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RNAi沉默c-Met基因对人脑胶质瘤U251细胞增殖及侵袭能力的影响
目的 探讨RNAi沉默c-Met基因对人脑胶质瘤U251细胞增殖及侵袭能力的影响.方法 分别构建3种靶向c-Met基因的短发卡RNA (shRNA)序列,以脂质体转染的方式导入人脑胶质瘤U251细胞,并筛选出稳定表达的细胞株.采用PCR和Western blot检测c-Met-shRNA转染后U251细胞c-Met的表达情况,以筛选出可有效沉默c-Met基因的shRNA.c-Met基因沉默后,采用MTT法和流式细胞术检测U521细胞增殖情况,采用Transwell法和细胞划痕实验检测U251细胞侵袭和迁移情况,采用裸鼠荷瘤实验研究U251细胞体内成瘤性.结果 成功构建可有效沉默c-Met基因的c-Met-shRNA1.沉默c-Met后,c-Met mRNA以及蛋白的表达均显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05);而且可明显抑制U251细胞的增殖、侵袭、迁移以及体内成瘤能力,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 RNAi沉默c-Met基因可有效抑制人脑胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭、迁移以及体内成瘤能力.
关键词： RNAi沉默 c-met 人脑胶质瘤U251细胞 -
RNAi沉默p53基因对HeLa细胞核转录因子3表达及其对细胞增殖和侵袭能力的影响
目的:探讨RNAi沉默p53基因对宫颈癌HeLa细胞核转录因子3(STAT3)的表达,及对HeLa细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:构建3种靶向p53基因的shRNA1～3序列,并转染HeLa细胞,采用逆转录PCR和Western blot检测细胞p53 mRNA和蛋白的表达,以筛选有效沉默p53的shRNA序列.将筛选的序列转染HeLa细胞后,采用逆转录PCR和Western blot检测STAT3 mRNA和蛋白的表达;采用四甲基噻唑蓝法(MTT)检测细胞增殖;采用Transwell检测细胞侵袭能力.结果:构建的3种p53-shRNA均可沉默宫颈癌HeLa细胞p53的表达,尤以shRNA3的沉默效果好,转染shRNA3后,HeLa细胞p53 mRNA和蛋白的表达量分别为0.23±0.05和0.41 ±0.11,显著低于未转染组、空质粒组、p53-shRNAl组和p53-shRNA2组(P均＜0.05),故后续试验均以shRNA3转染HeLa细胞.将shRNA3序列转染HeLa细胞沉默p53基因后,p53-shRNA3组STAT3 mRNA和蛋白表达量分别为1.09±0.21和1.46±0.25,显著高于未转染组(0.53±0.10和0.74±0.14)及空质粒组(0.55±0.11和0.73±0.15)(P均＜0.05).MTT法分析结果显示,在孵育24、36、48和72h时,p53-shRNA3组HeLa细胞增殖能力均显著大于未转染组和空质粒组(P均＜0.05).Transwell法分析结果显示,转染12 h后p53-shRNA3组穿膜细胞数目(59.36±5.33)显著高于未转染组(15.73±1.29)和空质粒组(16.01±1.34)(P均＜0.05).结论:RNAi沉默p53基因能够上调宫颈癌HeLa细胞STAT3的表达,并促进细胞的增殖及侵袭能力.
