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大鼠神经干细胞中MAPKK/MEK-MAPK/ERK信号转导通路的实验研究
目的 应用丝裂原激活的蛋白激酶激酶(MAPKK/MEK)特异性阻滞剂PD98059孵育大鼠神经干细胞(NSC),探讨MAPKK/MEK-MAPK/ERK信号通路在NSC中的作用.方法 体外分离、培养大鼠NSC,应用不同浓度的PD98059孵育NSC后进行WTS-8、Nestin,BrdU、β-tubulin-Ⅲ、Western blot检测.结果 PD98059对NSC的存活、增殖和分化的影响呈剂量依赖性,在PD98059较高浓度时NSC的存活率明显下降(P＜0.05),BrdU和β-tubulin-Ⅲ的阳性细胞数明显少于正常对照组(P＜0.05).PD98059阻断ERK表达的作用呈剂量依赖性.结论 MAPKK/MEK-MAPK/ERK信号通路对大鼠NSC的存活、增殖、分化起重要作用.
关键词： 丝裂原激活的蛋白激酶激酶 细胞外信号调控激酶 神经干细胞 -
子宫内膜样腺癌组织中 p-ERK1／2的表达变化及意义
目的：探讨细胞外信号调节激酶（ p-ERK1／2）在子宫内膜样腺癌组织中的表达变化及其临床意义。方法用免疫组化SP法检测22份子宫内膜样腺癌（ EEC）组织、20份非典型增生子宫内膜（ EAH）癌组织和20份正常子宫内膜组织中p-ERK1／2的表达，并探讨其与临床病理参数的关系。结果 p-ERK1／2蛋白在正常子宫内膜组织、EAH组织和EEC组织中的表达率分别为30．0％（6／20）、65．0％（13／20）、45．5％（10／22）。与正常子宫内膜组织相比，EAH组织p-ERK1／2阳性表达率升高（P＝0．030）。 EEC组织中p-ERK1／2阳性表达率与正常子宫内膜组织及EAH组织比较均无统计学差异（P分别为0．306，0．207）。 p-ERK1／2表达与临床病理参数无关（P均＞0．05）。结论 EEC组织中p-ERK1／2表达未见升高，其过量表达与子宫内膜由正常到非典型增生相关，可能不直接参与EEC癌变过程。
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吉非替尼对非小细胞肺癌细胞PC-9增殖的抑制作用及其机制
目的 探讨吉非替尼对非小细胞肺癌细胞PC-9增殖的抑制作用及其机制.方法 将生长状态良好的PC-9细胞随机分为四组,低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给予1、10、100 μmol/L吉非替尼干预8h,对照组给予生理盐水.采用MTT法检测各组细胞增殖情况,实时荧光定量PCR法检测细胞凋亡相关因子Bax、Bcl2、Caspase3、Caspase9 mRNA及MEK/ERK信号传导通路相关因子Ras、Raf、MEK、ERK1/2 mRNA表达,免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl2、Caspase3和Caspase9及通路相关蛋白Ras、Raf、MEK及ERK1/2表达.结果 吉非替尼能够抑制PC-9细胞增殖,且其抑制率随着作用时间延长和作用浓度升高而提高(P均＜0.01);与对照组比较,低、中、高剂量组Ras、Raf、MEK、ERK1/2、Bcl2mRNA及蛋白表达明显降低,Bax、Caspase3、Caspase9 mRNA及蛋白表达明显升高,且低、中、高剂量组组间两两比较均有统计学差异(P均＜0.01).结论 吉非替尼可抑制PC-9细胞增殖、促进其凋亡;其作用机制可能与抑制MEK/ERK信号转导通路的激活有关.
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重组人生长激素对THP1单核细胞中活化蛋白1转录因子的影响
目的 研究重组人生长激素(rhCH)对THPI单核细胞中活化蛋白1(AP-1)转录因子的影响.方法 应用荧光素酶报告基因和凝胶电泳迁移率实验检测AP-1在rhGH诱导的单核细胞中的活化程度,用蛋白免疫印迹实验检测细胞外信号调控激酶(ERK)和磷酸化的ERK(p-ERK)的表达.结果 与空白对照组比较,LPS组和rhGH组AP-1的转录活性升高(P＜0.01)；rhGH+脂多糖(LPS)组AP-1的转录活性较LPS组有明显下降(P＜0.01).同时,rhGH和LPS的预处理对ERK无显著影响,但均能促进p-ERK蛋白的表达,rhGH的预处理则能减弱LPS刺激p-ERK蛋白表达.结论 rhGH可通过双向调节ERK的磷酸化而影响THP-1单核细胞中AP-1的转录活性.
