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吗啡慢性暴露对C6细胞胞外谷氨酸浓度的影响及其机制
目的 探讨慢性吗啡暴露对C6胶质瘤细胞胞外谷氨酸浓度的影响及其机制.方法 培养好的C6细胞随机分为4组:对照组(细胞培养液培养,不加任何药物)、10 Mor组(10 μmol/L吗啡处理48 h)、撤药组(10 μmol/L吗啡预处理48 h后停药12 h)、5 Mor组(10 μmol/L吗啡预处理48 h、停药12h后再以5μmol/L吗啡复处理4h).采用磺酰罗丹明B(SRB)法检测细胞存活率,高效液相色谱测定细胞外液谷氨酸(Glu)水平,Western blot法检测细胞兴奋性氨基酸转运蛋白3(EAAT3)蛋白表达,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测EAAT3 mRNA表达水平.结果 (1)对照组细胞外液谷氨酸浓度为(18.03 ±1.11) mg/L.10 μmol/L吗啡作用C6细胞48 h后细胞外液Glu浓度上升至(41.76 ±7.14) mg/L,与对照组比较明显增加(P＜0.05).撤药12 h后Glu浓度降至(25.22±2.26) mg/L,后再以5μmol/L吗啡处理4h后,细胞外液Glu浓度再次升至(40.18±7.08) mg/L,较对照组与撤药12h均明显增加(P＜0.05).(2)C6细胞经吗啡作用48 h后EAAT3蛋白表达较对照组明显减少(P＜0.05),撤药12h后EAAT3蛋白表达水平与对照组差异无统计学意义(P＞0.05);5μmol/L吗啡再次处理4h,EAAT3蛋白表达再次明显升高(P＜0.05).(3)4组中EAAT3 mRNA表达水平差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 吗啡慢性暴露引起C6细胞胞外Glu浓度增加,与EAAT3蛋白表达下降有关,EAAT3表达下调可能为转录后水平调节.
关键词： 吗啡 谷氨酸 兴奋性氨基酸转运蛋白3 胶质瘤细胞 -
神经病理性疼痛大鼠背根神经节神经元EAAT3的分布特征和表达变化
目的 观察神经病理性疼痛大鼠背根神经节(DRG)神经元中兴奋性氨基酸转运蛋白3(EAAT3)的分布特征和表达变化.方法 SD雄性大鼠50只,随机分为对照组、假手术组、坐骨神经慢性缩窄性损伤模型(CCI)组(3、7、14d组).所有大鼠行热、机械痛觉过敏痛觉阈值测试完成后用免疫荧光和免疫印迹技术检测EAAT3的分布特征及蛋白表达水平.结果 (1)与对照组和假手术组比较,CCI组大鼠术后3d开始直至术后14 d均出现明显的机械、热痛觉过敏(P＜0.05).(2)对照组大鼠DRG中EAAT3均匀分布于中小直径神经元的胞质和胞膜,平均荧光强度为17.88±1.57.CCI术后7、14 d EAAT3从胞质向胞膜转移,平均荧光强度分别降至13.94±1.75、14.55±1.43；两组EAAT3蛋白表达水平也比对照组明显下降(P＜0.05).结论 CCI组大鼠DRG中EAAT3的蛋白表达水平和分布改变与大鼠疼痛行为学改变在时相上基本一致,外周初级感觉神经元中EAAT3分布及表达变化可能参与神经病理性疼痛的发生和发展过程.
关键词： 兴奋性氨基酸转运蛋白3 背根神经节 神经病理性疼痛 痛觉过敏 谷氨酸
