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长链非编码RNA UCA1靶向调控miR-185-5p对非小细胞肺癌A549细胞的作用及其机制
目的:探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)尿路上皮癌抗原1(urothelial carcinoma associated 1,UCAl)调控非小细胞肺癌(NSCLC) A549细胞增值、侵袭和迁移的作用及其机制.方法:NSCLC A549细胞培养及慢病毒转染完成后,RT-PCR检测A549细胞UCA1表达水平,荧光素酶实验验证UCA1和miR-185-5p的靶向关系,MTT检测A549细胞活性,Transwell和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力;Western blotting检测Wnt 1/β-catenin信号通路蛋白的表达.结果:sh-UCA1能显著抑制UCA1表达并促进miR-185-5p表达(均P＜0.05),miR-185 inhibitor可减弱sh-UCA1对miR-185-5p表达的促进作用(P＜0.05),UCA1能明显抑制miR-185-5p表达(P＜0.05),miR-185 mimic可减弱UCA1对miR-185-5p表达的抑制作用(P＜0.05).荧光素酶报告实验表明UCA1序列上有miR-185-5p的结合位点.sh-UCA1能显著抑制A549细胞增殖、侵袭和迁移(均P＜0.05),并能降低信号通路蛋白Wnt1、β-catenin信号和TCF-4表达水平(均P＜0.05);miR-185 inhibitor能显著减弱sh-UCA1对A549细胞的增殖、侵袭、迁移及对Wnt 1/β-catenin通路蛋白表达的抑制作用(P＜0.05).结论:UCA1可通过靶向miR-185-5p促进NSCLC细胞的增殖、侵袭和迁移,其作用机制与Wnt 1/β-catenin信号通路激活有关.
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lncRNA FOXD2-AS1通过调控miR-185-5p/CCND2分子轴诱导胃癌细胞MGC-803对阿帕替尼的耐药性
目的:探讨lncRNA FOXD2-AS1 (FOXD2-AS1)通过调控miR-185-5p/CCND2分子轴参与胃癌细胞对阿帕替尼耐药性的分子机制.方法:收集无锡市第五医院2016年4月至2017年12月间收治的资料完整的25例胃癌患者癌组织和相应癌旁组织标本,采用qRT-PCR检测FOXD2-AS1、miR-185-5p和CCND2在胃癌组织或细胞系中的表达水平;采用CCK-8、Transwell和AnnexinV-FITC/PI双染流式术检测胃癌细胞对阿帕替尼药物的敏感性;采用双荧光素酶报告基因验证FOXD2-AS1、miR-185-5p和CCND2的靶向关系,并通过Western blotting和qRT-PCR检测其调控关系.结果:FOXD2-AS1在胃癌组织和阿帕替尼耐药细胞株中高表达;同时,过表达FOXD2-AS1可促进胃癌MGC-803/AP细胞对阿帕替尼的耐药性.双荧光素酶报告基因证实FOXD2-AS1靶向作用miR-185-5p并下调其表达水平.miR-185-5p通过抑制胃癌MGC-803/AP细胞增殖、侵袭和促进凋亡进而下调FOXD2-AS1对胃癌细胞阿帕替尼耐药性的促进作用.miR-185-5p可靶向负调控CCND2的表达,FOXD2-AS1通过下调miR-185-5p对CCND2的抑制作用进而促进胃癌MGC-803/AP细胞增殖、侵袭和抑制凋亡,从而上调胃癌细胞对阿帕替尼的耐药性.结论:FOXD2-AS1通过调控miR-185-5p/CCND2分子轴诱导胃癌细胞对阿帕替尼的耐药性.
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干扰UCA1及抑制miR-185-5p对非小细胞肺癌β-Catenin通路的活化、自噬和存活影响
目的 探究在非小细胞肺癌中,长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)尿路上皮癌抗原1(urothelial carcinoma associated 1,UCA1)敲降miR-185-5p对β-Catenin通路的影响.方法 选取非小细胞肺癌A549细胞为研究材料,设置A549空白对照组、sh-scramble阴性对照组、sh-UCA1干扰组、miR-185 inhibitor组和sh-UCA1+inhibitor组.Western blot验证体系中增殖、凋亡和自噬相关分子表达;qRT-PCR鉴定体系中lncRNAUCA1和miR-185-5p的表达;生物信息学软件和荧光素酶实验检测lncRNA UCA1和miR-185-5p之间结合性.BrdU染色鉴定细胞增殖,免疫荧光染色检测细胞中LC3+细胞含量.结果 在A549细胞中,lncRNA UCA1干扰后,UCA1表达量显著下降并促进miR-185-5p表达,有效抑制肺癌细胞增殖和自噬,促进凋亡发生(P＜0.01);经生物信息学和双荧光素酶报告系统验证lncRNA UCA1和miR-185-5p有较强结合性;并进一步验证lncRNAUCA1可以有效抑制β-Catenin/TCF-4及Beclin 1和LC3Ⅱ表达,降低miR-185-5p对肺癌细胞增殖和自噬效果,减少细胞内LC3含量(P＜0.01).结论 lncRNA UCA1干扰后,可以有效降低UCA1对miR-185-5p的抑制效果,进而解除β-Catenin/TCF-4、Beclin 1和LC3Ⅱ受到的抑制作用,从而减少肺癌细胞自噬发生和减缓增殖.