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PPARγ激动剂和MEK1/2抑制剂药物组合对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化发展的抑制作用
目的 研究过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ)激动剂吡格列酮及MEK1/2抑制剂U0126药物组合对雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化的抑制作用,并初步探讨药物组合抑制动脉粥样硬化的机制.方法 ApoE-/-小鼠随机分为高脂喂养的对照组、吡格列酮喂药组和U0126与吡格列酮组合喂药3组.药物处理16周之后,将小鼠安乐死,收集血清,检测血清中总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)和甘油三酯(TG)的含量;剥离小鼠全主动脉并制备主动脉根部冰冻切片,油红O染色检测斑块大小;小鼠肝脏组织冰冻切片后油红O染色,提取肝脏组织中的脂类,定量检测TG含量.结果 药物处理没有明显的副作用,同时血清脂质水平和肝脏TG含量没有显著的影响.吡格列酮抑制雄性ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的发展,而吡格列酮与U0126组合喂药则进一步抑制动脉粥样硬化斑块.吡格列酮与U0126药物组合增加斑块弹性蛋白和胶原蛋白的含量,从而可增加斑块的稳定性.结论 吡格列酮和U0126药物组合抑制动脉粥样硬化的发展而不引起肝损伤及肝脏脂肪性病变等副作用.我们的结果揭示了一种新的治疗动脉粥样硬化方法.
关键词： 过氧化体增殖物激活型受体γ 细胞外信号调控激酶 动脉粥样硬化 甘油三酯 -
细胞外信号调控激酶在邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯诱导的尿道下裂大鼠中的表达
目的 在邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[di-(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP]诱导的先天性尿道下裂大鼠模型上,研究细胞外信号调控激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK) 1/2在DEHP暴露后的胎鼠阴茎中的表达变化,探讨尿道下裂发生机制.方法 将SD孕鼠完全随机分为DEHP组[750 mg/(kg·d)DEHP +1.5 mL大豆油]和对照组(1.5 mL大豆油),每组20只,2组分别于母鼠怀孕天数(GD)第12 ～19天持续经口灌注给药.2组分别取10只孕鼠让其正常分娩,并计数每窝产雄性活仔鼠数量；出生后1、3、7、14、21、30日龄时称取雄性仔鼠体质量并测量肛门生殖器距离(anogenital distance,AGD)；30日龄时逐个检查尿道下裂的发生情况.余孕鼠在GD20行剖宫产取雄性胎鼠,应用实时定量聚合酶链反应(qPCR)和免疫组化方法分别检测胎鼠阴茎组织中ERKl/2 mRNA和蛋白表达水平.结果 DEHP组孕期暴露诱导的尿道下裂发生率为28.2％.DEHP组每窝产雄性活仔鼠数量、各日龄雄性仔鼠体质量及AGD较对照组明显减少或缩短(P＜0.01).与对照组比较,DEHP组胎鼠阴茎组织中ERK1和ERK2 mRNA表达水平明显增加(P＜0.05)；DEHP组ERKl/2磷酸化蛋白表达水平有增加趋势.结论 DEHP诱导先天性尿道下裂发生可能与胎鼠阴茎组织中ERK信号的过度表达有关.
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高迁移率族蛋白1通过调控Erk1/2、Cyclin D1及MMP14蛋白促进肝内胆管细胞癌进展
目的 探讨高迁移率族蛋白1 (high mobility group box1,HMGB1)在肝内胆管细胞癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)进展中的作用及机制.方法 运用免疫组化法检测75例ICC癌组织石蜡标本中HMGB1蛋白表达情况,分析其表达水平与临床病理特征关系;在体外,外源性HMGB1处理细胞及siRNA抑制HMGB1表达后运用CCK-8、细胞迁移、侵袭试验研究HMGB1对肝内胆管癌细胞恶性生物学行为的影响;运用western-blot检测细胞内蛋白.结果 免疫组化检测结果显示54.67％(41/75)的肝内胆管细胞癌组织过表达HMGB1蛋白,HMGB1过表达与肿瘤分化程度(P =0.019)、临床分期(P =0.017)及血管侵犯(P =0.033)有明显正相关性.CCK-8结果显示HMGB1可以促进肝内胆管癌细胞HuCCT-1的增殖(P＜0.05).细胞迁移试验显示外源性HMGB1处理后细胞迁移数目增加到空白组的(1.85±0.08)倍(P＜0.01);同时,siRNA抑制细胞HMGB1表达后细胞迁移数目减弱到空白组的(0.48±0.04)倍(P＜0.01).同样地,细胞侵袭试验结果显示外源性HMGB1处理后的HuCCT-1细胞穿过基质胶的数目增加到空白组的(1.46±0.05)倍(P＜0.01);siRNA抑制细胞HMGB1表达后细胞侵袭数目减弱到空白组的(0.67±0.07)倍(P＜0.01).Western blot结果显示外源性HMGB1处理HuCCT-1细胞后细胞内Erk1/2、Cyclin D1及MMP14蛋白表达明显增加;siRNA沉默HMGB1表达后细胞内MMP14蛋白表达减弱.结论 HMGB1在肝内胆管细胞癌的进展中发挥作用,其机制可能与调控Erk1/2、Cyclin D1及MMP14蛋白相关.
