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小鼠粪便中短链脂肪酸提取与检测方法的建立及应用
目的:建立小鼠粪便中三种短链脂肪酸(乙酸、丙酸、丁酸)的检测方法及其应用.方法:使用水提法和乙醚萃取法提取小鼠粪便中的短链脂肪酸(SCFA),通过高效液相色谱(HPLC)评价两种方法的提取效果,并建立短链脂肪酸的HPLC定量检测方法并进行方法学考察,利用上述建立的体系评价新琼寡糖对小鼠短链脂肪酸合成的影响.结果:确定了SCFA的乙醚萃取方法和基于HPLC的定量检测方法,被测组分浓度与其峰面积呈良好线性关系,各组分测定的相对标准偏差在1.31%~2.61%之间,平均加标回收率为86.6%~105.8%之间;对喂饲新琼寡糖小鼠粪便中的SCFA检测显示,较对照组乙酸和丙酸含量提高了1倍,丁酸含量提高了0.45倍.结论:建立了小鼠粪便中SCFA的提取和定量检测方法,并利用该方法证明了新琼寡糖能促进小鼠短链脂肪酸的合成.
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荧光标记糖电泳在新琼寡糖定性和定量分析中的应用
目的:建立荧光辅助糖电泳(FACE)对系列新琼寡糖进行定性、定量分析的方法.方法:将系列新琼寡糖用7-氨基-1,3-萘胺二磺酸钾(AGA)氨化还原衍生后,在浓度梯度为18%-25%的聚丙烯酰胺凝胶中电泳分离,于波长264nm直接检测寡糖衍生物,得到聚合度为4-14的新琼寡糖衍生物电泳分析图谱.结果:寡糖衍生物的相对电迁移率与其分子量的负三分之二次方成线性关系;运用图像分析软件对电泳图谱进行数字化转换,发现寡糖衍生物的灰度积分面积与样品浓度呈线形关系.结论:建立了快速、精确的新琼寡糖微量定性、定量分析的方法,为新琼寡糖的质量分析提供了技术支撑.
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琼胶寡糖鉴定方法的研究进展
琼胶的主要成分琼脂糖,是由β-D-半乳吡喃糖和3,6-内醚-α-L-半乳吡喃糖通过α(1-3)和β(1→4)糖苷键交替形成的线性多糖.琼胶寡糖是琼胶多糖的降解产物,分为琼寡糖和新琼寡糖,其中琼寡糖是α-琼胶酶或酸水解形成的以3,6-内醚-α-L-半乳吡喃糖为还原端、β-D-半乳吡喃糖为非还原端的寡糖产物,而β-琼胶酶降解琼胶的产物是以β-D-半乳吡喃糖为还原端的新琼寡糖.对琼胶寡糖类型的判断是琼胶酶分类鉴定的主要依据之一,本文综述了利用核磁、质谱、薄层层析和生物降解鉴定琼胶寡糖的方法和依据,为后续研究琼胶酶的分类提供了技术支持与理论依据.