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瞬时受体电位M4通道相关的心脏疾病
瞬时受体电位通道(TRP)4是Ca2+激活的非特异性阳离子通道,参与心脏电活动的产生和传导.当其基因突变导致功能缺失时可通过减少钠通道Nav1.5或抑制电压依赖性钠通道的开放,降低心脏传导速度,从而引发心脏传导阻滞;在心肌肥厚时引起肥大心肌细胞的后除极化,导致致心律失常电重构及心律失常.TRPM4发挥作用的潜在分子机制,还需进一步研究.
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大鼠 Ad-pDOV-mCMV-TRPC4-EGFP-3 FLAG 质粒的构建、基因结构分析及鉴定
目的：大鼠Ad-pDOV-mCMV-TRPC4-EGFP-3FLAG基因重组表达质粒的构建及其基因结构分析。方法：通过UCSC（ http：//genome. ucsc. Edu/）分析大鼠瞬时受体电位通道4（ TRPC4）及其家族基因组结构，并通过NCBI确定了TRPC4的蛋白结构域，通过BioGPS（ http：//biogps. org/#goto=welcome）分析其表达模式；PCR扩增大鼠TRPC4蛋白编码区域（ CDS），并通过限制性内切酶与穿梭载体pDOV-mCMV-MCS-EGFP-3FLAG进行连接，其产物转化细菌感受态细胞；挑取阳性克隆进行菌落PCR鉴定，并对阳性克隆进行测序验证，测序正确的克隆即为目的质粒，命名为pDOV-mCMV-TRPC4-EGFP-3FLAG；将该质粒转染HEK293细胞进行腺病毒包装，并命名为Ad-pDOV-mCMV-TRPC4-EGFP-3FLAG，通过 Western blot验证蛋白的表达。结果：生物学分析发现TR-PC4蛋白保守的TRP-2、ANK及TRP结构域，通过BioGPS分析发现TRPC4在杏仁核和海马中表达明显，在血管内皮细胞中也有表达；PCR克隆获得3000 bp 的 TRPC4 CDS 序列，CDS 被亚克隆到表达载体 pDOV-mCMV-MCS-EGFP-3FLAG中，酶切鉴定及测序验证正确；进行腺病毒包装后的病毒可以在HEK293细胞中表达TRPC4-EGFP-3FLAG 融合蛋白，Western blot证实其为含flag标签的蛋白且大小为128 KDa。结论：成功构建了大鼠TRPC4的腺病毒表达载体Ad-pDOV-mCMV-TRPC4-EGFP-3FLAG。
