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飞行时间质谱与TaqMan探针技术在结核病易感性相关基因单核苷酸多态性筛选中的应用
目的 对比分析飞行时间质谱技术(MALDI-TOF)和TaqMan探针筛选与结核病易感性相关单核苷酸多态性(SNP)位点的结果,以及联合应用的方法学和效果评价.方法 选取2010年10月至2011年4月在深圳市第三人民医院收治并确诊的结核病患者400例为结核病组,对照组为同时期收集的健康体检者300名,利用MALDI-TOF对选取的7个SNP位点(rs2227476、rs1800795、rs56077270、rs1800797、rs2227484、rs2227472和rs2227473)同时进行基因分型,初步筛选易感SNP位点;与结核病易感相关的单个SNP位点,采用基于TaqMan探针技术的实时荧光定量PCR对同样的标本再进行基因分型,比较两种方法的准确性与敏感度;以rs2227473位点为实例对分型结果的基因频率进行分析,确定肺结核的易感SNP.结果 MALDI-TOF分型成功率为99.7％(698/700),TaqMan探针技术为98.4％(689/700);在基因分型过程中,MALDI-TOF与TaqMan探针方法对1例标本的分型结果不一致,经过对此分型结果进行了测序验证,MALDI-TOF的分型结果正确,MALDI-TOF在准确性和敏感度比TaqMan法稍高.位点rs2227473基因频率分析中,结核病组G等位基因频率(90.3％,722/800)明显高于对照组(82.5％,495/600)(x2=6.911,P=0.009).结论 上述肺结核易感基因的筛选方法是可行的;实例分析中,将两种方法联合应用,发现了IL-22基因rs2227473位点等位基因G可能与肺结核发病相关,两位点中等位基因A可能为保护性基因.
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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定食品真菌影响因素的探讨
目的 探讨培养基成分、培养时间对基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析真菌的影响以及该法鉴别产毒和非产毒真菌的可能性.方法 (1)实验模式菌株红曲茵分别接种于查氏酵母提取粉琼脂培养基(CYA)和麦芽提取粉琼脂培养基(MEA),曲霉属分别接种于CYA、查氏琼脂培养基(CA)、马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基(PDA)和麦芽汁琼脂培养基(MA),青霉属分别接种于CA、CYA和MA培养基,镰孢菌属分别接种于CA、MA和PDA培养基,培养10 d(红曲茵)和7 d后进行MALDI-TOF-MS分析;(2)模式菌株寄生曲霉接种于PDA培养基,在培养5、7、10和14 d时进行MALDI-TOF-MS分析;(3)产毒和非产毒(或低产毒)红曲茵和黄曲霉分别接种于MEA和PDA培养基,培养7 d后进行MALDI-TOF-MS分析.结果 CYA、PDA、CA和MA分别是红曲菌、曲霉属黄绿组和镰孢茵属、曲霉属黑色组、青霉属进行MALDI-TOF-MS分析的适培养基;真菌进行MALDI-TOF-MS分析的佳培养时间为7 d;从MALDI-TOF-MS质谱图上尚不能区分红曲菌高产毒株和低产毒株;黄曲霉产毒株和非产毒株的质谱图各异.结论 MALDI-TOF-MS进行真菌鉴定时必须对培养基、培养时间进行标化.
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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测与鉴定食品真菌的研究
目的 对基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)检测与鉴定常见食品真菌进行探索.方法 对MALDI-TOF-MS检测食品真茵所用基质、基质与样品比例、上样方法等进行筛选,获得优化的实验条件,并对方法的重现性和实际应用进行研究.结果 MALDI-TOF-MS分析不同属真菌所需的适基质各异,红曲霉属与镰孢菌属适基质均是MBT;曲霉属、青霉属与酵母茵的适基质均是IAA;上样的适基质/样品比例为1:1;混合液滴干燥法为佳上样方法.结论 MALDI-TOF-MS直接分析真菌的方法稳定、重现性好.
