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皖浙两省部分地区宠物犬肠道中犬新孢子虫的感染情况
目的 了解安徽省和浙江省宠物犬肠道中犬新孢子虫的感染情况. 方法 2013年4～12月从安徽省合肥市包河区、宣城市宣州区、滁州市凤阳县和明光市、蚌埠市龙子湖区和宿州市泗县,以及浙江省杭州市余杭区的宠物门诊采集315份新鲜宠物犬粪样.所有样品处理后先采用基于犬新孢子虫特异基因NCLI-004830的巢式PCR方法进行检测,随后对阳性样品进行PCR扩增和分析其内转录间隔区1(ITS1)序列以进一步验证.结果 315份粪样中NCLI-004830基因巢式PCR共扩增出5份犬新孢子虫DNA阳性样品,产物大小为420 bp,阳性率为1.6％,滁州和蚌埠宠物犬的阳性率分别为3.4％ (3/89)和6.5％ (2/31),其余调查点未发现犬感染犬新孢子虫.5份NCH-004830基因阳性样品的ITS1序列经PCR扩增后,均扩增出137 bp的条带,序列鉴定正确.成年犬和幼龄犬之间,雄性犬和雌性犬之间差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 安徽省滁州和蚌埠的宠物犬有犬新孢子虫感染.
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PCR诊断牛新孢子虫病的初步应用
目的 以犬新孢子虫Nc-5基因为目的 基因的PCR诊断方法.检测奶牛流产的胎牛脑组织的新孢子虫.方法 根据GenBank发布的新孢子虫特异性基因片段Nc-5基因序列,设计1对特异性引物,以犬新孢子虫(Neosporacaninum)标准株DNA为模板,PCR扩增Nc-5基凶,与pMD18-T载体连接,转化大肠埃希菌JM109,获得阳性重组质粒pMD18-T-Nc-5,并测序.以环形泰勒虫、牛巴贝斯虫、刚地弓形虫、杜氏利什曼原虫以及犬新孢子虫标准株DNA为模板进行扩增以验证PCR的特异性,采用紫外分光光度计测定犬新孢子虫标准株DNA浓度和纯度.取高纯度的DNA样品用灭菌水稀释,分别取不同量的DNA进行PCR扩增,确定PCR方法的敏感性;利用该方法对32份奶牛流产的胎牛脑组织样品进行检测,同时,对其中23份流产的母牛血样进行ELISA血清学检测(作为对照),以评价犬新孢子虫PCR方法的榆测效果.结果 克隆的犬新孢子虫标准株月的基因大小为350 bp,与GenBank(AY459289)中Nc-5基因序列一致性为98%,建立的犬新孢子虫PCR方法与环形泰勒虫、牛巴贝斯虫、刚地弓形虫和杜氏利什曼原虫均无交叉反应,低能检测犬新孢子虫DNA 3.125 pg,检测流产胎牛脑组织阳性率为18.8%(6/32).ELISA检验流产母牛血样抗体阳性率为17.4%(4/23),这4份阳性样品与其流产胎牛PCR检测结果均为阳性.结论 建立的犬新孢子虫PCR诊断方法用于检测奶牛流产的胎牛脑组织新孢子虫的感染效果较好.
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青海省乌兰县绵羊感染犬新孢子虫的血清学检查
1984年在挪威的狗上报告犬新孢子虫(Neospora caninum)以来[1],人们又将之描述为新的新孢子属和种.N. caninum为世界性广泛分布,可致严重的牛和狗的疾病,而且可致羊、山羊、鹿、犀牛和马普遍感染,水牛、红和灰狐、北美草原小狼、骆驼和猫科动物中也发现N.caninum 血清抗体.
