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Wistar大鼠视网膜神经元高糖模型葡萄糖浓度和培养时间的筛选
目的 筛选Wistar大鼠视网膜神经元高糖模型的葡萄糖浓度及培养时间.方法 取出生1～3 d Wistar大鼠分离视网膜神经元进行传代培养,尼氏染色法鉴定细胞;实验分5组:A组培养液葡萄糖浓度为0 mmol·L-1(正常对照组),B组浓度为10 mmol·L-1,C组浓度为15 mmol·L-,D组浓度为25 mmol·L-1,E组浓度为35 mmol·L-1.分别培养24 h、48 h、72 h后用MTT法检测各组细胞OD值,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率.结果 倒置显微镜观察分离培养细胞,大部分细胞于接种24h后贴壁,少数细胞长出较短的突起,并有向中央聚集生长的现象.2～3d后长出突起的神经元数目增多,突起长度增加,约为自身胞体长度的1倍.培养5～7d后神经元突起进一步增多、变长.经尼氏染色后细胞质呈蓝紫色,尼氏小体颗粒状结构清晰.非神经元细胞胞质基本不着色,细胞核呈淡紫色、圆形,核仁清晰可辨,神经元率达91％.各实验组在培养24h后OD值均低于正常对照组,但差异无统计学意义(P＞0.05).随培养时间延长OD值继续下降,48 h后各组OD值比较差异有统计学意义(P＜0.01);其中B组及C组与A组比较差异无统计学意义(均为P＞0.05);D组OD值明显下降,与A组比较差异有统计学意义(P＜0.05),E组下降更明显,与A组比较差异有统计学意义(P＜0.01).72 h后各组OD值比较差异有统计学意义(P＜0.01);其中B组及C组与A组比较差异无统计学意义(均为P＞0.05);D组及E组与A组比较差异有统计学意义(均为P＜0.01).各组在培养24h后视网膜神经元凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05).48 h后各组凋亡率比较差异有统计学意义(P＜0.01);其中B组及C组与A组比较差异无统计学意义(均为P＞0.05);D组凋亡率明显升高,与A组比较差异有统计学意义(P＜0.05);E组凋亡率升高更明显,与A组比较差异有统计学意义(P＜0.01),且与D组比较亦有统计学意义(P＜0.05).72 h后各组凋亡率比较差异有统计学意义(P＜0.01);其中B组及C组与A组比较差异无统计学意义(均为P ＞0.05),D组及E组与A组比较差异有统计学意义(均为P＜0.01).结论 葡萄糖浓度为25 mmol·L-1培养48 h是视网膜神经元高糖模型佳葡萄糖浓度及干预时间.
关键词： 大鼠视网膜神经元细胞 高糖模型 葡萄糖浓度 培养时间
