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乏白细胞富血小板血浆与富白细胞富血小板血浆对兔牙髓间充质干细胞增殖和成骨分化的影响
目的 比较乏白细胞富血小板血浆(以下称乏白细胞血浆)与富白细胞富血小板血浆(以下称富白细胞血浆)对兔牙髓间充质干细胞增殖和成骨分化的影响.方法 从新西兰大白免门牙分离、培养并鉴定牙髓间充质干细胞,经鉴定所提取的牙髓细胞纯度较高,符合间充质干细胞要求.采集大白免耳中动脉血,制备兔源性乏白细胞血浆与富白细胞血浆.经鉴定乏白细胞血浆中白细胞平均密度为<100/μL、血小板平均密度为9.46×105/μL,富白细胞血浆中白细胞平均密度为9.89×103/μL、血小板平均密度为9.42×105/μL.分别采用乏白细胞血浆、富白细胞血浆、乏血小板血浆培养牙髓间充质干细胞(分别设为乏白细胞组、富白细胞组、对照组),观察各组细胞增殖率及牙髓间充质干细胞标志物NS、成骨分化标志物Runx-2相对表达量.结果 两组同浓度乏白细胞或富白细胞血浆培养时细胞增殖率比较无统计学差异(P均>0.05);当乏白细胞或富白细胞血浆浓度为0～10％时,两组细胞增殖率随血浆浓度增加而升高;当乏白细胞或富白细胞血浆浓度为15％时,两组细胞增殖率均进入平台期.乏白细胞组和富白细胞组NS、Runx-2相对表达量均高于对照组,且乏白细胞组Runx-2相对表达量高于富白细胞组(P均<0.05).结论 乏白细胞血浆较富白细胞血浆在促牙髓干细胞成骨分化方面更具优势,临床修复骨缺损时建议使用乏白细胞血浆.
关键词： 牙髓间充质干细胞 乏白细胞富血小板血浆 富白细胞富血小板血浆 细胞增殖 成骨分化 -
甲氨蝶呤对人牙髓间充质干细胞生物学特性的影响
目的:探讨不同浓度甲氨蝶呤(MTX)对人牙髓间充质干细胞(hDPSCs)生物学特性的影响.方法:从新鲜拔除的健康年轻恒牙中分离培养并鉴定hDPSCs;然后将细胞分为4组,分别用含0、0.1、1.0、10.0 μmol/L的MTX进行培养,检测不同浓度MTX对hDPSCs的集落形成、增殖(CCK-8法)、迁移(划痕法)、成骨分化能力(茜素红染色及Western blot实验)以及细胞周期(流式细胞术分析)影响.结果:随着MTX浓度增加,hDPSCs的细胞集落形成能力及迁移速度逐渐降低,呈浓度依赖性;1.0、10.0 μmol/L组较0.1μmol/L组对细胞增殖的抑制更显著(P＜0.05),但1.0、10.0 μmol/L组间相比无统计学差异(P＞0.05);细胞周期分析显示,加入MTX后细胞被阻滞于S期,S相细胞从35.4％增加到60.3％ ～64.5％(P＜ 0.05),但3个实验组S相细胞百分数相比P＞ 0.05;茜红素染色显示,1.0、10.0 μmol/L组明显抑制矿化结节的形成;Western blot结果显示,各组间RUNX2、OSX、ALP的表达水平相比P＞0.05.结论:MTX对hDPSCs的各项生物学特性均会产生不利作用,但影响程度会受药物浓度、作用时间的影响.