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替米沙坦干预心房颤动模型猪的右心房心肌靶蛋白鉴定
目的 研究替米沙坦(TMST)对实验性心房颤动(AF)模型猪的影响,分离并鉴定右心房组织差异表达蛋白.方法 健康家猪18只完全随机法分为3组,每组6只:正常对照(NC)组右心房植入电极不起搏,房颤(AF)组右心房植入电极并快速起搏,替米沙坦(TMST)组右心房植入电极快速起搏并给予TMST干预.实验前及2周后测量各组实验猪心室收缩末期左、右心房面积(LAESA、RAESA).实验结束时进行右房组织Masson染色观察,双向蛋白质电泳分离各组右心房心肌差异表达蛋白质,采用基质辅助激光解吸电离-飞行时间-质谱技术鉴定靶蛋白.结果 AF组采用快速右心房起搏成功建立AF猪模型.与AF组比较,TMST干预可以减少AF诱发率和胶原纤维表达,并使LAESA和RAESA缩小[LAESA:(630.6±10.9)mm2比(744.3±29.9)mm2;RAESA:(553.4±13.7)mm2比(677.9±26.3)mm2,均P＜0.05].双向蛋白质电泳及质谱分析鉴定出翻译起始因子5A、热休克蛋白27、NADH脱氢酶铁硫蛋白8在TMST组表达减少.结论 翻译起始因子5A、热休克蛋白27、NADH脱氢酶铁硫蛋白8可能是与TMST减低实验猪AF诱发率、抑制心房重构相关的靶蛋白.
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多维液相色谱质谱组合体系在志贺菌蛋白质组学研究中的应用
目的 建立多维液相色谱质谱组合体系,用以获得福氏志贺菌更完整的蛋白质组信息. 方法 对福氏2a志贺菌301株(Sf2a301)全菌蛋白进行预分离,顺序抽提胞浆蛋白和膜蛋白.应用二维液相色谱基质辅助激光解吸附飞行时间串联质谱(2D LC-MALDI-TOF/TOF)和二维液相色谱电喷雾串联质谱(2D LC-ESI-MS/MS)构成的多维液相色谱质谱组合体系进行蛋白分离和鉴定,分别应用MASCOT和SEQUEST软件搜索NCBI上Sf2a301的蛋白质数据库,并对两种串联质谱的互补性及组合后优势进行分析. 结果 MALDI-TOF/TOF和ESI-MS/MS分别鉴定到Sf2a301株的960个蛋白和729个蛋白,总共鉴定1 231个蛋白;两种技术方法鉴定蛋白质的平均氨基酸序列覆盖率分别为14.3％和13.9％,组合鉴定后覆盖率升高为15.7％.MALDI和ESI两种离子化方式具有互补性,表现为MALDI更倾向于离子化分子质量偏小、碱性、胰酶消化后羧基末端为精氨酸的肽段;ESI更倾向于离子化分子质量偏大、疏水、胰酶消化后羧基末端为赖氨酸的肽段. 结论 应用2D LC-MALDI-TOF/TOF和2D LC-ESI-MS/MS鉴定Sf2a301全蛋白质组,既互相确认又相互补充.多维液相色谱质谱组合体系无论在蛋白质鉴定数量还是可信程度上都优于单一串联质谱,可作为复杂样品的蛋白质组学研究技术平台.
关键词： 福氏志贺菌 基质辅助激光解吸电离 电喷雾电离 蛋白质组学 -
肝细胞癌患者血清蛋白质组成分的双向凝胶电泳-飞行时间质谱分析
目的分析肝细胞癌患者与正常人血清双向凝胶电泳的差异蛋白质,寻找肝癌早期血清学诊断的可能指标.方法固相pH梯度双向凝胶电泳分离肝细胞癌患者及正常人血清总蛋白.银染显色,PDQuest 2DE软件分析,对差异蛋白质点用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定其胶内酶解后的肽质指纹图谱, 用PepIdent软件查询SWISS-PROT数据库.结果获得了重复性较好的双向电泳银染图谱.图像分析检测3块胶平均匹配的点数占平均蛋白点数的匹配率是70.2%.等电聚焦方向的平均偏差为(1.02±0.22) mm,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方向的平均偏差为(0.97±0.14) mm.将23个差异点进行胶内原位酶解-质谱指纹图分析,获得15张肽质指纹图,查询数据库进行了初步鉴定.结论固相pH梯度双向凝胶电泳分离人血清总蛋白获得重复性较好的结果,但仍需进一步探索如何去除高丰度已知蛋白及脂类等物质的方法,以便得到分辨率更高的双向电泳银染图谱.MALDI-TOF-MS肽质指纹图分析鉴定的结果为人肝细胞癌血清学诊断指标的筛选提供了依据.
