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醛酮还原酶AKR1C3文献资料
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醛酮还原酶AKR1C3基因的原核表达及其生物学活性
目的 原核表达醛酮还原酶AKR1C3基因,并探讨其生物学活性.方法 经人工合成醛酮还原酶AKR1 C3基因,克隆至质粒pET-15b中,构建重组表达质粒pET-15b-AKR1C3,转化E.coli BL21 (DE3),IPTG诱导表达,表达产物经亲和层析镍柱纯化.采用荧光分光法检测酶活性,确定AKR1C3的适底物,并检测金属离子对酶活的影响.用纯化蛋白分别免疫BALB/c小鼠和新西兰大耳白兔,ELISA法检测动物血清中抗体水平,并对免疫后的兔进行血常规和生化检验,对兔和小鼠进行病理学检查.采用MTT法进行细胞毒理试验.结果 重组质粒pET-15b-AKR1 C3经双酶切及PCR鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约36 000,可溶性蛋白占菌体总蛋白的27％,纯化后纯度达95％以上.睾丸酮为AKR1C3适底物,酶活为100.086 U;金属离子Cu2+、K+可提高AKRIC3酶活;小鼠血清中高效价为5×104,兔血清中高效价为6.25× 104.AKR1C3对动物肝、肾等器官均有损害.AKR1 C3对癌细胞生长抑制作用低于正常细胞.结论 醛酮还原酶AKR1C3在E.coli BL21(DE3)中成功表达,并获得高纯度、高活性的酶,对细胞生长有抑制作用,对动物肝、肾等器官均有损害,为诊断及治疗多种癌症提供实验依据.
关键词： 醛酮还原酶AKR1C3 原核细胞 基因表达 生物学活性
