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肇庆地区血小板供者库的建立及应用
目的 建立肇庆地区已知人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)基因分型及人类血小板抗原(human platelet alloantigen,HPA)HPA-1~6、9、15基因型的无偿机采血小板供者库,为临床血小板输注无效(platelet transfusion refractory,PTR)患者提供HLA及HPA相合的血小板.方法 采用聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(polymerase chain reaction-sequence specific olignuliotide probe,PCR-SSO)检测血小板供者的HLA基因分型及聚合酶链反应-序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)检测HPA-1~6、9、15基因型.对杂合度高的HPA-3、15随机抽样20个标本进行测序.对3例患者进行HLA-I分型.结果 成功检测出101名无偿血小板捐献者HLA及HPA-1~6、9、15基因型;HPA-3、15的测序结果与PCR-SSP一致.HLA-A位点等位基因共检出11个;HLA-B位点共检出等位基因20个.3例患者中的1例从已知的HLA血小板库中找到完全一致供者,另外2例也找到三位点吻合的血小板供者.结论 建立基于HLA-I类抗原及HPA基因分型的血小板供者资料库,有助于给PTR患者提供HLA和HPA相合的单采血小板.
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流式细胞仪结合序列特异性寡核苷酸探针基因分型方法在血小板供者资料库建立中的应用
目的 探讨高通量流式细胞仪结合序列特异性寡核苷酸探针(FLOW-SSO)技术在人类血小板抗原( HPA)基因分型中的应用.方法 采用FLOW-SSO技术对1378例汉族血小板捐献者HPA1～6,15系统的基因型进行检测；并以10份国际输血协会(ISBT)第12届血小板免疫学术研讨会提供的质控样品对FLOW-SSO技术的可靠性进行考核.以3家供应商提供的不同聚合酶链反应-序列特异引物法(PCR-SSP)试剂,对50份血小板样品的基因分型结果进行比对试验.分型结果采用x2检验考察HPA系统的基因型频率分布是否符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律.结果 通过FLOW-SSO方法获得的1379例血小板供者HPA等位基因频率如下,HPA-1a为0.9927,HPA-1b为0.0073,HPA-2a为0.9536,HPA-2b为0.0464,HPA-3a为0.5700,HPA-3b为0.4300,HPA-4a为0.9982,HPA -4b为0.0018,HPA-5a为0.9804,HPA-5b为0.0196,HPA-6a为0.9822,HPA-6b为0.0178,HPA- 15a为0.5337及HPA-15b为0.4663.基因频率检测结果经x2检验,其分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律.ISBT提供的10份样品考核结果相符率为100％.50份血小板样本采用3种不同的PCR-SSP试剂测定的HPA1～6,15基因分型结果,与FLOW-SSO技术测定结果完全一致.结论 FLOW-SSO基因分型技术有便捷、重复性好及高通量等特点,适用于血小板供者资料库的血小板基因分型.
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南宁地区HLA、HPA已知基因型血小板供者资料库的设计及建立
目的 设计和建立适合南宁地区人群的HLA、HPA已知基因型血小板供者资料库,为免疫性PTR和血小板减少症患者的治疗提供保障.方法 以4 243名无血缘关系的南宁地区健康供者为对象,研究和分析南宁地区人群HPA基因多态性,以7 001名南宁地区骨髓库供者的HL4基因分型检测数据,分析这些供者的HL4-A,-B基因多态性,并以此为数据基础,预测所建立血小板供者资料库的库容.以预测的佳库容为设计目标,建立南宁地区HLA、HPA已知型血小板供者资料库.供者的HPA-1-17w,HLA-A,-B基因分别使用PCR-SSP、PCR-SSO等基因分型方法.结果 根据对南宁地区人群HPA-1-17w(n=4 243)和HLA-A,-B(n=7 001)基因多态性研究分析,计算推导得到当血小板供者资料库库容为283人时,约有95％的患者能在该库中找到≥1名HPA-1-17w基因型全匹配的供者;当血小板供者资料库库容为819人时,约有80％的患者能在该库中找到≥1名HLA-A,-B CREG全匹配的供者;当血小板供者资料库库容为1 781人时,约有90％的患者能在该库中找到≥1名HLA-A,-B CREG全匹配的供者,如果需要考虑ABO同型血小板输注时,则按人群的ABO血型分布频率将该库容量做相应测算和列出各自库容量的变化.目前所建立的南宁地区HLA、HPA已知基因型血小板供者资料库,包含1 072名献血者数据,按本研究设计的佳库容量预测方案评估,在不考虑ABO同型的情况下,约98.58％患者能在该资料库中找到≥1名HPA基因型全匹配的供者,约83.49％患者能在该血小板供者资料库中找到≥1名HLA-A,-B CREG全匹配的供者.结论 本研究为血小板抗原和/或抗原基因已知型血小板供者资料库的建立提供了设计思路,并已建立了适合南宁地区人群的含1 072名HLA和HPA献血者已知基因型的血小板供者资料库.
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新乡地区HPA基因分型供者库在免疫性血小板输注无效中的应用研究
目的 建立新乡地区已知HPA-1-18基因型的无偿机采血小板供者库,为临床血小板输注无效(PRT)患者提供HPA相合的血小板,方法 建立PCR-SSP检测HPA-1-18基因型检测方法;采用固相凝集法对52名PRT患者,做血小板同种抗体筛查;应用HLA抗体特异性试剂盒检测患者血清群体反应性抗体;对血小板同种抗体筛查阳性患者,采用已知HPA基因型的标准谱血小板傲抗体鉴定,并对其进行HPA基因分型;采取HPA抗体无对应抗原的供者血小板进行输注.结果 成功检测出150名无偿血小板捐献者HPA-1-18基因型.在52例PRT病例中,检出血小板同种抗体23例(阳性率44％),其中5例鉴定为抗-HPA (21.7％),分别为HPA-3a 2例;HPA-15b 3例;其余HLA抗体阳性18例.结论 对PRT患者采用HPA基因型相合的方法进行输注取得临床效果.
