您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
线粒体DNA/遗传文献资料
-
腺相关病毒2-ND4基因转染细胞线粒体的研究
背景 Leber遗传性视神经病变(LHON)是导致视神经退行性变的线粒体遗传性疾病,主要与线粒体11778位点突变导致ND4蛋白合成异常有关,构建含正常ND4蛋白的载体是基因治疗的关键.由于ND4 DNA存在于线粒体,而转染的外源基因只能进入细胞核,不能作用于突变的线粒体DNA.探讨将ND4基因成功转染到线粒体是LHON的基因治疗的关键. 目的 验证人工合成的ND4基因所构建的重组腺相关病毒(AAV)转染细胞后产生的ND4蛋白能否进入线粒体.方法 常规体外培养转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系(293细胞),将细胞分为AAV-ND4转染组和单纯AAV转染组,分别将两种转染液加至各组的培养基中,分别于转染后12、24、36和48 h用Y03量子点免疫荧光法检测细胞质中ND4的表达,细胞质中绿色荧光为ND4表达阳性. 结果 培养的293细胞生长良好,达到80％融合.荧光显微镜下显示,AAV-ND4基因转染组293细胞质中可见大量绿色荧光,而单纯AAV转染组仅可见线粒体蛋白红色荧光.结论 AAV-ND4基因转染细胞后产生的ND4蛋白能够进入线粒体,为LHON的基因治疗提供了实验依据.
