H22荷瘤小鼠血清半数溶血值(HC50)无显著影响.灵芝孢子油注射液高剂量能明显提高H22荷瘤小鼠血清IFN-γ水平(P＜0.05).结论:灵芝孢子油注射液具有显著的免疫增强作用,可提高血清IFN-γ水平.
-
灵芝孢子油中麦角甾醇含量测定方法研究
目的:建立灵芝孢子油的含量控制方法.方法:采用HPLC色谱法建立了灵芝孢子油中的麦角甾醇含量测定方法.结果:能准确的测定原料及制剂中的该成分的含量,该方法操作简便,重现性高,特异性强,麦角甾醇在0.316-580 mg/ml范围内呈良好的线性关系;回归方程:Y=1.08581X+1.58888,r=0.9999;平均加样回收率在99.37%-103.80%之间,RSD为1.54%.结论:可作为控制灵芝孢子油类产品质量的有效方法和依据.
