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他莫昔芬对子宫内膜癌RL-95-2细胞增殖及let-7g表达的影响
目的 探讨他莫昔芬( Tamoxifen,TAM)对子宫内膜癌RL-95-2细胞增殖及let-7g表达的影响.方法 采用免疫荧光染色法检测RL-95-2细胞中雌激素受体(Estrogen receptor,ER)的表达；用不同浓度的TAM(1×10-11,1×10-9、1×10-7、1×10-5、1×10-4 mol/L)处理RL-95-2细胞48和72 h,CCK-8法检测细胞的增殖活力；用1×10-7 mol/L的TAM处理RL-95-2细胞72 h,流式细胞术检测细胞周期的变化；用不同浓度的TAM处理RL-95-2细胞72 h,实时荧光定量PCR(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测细胞中let-7g的表达,借助生物信息学软件预测let-7g的靶标基因,并对其生物学功能进行分析.结果 RL-95-2细胞中ER呈阳性表达；1×10-7mol/L的TAM处理RL-95-2细胞48 h及1×10-9～1×10-5 mol/L的TAM处理细胞72 h,具有促进细胞增殖的作用,并使let-7g的表达量增加,1×10-7mol/L的TAM作用为显著；TAM促使细胞从G0/G1期进入S期；let-7g作用的可能靶标基因为UHRF2、RB1、GAS7、PLA GL2、NAB1和ZNF282.结论 适宜浓度的TAM对人子宫内膜癌RL-95-2细胞具有促增殖作用,并使细胞从G0/G1期进入S期,该作用可能部分是通过上调let-7g的表达而实现的.
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Let-7g对BEL7402/5-FU细胞CRD-BP表达及5-FU敏感性的影响
目的:探讨微小RNA(miRNA)对肝癌耐药细胞株BEL7402/5-Fu细胞CRD-BP表达及5-FU敏感性的影响.方法:构建let-7g表达载体,将Let-7g质粒表达载体转染至BEL7402/5-FU细胞;MTT试验及流式细胞术检测细胞生长变化;逆转录PCR(RT-PCR)及免疫印迹试验(Western-Blot)检测CRD-BP mRNA水平和相关蛋白表达水平的变化.结果:以浓度梯度5-氟尿嘧啶(5-Fu)处理肝癌耐药细胞株BEL7402/5-FU后,与未转染组和空载体转染组相比,let-7g转染组的细胞生长抑制率增高,而CRD-BP、P-gp蛋白表达水平均降低.结论:let-7g可能通过下调BEL7402/5-FU细胞CRD-BP、c-myc和P-gp蛋白的表达,逆转BEL7402/5-FU细胞对5-Fu的耐药性.
关键词： let-7g CRD-BP BEL7402/5-FU细胞 P-gp 5-FU -
let-7g对子宫内膜癌RL-95-2细胞中RB1表达的调控
目的:探讨子宫内膜癌RL-95-2细胞中let-7g对其靶基因视网膜母细胞瘤相关蛋白1(retinoblastoma-associated protein l,RB1)表达的调控作用.方法:运用生物信息学方法对let-7g进行靶基因预测并分析其靶基因RB1；let-7g模拟物(let-7g mimic)、模拟物对照组(mimic control)、let-7g抑制物(let-7g inhibitor)、抑制物对照组(inhibitor control)分别转染至RL-95-2细胞,采用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响；实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测转染后RBl mRNA的表达差异；Western blotting检测RB1蛋白的表达.结果:RB13'非编码区(3'UTR)含有一个let-7g结合位点,而且该结合位点在多个物种中高度保守；与未转染组相比,转染let-7g mimic可促进细胞增殖,且使RB1蛋白的表达显著降低,而转染let-7g抑制物则抑制细胞增殖,使RB1蛋白的表达显著增高,其余各组无明显变化；而各转染组RBl mRNA表达无明显差异.结论:子宫内膜癌RL-95-2细胞中let-7g可以结合到RB1的3'UTR,负性调控RB1的表达,从而促进细胞生长.
关键词： let-7g 子宫内膜癌 视网膜母细胞瘤相关蛋白1(RB1)
