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蝙蝠葛活性成分对人白血病K562及肺癌A549细胞株的抑制增殖作用
[目的]探讨蝙蝠葛活性成分对体外人白血病K562及肺癌A549细胞株的抑制增殖作用.[方法]利用倒置显微镜及HE染色方法观察给予20 mg/L蝙蝠葛活性成分处理后的体外人白血病K562细胞株的形态学变化;采用血清药理学实验方法观察含药(20 mg/L蝙蝠葛活性成分)血清对体外人肺癌A549细胞株的抗增殖作用.[结果]倒置显微镜观察结果显示,给予20 mg/L蝙蝠葛活性成分后早期K562细胞出现凋亡形态学变化,细胞膜鼓泡,凋亡小体形成,晚期K562细胞出现膜破裂坏死.HE染色结果显示,给予20 mg/L蝙蝠葛活性成分后,K562细胞出现典型凋亡形态学变化,凋亡小体形成,细胞核浓缩呈蓝黑色,胞浆呈淡红色,核染色质浓缩呈碎块状.血清药理学实验结果显示,终质量分数分别为10％,20％,25％的灭活的含药大鼠血清对人肺癌A549细胞株的增殖抑制率分别为29.03％,30.55％,41.67％,与空白对照组比较明显增高(P＜0.05).[结论]蝙蝠葛活性成分对人白血病K562细胞株具有抑制增殖和诱导凋亡的作用;含蝙蝠葛活性成分血清对体外人肺癌A549细胞株具有抑制增殖作用.
关键词： 人白血病K562细胞株 肺癌A549细胞株 蝙蝠葛活性成分 血清药理学 -
浅谈甲基化抑制剂5-Aza-CdR对肺癌A549细胞株DNA甲基转移酶1及c-myc、MKi-67、p53基因表达的影响
目的 探究甲基化抑制剂5-氮杂-2'脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对肺癌A549细胞株DNA甲基转移酶1(DNMT1)及c-myc、MKi-67、p53基因表达的影响.方法 选取合适的肺癌A549细胞株作为研究对象,随机将这些细胞分为观察组和对照组,采用不同的方法进行处理,其中观察组采用5-Aza-CdR进行处理,在对照组的细胞株中不加任何的药物处理,经过3d的药物处理之后,主要采用FQ-PCR的检测技术研究5-Aza-CdR对肺癌A549细胞株DNMT1及c-myc、MKi-67、p53基因表达的影响.结果 研究发现观察组的DNMT1及c-myc、MKi-67mRNA与对照组相比,表达量明显的低于对照组,但p53 mRNA的表达量比对照组高,P<0.05有统计学意义.结论 采用甲基化抑制剂5-Aza-CdR明显的降低了肺癌A549细胞中的DNMT1及c-myc、MKi-67、p53基因表达量,使得p53基因表达量升高,主要的原因可能与基因启动子区域的去甲基化相关,为去甲基化的治疗提供了有利的线索及依据.
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地西他滨对肺腺癌细胞生长的影响
目的 探讨甲基转移酶抑制剂地西他滨(5-Aza-CdR)对肺腺癌A549细胞增殖及抑癌基因XAF1表达水平的影响.方法 用不同浓度地西他滨干预24、36和48 h后,采用MTT法检测肺腺癌A549细胞增殖的变化,半定量RT-PCR检测细胞中XAF1 mRNA的表达水平变化.结果 地西他滨浓度为1.0、5.0和10.0 μmol/L干预48 h后,细胞增殖抑制率分别为(35.1±3.2)％、(53.3±3.2)％和(64.3±2.1)％,均明显高于对照组的(3.3±1.4)％(P＜0.01),XAF1 mRNA表达水平分别为2.11±0.86、3.19±0.71和3.96±0.78,亦均明显高于对照组的1.41±0.24(P＜0.05).其作用随药物浓度增加和作用时间延长而增强(P＜0.05).结论 甲基转移酶抑制剂地西他滨抑制肺腺癌A549细胞增殖,可能与其上调细胞中抑癌基因XAF1表达有关.