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表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术在大肠癌及其肝转移患者中肿瘤标记物应用研究
目的 进行大肠癌肝转移肿瘤标志物的早期检测,为大肠癌肝转移患者早期诊断提供依据.方法 应用飞行质谱技术检测53例大肠癌及27例大肠癌肝转移血清蛋白质谱,寻找差异蛋白.结果 大肠癌患者与肝转移患者检测到6个蛋白质M/Z峰值有统计学意义.获得分子量为5641.82 Da、8703.02 Da、6205.51 Da、3377.19 Da、5907.43 Da的5个峰在肝转移患者中表达均低表达,4353.81 Da在肝转移患者中高表达.联合6个M/Z峰区分大肠癌与肝转移的患者的准确率为88.75%(71/80);敏感度为85.19%(23/27);特异度为90.57%(48/53).结论 飞行质谱技术可用于大肠癌与大肠癌肝转移患者的早期预测.
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应用蛋白质组学方法筛选乳腺癌相关蛋白质
目的：筛选乳腺癌组织与癌旁正常乳腺组织之间的差异蛋白，寻找和鉴定与乳腺癌相关的蛋白质。方法选取新鲜乳腺浸润性导管癌组织及癌旁正常乳腺组织行双向凝胶电泳，得到的差异蛋白点进行图像分析，运用质谱分析对所筛选的差异蛋白点做质谱鉴定，根据检索软件Mascot计算得到蛋白的分值，输入NCBI数据库来获得蛋白质的信息。结果浸润性导管癌及癌旁正常乳腺组织分别获得（1040±15）个蛋白位点和（1003±17）个蛋白位点，差异在2倍以上共有28个蛋白位点，其中22个蛋白点表达上调，6个蛋白点表达下调，有23个蛋白点得到鉴定（蛋白得分大于70分），其中得分高的为热休克蛋白27、70、90。结论热休克蛋白27、70、90在乳腺浸润性导管癌组织中呈现高表达状态，提示它们与乳腺癌密切相关，有可能成为乳腺浸润性导管癌的联合特异性标记物。
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"中国病原分枝杆菌质谱数据库"构建及验证
目的 构建国产基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)仪的病原分枝杆菌鉴定数据库,评价其鉴定准确性并与国外同类产品比较.方法 "中国病原分枝杆菌质谱数据库"的构建:收集分枝杆菌国际标准菌株19种、19株及"资源化"分枝杆菌临床分离株42种、183株;采用改良研磨-超声裂解法提取菌体蛋白.以国产MALDI-TOF MS仪(microTyper MS)为基础进行谱图采集及数据库构建,每株菌提取物平行滴加于12个靶点,每个靶点采集2次,得到24张质谱图;后按标准精选20张优质谱图,设置大出峰数目、小出峰频率及质量容差,经分析软件生成主谱图(MSP).数据库验证:收集不同地区来源分枝杆菌305株,以16S rRNA基因、hsp65及rpoB测序为金标准,比较以本数据库为基础的microTyper MS与以Mycobacteria Library 3.0数据库为基础的进口MALDI-TOF MS仪(MALDI-TOF MS Microflex)鉴定分枝杆菌的准确性及谱图特征.结果 构建的"中国病原分枝杆菌质谱数据库"容量为42种、202株,平均每种纳入菌株4.8株,排在前10位的是堪萨斯分枝杆菌16株、胞内分枝杆菌16株、戈登分枝杆菌16株、偶发分枝杆菌16株、鸟分枝杆菌16株、脓肿分枝杆菌16株、结核分枝杆菌15株、马赛分枝杆菌11株、阿罗普研院分枝杆菌10株及yongongens分枝杆菌2株;305株验证菌株经测序确认为29种;基于本数据库,种水平鉴定准确率为99.67％(304/305),高于MALDI-TOF MS Microflex(97.38％,297/305),差异有统计学意义(χ2=4.06,P<0.05).结论 构建的"中国病原分枝杆菌质谱数据库"质量达到临床常规应用要求,就国内流行株而言,鉴定准确率优于国外同类产品.
