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人RHD基因外显子多态性研究
目的研究人RHD基因外显子多态性,探讨中国人RhD阴性个体遗传学机制.方法用PCR-SSP法检测40例RhD(+)、120例RhD(-)和2例弱D型样本的10个外显子.结果 40例RhD阳性和2例弱D型样本均检出RHD基因的10个外显子,120例RhD阴性样本中28例样本的10个外显子全存在(占23.33%),19例样本10个外显子部分存在(占15.83%),大部分为中间缺失型,73例样本10个外显子全缺失(占60.835%).从120例RhD阴性样本中检出的19例Del型样本均能检出RHD基因的10个外显子.结论 RhD表型阴性个体的RHD基因外显子结构具有多态性,主要表现为RHD基因全缺失、RHD基因部分缺失、RHD基因不缺失3种.
关键词： RHD等位基因 RhD表型 外显子 聚合酶链反应-序列特异性引物 多态性 -
RHD等位基因37bp和RHC等位基因109bp插入序列检测
目的 研究RHD等位基因37bp插入序列和RHC等位基因109bp插入序列是否存在多态性.方法 应用PCR-SSP技术检测82例汉族RhD阳性样本,206例汉族和70例维族RhD阴性样本RHD等位基因37bp插入序列和RHC等位基因109bp插入序列.结果 上述样本均检测不到RHD基因37hp插入序列,即无RHDψ假基因.82例汉族RhD阳性样本中有76例样本有RhC抗原,其中3例(3.95%)检测不到109bp插入片段;206例RhD阴性汉族样本中有75例样本有RhC抗原,其中4例(5.33%)检测不到109bp插入片段;70例RhD阴性维族样本中,无RhCC表型,3例RhCc样本均检测到109bp插入片段;其余204例Rhcc表型样本均未检测到109bp插入序列.结论 中国人RHC等位基因109bp插入序列存在多态性,尚不能肯定中国人是否不存在RHD ψ假基因.
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两个新的RHD等位基因的分子研究及家系分析
目的 对新发现的2个RHD等位基因进行分型,并对其家系成员进行分型研究.方法 应用单克隆抗体检测Rh血型抗原.对新发现的等位基因再用基因分型技术检测RHD基因型,扩增先证者及家系成员RHD基因10个外显子,作直接测序分析；并用序列特异性引物聚合酶链反应(sequence specific primer-polymerase chain reaction,PCR-SSP)技术检测先证者2的家系成员.结果 2例先证者均为RhD阴性.先证者1测序分析显示为RHD 78 del C,家系调查发现先证者1妹妹的Rh表现型和测序结果与先证者一致；先证者2测序分析为第4外显子520G/A,第8外显子1080始缺失10个碱基,家系调查的测序结果显示先证者的RHD 520 G＞A+1080 del 10基因来源于母亲.2个新的等位基因(RHD 78delC、RHD 520 G＞A+1080 del 10)已被GenBank受理(GQ477180、GU362076).结论 这两个新发现的RHD等位基因为RHD假基因,家系调查显示均可以稳定遗传.
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中国人中发现2种新的弱D型
目的 鉴定并确认在中国人中发现的2种新的弱D型.方法 对2份从上海市血液中心无偿献血者血样中筛查出的RhD抗原减弱的标本,采用常规Rh分型试剂对其作血清学分型,使用D-screen试剂盒分析其RhD抗原表位;对RHD基因全部外显子测序并分析杂合性,使用PCR-SSP方法对新的弱D型作基因分型.结果 在2名弱D型献血者中分别发现2种新RHD等位基因:RHD(R10P)和RHD(A414V);D抗原表位分析结果与弱D表型相一致.建立了测定新等位基因的PCR-SSP检测方法.结论 在中国人群中发现了2种新的弱D型,初步阐明了这2种弱D表型的分子机制.
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用于研究RHD等位基因的有核红细胞体外表达系统的建立
目的 建立用于研究RHD等位基因的有核红细胞体外表达系统.方法 从Rh阴性献血者的外周血中分离单个核细胞,并从中进一步分离、培养有核红细胞,同时使用含有野生型RHD等位基因和绿色荧光蛋白的慢病毒表达质粒和包装质粒共转染HEK 293细胞包装慢病毒,收获包装病毒颗粒后感染体外培养的RhD阴性有核红细胞,诱导有核红细胞分化,后使用针对9种不同D抗原表位的15种单克隆抗体对红细胞RhD抗原表位进行流式分析.结果 用携带野生型RHD基因的慢病毒感染体外培养的RhD阴性有核红细胞,成功表达了抗原表位完整的D抗原,RhD阴性有核红细胞的感染效率为51.7％.结论 成功建立了用于研究RHD等位基因的有核红细胞体外表达系统,可进一步应用于弱D、部分D和D放散型相关的RHD突变型等位基因的体外表达研究.
