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顺序特异性引物法检测人胰腺癌细胞株PCNA-1的K-ras基因点突变的方式
胰腺癌具有发病隐匿,症状不典型,病情发展快,生物恶性程度高,预后差等特点.胰腺癌的切除率一般只在20%左右,五年生存率低于5%[1].本研究旨在采用顺序特异性引物法(SSP)对胰腺癌细胞株的K-ras基因点突变方式.
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顺序特异性引物法检测胰腺穿刺物及胰液中K-ras基因点突变
自1994年以来，我们采用多聚酶链反应-顺序特异性引物（PCR-SSP）检测胰腺癌细针穿刺组织及胰液中K-ras基因第12位密码子有无突变及突变方式，现报道如下。 一、对象与方法 1.标本来源：自1994年1月至1996年12月，行病变组织细针穿刺共88例，其中胰腺癌35例，慢性胰腺炎20例，壶腹癌8例，胆管癌7例，胰岛素瘤6例及正常胰腺组织12例。采用内窥镜逆行胰胆管造影或术中胰管穿刺或术后外引流收集到胰液47份，其中胰腺癌17例，慢性胰腺炎17例，胰岛素瘤、壶腹癌、胆管癌各3例及胰腺外伤4例。穿刺物或胰腺离心沉淀物用蛋白酶K裂解液裂解，上清液用作PCR模板。50 μl反应体系中含50 mmol/L KCl、10 mmol/L Tris-HCl、pH 8.5、1.8 mmol/L MgCl2 ,引物浓度各1.0 μmo1/L,4种dNTP浓度各200 μmo1/L,Taq DNA聚合酶1.5 U。每一体系：94℃45 s变性，55 ℃45 s退火，72 ℃ 45 s延伸，共35个循环。扩增产物用8%聚丙烯酰胺凝胶电泳，溴乙啶染色，紫外灯下观察。
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聚合酶链反应顺序特异性寡聚核苷酸探针反向杂交法在HLA-DRB1分型中的应用
目的:探讨聚合酶链反应顺序特异性寡聚核苷酸探针(polymerase chain reaction-sequence spe-cific oligonucleotide probes,PCR-SSOP)反向杂交法应用于人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-DRB1配型的可行性.方法:随机选取25例已行聚合酶链反应顺序特异性引物(polymerase chain reac-tion-sequence specific primers,PCR-SSP)法HLA-DRB1配型的肾移植受者的血标本,采用PCR-SSOP反向杂交法再次配型,并与PCR-SSP法的结果比较.结果:两法的一致性达92%.2例不一致的患者经再次PCR-SSOP反向杂交法配型后,其中1例与PCR-SSP结果一致,PCR-SSOP反向杂交法的平均操作时间为4小时30分.结论:PCR-SSOP反向杂交法是一种能以中等分辨度进行等位基因分型的方法,操作较简单,结果解读客观,适用于临床肾移植配型.