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比较 Bruker Microflex MALDI-TOF MS和 Vitek 2 Compact 全自动分析系统对酵母菌的鉴定能力
目的：比较Bruker Microflex MALDI-TOF MS和Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统对酵母菌的鉴定能力。方法回顾性研究。利用 Bruker Microflex MALDI-TOF MS 和 Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统同时对2013年3月至2014年3月上海交通大学医学院附属新华医院临床标本分离得到的742株酵母菌进行鉴定，结果不符菌株用基因测序予以确证。结果 Bruker Microflex MALDI-TOF MS和Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统对699株念珠菌的种鉴定符合率分别为100％（699／699）和99.6％（696／699），对43株酵母样菌的种鉴定符合率分别为90.7％（39／43）和79.1％（34／43）。这2种仪器均未鉴定出马尔尼菲青霉菌，但本研究利用MALDI-TOF MS技术建立了马尔尼菲青霉菌的蛋白质图谱。结论 Bruker Microflex MALDI-TOF MS对酵母菌的鉴定率高于Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统，且操作快速简便，成本低廉，准确率高，可用于临床微生物实验室常见酵母菌的常规鉴定。（中华检验医学杂志，2015，38：382-386）
关键词： 酵母菌 念珠菌属 光谱法 质量 基质辅助激光解吸电离 -
应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定假丝酵母菌
目的 评价应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)的假丝酵母菌鉴定的准确性.方法 应用分子方法包括PCR基因扩增和测序分析鉴定WC的假丝酵母菌,应用MALDI-TOF-MS鉴定分子方法确认的假丝酵母菌,建立白假丝酵母菌复合体鉴定数据库.结果 从VVC标本中应用分子方法鉴定出包括白假丝酵母菌、非洲假丝酵母菌、都柏林假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、C.bracarensis、C.nivariensis、季也蒙假丝酵母菌、葡萄牙假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌、乳酒假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌、C.metapsilosis、热带假丝酵母菌、奥默柯达菌、费比恩毕赤酵母菌、胶红酵母菌、酿酒酵母菌、阿萨希丝孢酵母等在内的假丝酵母菌324株,应用MALDI-TOF-MS能够正确鉴定株314株,正确鉴定率为96.91%,3株白假丝酵母菌、1株非洲假丝酵母菌、1株光滑假丝酵母菌、2株C.metapsilosis、1株季也蒙假丝酵母菌和1株酿酒酵母菌鉴定错误.1株Torulaspora pretoriensis未能鉴定.应用自建白假丝酵母菌复合体数据库可正确鉴定白假丝酵母菌153株(98.08%)、非洲假丝酵母菌37株(97.37%)和都柏林假丝酵母菌1株(100%),总正确鉴定率为97.95%(191/195).结论 MALDI-TOF-MS可用于快速和准确鉴定假丝酵母菌,对假丝酵母菌复合体的鉴定有优势.(中华检验医学杂志,2018,41:296-299)
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无锡地区新生儿耳聋基因的MALDI-TOF-MS筛查分析
目的 分析无锡地区耳聋致病基因突变热点及携带频率,建立无锡地区新生儿听力及耳聋基因联合筛查的临床推广标准.方法 根据中国人群常见耳聋相关基因热点突变设计,利用MALDI-TOF-MS飞行时间质谱检测技术,以2013至2014年期间无锡市妇幼保健院2 796例新生儿为研究对象,采集足跟血并提取基因组DNA,针对中国人群特点,进行4个基因(GJB2,GJB3,SLC26A4和12s rRNA)20个突变位点的基因突变检测,结合OAE及AABR听力筛查,并对结果进行t检验分析.结果 检出耳聋基因突变新生儿158例,携带率为5.65％,其中单位点突变152例(5.44％),复合突变6例(0.21％).在阳性检出样本中,GJB2及SLC26A4基因突变占总阳性样本的88.61％(140/158).阳性突变位点数多的是GJB2基因235delC位点,共检出73例(46.20％),其次是SLC26A4基因IVS7-2A＞G位点(30/158,18.99％).此次检测中还发现了3例纯合突变样本,均是12s rRNA基因1555A＞G突变.通过耳聋基因筛查结合听力筛查,共确诊4例中度及重度耳聋新生儿.结论 MALDI-TOF-MS对非综合征型耳聋患者的突变检出率较高,与传统常用基因检测方法相比,具有检测位点多、覆盖率高、高通量等特点,能够满足临床对常见耳聋基因检测的要求,为耳聋基因突变携带儿未来的婚育、用药及提早干预提供了积极有效的遗传指导意义.
