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脱氢表雄酮对高脂诱导的人脐静脉内皮细胞MMP-2表达的影响及CYP19在其中的作用
目的 观察脱氢表雄酮(DHEA)对高脂诱导的人脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响,以及细胞色素P450芳香酶(CYP19)在此过程中的作用.方法 取健康新生儿脐带,分离并培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC).将HUVEC分为4组:正常对照组予以DMEM/F12培养基,ox-LDL组予以DMEM/F12培养基+30 mg/L ox-LDL,DHEA组予以DMEM/F12培养基+1μmol/L DHEA,ox-LDL+DHEA组予以DMEM/F12培养基+30 mg/L ox-LDL+1μmol/L DHEA.作用24 h后,采用实时荧光定量PCR和ELISA法检测各组细胞MMP-2 mRNA及蛋白表达.将HUVEC分为pcDNA3.1-CYP19-GFP转染组、pcDNA3.1-GFP空质粒组,通过脂质体介导的方法分别转染pcDNA3.1-CYP19-GFP真核表达质粒和pcDNA3.1-GFP空质粒.将pcDNA3.1-CYP19-GFP转染组再分为3组:CYP19组予以无血清DMEM/F12培养基,CYP19+ox-LDL组予以无血清DMEM/F12培养基+30 mg/L ox-LDL,CYP19+ox-LDL+DHEA组予以无血清DMEM/F12培养基+30 mg/L ox-LDL+1μmol/L DHEA.将pcDNA3.1-GFP空质粒组再分为3组:空质粒组予以无血清DMEM/F12培养基;空质粒+ox-LDL组予以无血清DMEM/F12培养基+30 mg/L ox-LDL,空质粒+ox-LDL+DHEA组予以无血清DMEM/F12培养基+30 mg/L ox-LDL+1μmol/L DHEA.均培养24h后,采用实时荧光定量PCR和ELISA法检测各组细胞MMP-2mRNA及蛋白表达.结果 ox-LDL组MMP-2 mRNA及蛋白表达较正常对照组升高,ox-LDL+DHEA组较ox-LDL组降低(P均<0.05).CYP19+ox-LDL+DHEA组MMP-2 mRNA及蛋白表达较空质粒+ox-LDL+DHEA组降低,CYP19+ox-LDL组较CYP19组升高,CYP19+ox-LDL+DHEA组较CYP19+ox-LDL组降低(P均<0.05).结论 DHEA能够抑制高脂诱导的MMP-2表达,过表达CYP19能够增强DHEA的这一作用.
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脱氢表雄酮对氧化型低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白1表达的影响及其机制
目的 观察脱氢表雄酮对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞分泌单核细胞趋化蛋白1的影响,并探讨其作用机制是否与细胞色素P450芳香酶的催化作用有关.方法 使用脂质体转染法将含有细胞色素P450芳香酶基因的质粒和空白对照质粒分别转染至体外培养的血管平滑肌细胞,24 h后给予氧化型低密度脂蛋白诱导及脱氢表雄酮刺激,采用逆转录聚合酶链反应、实时荧光定量聚合酶链反应及酶联免疫吸附法检测转染后各组细胞单核细胞趋化蛋白1的基因和蛋白表达水平.结果 与氧化型低密度脂蛋白刺激组比较,给予氧化型低密度脂蛋白和脱氢表雄酮后单核细胞趋化蛋白1的分泌明显降低(P＜0.05).转染含有细胞色素P450芳香酶基因的质粒组和空白对照质粒组单核细胞趋化蛋白1 的分泌差别不明显(P＞0.05).结论 脱氢表雄酮能抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白1的分泌升高,可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一.而这一过程可能并不通过转化为雌雄激素而发挥,也许与其本身的生物学活性有关.
