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BC02复合佐剂成分协同增强巨噬细胞固有免疫应答的分析
目的 初步分析BC02(BCG CpG DNA combination adjuvants system 02)复合佐剂构成成分在巨噬细胞激活过程中的协同加强作用.方法 采用夹心ELISA和RT-PCR法分别检测BC02复合佐剂及其构成成分[Al(OH)3佐剂及BC01 (BCG CpG DNA compound adjuvants system 01)佐剂]对小鼠巨噬细胞RAW264.7分泌的TNF-α及单核细胞趋化蛋白-l(monocyte chemotactie protein 1,MCP-1)细胞因子水平和mRNA转录水平的影响.信号通路蛋白磷酸化芯片检测经BC01和BC02刺激45 min后,RAW264.7细胞中核转录因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB)和促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的变化情况.结果 BC02对巨噬细胞的刺激存在剂量和时间依赖性,佳浓度和培养时间分别为1/10人用剂量[(7.5μg/mL BC01+20 μg/mL Al(OH)3]和24 h.Al(OH)3无机盐佐剂能协同增强BC01生物佐剂对RAW264.7细胞的刺激活性,同时,TLR-9抑制剂ODN 2088与NLRP3抑制剂MCC 950单独或联合处理RAW264.7细胞,均能显著降低BC02刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α和MCP-1细胞因子的能力.信号通路蛋白磷酸化芯片结果表明,BC02复合佐剂显著上调NF-κB信号通路中NF-KB-p105/p50、NF-κB-p65及NF-κB-p 100/p52等关键蛋白分子的磷酸化水平;同时,也能显著上调MAPK信号通路中p38 MAPK、c-Jun、SPAK/JNK及EIK-1等关键蛋白分子的磷酸化水平.结论BC02复合佐剂中BC01生物佐剂与Al(OH)3无机盐佐剂成分在激活小鼠巨噬细胞参与固有免疫应答中具有协同加强作用.
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沉默DUSP1基因对急性胰腺炎小鼠促炎因子释放的调控机制
目的 研究沉默DUSP1基因对急性胰腺炎(AP)小鼠促炎因子释放的调控机制.方法 设计2条DUSP1-siRNA序列和1条阴性对照序列,选择沉默效率高的DUSP1-siRNA2序列.建立AP小鼠模型,分为6组:对照组、AP组、AP+PD98059组、AP+干扰组、AP+siRNA组和AP+PD98059+siRNA组.建模成功后用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中促炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β 和IL-6的表达,同时检测血清淀粉酶水平.采用定量实时聚合酶链反应(qPCR)法检测胰腺组织中TNF-α、IL-1β和IL-6水平,免疫印迹法检测胰腺组织中DUSP1、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38、p-ERK、p-JNK和p-p38的表达水平.结果 与对照组相比,其他5组血清TNF-α、IL-1β、IL-6和血清淀粉酶及组织中DUSP1、TNF-α、IL-1β、IL-6、p-ERK、p-JNK和p-p38的表达均升高,差异均有统计学意义(均P<0.05).与AP组相比,AP+PD98059+siRNA组胰腺组织中DUSP1的表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05),AP+PD98059组血清TNF-α、IL-1β、IL-6和淀粉酶的表达下降,胰腺组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、p-ERK、p-JNK、p-p38的表达也下降,差异均有统计学意义(均P<0.05);而在DUSP1表达下降的AP+siRNA组中结果却相反.结论 沉默DUSP1基因可以激活促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路,从而促进AP小鼠模型中促炎因子的释放.
关键词： 促分裂原活化蛋白激酶信号通路 急性胰腺炎 促炎因子 慢病毒载体 DUSP1基因