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基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪在醋酸钙鲍曼不动杆菌复合群鉴定中的应用研究
目的 评价基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对醋酸钙鲍曼不动杆菌复合群的鉴定价值,了解浙江大学医学院附属第二医院醋酸钙鲍曼不动杆菌复合群的菌种分布情况.方法 回顾性选取2012年1至7月我院临床分离的502株醋酸钙鲍曼不动杆菌复合群非重复菌株,用MALDI-TOF MS进行再鉴定,同时用16S-23S rRNA基因间隔区序列分析来确定所有菌株的菌种,比较二者鉴定结果的差异.结果 502株醋酸钙鲍曼不动杆菌复合群用MALDI-TOF MS再鉴定,包括鲍曼不动杆菌431株(85.9％),皮特不动杆菌68株(13.5％),醋酸钙不动杆菌3株(0.6％);对502株醋酸钙鲍曼不动杆菌复合群16S-23S rRNA基因间隔区序列分析结果显示:403株为鲍曼不动杆菌(80.3％),68株为皮特不动杆菌(13.5％),28株为医院不动杆菌(5.6％),3株为醋酸钙不动杆菌(0.6％).与16S-23S rRNA基因间隔区序列分析相比较,MALDI-TOF MS错误地将所有28株医院不动杆菌鉴定为鲍曼不动杆菌,其余菌株的鉴定结果完全一致.结论 MALDI-TOF MS可将醋酸钙鲍曼不动杆菌复合群菌株准确鉴定到种,具有操作简便、快速、成本低,重复性好的优点.MALDI-TOF MS有望在未来成为日常临床微生物鉴定的理想工具.
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MALDI-TOF MS用于碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌同源性分析的初步研究
目的 评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术对碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKPN)同源性分析的能力.方法 收集山东大学附属省立医院儿科病房及心外科病房2011年4月至2013年10月分离的21株CRKPN菌株,分别采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)、多位点序列分型(MLST)及MALDI-TOF MS技术进行回顾性同源性分析.结果 MALDI-TOF MS将21株CRKPN菌株根据亲缘关系远近分为三群,其中17例菌株为II群,同源性高于75%,从获得的17株菌的蛋白质谱图结果分析,其蛋白峰大致一致,由此推断其亲缘关系比较接近,与PFGE和MLST结果基本一致.而同源性较低(<60%)的H13与上述菌株存在差异,尤其在分子量4365、5381及6289处蛋白峰有显著差异,PFGE分析显示H13与其他菌株的同源性为61.0%,MLST分型为ST54.结论 MALDI-TOF MS技术能够准确对碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌进行同源性分析,较之其他同源性分析方法,快速方便,可满足医院感染工作的需求,及时防止耐药菌株在医院感染的爆发与流行.
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基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术对非结核分枝杆菌的鉴定与分型
目的 以CLSI-MM18A(病原菌DNA测序鉴定的解释指南)推荐的RPOB(利福平耐药)基因为参考标准,评价基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术对非结核分枝杆菌的鉴定和分型的水平的能力.方法 收集2012年至2016年从临床分离的不同感染部位的55株NTM菌株,利用 RPOB 进行管家基因测序,并对测序结果进行系统发育进化分析;同时利用MALDI-TOF MS技术对菌株进行鉴定,并对蛋白指纹图谱进行聚类分析;评价两种方法对NTM鉴定和分型的一致性.结果 RPOB基因对55株NTM显示了很好的鉴定(测序结果TM值均大于99%)和分型(可区分到复合群内的种或亚种)能力;法国BioMerieux MALDI-TOF MS技术对55株NTM的鉴定到属的水平为89.1%,鉴定到种的水平为78.2%,鉴定水平良好;利用SARAMS Premium软件对蛋白指纹图谱的聚类分析也显示出了良好的分型能力.结论 MALDI-TOF MS技术可以有效的对非结核分枝杆菌进行鉴定和分型,其检测周期短,操作简便,在实验室中与RPOB基因联合应用有着很好的互补性.
