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小鼠髓样细胞触发受体-2基因小发卡状RNA慢病毒载体构建
目的 构建小鼠髓样细胞触发受体-2(TREM2)基因小发卡状RNA(shRNA)慢病毒表达载体,并检测其功能.方法 针对小鼠TREM2基因设计合成3对shRNA序列,将其分别与线性化GV248载体连接,转化至感受态大肠埃希菌DH5α,构建TREM2基因shRNA重组慢病毒载体(TREM2-shRNA-1、TREM2-shRNA-2、TREM2-shR-NA-3).用重组载体转染293T细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光(GFP)后,进行滴度测定.取对数生长期BV2小胶质细胞,分为TREM2-shRNA-1感染组、TREM2-shRNA-2感染组、TREM2-shRNA-3感染组、阴性对照组及空白对照组.TREM2-shRNA-1感染组、TREM2-shRNA-2感染组、TREM2-shRNA-3感染组、阴性对照组分别感染TREM2-shRNA-1、TREM2-shRNA-2、TREM2-shRNA-3、shRNA空质粒,空白组不做任何处理.感染120 h取各组细胞,Q-PCR法检测各组TREM2mRNA,计算细胞沉默效率.结果 TREM2-shRNA-1、TREM2-shRNA-2、TREM2-shRNA-3转染293T后镜下均观察到GFP,包装浓缩的慢病毒滴度分别为(4×108)、(4×108)、(5×108)TU/mL.与空白对照组和阴性对照组比较,TREM2-shRNA-1感染组、TREM2-shRNA-2感染组、TREM2-shRNA-3感染组TRME2 mRNA相对表达量均降低(P均<0.05);与TREM2-shRNA-1感染组、TREM2-shRNA-3感染组比较,TREM2-shRNA-2感染组TRME2 mRNA相对表达量降低(P均<0.05).TREM2-shRNA-1感染组、TREM2-shRNA-2感染组、TREM2-shRNA-3感染组、阴性对照组的沉默效率分别为49.4％ ±3.98％、79.7％ ±2.01、65.3％ ±2.41％和39.2％ ±6.98％,TREM2-shRNA2组沉默效率高.结论 成功构建TREM2-shRNA-1、TREM2-shRNA-2、TREM2-shRNA-3.TREM2-shRNA-1、TREM2-shRNA-2、TREM2-shRNA-3均可沉默小鼠BV2小胶质细胞中TREM2基因表达,以TREM2-shRNA-2沉默效果好.
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TREM-2在DSS诱导小鼠肠炎中的作用
目的 探讨髓样细胞触发受体-2(TREM-2)对小鼠肠炎模型肠道炎症发生发展的影响.方法 构建葡萄糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠实验性肠炎模型,采用流式细胞术检测TREM-2在炎症肠道细胞的表达,采用TREM-2敲除小鼠构建小鼠肠炎模型,检测体重、临床评分以及结肠长度,采用荧光定量PCR检测小鼠脾脏(SPs)和肠系膜淋巴(MLNs)细胞因子的表达.结果 肠炎小鼠肠道TREM-2表达显著高于正常小鼠,TREM-2基因敲除肠炎小鼠体重以及结肠长度均显著高于野生型对照组,疾病临床评分(DAI)以及肠道病理评分显著低于野生型对照组小鼠,脾脏和肠系膜淋巴结的促炎性细胞因子(IFN-y和IL-17a)表达显著低于野生型对照组小鼠(P＜0.05).结论 TREM-2增强肠道炎症反应和病理损伤,增强促炎性细胞因子分泌,从而调控炎症性肠病的发生发展,TREM-2有望成为治疗炎症性肠病的一个有效靶点.
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髓样细胞触发受体1和2与恶性肿瘤关系的研究进展
越来越多的证据支持炎症与肿瘤形成的相关性,其中模式识别受体启动的免疫应答对于肿瘤相关炎症的触发至关重要.髓样细胞触发受体(TREM)是一种新近发现的免疫球蛋白跨膜受体超家族,主要表达于髓样细胞,其主要家族成员为TREM-1和TREM-2.它们通过与配体结合被激活后发生交联反应,从而调节炎症反应.近年来,TREM与恶性肿瘤之间的关系得到广泛关注与研究.本文就TREM-1和TREM-2与恶性肿瘤关系在医学领域的研究进展作一综述,以期为牙周炎与口腔肿瘤的相关关联研究提供思路.
关键词： 髓样细胞触发受体-1 髓样细胞触发受体-2 慢性炎症 恶性肿瘤