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CTR1和ATP7B在人肺腺癌细胞A549的表达及其与顺铂耐药的关系
目的 探讨人肺腺癌细胞株A549和肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP对顺铂的耐药机制.方法 利用噻唑蓝法检测顺铂对A549/DDP及其亲代细胞株的细胞毒作用和生长曲线的影响,探讨A549/DDP细胞株凋亡敏感性的变化规律.采用Western blot检测该细胞株铜离子转运蛋白1(CTR1)、铜离子转运磷酸化ATP酶(ATP7B)及聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)剪切蛋白表达,分析A549细胞对顺铂耐药与CTR1、ATP7B及PARP剪切蛋白表达量的相关性.结果 A549/DDP较其亲代细胞株对顺铂引起的细胞毒性和凋亡敏感性下降;较其亲代细胞株A549/DDP中ATP7B表达增加,CTR1表达降低.结论 人肺腺癌细胞株A549对顺铂耐药的产生与细胞凋亡敏感性降低有关,且细胞内ATP7B表达增加,CTR1表达降低,或可作为细胞对顺铂的增敏靶点.
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甲基化抑制剂5－Aza－CdR对肺癌A549细胞株DNMT1及c－myc、MKi－67、p53基因表达的影响
目的：探讨甲基化抑制剂5－氮杂－2′脱氧胞苷（5－Aza－CdR）对肺癌A549细胞株中DNA甲基转移酶1（DNMT1）、c－myc、MKi－67和p53基因表达的影响。方法将肺癌A549细胞株分为两组，实验组采用5－Aza－CdR处理，对照组不加药处理；药物处理72 h后，采用FQ－PCR技术检测A549细胞株DNMT1及c－myc、MKi－67、p53基因mRNA的表达，Western blot检测DNMT1及c－myc、MKi－67、p53蛋白的表达。结果实验组DNMT1、c－myc和MKi－67mRNA的表达量明显低于对照组，而p53 mRNA的表达量明显高于对照组，两组比较差异均有统计学意义（ P＜0.01）；实验组DNMT1、c－myc和MKi－67蛋白的表达量明显低于对照组，而p53蛋白的表达量明显高于对照组，两组比较差异均有统计学意义（ P＜0.01）。结论甲基化抑制剂5－Aza－CdR可使肺癌A549细胞中DNMT1、c－myc、MKi－67基因表达降低，p53基因表达升高，这可能与基因启动子区域出现的去甲基化有关，可为去甲基化药物临床治疗肺癌提供理论依据。
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microRNA启动子区甲基化调控对人肺癌细胞A549增殖、迁移、侵袭的影响
目的 研究microRNA启动子区甲基化水平的变化对几种microRNAs (miRNA34a、miRNA34b、miRNA148a、miRNA203a)表达的影响,并进一步研究该甲基化调控对人肺癌细胞A549增殖、迁移以及侵袭能力的影响.方法 不同浓度的去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理人肺癌细胞A549,分别作用24 h、48 h、72 h,采用CCK8法检测细胞增殖情况,计算增殖抑制率.20 μmol/L 5-Aza-CdR处理A549细胞72 h,通过甲基化特异性PCR(MSP)检测A549细胞相关miRNAs启动子甲基化水平的变化;实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测A549细胞相关miRNAs表达水平的变化.20μmol/L 5-Aza-CdR处理A549细胞0h、24 h、48 h,采用划痕实验检测细胞迁移能力(计算细胞在24 h和48 h的划痕愈合率);作用48 h,采用Transwell检测细胞侵袭能力.结果 CCK8结果显示,随着5-Aza-CdR的处理浓度升高、时间延长,A549细胞的增殖抑制率逐渐增加.经5-Aza-CdR去甲基化处理后,MSP结果表明,实验组相对于对照组甲基化引物扩增条带减弱,而非甲基化引物扩增条带增强;Real-time PCR结果显示,相关miRNAs表达水平升高(P＜0.05).由划痕实验和Transwell检测结果揭示,经5-Aza-CdR处理后,A549细胞的生长愈合能力降低(P＜0.05),并且侵袭到Transwell小室滤膜下表面的细胞数亦减少(P＜0.05).结论 人肺癌细胞A549经5-Aza-CdR去甲基化处理后,miRNAs表达水平升高,进一步抑制肺癌细胞的增殖、迁移以及侵袭能力.