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国产基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱系统 Clin-TOF-ⅡMS与 Bruker Biotyper质谱系统在革兰阴性菌的鉴定效能评估
目的：评估国产基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱系统Clin-TOF-Ⅱ型仪器及其搭载的BioExplorer V2.3鉴定数据库（简称Clin-TOF质谱系统）对革兰阴性菌的鉴定效能。方法方法学评价研究。共纳入1999至2000年及2014至2016年北京协和医院革兰阴性菌1025株，分属32个属，56个种或种复合体。对照方法为Bruker Biotyper质谱系统：Bruker Autoflex Speed型号仪器及其搭载的Biotyper v3.1数据库（简称Bruker质谱系统）。采用直接涂抹法平行使用2套质谱系统对研究纳入菌株进行菌种鉴定。当某一种或两种质谱鉴定结果为“不可信结果”或两种质谱鉴定结果不一致时，采用16S rDNA扩增测序进行结果验证。结果 Clin-TOF质谱系统准确鉴定率为98.05％（1005／1025）。Bruker质谱系统准确鉴定率为99.22％（1017／1025）。 Clin-TOF质谱系统有17株仅鉴定至属水平，2株无鉴定结果。另外将1株蒙氏假单胞菌错误鉴定为恶臭假单胞菌。 Bruker质谱系统有2株菌仅鉴定至属水平，3株无鉴定结果。但是将3株嗜水气单胞菌中的2株错误鉴定为豚鼠气单胞菌，1株错误鉴定为中间气单胞菌。对于本研究纳入的1株黏金黄杆菌和1株伯氏金黄杆菌，两个质谱系统都仅鉴定到属水平。结论国产Clin-TOF质谱系统在鉴定革兰阴性菌方面有临床效能。（中华检验医学杂志，2017，40：41-45）
关键词： 革兰氏阴性菌 光谱法 质量 基质辅助激光解吸电离 -
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在幽门螺杆菌鉴定中的应用
目的：优化幽门螺杆菌（ H.pylori）基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（ MALDI-TOF MS）检测前处理方法，建立MALDI-TOF MS的H.pylori 超级图谱并验证其鉴定能力。方法收集2015年1月至2016年7月期间复旦大学附属华东医院临床胃活检组织样本469例，进行H.pylori分离培养和鉴定，并利用16 S rRNA测序验证，共获得91株H.pylori菌株用于后续MALDI-TOF MS检测。在进行MALDI-TOF MS检测前，比较50％异丙醇、甲酸乙腈（1∶1）以及70％甲酸用于H.pylori前处理的效果。从91株临床分离的H.pylori菌株中随机选取40株进行MALDI-TOF MS检测，再进一步分别随机抽取原始图谱分为5株组、10株组、20株组和30株组，每组重复3次，采用SARAMIS Premium软件分析，建立超级图谱。剩余的51株H.pylori菌株用于验证新建超级图谱的鉴定能力。结果70％甲酸进行前处理效果好。30株组建立的超级图谱的鉴定率高，可达90.2％。用于验证的306张质谱图中46.1％的图谱取得了高可信度（≥90％）的鉴定结果、22.2％的图谱取得了中低度可信的鉴定结果，31.7％的图谱无鉴定结果。结论本研究优化了MALDI-TOF MS鉴定H.pylori的前处理方法，并建立了H.pylori超级图谱，提高了MALDI-TOF MS对于H.pylori的鉴定能力，为临床上快速准确地鉴定H.pylori提供了新的检测平台。（中华检验医学杂志，2017，40：31-35）
关键词： 幽门螺杆菌 光谱法 质量 基质辅助激光解吸电离 -
MALDI-TOF MS在临床曲霉菌鉴定中的应用
目的 探讨基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)在临床曲霉菌属鉴定中的应用,并评价其鉴定性能.方法 以ITS测序结果为金标准,对解放军总医院2017年5月至2018年4月临床分离的曲霉菌属采用VITEK MS V3.0进行鉴定,并对结果进行分析.结果 通过V3.0数据库(含12种曲霉菌图谱)鉴定了9种曲霉菌,占总体分离菌株的86.24%.VITEK MSV3.0的鉴定符合率为91.49%,未获得结果的占16.51%;菌属符合率为93.62%,其中仅有两株杂色曲霉鉴定到属水平.根据鉴定置信度进行统计,88.30%的菌株获得了99%以上的鉴定率.首次未获得鉴定结果的占13.83%,鉴定错误率3.19%,二次提取后再次进行质谱鉴定未鉴定菌株降低到6.38%,鉴定错误率降到2.13%;结合传统鉴定和VITEK MS鉴定手段,属正确率为98.94%,种正确率为93.62%;其他真菌对曲霉菌鉴定的影响度为0%.结论 MALDI-TOF MS作为传统鉴定方法的有力补充,应用于曲霉菌鉴定给工作带了很多便捷,提高了种水平鉴定准确率,使得真菌实验室鉴定水平得到了提高.
关键词： 曲霉菌属 真菌学分型技术 光谱法 质量 基质辅助激光解吸电离 -
MALDI-TOF MS技术快速区分携带rmpA2毒力基因的高毒力肺炎克雷伯菌
目的 评价基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术快速区分携带rmpA2毒力基因的高毒力肺炎克雷伯菌的能力.方法 对浙江大学医学院附属第二医院和河南省人民医院的57株肺炎克雷伯菌,PCR扩增rmpA2毒力基因和荚膜血清型基因,多位点序列分型方法(MLST)进行分型,拉丝试验进行高黏液表型测定.MALDI-TOF MS对肺炎克雷伯菌进行鉴定并对峰图进行二维分析和算法统计,包括采用支持向量机算法(SVM),遗传算法(GA),监督使神经网络算法(SNN)和快速分类算法(QC)进行数据分析并建立相应模型,得到分型区分的特征峰.结果 57株肺炎克雷伯菌中有28株携带rmpA2毒力基因,MLST均为ST11型,其中拉丝试验阳性有5株;29株不携带rmpA2毒力基因,主要ST型为ST11(n=23),还包括ST15(n=3),ST1、ST76和ST473各一株.质谱将肺炎克雷伯菌较清晰地划分成两个区域,ClinProTools软件可准确区分84.2%(48/57)的菌株.ClinProTools软件四种算法结果基本相似,SVM特异性和灵敏度高,分别为93.23%和100%.采用ClinProTools对质谱峰进行统计显示,得到区分rmpA2基因阳性组和阴性组的2个特征峰分别为7168.9和7280.76,在峰强度上存在一定的差异.结论 MALDI-TOF MS快速区分携带rmpA2毒力基因的高毒力肺炎克雷伯菌方法灵敏度和特异性都在90%以上,得到两个特征峰在峰强度上存在一定差异,需进一步验证.
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MALDI-TOF MS检测肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的效果评估
目的 评估基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术直接检测肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶效果.方法 收集2018年1月至5月苏州大学附属第二医院分离的21株对亚胺培南和(或)美罗培南敏感性下降的肠杆菌科菌株,包括11株肺炎克雷伯菌、3株产酸克雷伯菌、3株阴沟肠杆菌、4株大肠埃希菌.PCR检测21株菌株分别产A、B和D类碳青霉烯酶基因情况,同时将菌株与0.5 g/L美罗培南溶液孵育2 h后离心取上清进行MALDI-TOF MS检测,通过菌株水解药物所出现的特征性谱峰来快速判断菌株是否产碳青霉烯酶,并与PCR基因检测结果进行Kappa检验统计学比较.结果 PCR检测结果提示21株肠杆菌科细菌碳青霉烯酶基因检测均阳性,其中KPC阳性15株、GES阳性6株、NDM阳性2株、VIM阳性1株、GIM阳性4株、SIM阳性1株,同一菌株可产生一种或多种碳青霉烯酶基因.MALDI-TOF MS直接检测结果显示21株菌株与美罗培南孵育后,在质荷比199 m/z左右处均出现了一个特征性谱峰,为菌株产生碳青霉烯酶水解美罗培南药物所致,与PCR检测碳青霉烯酶基因结果高度一致.结论 本研究运用MALDI-TOF MS技术,可通过捕捉菌株水解碳青霉烯类药物所出现的特征性谱峰来直接检测碳青霉烯酶的产生.
